第七章 抗体的标记

生物素标记抗体的原理应用引言生物素标记抗体是一种常用于生物学实验和生物化学研究的工具。

它可以通过结合生物素和抗体来标记目标蛋白，从而实现对目标蛋白的检测和定位。

本文将介绍生物素标记抗体的原理和常见的应用。

生物素标记抗体的原理生物素标记抗体是通过将生物素分子与抗体共价结合来实现标记的。

生物素是一种天然存在于生物体中的小分子，其与生物素受体（如亲和素或亲和力很强的亲和素结合蛋白）之间具有高度的亲和力。

生物素标记抗体的原理基于生物素与生物素受体之间的高亲和力，通过标记抗体即可实现对目标蛋白的检测和定位。

生物素标记抗体的应用生物素标记抗体在生物学实验和生物化学研究中有着广泛的应用。

下面列举了一些常见的应用：1.免疫组化生物素标记抗体可以用于免疫组化实验中的抗原检测和定位。

通过将生物素标记的抗体与目标抗原结合，再将其与亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物结合，可以实现对抗原的检测和可视化。

2.流式细胞术生物素标记抗体可以在流式细胞术中用于细胞表面标记。

通过将生物素标记的抗体与目标细胞结合，再与荧光素-生物素-蛋白（如荧光素结合蛋白）复合物结合，可以实现对目标细胞的检测和定位。

3.免疫沉淀生物素标记抗体在免疫沉淀实验中广泛应用。

通过将生物素标记的抗体与目标蛋白结合，再与琼脂糖颗粒（如琼脂糖颗粒A/G）结合，可以实现对目标蛋白的沉淀和富集。

4.西方印迹生物素标记抗体在西方印迹实验中也起着重要的作用。

通过将生物素标记的抗体与目标蛋白结合，再与亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物结合，可以实现对目标蛋白的检测和定量。

结论生物素标记抗体是一种常用的生物学实验和生物化学研究工具，其原理基于生物素与生物素受体之间的高亲和力。

通过将生物素标记抗体与目标蛋白结合，可以实现对目标蛋白的检测和定位。

生物素标记抗体在免疫组化、流式细胞术、免疫沉淀和西方印迹等实验中有着广泛的应用。

在将来的研究中，生物素标记抗体将继续发挥重要的作用，并为研究人员提供更多的实验选择和研究手段。

细胞生物学教案〔来自〕目录前言第一章绪论第二章细胞结构概观第三章研究方法第四章细胞膜第五章物质运输与信号传递第六章基质与内膜第七章线粒体与叶绿体第八章核与染色体第九章核糖体第十章细胞骨架第十一章细胞增殖及调控第十二章细胞分化第十三章细胞衰老与凋亡前言依照高等师范院校生物学教学方案，我们开设细胞生物学。

一、学科本身的重要性要最终说明生命现象，必须在细胞水平上。

细胞是生命有机体最根本的结构和功能单位，生命寓于细胞之中，只有把各种生命活动同细胞结构相联系，才能在细胞水平上说明各种生命现象。

世界著名生物学家Wilson〔德国人〕曾说过：“一切生物学问题的答案最终要到细胞中去寻找〞。

二、学科开展特点细胞生物学涉及知识面广、内容浩繁且更新迅速。

它同生物化学、遗传学形成生命科学的鼎立三足，既是当代生命科学开展的前沿，又是生命科学赖以开展的根底。

三、欲到达的目的通过系统地学习细胞生物学，丰富细胞学知识，以适应当代人类社会知识结构开展的需求，也是为考研做打算。

本课程讲授51学时，实验21学时，共72学时。

参考资料1 De.Robertis，《细胞生物学》，1965年〔第四版〕；1980年〔第七版〕《细胞和分子生物学》2 Avers，“Molecular Cell Biology〞， 1986年3 Alberts，《细胞的分子生物学》，“Molecular biology of the cell〞，1989年4 Darnell，《分子细胞生物学》，1986年〔第一版〕；1990年〔第二版〕“Molecular Cell Biology〞5郑国錩，细胞生物学，1980年，高教出版社；1992年，再版6 郝水，细胞生物学教程，1983年，高教出版社7 翟中和，细胞生物学根底，1987年，X大学出版社8 韩贻仁，分子细胞生物学，1988年，高等教育出版社；202X年由科学出版社再版9 汪堃仁等，细胞生物学，1990年，X师范大学出版社10 翟中和，细胞生物学，1995年，高等教育出版社，202X年再版11 郑国錩、翟中和主编《细胞生物学进展》，12翟中和主编《细胞生物学动态》，从1997年起〔1—3卷〕，北师大出版社13徐承水等，《分子细胞生物学手册》1992，中国农业大学出版社14徐承水等，《现代细胞生物学技术》1995，中国海洋大学出版社15徐承水，《细胞超微结构研究》202X，中国国际教育出版社学术期刊、杂志国外：Cell、Science、Nature、J.Cell Biol.、J.Mol. Biol.国内：中国科学、科学通报、实验生物学报、细胞生物学杂志等第一章绪论教学目的 1 掌握本学科的研究对象及内容；2 了解本学科的来龙去脉〔开展史及开展前景〕；3 掌握与本学科有关的重大事件和名词。

几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等，还有一些其他的标记方法例如金标记，本文主要讲述了这些抗体标记的基本原理、操作步骤。

、酶标记1 、辣根过氧化物酶(HRP) 标记辣根过氧化物酶(HRP) 标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。

其原理是HRP 的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG后该醛基与IgG 氨基结合，形成Schiff 氏碱。

为了防止HRP中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。

氧化反应末了，用硼氢化钠稳定Schiff 氏碱。

这里介绍两种程序。

程序一：(1)将5mg HRP 溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3 溶液中加0.5ml 10mmol/LNaIO4 溶液，混匀，盖紧瓶塞，室温避光作用2 小时。

(2)加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3 混匀。

(3)加入0.75ml 小鼠已处理的腹水，或纯化单抗等(15mg/ml) ，混匀。

(4)称取SephadexG25 干粉0.3g ，加入一支下口垫玻璃棉的5ml 注射器外筒内;随后将上述交联物移入注射器外套;盖紧，室温作用(避光)3小时或4C过夜。

(5)用少许PBS 将交联物全部洗出，收集洗出液，加1/20V 体积新鲜配制的5mg/mlNaBH4 溶液，混匀，室温作用30 分钟;再加入3/20V NaBH4溶液，混匀，室温作用1小时(或4C过夜)。

(6)将交联物过Sephadex g200 或Sepharose6B(2.6 X 50cm)层析纯化，分管收集第一峰。

(7)酶结合物质量鉴定：克分子比值测定酶量(mg/ml)=OD403 X 0.4IgG 量(mg/ml)=(OD280- OD403X 0.3) X 0.62克分子比值(E/P)=酶量X 4/IgG量，一般在1-2之间。

酶结合率=酶量X体积/抗体，标记率一般为0.3-0.6，即1-2个HRP 分子结合在一个抗体分子上，标记率可大于0.6，0.8，0.9;OD403/OD280 等于0.4 时，E/P 约为1 。

第1章抗体分子标记技术第一节抗体的I125标记法基本原理有多种方法可用于蛋白质的碘标记，如应用化学法或酶促法通过氧化对蛋白质分子进行碘化是常用的方法。

当应用化学氧化法时，碘化钠（NaI）遇强氧化剂，碘离子被氧化为碘分子，所生成的自由碘分子可与某些基团进行卤化反应。

蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基，某些组氨酸残基也可能进行碘化。

在应用氯胺T(Chloramine T)法的实验中，所用的氧化剂（1，3，4，6-tetrachloro-3α, 6α-diphenyl-glucoluril）是溶于强挥发性的有机溶剂中。

该溶剂加入试管后，先让其挥发（即让氧化剂将试管包被），然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中，反应完成即将混合液移入他管，以终止反应。

试剂及仪器●经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体●0.5 mol/L磷酸钠缓冲液，pH 7.5 (配法见附录1)●无载体的Na125I 3.7GBq/ml ( 100 mCi/ml ) 的NaOH液●凝胶过滤柱●γ-记数器●100g/L 三氯醋酸●70% 乙醇●玻璃纤维滤●氯胺T (Chloramine T)反应用* 新鲜制备的含2mg/ml氯络胺T的 0.5 mol/L磷酸钠缓冲液（pH 7.5）；* 氯胺T 反应终止缓冲液： 2.4mg/ml 偏重亚硫酸， 10mg/ml 酪氨酸, 10%甘油, 1g/L Xyene cyanol 的PBS 液。

操作步骤*注意：125I 对健康有害，需要保护措施。

在应用125I 应先有关同位素知识，及在有关部门的监测下，按放射线同位素的应用及处置要求进行。

（一）氯胺T法1．用1.5ml Ependof 管，加10μl 抗体及pH 7.5的0.5 mol/L磷酸钠缓冲液总体积至25μl；2．加500 μCi 的Na125I ，混匀；3．加25μl 2mg/ml 氯胺T液，混匀；4．在室温下培养1分钟；5．加入50μl氯胺T 反应终止缓冲液（以饱和的酪氨酸来捕获游离的 Na125I）；6．通过凝胶过滤层析分离将碘化抗体与碘化酪氨酸分离。

组织抗体标记过程嘿，咱今儿就来聊聊这组织抗体标记过程。

这可不是个简单事儿啊，就好像给组织贴上一个个特别的标签，让它们能在显微镜下闪闪发光，被咱清楚地认出来。

你想啊，组织就像是一个大部队，里面有各种各样的细胞在忙碌着。

而抗体呢，就像是一个个带着任务的小特工，专门去找到它们要标记的目标。

这过程可不比警察抓小偷容易哦！首先得准备好一切，就像战士出征前要检查装备一样。

得有合适的抗体，这抗体可不能随随便便选，得是能精准找到目标的那种。

然后就是处理组织啦，要让组织乖乖地躺在那里，等着抗体来标记。

接下来，抗体就闪亮登场啦！它们像是一群有目标的小蜜蜂，嗡嗡地飞向组织。

然后，就像钥匙插进锁孔一样，准确地和目标结合在一起。

这时候，你就得睁大眼睛看着，可别错过了什么精彩的瞬间。

标记好了之后呢？那当然是要观察啦！把组织放在显微镜下，哇，你就能看到那些被标记的细胞啦，就像是夜空中闪闪发光的星星。

这感觉，就像是你发现了一个宝藏一样，让人兴奋不已。

说真的，这组织抗体标记过程就像是一场奇妙的冒险。

每一步都得小心翼翼，不能有丝毫差错。

不然，就像走迷宫走错了路一样，得重新再来。

想象一下，如果抗体标记错了目标，那可就乱套啦！就好像本来要找张三，结果把李四给标记了，那可怎么行呢！所以啊，每一个环节都得认真对待。

在这个过程中，耐心也是超级重要的。

不能着急，得一步一步慢慢来。

就像盖房子一样，得一块砖一块砖地垒起来。

要是着急了，说不定就会弄出个豆腐渣工程。

而且啊，这还需要经验呢！有经验的人就像是老司机，开起车来稳稳当当。

他们知道什么时候该怎么做，遇到问题也能轻松解决。

总之呢，组织抗体标记过程是个既有趣又有挑战的事情。

它就像是一个神秘的魔法，能让我们看到组织里那些隐藏的秘密。

咱可得好好对待它，让它为我们的科学研究发挥出最大的作用呀！这就是我对组织抗体标记过程的理解，你觉得呢？是不是也觉得挺有意思的呀！。

细胞生物学教案（来自）目录前言第一章绪论第二章细胞结构概观第三章研究方法第四章细胞膜第五章物质运输与信号传递第六章基质与内膜第七章线粒体与叶绿体第八章核与染色体第九章核糖体第十章细胞骨架第十一章细胞增殖及调控第十二章细胞分化第十三章细胞衰老与凋亡前言依照高等师范院校生物学教学计划，我们开设细胞生物学。

一、学科本身的重要性要最终阐明生命现象，必须在细胞水平上。

细胞是生命有机体最基本的结构和功能单位，生命寓于细胞之中，只有把各种生命活动同细胞结构相联系，才能在细胞水平上阐明各种生命现象。

世界著名生物学家Wilson（德国人）曾说过：“一切生物学问题的答案最终要到细胞中去寻找”。

二、学科发展特点细胞生物学涉及知识面广、内容浩繁且更新迅速。

它同生物化学、遗传学形成生命科学的鼎立三足，既是当代生命科学发展的前沿，又是生命科学赖以发展的基础。

三、欲达到的目的通过系统地学习细胞生物学，丰富细胞学知识，以适应当代人类社会知识结构发展的需求，也是为考研做准备。

本课程讲授51学时，实验21学时，共72学时。

参考资料1 De.Robertis，《细胞生物学》，1965年（第四版）；1980年（第七版）《细胞和分子生物学》2 Avers，“Molecular Cell Biology”， 1986年3 Alberts，《细胞的分子生物学》，“Molecular biology of the cell”，1989年4 Darnell，《分子细胞生物学》，1986年（第一版）；1990年（第二版）“Molecular Cell Biology”5郑国錩，细胞生物学，1980年，高教出版社；1992年，再版6 郝水，细胞生物学教程，1983年，高教出版社7 翟中和，细胞生物学基础，1987年，北京大学出版社8 韩贻仁，分子细胞生物学，1988年，高等教育出版社；2000年由科学出版社再版9 汪堃仁等，细胞生物学，1990年，北京师范大学出版社10 翟中和，细胞生物学，1995年，高等教育出版社，2000年再版11 郑国錩、翟中和主编《细胞生物学进展》，12翟中和主编《细胞生物学动态》，从1997年起（1—3卷），北师大出版社13徐承水等，《分子细胞生物学手册》1992，中国农业大学出版社14徐承水等，《现代细胞生物学技术》1995，中国海洋大学出版社15徐承水，《细胞超微结构研究》2000，中国国际教育出版社学术期刊、杂志国外：Cell、Science、Nature、J.Cell Biol.、J.Mol. Biol.国内：中国科学、科学通报、实验生物学报、细胞生物学杂志等第一章绪论教学目的 1 掌握本学科的研究对象及内容；2 了解本学科的来龙去脉（发展史及发展前景）；3 掌握与本学科有关的重大事件和名词。