原花青素的分离纯化实验方案(修改)

原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究本文以葡萄籽、葡萄叶子为原料，对其原花青素的提取工艺进行了研究。

在提取葡萄籽中的原花青素时采用50％乙醇，料液比1／40，于60℃下热回流浸提2个小时，提取2～3次最优提取工艺，此工艺提取得到的原花青素提取物得率为22.01％，产品纯度为51.17％；提取葡萄叶子时采用70％乙醇，料液比1／50，于80℃下热回流浸提3个小时，提取1～2次的最优提取工艺，此工艺得到的原花青素得率为34.14％，纯度为13.66％。

对上述提取物进一步纯化，葡萄籽提取物选用AB-8大孔吸附树脂，50％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，葡萄籽原花青素总的提取得率为9.09％，产品纯度能达到94～95％；葡萄叶子提取物选用D-101大孔吸附树脂，70％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，其原花青素提取得率为18.21％，纯度为25.63％。

采用超滤法对大孔吸附后的葡萄籽精提物进行低聚体的提纯，其过膜后的单体儿茶素含量有明显增加，P5000约为过膜前的6.6倍，P1000为过膜前的7.7倍。

其中压力对超滤通量的影响较大，而温度影响较小，一般选择20～30psig，室温下操作即可，避免在操作过程中长时间将过滤液暴露于强光及空气中。

利用Sephadex LH20将P5000样继续分离，使含量较高的一种二聚体得到了富集。

原花青素的抗氧化(FRAP)、清除DPPH自由基实验表明，葡萄叶子原花青素抗氧化、清除自由基活性均强于抗坏血酸，稍强于葡萄叶子提取物，而与原花青素的低聚体、高聚体相差不大。

原花青素在不同温度、光照、氧气的条件下1～2天内具有较好的稳定性。

经长期(10天)紫外光照射不稳定，含量下降甚至消失，溶液颜色逐渐加深，但其抗氧化、清除自由基能力无显著性变化(p＞0.05)。

抗坏血酸对紫外照射引起的原花青素不稳定能起到保护作用，并且存在剂量依赖效应。

类似于口服液等的原花青素溶液产品较适用微波法灭菌。

一种葡萄籽原花青素高效提取分离方法我折腾了好久一种葡萄籽原花青素高效提取分离方法，总算找到点门道。

最开始的时候我真的是瞎摸索。

我就想着把葡萄籽弄碎，然后就用那种很普通的溶剂泡着，觉得就能把原花青素提取出来了。

结果呢，提取出来的量特别少，而且纯度也不咋地。

我当时就知道，肯定是哪里有问题。

后来我看书上说，可能是葡萄籽破碎程度不够。

我就下狠手，把葡萄籽弄得特别碎，几乎成粉末了。

然后换了几种溶剂来试。

先用乙醇试，感觉比之前那次稍微好点了，但还是不符合我想要的高效的标准。

我就想啊，是不是加热会好点呢？就像煮豆子一样，加热能让东西更好地融合。

我就对泡着葡萄籽粉末的乙醇溶液加热。

但是加热的温度不好掌握啊。

有一次温度太高了，都把溶液煮冒烟儿了，结果原花青素可能给破坏掉了一部分。

那一次算是失败透顶了，提取出来的不但没多，还少了呢。

我就开始慢慢调整温度。

也不确定什么样的温度才是最适合的。

就一点点试，像摸着石头过河一样。

最后发现大概在多少多少度的时候，提取出来的量和纯度都有提高了。

但是这里边还有杂质呢。

我又想办法分离这个杂质。

我试过用那种过滤的方法，就像过滤茶叶末儿似的，但是不太好使。

后来我用了不知道哪个资料看到的离心法。

就是放到离心机里转啊转的。

转了不同的速度。

一开始速度不对的时候，根本就分离不干净。

就慢慢调整速度，当然这个过程也失败了好多次，有时候转完了发现还是很多杂质混在原花青素溶液里。

最后终于调到一个合适的速度，把大部分杂质都给甩出去了。

但我心里还是有点犯嘀咕，总觉得可能还不是最完美的。

可能还有别的更好的溶剂组合或者操作步骤能让这个提取分离更高效。

但我现在这个方法从我的实验来看，相对比之前用过的那些方法是好很多了。

如果谁要试的话，一定得在葡萄籽破碎、溶剂选择、加热温度还有离心速度上好好把控，不然很容易失败啊。

我这一路摸索过来，就感觉这是个特别细致的活儿，一点都不能马虎。

花青素提取实验报告花青素提取实验报告植物中的花青素是一类具有丰富颜色的天然色素，广泛存在于花朵、果实、叶子等植物组织中。

花青素不仅为植物赋予了吸引力的色彩，还具有很多生物活性，如抗氧化、抗炎、抗癌等。

因此，对花青素的提取和研究具有重要意义。

本实验旨在探究不同溶剂对花青素提取效果的影响，并比较不同植物材料中花青素的含量差异。

实验选取了红花、紫苏和紫甘蓝三种常见的植物材料作为研究对象。

实验步骤如下：1. 材料准备：准备红花、紫苏和紫甘蓝三种植物材料，并将其分别洗净、切碎备用。

2. 提取溶剂选择：选取乙醇、醋酸乙酯和水三种常用溶剂作为提取试剂，分别标注为A、B和C。

3. 提取过程：将每种植物材料分别加入三个烧杯中，每个烧杯中加入适量的提取溶剂，浸泡一段时间后，用搅拌棒搅拌均匀。

4. 过滤：将提取液用滤纸过滤，去除固体颗粒。

5. 浓缩：将过滤后的提取液分别倒入烧杯中，放在加热板上进行浓缩，直至溶剂蒸发完全。

6. 称量：将浓缩后的花青素溶液称量并记录。

7. 分光光度计测定：将每个烧杯中的花青素溶液分别转移到试管中，使用分光光度计测定吸光度。

8. 计算花青素含量：根据吸光度值，利用标准曲线计算出花青素的含量。

实验结果如下：在本实验中，我们选取了红花、紫苏和紫甘蓝三种植物材料进行花青素提取实验。

通过比较不同溶剂对花青素提取效果的影响，我们发现乙醇溶剂（A）对三种植物材料中花青素的提取效果最好。

在红花提取实验中，乙醇溶剂（A）的吸光度值最高，表明乙醇溶剂对红花中花青素的提取效果最佳。

紫苏和紫甘蓝的提取实验结果也是如此。

这可能是因为乙醇具有较好的溶解性，能够更好地溶解植物组织中的花青素。

此外，我们还发现不同植物材料中花青素的含量存在差异。

红花中花青素含量最高，紫苏次之，紫甘蓝最低。

这可能与不同植物材料的生长环境、基因差异等因素有关。

通过本实验，我们深入了解了花青素的提取过程以及不同溶剂对提取效果的影响。

同时，我们也发现了不同植物材料中花青素含量的差异。

大孔树脂分离纯化葡萄籽原花青素的研究梁敏;何丽娜;董新荣;崔夫知【摘要】本文研究了大孔树脂分离纯化葡萄籽提取物中原花青素的方法.先对5种大孔吸附树脂用静态筛选方法选择HPD100和HPD400树脂,进一步以动态吸附与解吸附实验比较了两种树脂对葡萄籽提取物原花青素的吸附与洗脱效果.结果表明:HPD100、HPD400树脂对葡萄籽提取物中原花青素的动态饱和吸附量分别为101.2和92.1mg·g-1,乙醇洗脱的总洗脱率分别为96.5％和92.0％;其中30％乙醇洗脱样品中原花青素含量分别为74.8％和85.0％;50％乙醇洗脱样品中原花青素含量分别为70.0％和73.9％.与HPD100相比较,HPD400更适合葡萄籽原花青素的分离与富集.【期刊名称】《化学工程师》【年(卷),期】2015(029)003【总页数】5页(P65-69)【关键词】葡萄籽;原花青素;大孔树脂;分离【作者】梁敏;何丽娜;董新荣;崔夫知【作者单位】湖南农业大学理学院,湖南长沙410128;湖南农业大学理学院,湖南长沙410128;湖南农业大学理学院,湖南长沙410128;湖南农业大学理学院,湖南长沙410128【正文语种】中文【中图分类】R284.2;O652.62原花青素（Procyanidins，PC）是一类自然界广泛存在的植物多酚类物质，具有良好的抗氧化作用，其清除自由基的能力是VC的50倍，VE的20倍[1]。

此外，还具有抗突变、抗心血管疾病、抗癌、延缓衰老等活性[2-4]，因而引起了极大的关注。

葡萄籽是原花青素的重要来源。

我国是葡萄生产大国，大量葡萄用来酿酒，产生的大量籽具有综合利用的价值。

葡萄籽提取物需要分离纯化以提高原花青素的含量，其分离方法很多，其中大孔树脂吸附法由于操作简单、以再生利用、产品纯度高等特点受到人们的广泛关注。

曹明华[5]以O3F3大孔吸附树脂作为吸附剂，葡萄籽提取物以水溶解后上样，吸附树脂再以40%的乙醇溶液脱，葡萄籽中原花青素的纯度可达到85.8%，回收率可达到86.6%。

板栗壳中原花青素大孔吸附树脂分离纯化工艺优化随着人们对健康的关注度不断提高，越来越多的天然植物和植物提取物被广泛应用于食品、医药和化妆品等领域。

其中，板栗壳中的原花青素是一种具有抗氧化、抗癌、抗炎、降血压等多种生物活性的天然大分子化合物，具有广泛的应用价值。

为了开发和利用板栗壳中的原花青素，需要建立一个高效的分离纯化工艺，以提高产量和纯度。

本文将介绍一种基于大孔吸附树脂的板栗壳中原花青素分离纯化工艺，并结合实验数据进行优化。

1. 建立分离纯化工艺的重要性板栗壳中的原花青素是一种多酚类化合物，具有较强的吸附和结合能力，同时也存在着多种与之相似的杂质。

因此，建立一种高效的分离纯化工艺是十分必要的。

目前，板栗壳中原花青素的分离纯化方法主要有溶剂萃取、黄龙云实验法、聚乙烯醇/盐酸盐法等。

这些方法虽然能够从板栗壳中提取到原花青素，但是其操作复杂、成本高昂、产率低，且提纯程度也有一定的限制。

2. 大孔吸附树脂的基本原理大孔吸附树脂是一种具有高效分离纯化能力的吸附剂，其基本原理是利用分子间相互作用力（如静电作用、氢键作用）对杂质进行选择性吸附，以实现对目标分子的分离纯化。

大孔吸附树脂在选择性吸附杂质的同时，也可以将目标分子的极性、结构等特征纳入考虑范畴中，从而实现对目标分子的更精确选择性吸附。

3. 大孔吸附树脂分离纯化原花青素的实验过程从板栗壳中提取原花青素后，将经过预处理的板栗原花青素水溶液连续通过列装有大孔吸附树脂的柱子，使目标分子与吸附树脂发生相互作用。

随着操作流程的进行，杂质被选择性吸附在吸附树脂的内部孔道中，而目标分子则留在流出液中。

随着反复操作的进行，目标分子会不断被从吸附树脂上剥离出来，形成纯净的分离物。

4. 实验优化结果分析通过实验不断优化，我们最终得到了以大孔吸附树脂为基础的板栗壳中原花青素分离纯化工艺。

通过实验数据统计分析，我们得到了以下结果：（1）阳离子树脂CM-Sephadex C-25对板栗壳中原花青素的吸附效果最佳；（2）pH值在7.0~8.0的范围内，可获得最好的吸附效率和纯化效果；（3）采用15%乙醇水溶液进行洗脱，可获得较好的洗脱效果和高的回收率。

花青素的提取、测定仪器材料试剂：仪器：旋转蒸发仪，真空泵，分光光度计，真空干燥箱，水浴锅，天平材料：新鲜的紫葡萄和青葡萄试剂：无水乙醇，盐酸，铁氰化钾，三氯乙酸，硫酸亚铁实验步骤一、花青素的提取：1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干，分离出果肉、果皮、籽粒2、将分离晾干的紫色葡萄果皮，80℃下干燥1h。

3、称取2g磨成粉末4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次，合并提取液5、讲合并提取液进行抽滤6、60℃减压浓缩7、真空干燥8、得粗提取液2、提取条件的优化：p 水平A提取温度 /℃B乙醇浓度/%C提取时间/minD料液比/（g/ml）p 1 50 50 60 1:10 p 2 60 60 90 1:20 p 3 70 70 120 1:30A B C D 结果实验序号1 1 1 1 12 1 2 2 23 1 3 3 34 2 1 2 35 2 2 3 16 2 3 1 27 3 1 3 28 3 2 1 39 3 3 2 1K1K2K3Q确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取，测定最佳提取部位。

3、纯化纸层析法提纯1.取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。

2．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。

3．在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇∶V(乙酸∶V(水=4∶1∶5,V(正丁醇∶V(2mol/LHCl=1∶1,V(乙酸∶V(浓HCl∶V(水=15∶3∶82,1%盐酸,V(浓HCl∶V(水=3∶97等（即层析液）。

然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。

4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙醇洗涤、浓缩,即可得到样品。

葡萄籽中分离提取原花青素的研究花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。

本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。

研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。

标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验1 概述原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。

属于缩合鞣质或黄烷醇类。

最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。

它于1879年在意大利上市。

由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。

目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。

已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。

原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。

2 葡萄籽中花青素的提取本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。

并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。

2.1 实验方法2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。

在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。

所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。

一、实验目的1.了解原花色素及其分离提纯的常用方法。

2.学会用乙醇抽提法提取分离花色素和比色法测定其含量。

二、实验目的原花色素，也称原花青素（proanthocyanidins）,是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。

也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。

原花色素属于生物类黄酮（flavonoids）,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。

依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。

从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。

其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligomeric proanthocyanidins,简称OPC）。

三．实验仪器1.试剂：花色素标准样品；甲醇；0.1%HCL-95%乙醇（V:V=70:30）；无水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；HCL-正丁醇（浓HCL5.0ml加入正丁醇95.0ml，混合即可）；2%硫酸铁氨（硫酸铁氨2.0g溶于2.0mol/L HCL 100.0ml即可）2.器材：冷冻干燥机；旋转蒸发仪；分光光度计；水浴锅；电炉；电子分析天平3.材料：新鲜勒杜鹃花四、实验操作(一)勒杜鹃原花色素的提取1.材料处理：称取新鲜勒杜鹃10.0g，剪碎，置于锥形瓶中，加入3倍体积的石油醚，室温浸泡，脱去脂质物质和叶绿素，过滤，将勒杜鹃样品晾干，备用。

a)花色素的提取：提取剂0.1%HCL-95%乙醇（V：V=70:30）料液比（m：V=1:150），提取时间30分钟，控制提取温度60℃，提取次数2次，即提取液分2次加入。

2.花色素的纯化：由于样品中还是会含有其他杂质，如：蛋白质，维生素（水溶性维生素易溶于水而不易溶于非极性有机溶剂；脂溶性维生素易溶于非极性有机溶剂，而不易溶于水。

生研1002班姚远学号：2010001225葡萄籽中原花青素(OPC)的提取与纯化一、原花青素简介原花青素是一种水溶性色素，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。

细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。

花青素(Anthocyanins)是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。

花青素为植物二级代谢产物，在生理上扮演重要的角色。

花瓣和果实的颜色可吸引动物进行授粉和种子传播。

常见于花、果实的组织中及茎叶的表皮细胞与下表皮层。

花青素属于酚类化合物中的类黄酮类(Flavonoids)。

基本结构包含二个苯环，并由3碳的单位连结(C6-C3-C6)。

花青素经由苯基丙酸路径和类黄酮生合成途径生成，由许多酵素调控催化。

以天竺葵色素(Pelargonidin)、矢车菊素(Cyanidin)、花翠素(Delphinidin)、芍药花苷配基(Peonidin)、矮牵牛苷配基(Petunidin)及锦葵色素(Malvidin)六种非配醣体(Aglycone)为主。

花青素因所带羟基数(-OH)、甲基化(Methylation)、醣基化(Glycosylation)数目、醣种类和连接位置等因素而呈现不同颜色。

[9]颜色的表现因生化环境条件的改变，如受花青素浓度、共色作用、液胞中pH値的影响(Clifford)。

橙色和黄色是胡萝卜素的作用。

1910年在胡萝卜中发现了β-胡萝卜素，以后共发现另外2种胡萝卜素异构体，分别是：α、β、γ三种异构体。

1958年β-胡萝卜素获得专利，目前主要从海洋中提取，也可人工合成。

[1]食品中几种重要花青素的结构自然界有超过300种不同的花青素。

他们来源于不同种水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡罗卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。

这些花青素主要包含飞燕草素（Delchindin）、矢车菊素（Cyanidin）、牵牛花色素（Petunidin）、芍药花色素（Peonidin）。

花青素颜色随PH值发生变化，从当PH值为3时的覆盆子红到当PH值为5时的深蓝莓红。