试验八大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定

大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。

这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。

本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。

大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。

醇提法是最常用的提取方法之一。

一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。

以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。

（2）加热回流提取1小时。

（3）过滤，滤去残渣。

（4）将过滤液浓缩至干燥。

（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。

大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。

其中，高效液相色谱技术最常用。

根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。

以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。

（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。

大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。

其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。

（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。

（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。

（4）记录在特定波长下的吸光度。

（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。

总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。

通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。

大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。

由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。

根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。

2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。

具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。

以分离酸度不同的蒽醌苷元。

也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。

（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。

三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。

大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。

通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。

首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。

对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。

高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。

通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。

同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。

一、实验目的1. 掌握大黄游离蒽醌的提取方法。

2. 熟悉大黄游离蒽醌的分离与鉴定技术。

3. 了解大黄游离蒽醌的药理作用及临床应用。

二、实验原理大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎。

大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷等成分，其中大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌类成分具有显著的生物活性。

本实验采用pH梯度萃取法提取大黄中的游离蒽醌类成分，并通过高效液相色谱法（HPLC）对其进行分离和鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、氯仿、甲醇、乙腈、0.1%磷酸水、Diamonsil C18色谱柱等。

2. 实验仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。

四、实验方法1. 大黄游离蒽醌的提取（1）称取大黄粗粉10g，加入100mL甲醇，超声提取30min。

（2）过滤，滤液浓缩至约10mL。

（3）向浓缩液中加入5mL浓硫酸，搅拌均匀，室温放置过夜。

（4）加入5mL氯仿，剧烈振荡，静置分层。

（5）吸取氯仿层，重复步骤（3）和（4）至氯仿层颜色变浅。

（6）合并氯仿层，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩至干。

（7）用甲醇溶解残渣，定容至10mL，得大黄游离蒽醌提取液。

2. 大黄游离蒽醌的分离与鉴定（1）色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水（75:25）；流速：1mL·min-1；柱温：35℃；检测波长：254nm。

（2）样品处理：取大黄游离蒽醌提取液，过0.22μm微孔滤膜，进样。

（3）数据分析：根据保留时间、峰面积等数据，对大黄游离蒽醌进行鉴定。

五、实验结果与分析1. 大黄游离蒽醌的提取通过pH梯度萃取法，从大黄中成功提取出游离蒽醌类成分。

实验结果显示，大黄中主要含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等成分。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。

仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL 分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。

三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。

其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。

其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。

根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3大黄酚 R1=CH3 R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 5%Na大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl % NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。

大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。

提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。

在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。

2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。

为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。

柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。

薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。

3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。

常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。

红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。

以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。

一、实验目的1. 掌握大黄的提取、分离和鉴定方法。

2. 熟悉大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定过程。

3. 了解大黄中游离蒽醌的提取方法。

二、实验原理大黄是一种传统的中药材，具有清热解毒、凉血止血等功效。

大黄中含有丰富的蒽醌类成分，如大黄素、大黄酚等，这些成分具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等药理作用。

本实验采用酸水解法提取大黄中的蒽醌类成分，并通过薄层色谱（TLC）法进行分离和鉴定。

三、实验材料与仪器1. 材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaOH溶液、乙醚、硅胶G板、展开剂、显色剂等。

2. 仪器：电热恒温水浴锅、分析天平、研钵、滤纸、毛细管、紫外灯等。

四、实验步骤1. 大黄粗粉的制备：将大黄粗粉过40目筛，备用。

2. 酸水解：称取大黄粗粉10g，加入20%H2SO4水溶液150mL，置于电热恒温水浴锅中加热1小时，放冷，抽滤。

滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎。

3. 萃取：将干燥后的大黄粉末置于250mL回流装置中，加入适量乙醚，加热回流提取1小时。

冷却后，将提取液过滤，滤液即为大黄中游离蒽醌的提取液。

4. 分离：将提取液用TLC法进行分离。

具体操作如下：（1）制备硅胶G板：取硅胶G适量，加入适量水，搅拌均匀，倒入涂板器中，涂成均匀的涂层，晾干。

（2）点样：用毛细管吸取提取液，点于硅胶G板上，重复点样，直至样品点干。

（3）展开：将点样的硅胶G板置于展开剂中，展开至适宜位置。

（4）显色：取出展开后的硅胶G板，晾干，用显色剂进行显色。

5. 鉴定：根据大黄中游离蒽醌的Rf值，与标准品进行比较，确定大黄中游离蒽醌的种类。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过TLC法分离，大黄中提取出大黄素、大黄酚等蒽醌类成分。

2. 分析：大黄中游离蒽醌的提取、分离和鉴定成功，表明实验方法可行。

六、实验讨论1. 酸水解法提取大黄中蒽醌类成分，具有操作简便、提取效率高等优点。

2. TLC法分离大黄中蒽醌类成分，操作简便，分离效果好。

大黄游离蒽醌实验报告大黄游离蒽醌实验报告大黄游离蒽醌实验报告引言：大黄是一种常见的中药材，被广泛用于治疗便秘和胃肠道问题。

它的主要成分是蒽醌类化合物，其中最主要的成分是大黄素。

本实验旨在通过提取大黄中的大黄素，并通过游离蒽醌实验验证提取物中的有效成分。

实验步骤：1. 材料准备：我们使用的材料包括大黄粉末、乙醇和氯化钠。

2. 提取大黄素：首先，我们将大黄粉末与乙醇混合，并在常温下搅拌30分钟，以使大黄素充分溶解。

然后，用滤纸过滤混合物，收集滤液。

接下来，将滤液转移到蒸发皿中，用低温蒸发法除去乙醇，得到提取物。

3. 游离蒽醌实验：我们将提取物与氯化钠溶液混合，并用酸性醇溶液进行萃取。

然后，我们将萃取液进行离心分离，并收集上层溶液。

最后，我们用紫外可见光谱仪测量上层溶液的吸光度，以确定其中游离蒽醌的含量。

实验结果：通过游离蒽醌实验，我们测量了提取物中游离蒽醌的含量。

根据测量结果，我们发现提取物中的游离蒽醌含量为XX mg/mL。

这表明我们成功地从大黄中提取出了游离蒽醌，并且提取物中的游离蒽醌含量较高。

讨论：大黄素是一种具有抗炎、抗菌和抗氧化等多种药理作用的物质。

游离蒽醌实验是一种常用的方法，用于检测大黄素的含量。

通过本实验，我们确定了大黄提取物中游离蒽醌的含量，这为进一步研究大黄的药理作用提供了基础。

然而，本实验存在一些局限性。

首先，我们只测量了游离蒽醌的含量，而没有对其他蒽醌类化合物进行测量。

因此，提取物中可能还存在其他有效成分。

其次，我们只使用了一种提取方法，可能有其他更有效的提取方法可以提高提取物中游离蒽醌的含量。

结论：本实验成功地从大黄中提取出了游离蒽醌，并通过游离蒽醌实验测量了其含量。

提取物中游离蒽醌的含量为XX mg/mL。

这为进一步研究大黄的药理作用提供了基础。

然而，还需要进一步研究以确定提取物中其他有效成分的含量，并尝试其他更有效的提取方法。

总结：大黄游离蒽醌实验是一种常用的方法，用于检测大黄中游离蒽醌的含量。

一、实验目的1. 熟悉大黄中蒽醌类成分的提取和分离方法。

2. 掌握pH梯度提取法的原理和操作技术。

3. 学习蒽醌类化合物的鉴定方法。

二、实验原理大黄是一种常用的中药材，具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种功效。

大黄中的主要有效成分是蒽醌类化合物，包括游离蒽醌和蒽醌苷。

本实验采用pH梯度提取法，利用蒽醌类化合物在不同pH值下的溶解度差异进行分离。

三、实验材料1. 材料：大黄药材（掌叶大黄或唐古特大黄）2. 试剂：浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、浓硝酸、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、硅胶G、CMC等3. 器械：粉碎机、索氏提取器、分液漏斗、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管、30cm层析缸、标本瓶、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、薄层板、喷雾器、广泛pH试纸等四、实验步骤1. 粉碎：将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到大黄粗粉，经80目筛子过筛。

2. 酸解：取大黄粗粉50g，加入100ml浓硫酸，搅拌均匀，于索氏提取器中加热回流3小时，使蒽醌苷水解成苷元。

3. 水洗、抽滤、干燥：将酸解液过滤，用蒸馏水洗涤滤渣，抽滤，将滤液浓缩至约20ml，蒸干，得大黄蒽醌提取物。

4. 萃取结晶：将大黄蒽醌提取物用乙醚萃取，萃取液浓缩至干，得大黄蒽醌结晶。

5. 硅胶薄层层析：取大黄蒽醌结晶适量，加适量石油醚溶解，点于硅胶薄层板上，用苯-乙醚（8:2）为展开剂进行层析，晾干后观察斑点。

6. 纤维素柱层析：将硅胶薄层层析得到的大黄蒽醌结晶，用石油醚溶解，上柱，用苯-乙醚（8:2）为洗脱剂进行柱层析，收集各组分。

7. 鉴定：取各组分适量，加2%的氢氧化钠溶液1ml，观察颜色变化，鉴定游离蒽醌的种类。

五、实验结果1. 通过实验，成功提取出大黄中的蒽醌类化合物。

2. 通过硅胶薄层层析和纤维素柱层析，将大黄蒽醌类化合物分离为多个组分。

3. 通过鉴定，确定了大黄中游离蒽醌的种类，包括大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸等。

大黄中大黄素的提取、分离与鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握PH梯度提取法的原理和操作技术（3）掌握蒽醌类化合物鉴定方法（4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法二、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。

其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物,其中大部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。

结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很小。

游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。

其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。

根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

【1】本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其R f值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。

【2】大黄酸：黄色针状结晶mp.321—322℃（升华），不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。

大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257℃（乙醇或冰醋酸），能升华。

其溶解度如下：四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%。

易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。

【3】大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H三、实验器材试药：大黄粗粉、20%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油醚、大黄素标准品等仪器：回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉30g【4】20%H2SO4150ml加热1h,抽滤、干燥滤饼乙酸乙酯回流提取1h乙酸乙酯层5%NaHCO3萃取水层（紫红色）乙酸乙酯层5%Na2CO3水层（红色）乙酸乙酯层（弃掉）HCl黄色沉淀（粗品）水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化大黄素结晶具体操作步骤：1.游离蒽醌的提取称取大黄粗粉30g，加20%H2SO4水溶液150mL，加热1小时，放冷，抽滤，同时滤饼水洗至近中性（除去H2SO4），于70℃干燥后，置回流装置中，加入乙酸乙酯300mL回流提取1小时，得到乙酸乙酯提取液。

大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。

2．掌握PH梯度法的原理及操作技术。

3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。

4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。

实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。

所以要用酸水解使其生成苷元。

蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。

氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。

2．总蒽醌苷元分离方案的设计1)大黄总蒽醌苷元的纸色谱2) 蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验3)最佳萃取剂及其用量的确定4)蒽醌类成分各种萃取剂用量的确定5)新分离方法的设计3．蒽醌类成分的分离与精制①大黄酸的分离与精制将含有总游离蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液275ml振摇萃取，静置至彻底分层，放出氯仿液后，到出碱水液至置250ml烧杯中，加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。

②大黄素的分离与精制将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液275ml振摇萃取，彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经干燥后，用10ml 冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄素纯品。

③芦荟大黄素的分离和精制余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液540ml或用0.5%KOH540ml振摇萃取，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。

利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分中药大黄是一种常用的中药材，具有泻火泄结、通便利湿的功效。

大黄中的有效成分主要包括蒽醌类物质，例如大黄素、大黄酚等。

这些蒽醌类物质对于大黄的药效起着重要作用。

提取大黄中的游离蒽醌组分对于深入研究大黄的药理作用以及进一步研发和利用大黄具有重要意义。

在提取大黄中的蒽醌类物质时，pH梯度萃取法被广泛应用，具有提取效率高、操作简便等优点，因此成为当前研究的热点之一。

1. pH梯度萃取法的原理pH梯度萃取法是一种根据化合物在不同pH条件下的电荷性质而进行分离提取的方法。

在这种方法中，通过调节提取液的pH值，使得目标物质在不同pH条件下具有不同的电荷性质，从而实现其在不同相（例如有机相和水相）之间的分配和分离。

一般可以利用两种不同pH值的提取液，使得待提取物质在两种不同相之间进行分配，最终达到分离提取的目的。

在提取大黄中的游离蒽醌组分时，pH梯度萃取法被广泛应用。

由于蒽醌类物质具有酚羟基和酮羰基等官能团，因此在不同pH条件下具有不同的电荷性质。

一般来说，蒽醌类物质在酸性条件下以酚酸形式存在，而在碱性条件下以酚醌形式存在。

通过调节提取液的pH 值，可以使得蒽醌类物质在不同相之间进行分配和分离。

在实际操作中，可以利用有机溶剂和酸性或碱性水溶液构建pH梯度，从而实现大黄中游离蒽醌组分的高效提取。

（1）制备提取液：根据实验需要，选取合适的有机溶剂和酸性或碱性水溶液，并分别调节它们的pH值，构建两种不同pH值的提取液。

（2）样品预处理：将待提取的大黄样品进行粉碎和干燥处理，以增加提取效率。

（3）提取过程：将样品与有机溶剂和酸性或碱性水溶液中的一种进行混合并充分摇匀，使得目标物质在两种不同相之间分配平衡。

然后将两种相分离，并分别收集。

（4）重复提取：根据需要，可以重复进行多次提取，以增加提取效率。

（5）浓缩提取液：通过蒸发或其他方法将提取液进行浓缩，得到目标物质的浓缩物。

（6）分析鉴定：对提取得到的物质进行分析鉴定，确定其中的游离蒽醌组分并进行定量分析。

大黄中游离蒽醌的提取、分离的实训操作王英;万红;彭志芬【摘要】大黄是我国的常用中药之一,含有多种蒽醌化合物,是具有代表性的蒽醌类衍生物,在中药化学、天然药物化学课程中都有大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识的实验课程,在操作中运用到回流、连续回流、PH梯度法和色谱法.目的通过对大黄中游离蒽醌的提取、分离的实训操作,使学生能够轻松掌握回流、连续回流、PH梯度法的原理及操作技术,鉴定方法和运用色谱法进行蒽醌类成分的鉴别.【期刊名称】《中国中医药现代远程教育》【年(卷),期】2015(013)022【总页数】2页(P148-149)【关键词】大黄;游离蒽醌;中药化学【作者】王英;万红;彭志芬【作者单位】江西中医药高等专科学校药学系,抚州 344000;江西中医药高等专科学校药学系,抚州 344000;江西中医药高等专科学校药学系,抚州 344000【正文语种】中文大黄是我国的四大中药之一，名火参、金木、破门、绵纹等，来源于蓼科植物掌叶大黄、药用大黄或唐特大黄的根及根茎。

性寒，味苦，具有攻积导滞、泻火凉血、活血化瘀、利胆退黄的功效，内服治疗肠胃积滞、大便不通，外用治疗烧伤，并有止血作用，近来又将大黄中的游离蒽醌用作抗菌消炎药，其药性峻烈，素有“将军”之称，是具有代表性的蒽醌类衍生物，在中药化学、天然药物化学课程中都有大黄中游离蒽醌的提取分离与检识的实验，如何上好本实验课，我们认为如下做，有利于学生掌握操作。

掌握回流、连续回流、PH梯度法的原理及操作技术。

掌握蒽醌类化合物鉴定方法。

能够运用色谱法进行蒽醌类成分的鉴别。

大黄的主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%～5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元主要有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酚，结构如图1：大黄中的羟基蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元，苷元可溶于氯仿而被提取，再根据各羟基蒽醌的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。