培养基配方及配制方法
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一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2、SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。
4、TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
5、2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
6、YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后,高压灭菌。
建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。
为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
二、常用抗生素氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备:干麦芽首先进行粉碎(不能太粗,也不必太细。
太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度),按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌均匀后,37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀),保温4~6小时(用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时),糖化结束。
在糖化过程中,应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液,加1.8%琼脂,分装试管,每试管约5-10ml (视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
2基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中,煮沸溶解后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后,带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分:胰蛋白胨:20g,葡萄糖:1g,甘露醇:2g,柠檬酸钠:5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。
pH7.0制法:将上述物品加入蒸馏水中,加热溶解煮沸,调pH为7.0,分装,在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分:胨:12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000ml0,0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。
pH7.5 制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中,调pH,再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50~55℃,倾注浇平板。
培养基配方及配置
一般来说,培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分,包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分,如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分,如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置:
1.基础培养基成分:
- 水:900ml
-蛋白胨:10g
-酵母提取物:5g
-NaCl:5g
2.添加剂:(可根据实验需求进行必要的添加)
- 抗生素(如氨苄青霉素):100μg/ml
- 抗菌剂(如氯霉素):25μg/ml
3.配制方法:
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中,并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中,加水至1000ml,并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2(一般使用缓冲液进行调节)。
-用自制滤纸过滤器滤过,将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂,将相应的药物加入培养基中,并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌,或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程,不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时,需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度,并注意配制和保管过程中的无菌操作,以确保培养基的质量和有效性。
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质,能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件,因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方:-蛋白胨或复合氮源:10g-酵母浸出物:5g-葡萄糖:1g-NaCl:5g-K2HPO4:2g-MgSO4:0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方:-牛心提取物:3g-高级琼脂糖:15g-葡萄糖:10g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方:-玉米浸出物:4g-高级琼脂糖:15g-酵母浸出物:1g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方:-液体LB培养基:10mL-高级琼脂糖:15g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方:-羊血:50mL-肉浸出物:3g-酵母浸出物:3g-肉汤培养基:1L-红细胞素:5g-高级琼脂糖:3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方:-肉浸出物:5g-酵母浸出物:5g-NaCl:5g-蒸馏水:900mL- 加入0.1%的L-cysteine:10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项:-培养基中的成分应严格按照配方比例加入,并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感,需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整,一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中,避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方,不同的微生物有不同的需求,可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中,还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基有很多种,包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。
下面以常用的LB培养基和M9培养基为例,介绍它们的配制方法。
1. LB培养基(Luria-Bertani agar)LB培养基是一种通用培养基,适用于许多不同类型的细菌。
它由三种主要成分组成:蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配方如下:-蛋白胨:10克-酵母提取物:5克-NaCl:10克-精制水:1000毫升步骤如下:1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。
2)加入适量的精制水,搅拌溶解。
3) 将溶液移至一个继续器中,并用精制水补足至1000ml。
4)蓄满培养基的瓶子,盖上盖子,并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌,或者将瓶子放入高压灭菌器中,将压力调至15磅(每平方英寸)。
2.M9培养基M9培养基是一种无机盐培养基,常用于细菌的生长和培养。
它的配方相对简单,由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。
配方如下:-Na2HPO4:6克-KH2PO4:3克-NaCl:0.5克-NH4Cl:1克-葡萄糖:0.4克-维生素B1:0.1克-精制水:1000毫升步骤如下:1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。
2)加入一部分的精制水,搅拌溶解。
3)加入葡萄糖和维生素B1,搅拌均匀。
4) 将溶液移至一个继续器中,并用精制水补足至1000ml。
5)蓄满培养基的瓶子,盖上盖子,并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌,或者将瓶子放入高压灭菌器中,将压力调至15磅(每平方英寸)。
以上是LB培养基和M9培养基的配制方法的简要介绍。
当然,实验室中还有很多其他种类的培养基,它们的配制方法也各有不同,需要根据具体的实验目的和细菌类型进行调整。
在培养基配制过程中,应当注意严格按照配方比例配制,保持清洁卫生,避免污染,并注意高压灭菌的操作安全。
培养基配方及配制方法培养基是一种用于细菌、真菌、酵母等微生物的生长和繁殖的基质。
不同的微生物对培养基的要求不同,因此配方也会有所差异。
下面是一种常用的培养基配方及配制方法。
1.碳源:常见的碳源包括葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
碳源的添加能够提供微生物的能量和碳原子。
2.氮源:常见的氮源包括氨基酸、尿素、硝酸盐等。
氮源的添加能够提供微生物生长所需的氮元素。
3.矿物质:常见的矿物质包括钠、钾、氯等。
矿物质的添加能够提供微生物生长所需的微量元素。
4.生长因子:一些微生物对特定的生长因子具有依赖性,例如维生素和氨基酸等。
5.pH缓冲剂:常见的pH缓冲剂有磷酸盐缓冲液、琼脂等,用于调节培养基的pH值。
6. 凝固剂:常见的凝固剂包括琼脂、Agar等,用于使培养基变成固体状。
培养基配制方法:1.按照配方将所需的各种成分加入适量的蒸馏水中。
注意要先将一些难溶的固体成分溶解后再加入。
2.配制的过程中要注意无菌操作,使用无菌的容器和仪器,避免细菌及其他微生物污染。
3.将配制好的培养基混合均匀,使各个成分充分溶解。
可以通过搅拌或加热溶解等方法进行混合。
4.调节培养基的pH值。
使用酸碱试剂(如盐酸和氢氧化钠)进行调节,直到达到适合所需微生物生长的pH值范围。
5.如果需要固体培养基,可以加入适量的凝固剂(如琼脂)。
溶解后加入培养基中,然后将培养基煮沸消毒使凝结。
6.将配制好的培养基装入适量的培养皿或试管中。
7.灭菌处理。
使用高压灭菌器或自动培养箱等设备进行灭菌处理,以杀死培养基中的微生物。
通过以上步骤,就可以得到配制好的培养基。
根据不同的微生物要求和实验需要,可以调整培养基的成分和浓度,以获得最适合微生物生长和繁殖的环境。
培养基配方及配置培养基是一种提供养分和条件给细胞、组织或微生物生长和繁殖的人工环境。
不同种类的细胞或微生物,需要不同的培养基来满足其生长和繁殖的需求。
下面将介绍细胞和微生物培养基的配方及配置方法。
1.培养基配方:不同细胞或微生物的培养基配方各有不同,下面是常用的细胞培养基的配方示例:-DMEM培养基配方:Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)是一种广泛应用于动物细胞培养的基础培养基。
其主要成分包括:- 无铁媒介物(Iron Medium):DMEM中通常包含高浓度的铁盐,例如铁氯化物。
- 糖类(Glucose):DMEM中通常包含葡萄糖,用于提供能量供细胞代谢。
- 氨基酸(Amino acids):DMEM中包含多种氨基酸,用于蛋白质的合成。
- 维生素(Vitamins):DMEM中通常添加B族维生素和其他必需维生素。
- 盐类(Salts):DMEM中含有多种无机盐,例如氯化钠、磷酸盐等。
- 缓冲液(Buffer):DMEM中的缓冲液用于维持培养基的pH值。
- 补充物(Supplements):DMEM中可添加血清、激素和生长因子等提供细胞生长所需的物质。
-LB培养基配方:大肠杆菌(Escherichia coli)的最常用培养基是Luria-Bertani (LB)培养基。
其主要成分包括:- 蛋白质源(Protein source):LB培养基中通常添加琼脂和酵母提取物作为蛋白质源。
- 碳源(Carbon source):LB培养基中添加葡萄糖等碳源供菌落生长所需。
- 盐类(Salts):LB培养基中含有多种无机盐,例如氯化钠、磷酸盐等。
- 缓冲液(Buffer):LB培养基的缓冲液用于维持培养基的pH值。
- 抗生素(Antibiotics):LB培养基中添加抗生素,用于选择性培养目标菌株。
- 补充物(Supplements):在LB培养基中还可以添加亲水胶体、氧化还原剂等。
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法:1. LB培养基(Luria-Bertani)LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基,其配方包括:- 1% 蛋白胨(tryptone): 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉(yeast extract): 提供维生素和生长因子-1%NaCl(氯化钠):调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基(Yeast extract-Peptone-Dextrose)YPD培养基常用于酵母菌的培养,其配方包括:- 1% 酵母提取物(yeast extract): 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨(peptone): 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖(dextrose): 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基,其配方包括:-10%胎牛血清(FBS):提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin Solution): 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺(L-Glutamine): 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中,调整pH值至7.4,混合均匀即可。
培养基配方1、PDA培养基(用于分离、培养植物内生真菌):马铃薯(去皮)200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml,用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基(用于分离、培养植物内生细菌):牛肉膏3g,蛋白胨5g,葡萄糖2.5g,琼脂粉15g,蒸馏水1000ml,pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml,用于抑制真菌生长。
115℃,20min 灭菌。
3、LB培养基:胰蛋白胨10 g,酵母提取物5 g,NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;4、DSM1培养基:磷酸三钾26.631 g(pH=7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,胰蛋白胨10 g,葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;5、DSM2培养基:磷酸三钾26.631 g(pH=7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,牛肉膏3 g,NaCl5 g,细菌学蛋白胨10 g,葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;6、Msgg培养基:磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0),MOPs 100 mmoL/L(pH7.0),MgCl2 2 mmoL/L,CaCl2 700 mmoL/L,MnCl2 50 μM,FeCl3 50 μM,ZnCl2 1 μM,VB1 2 μM,甘油0.5 %,谷氨酸0.5 %,色氨酸50 μg/mL,苯丙氨酸50 μg/mL,蒸馏水1000 mL,pH 7.0。
7、N%NA培养基:牛肉膏3.0 g,细菌学蛋白胨10 g,NaCl 5 g,琼脂粉N*10 g,8、BGM1培养基:牛肉膏3 g,胰蛋白胨10 g,NaCl 5 g,磷酸三钾26.631 g(pH7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,葡萄糖1 g,蒸馏水1000 mL,pH 7.0。
培养基配方1 斜面菌种保存培养基培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备:干麦芽首先进行粉碎(不能太粗,也不必太细。
太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度),按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌均匀后,37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀),保温4~6小时(用摩尔/升碘液测定为黄色至无色时),糖化结束。
在糖化过程中,应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液,加%琼脂,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
2基菌落总数检测平板计数琼脂培养基将?胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中,煮沸溶解后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后,带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测GN增菌液成分:胰蛋白胨:20g,葡萄糖:1g,甘露醇:2g,柠檬酸钠:5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。
制法:将上述物品加入蒸馏水中,加热溶解煮沸,调pH为,分装,在115℃高压灭菌15min。
HE琼脂成分:胨:12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000ml0,%溴麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。
制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中,调pH,再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50~55℃,倾注浇平板。
注1:此培养基不能高温灭菌。
注2:甲液的配置:硫代硫酸钠:34g,柠檬酸铁钠:4g,蒸馏水:100ml。
注3:乙液的配置:去氧胆酸钠:10g,蒸馏水:100ml。
注4:Andrade指示剂的配置:酸性复红:0.5g,1mol/l的氢氧化钠溶液:16ml,蒸馏水:100ml。
将酸性复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液,数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2ml。
SS琼脂3.3.1 基础培养基:成分:牛肉膏:5g,胨:5g,三号胆盐:3.5g,琼脂:17g,蒸馏水:1000ml。
制法:将牛肉膏蛋白胨,三号胆盐加入到400ml蒸馏水中,将琼脂加入到600ml蒸馏水中,煮沸使其溶解,然后液混合,于121℃下灭菌15min,保存备用。
3.3.2 完全培养基成分:基础培养基:1000ml,乳糖:10g,柠檬酸钠:8.5g,硫代硫酸钠:8.5g,10%柠檬酸铁溶液:10ml,1%中性红溶液:,%煌绿溶液:。
制法:加热融化基础培养基,按比例加入处染料以外的所有成分,搅拌均匀,调,加入中性红溶液和煌绿溶液,混合均匀后浇平板。
注1:配制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱48h内使用。
注2:煌绿溶液配好后,应在10日内使用。
注3:可以购买SS琼脂的干燥培养基。
麦康凯琼脂成分:蛋白胨:17g,胨:3g,猪胆盐(牛、羊胆盐):5g,氯化钠:5g,琼脂:17g,蒸馏水:1000ml,乳糖:10g,%结晶紫水溶液:10ml,%中性红水溶液:5ml。
制法:将蛋白胨、胨、猪胆盐、氯化钠溶解于400ml蒸馏水中,调,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,将两液混合均匀,于121℃下灭菌15min备用。
临用时加热融化琼脂,趁热加入乳糖,等冷却到50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,搅拌均匀后浇平板。
注:结晶紫和中性红水溶液配好后,须经高压灭菌。
伊红美蓝琼脂(EMB)成分:蛋白胨:10g,乳糖:10g,磷酸氢二钾:2g,琼脂17g,2%伊红Y溶液:20ml,%美蓝溶液:10ml,蒸馏水1000ml,。
制法:将蛋白胨、磷酸盐、琼脂溶解于蒸馏水中,调pH,于121℃下灭菌15min备用。
临用时加热融化琼脂,并加入乳糖,冷却至50~55℃时加入伊红和美蓝溶液,混合均匀后浇平板。
三精铁琼脂成分:蛋白胨:20g,牛肉膏:5g,乳糖:10g,蔗糖:10g,葡萄糖:1g,氯化钠:5g,六水硫酸亚铁铵:0.2g,硫代硫酸钠:0.2g,琼脂:12g,酚红:0.025g,蒸馏水:1000ml,。
制法:将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中,调pH,然后加入琼脂,加热溶解,加入%酚红水溶液,摇匀,分装时量多一点,于121℃下灭菌15min,搁高层斜面备用。
葡萄糖半固体发酵管成分:蛋白胨:1g,牛肉膏:0.3g,氯化钠:0.5g,%溴甲酚紫酒精溶液:,葡萄糖:1g,琼脂:0.3g,蒸馏水:100ml,。
制法:将蛋白胨,牛肉膏,氯化钠加入水中,调pH后,加入琼脂,煮沸溶解,再加入指示剂和葡萄糖。
分装,于121℃下灭菌15min,备用。
半固体管成分:蛋白胨:1g,牛肉膏:0.3g,氯化钠:0.5g,琼脂:~0.4g,蒸馏水:100ml,。
制法:将上述成分溶于水中,加热煮沸,并调pH后分装小试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用。
尿素琼脂成分:蛋白胨:1g,氯化钠:5g,葡萄糖1g,磷酸二氢钾:2g,%酚红溶液:3ml,琼脂:20g,蒸馏水:1000ml,20%尿素:100ml,±。
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,调pH,加入琼脂后加热使其溶化并分装小瓶,121℃高压灭菌15min,冷却至50~55℃后,加入经过滤灭菌的尿素溶液,最终尿素浓度为2%,最终的pH应为±。
分装于灭菌试管内,搁斜面备用。
西蒙氏柠檬酸盐琼脂成分:氯化钠:5g,七水硫酸镁:0.2g,磷酸二氢铵:1g,磷酸氢二甲:1g,柠檬酸钠:5g,琼脂:20g,蒸馏水:1000ml,%溴麝香草酚蓝溶液:40ml,。
制法:先将盐类溶解于水中,调pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃下灭菌15min,搁成斜面。
实验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36℃±1℃培养4天,每天观察结果,阳性者斜面上有菌落生长。
培养基由绿色转为蓝色。
氰化钾(KCN)培养基成分:蛋白胨:10g,氯化钠:5g,磷酸二氢钾:0.225g,磷酸氢二钠:5.64g,蒸馏水:1000ml,%氰化钾溶液:20ml,。
制法:将除氰化钾以外的成分配好分装,121℃灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却,每100ml培养基加入%氰化钾溶液(最后浓度为1:10000),分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4ml,立刻用橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月,同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装备用。
试验方法:将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成作为稀释菌液,挑取1环接种于氰化钾培养基,另外挑取1环接种于对照培养基,在36℃±1℃下培养1~2天,观察结果,如有细菌生长,则为阳性,经2天后不生长则为阴性。
注:氰化钾是剧毒物质,使用时应小心,切勿沾染,以免中毒。
夏天分装培养基应在冰箱内进行,实验失败的主要原因是封口不严,氰化钾逐渐分解,变成氢氰酸气体逸出,以致药物浓度降低,细菌生长,造成假阳性现象。
氨基酸脱羧酶实验培养基成分:蛋白胨:5g,酵母浸膏:3g,葡萄糖:1g,蒸馏水:1000ml,%溴甲酚紫乙醇溶液:1ml,L-氨基酸或DL-氨基酸:0.5g或1g/100ml,。
制法:除氨基酸以外的所有成分加热溶解后,分装每瓶100ml,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。
L-氨基酸按%加入,DL-氨基酸按1%加入。
再调,对照培养基不加氨基酸。
分装于灭菌的小试管内,每管,上面滴加一层液体石蜡。
115℃高压灭菌10min。
实验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36℃±1℃下培养18~24h,观察结果,氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。
阴性者因为碱性物质产生,但因葡萄糖产酸而是培养基变成黄色,对照管应为黄色。
蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨或胰蛋白胨:20g,氯化钠:5g,蒸馏水:1000ml,制法:将上述成飞混合均匀,分装小管,121℃灭菌15min。
靛基质试剂:柯凡克试剂:将5g对二氨基甲醛溶于75ml戊醇中,然后慢慢加入浓盐酸25ml。
欧-波试剂:将1g对二氨基苯甲醛溶于90ml95%的乙醇内,然后慢慢加入浓盐酸20ml。
实验方法:挑取少量接种物接种,在36℃±1℃下培养1~2天,必要时可培养4~5天,加入柯凡克试剂约,轻摇试管,阳性者试剂层呈深红色,或加入欧-波试剂,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者接触面上呈玫瑰红色。
注:蛋白胨应含有丰富的色氨酸,每批蛋白胨买来后应用已知菌种实验。
糖发酵管成分:牛肉膏:5g,蛋白胨:10g,氯化钠:3g,十二水磷酸氢二钠:2g,%溴麝香草酚蓝溶液:12ml,蒸馏水:1000ml,。
葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃灭菌15min。
其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100ml,121℃灭菌15min,另将各种糖类配好10%溶液,一同灭菌,将5ml糖溶液加入到100ml液体培养基中,以无菌操作分装小试管。
注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
实验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃,一般观察2~3天,迟缓反应需观察14~30天。
5%乳糖发酵管成分:蛋白胨:0.2g,氯化钠:0.5g,乳糖:5g,2%溴麝香草酚蓝水溶液:,蒸馏水:100ml,。
制法:除乳糖以外的各成分溶解于50ml蒸馏水内,调pH,将乳糖溶解于另外50ml蒸馏水中,分别于121℃灭菌15min,将两者混合,以无菌操作分装到小试管中。
注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1天内发酵。