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细菌内毒素检查法应用指导原则细菌内毒素检查法应用指导原则1. 引言在当前社会背景下，食品安全问题备受关注，并且细菌内毒素作为食品中的一种重要污染物质也越来越受到重视。
为了确保食品的安全性，细菌内毒素检查成为一项非常重要的工作。
本文将从深度和广度的角度来评估细菌内毒素检查法的应用指导原则，并根据该主题进行讨论。
2. 细菌内毒素检查法的概述细菌内毒素是由细菌产生的一种有毒物质，它们可以污染食品并对人体健康造成潜在威胁。
细菌内毒素检查法的应用非常重要。
该方法一般包括样品准备、提取和分析等步骤。
通过采用适当的检测技术和方法，可以准确可靠地检测细菌内毒素的存在和含量。
3. 细菌内毒素检查法的准备工作在进行细菌内毒素检查之前，必须进行一些准备工作。
需要确定检测的细菌种类和内毒素类型，以便选择适当的检测方法。
样品的收集和保存也是一项关键工作，应该注意避免污染或降解。
还需要准备相关的实验室设备、试剂和标准品等。
4. 细菌内毒素检查的主要技术方法目前，细菌内毒素检查主要采用生物学方法和化学方法两种主要技术。
生物学方法包括毒素制备、生物学活性试验和鉴定等步骤，通常用于细菌内毒素的初步筛查。
而化学方法则依靠物质的化学性质或光学性质来进行分析和检测，常用的方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和质谱法等。
5. 细菌内毒素检查的应用指导原则为了保证细菌内毒素检查的质量和准确性，应遵循以下应用指导原则：5.1 样品选择：应根据实际情况选择适当的样品进行检测，要注意样品的来源、存储和处理方式。
5.2 样品制备：样品必须按照规定的方法进行提取和制备，确保细菌内毒素的稳定性和提取效率。
5.3 适当的检测方法：应根据细菌种类和内毒素类型选择适当的检测方法，确保检测结果的准确性和可靠性。
5.4 外部质量控制：在进行细菌内毒素检查时，应严格遵循外部质量控制的要求，包括使用标准品进行校准和内毒素的稀释等。
5.5 结果解释和评估：在得到检测结果后，需要对结果进行解释和评估，确保对检测结果的理解和使用是正确的。
凝胶法检查细菌内毒素应注意的问题为了确保凝胶法测定细菌内毒素的准确性，我们通过对凝胶法准确性干扰因素的分析(包括鲎试剂本身、操作条件、原料及其他)，指出了应用凝胶法测定细菌内毒素时应注意的问题。
最后认为只要克服了检查中的干扰因素，凝胶法是最简单、经济、应用最广泛检查细菌内毒素的方法。
此外此种方法对干扰不敏感，为《中国药典》的“仲裁”方法。
标签：凝胶法；热原；注意事项《中国药典》2005年版二部将细菌内毒素检查法分为凝胶法和光度测定法。
因凝胶法具有最简单、经济，应用最广泛，对干扰不敏感的优点，因此为《中国药典》的“仲裁”检查方法，而广泛用于注射剂药品细菌内毒素的检查。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
中国药典1995年版已收载细菌内毒素检查法(简称鲎试验)，但只用于几种输液的检查。
根据现有的实验证明，凡不干扰细菌内毒素检查或虽有干扰，但可以克服的药品注射剂，将能够以凝胶法代替家兔热原检查法。
多年以来的实践证明，进行细菌内毒素检查前必须具备的条件是：①实验所用器具“无细菌内毒素”；②鲎试剂灵敏度的确证；③无干扰因素。
这3条也是检验细菌内毒素试验是否有效的重要标准。
用凝胶法做细菌内毒素的检查时应注意以下问题：1 鲎试剂本身1.1 鲎试剂灵敏度为了保证检查细菌内毒素结果的准确性，用于试验的鲎试剂应首先核对灵敏度。
当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验对结果的改变时，需进行灵敏度复核试验。
因为在我们的实际工作中，发现鲎试剂均符合药典规定标准前提下，由于生产厂家不同，批号不同，部分鲎试剂的实测灵敏度与标示值有差异而导致检测同一检品时，用相同标示值的鲎试剂，出现不同结果。
因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。
建议到省、市、县药检所购入鲎试剂。
1.2 供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶质中浸提制成供试品溶液。
首先确定供试品的内毒素限值(EU/ml)，公式为L=K/M，L为供试品内毒素限值，然后计算出供试品最大有效稀释倍数（MVD）MVD=cL/λ，其中c为供试品溶液的浓度，λ为在凝胶法中鲎试剂灵敏度(EU/ml)。
细菌内毒素检查仪安全操作及保养规程细菌内毒素检查仪是一种测定样品中是否存在内毒素的仪器。
在使用该仪器时，需要严格遵守操作规程，以确保实验安全和数据准确性。
本文将介绍细菌内毒素检查仪的安全操作和保养规程。
操作规程前期准备在操作细菌内毒素检查仪之前，必须进行以下准备：1.确定实验室内符合要求的工作环境。
2.按照厂家提供的操作手册检查仪器的完整性和性能是否正常。
3.预热仪器至稳定状态，通常需要30分钟左右。
样品操作1.打开仪器，等待其进入空闲状态。
2.将标准样品和待测样品稀释至一定浓度，并加入到试剂盘中。
3.将试剂盘放入仪器中，并按照操作手册的要求启动检测程序。
4.在仪器完成检测后，从试剂盘中取出样品，并关闭仪器。
清洗操作1.在取出试剂盘后，立即将试剂盘中的残留试剂倒掉。
2.对试剂盘进行物理清洗。
使用化学溶剂前请先了解溶剂的物理性质，注意防止划伤、断裂和溅泼等情况的发生。
3.重新装载试剂盘，并进行仪器的预热步骤。
技术要求1.操作者必须经过相关培训，了解细菌内毒素检查仪的操作原理和方法。
2.操作者必须佩戴适当的防护装备，如实验手套、护目镜等。
3.操作者必须在出现故障或异常状况时立即停止检测并联系维修人员。
保养规程以细菌内毒素检查仪为例，保养规程分为日常保养和定期保养两部分。
日常保养日常保养是指在每天使用仪器之前和之后的清洁和检查。
具体操作如下：1.清洁仪器表面，用柔软的布擦拭干净，不要使用含有毒性的化学试剂进行清洁。
2.清洁试剂盘，用芳香性清洁剂清洗并擦干，不能用水清洁，避免产生水渍或氧化。
3.检查试剂盘、样品载架和其他仪器部件是否完好无损，如损坏应及时更换。
定期保养定期保养是指细菌内毒素检查仪在长时间使用或维护保养期间需要进行的操作。
具体操作如下：1.仪器的芯片和电子部件可能存在老化、腐蚀、锈蚀等情况，因此定期对仪器进行内部清晰和检修。
2.定期对仪器进行校准，可在正常操作前进行，以保证检测准确性。
3.定期检查仪器的电源线和接线是否存在磨损、剥皮、断裂或腐蚀等情况，避免电源线或接线出现不良现象，如如有出现及时更换电源线或接线。
细菌内毒素检测标准细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒物质，它可以对人体和动物的健康造成严重危害。
因此，对细菌内毒素的检测是非常重要的。
目前，国际上已经建立了一系列的细菌内毒素检测标准，以确保检测结果的准确性和可靠性。
首先，细菌内毒素检测标准包括了样品的采集和处理方法。
在采集样品时，需要注意避免污染和样品损坏，同时还要确保样品的代表性。
对于不同类型的样品，比如食品、药品、环境样品等，都有相应的采集和处理方法，以保证检测结果的准确性。
其次，细菌内毒素检测标准还包括了检测方法和技术的要求。
目前常用的检测方法包括生物学检测方法、化学检测方法和免疫学检测方法等。
这些方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方法进行检测。
同时，检测设备和仪器的精密度和准确性也是检测标准中非常重要的一部分。
另外，细菌内毒素检测标准还规定了检测结果的解读和评定标准。
对于检测结果的阳性和阴性判定，以及毒素含量的测定，都有相应的标准和规定。
这些标准旨在保证检测结果的准确性和可比性，从而为食品安全、医药卫生等领域提供可靠的数据支持。
最后，细菌内毒素检测标准还包括了实验室质量控制和质量保证体系的要求。
实验室需要建立完善的质量管理体系，包括设备校准、人员培训、实验操作规范等，以确保检测结果的准确性和可靠性。
总的来说，细菌内毒素检测标准是一套系统完整的标准体系，它涵盖了样品采集、检测方法、结果解读和质量保证等方方面面。
这些标准的建立和执行，对于保障食品安全、医药卫生等领域的公共健康具有重要意义。
希望各相关单位和人员能够严格执行这些标准，确保细菌内毒素检测工作的准确性和可靠性。
细菌内毒素检测标准一、范围：本试验为《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”中规定的“凝胶法”，系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝胶反应的机理，经判定供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定。
二、依据：GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法。
第二部分：生物学试验方法。
《中华人民共和国药典》2010年版二部三、器具及试剂：1.器材：（1）锥形瓶（2）三角烧瓶（3）无热原剪刀、镊子（4）恒温培养箱（5）超净工作台（6）恒温水浴箱（7）电热干燥箱（8）旋涡混合器（9）移液器2.试剂：（1）细菌内毒素国家标准品（2）细菌内毒素工作标准品（3）鲎试剂（4）细菌内毒素检查用水四、实验前准备：1.器具处理：试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素。
玻璃器皿置电热干燥箱内1800C干烤至少2h，或2500C干烤至少30min。
塑料器皿置30%双氧水中浸泡4h，再用细菌内毒检查用水充分冲洗后置600C烘干备用。
2.鲎试剂灵敏度复核实验：当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度试验。
试验步骤按《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”中规定进行。
3.供试品干扰实验：（1）对未知或可疑的供试品初次进行细菌内毒素试验之前应先进行干扰试验，以检验供试品对细菌内毒素试验是否有抑制或增强作用，以及其他影响细菌内毒素试验准确性和敏感性的干扰作用。
当鲎试剂、供试品来源、供试品配方或生产工艺有变化或其他任何影响细菌内毒素试验结果的试验条件改变时，应重新进行干扰实验。
（2）每种产品应取3批并分别使用不少于两个制造商生产的鲎试剂进行干扰实验。
供试液制备按《中国药典（二部）》附录“细菌内毒素检查法”规定进行。
（3）如供试品对细菌内毒素试验有干扰作用，可选用下列适宜方法排除干扰：a)使用更灵敏的鲎试剂对供试品进行更大倍数稀释;b)采用无热原氨基甲烷缓冲液稀释供试液;c)采用无热原氢氧化钠或盐酸溶液调节供试液pH值在6.0-8.0范围;d)采用阳离子缓冲（MgSO4或MgCl2）稀释供试液以调节离子浓度。
1 目的规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。
2 范围适用于本厂质监科化验室对注射用水的细菌内毒素检验。
3 责任化验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。
4 内容本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1仪器、用具4.1.1旋涡混合器、注射器（2.0ml、1.0ml）、注射针（6号、9号）、保鲜纸、试管（10×75 mm）、镊子（金属）、金属盒。
4.1.2用具除去外源性内毒素：将用具放入金属盒，在250℃干烤30分钟或180℃干烤120分钟。
4.2试剂4.2.1细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2.2细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价应不小于2EU，不大于50EU。
4.2.3细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37℃±1℃条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
4.2.4鲎试剂：0.1ml/支（λ=0.5EU/ml）。
4.3鲎试剂灵敏度复核试验鲎试剂灵敏度的标示值（λ，此处λ=0.5EU/ml）,将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合15分钟，然后制备成合适的稀释浓度，1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
按检查法项下试验，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值λc。
λc=lg-1(∑X/4)式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。
反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。
*******制药有限责任公司目的：建立一个规范的细菌内毒素检查操作规程。
范围：本规程适用于细菌内毒素检查。
职责：生物检测人员对本规程实施负责。
内容：1 准备工作1.1 设备用具的洗涤及除热原1.1.1 设备与用具刻度吸管(1、2、5、10ml)、10mm³75mm试管、试管架、不锈钢盒(或铝饭盒)、不锈钢筒(或铝筒)、洗耳球、电热干燥箱、恒温水浴箱、定时钟、电冰箱、旋涡混合器。
1.1.2 洗涤及除热原所用的玻璃器皿，先用自来水冲洗，再浸泡在洗液中过夜，取出后用自来水冲洗至pH中性，再用注射用水冲洗三次。
将刻度吸管放入金属筒内，试管、小瓶等放入金属盒内，于250℃干烤至少60分钟，也可采用其其它确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
若使用塑料器械，如微孔板和微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。
1.2 试剂与标准品1.2.1 内毒素检查用水(即无热原水)，为内毒素含量不超过0.015Eu/mL的灭菌注射用水。
1.2.2 75%酒精棉。
1.2.3 细菌内毒素工作标准品，系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
由中国药品生物制品检定所标定和供应。
1.2.4 供试品溶液的制备：某些供试品需进行复溶，稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH值在6.0—8.0的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家的推荐的适宜的缓冲液调节pH值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
内毒素限值的确定：药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：L=K/M式中：L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg²h)表示，注射剂K=5EU/(kg²h)，放射性药品注射剂K=2.5EU/( kg²h)，鞘内用注射剂K=0.2EU/( kg²h)；M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/(kg²h)、mg/( kg²h)或U( kg²h)表示，人均体重按60Kg计算，注射时间若不足1小时，按1小时计算。
******有限公司标准操作规程目的建立细菌内毒素检查操作规程，保证检测结果的准确性。
适用范围所有原料、成品的细菌内毒素检查。
责任人QC检验员内容1 简述1.1 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌毒素的限量是否符合规定的一种方法。
1.2 细菌内毒素检查包括凝胶法和光度测定法两种方法。
供试品检测时可使用其中任何一种方法。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.3 本规范适用于凝胶法检查。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
1.4 细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示1.5 细菌内毒素国家标准品(NSE)系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
1.6 细菌内毒素工作标准品(WSE)系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
1.7 凝胶法细菌内毒素检查用水(BET水)系指内毒素含量小于0.015Eu/ml灭菌注射用水。
光度测定法用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005Eu/ml。
1.8 鲎试剂灵敏度复核试验在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素******有限公司标准操作规程的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度,用EU/ml表示。
当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
1.9 供试品干扰试验项用于建立新品种细菌内毒素检查方法以及供试品的配方和生产工艺或试验环境有变化，鲎试剂来源不同或供试品阳性对照结果呈阴性时确定供试品是否存在抑制或增强作用。
1.10 检查法项为供试品细菌内毒素检查方法。
阴性对照、阳性对照和供试品阳性对照必须同时进行，否则试验结果无效。
2实验材料及用具2.1 天平供试品称量用，感量为0.1mg以下。
2.2 电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能维持250℃以上至少一小时。
细菌内毒素检查法的正确理解
·如何全面理解细菌内毒素检查法中污染物对试验结果的影响？
·如何正确认识器皿洗涤的重要性？
·如何正确理解鲎试剂的抗干扰能力和鲎试剂的特异性？
许多客户对污染的认识是不全面或错误的，他们认为在细菌内毒素检查过程中，器皿被污染的结果必然导致阳性结果的出现，但试验结果正好与他们的认识有时正好相反，可能阳性对照全为阴性，对此亦有百思不得其解。
要正确理解这个问题，首先要正确理解鲎试剂与内毒素的反应机理，鲎试剂与内毒素的反应为一系列酶反应，生物酶反应受许多因素的干扰。
在日常工作中，我们要特别注意一些因素对试验结果的影响，如PH值、器皿的洁净度以及环境因素等。
图1 鲎试剂与内毒素的反应机理
1、PH值：鲎试剂生物活性在pH 6-8时酶活性稳定；pH ≤3 或≥10时，酶活性受到抑制。
故鲎试验时，供试品 pH 最好应预调和6.8-8.0 为好，必要时可用无内毒素的 HCl 或NaOH 稀溶液调节 pH 值。
2、器皿：内毒素稀释不宜用注射器，而应用经过校正的刻度玻璃吸管。
因为注射器刻度准确度差，而且针栓壁磨沙面易吸附内毒素，试验误差大。
同时要特别注意注射器针头引入的铁离子对试验结果的干扰，铁离
子对鲎试验反应有较强的抑制作用。
操作中常用的聚丙烯塑料管可能干扰试验结果，故宜慎用。
3、金属阳离子：离子对细菌内毒素测定结果影响较大，一方面阳离子如Fe3+、Al3+强度较大会引起内毒素的聚集造成内毒素局部浓度过高，同时还必须注意高价阳离子（如Fe3+）对鲎试剂酶反应具有强抑制作用；另一方面鲎试剂必须在二价阳离子Ca2+、Mg2+的参与下才能被激活形成凝胶反应。
许多药物因PH值≥10时，其中的阴离子会吸收鲎试剂中的 Ca2+、Mg2+离子，使实验呈假阴性。
4、其它物质：如血液中的凝血因子、络合剂、抗凝剂等，都可能干扰鲎试剂与内毒素的反应，同时消毒剂和有机溶剂对鲎试验都有抑制作用。
一、器皿洗涤的重要性
《中国生物制品操作规程》389页——细菌内毒素检查法“玻璃器皿的洗涤”规定：“将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并烘干水分后，置洗液中浸泡4小时，取出将洗液沥干，用自来水将残余的洗液洗净，再用新鲜蒸馏水冲洗干燥（禁用超纯水或久置的蒸馏水冲洗）后置适宜的密闭金属容器中，迅速置烤箱中，除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素。
”应特别注意，该规程明确规定最后冲洗玻璃器皿必须“用新鲜蒸馏水冲洗，禁用纯化水和久置的蒸馏水冲洗。
”有的客户使用反渗透制备的纯化水冲洗试验用玻璃器皿，结果试验中所有的阳性对照都为阴性，复核鲎试剂灵敏度时试验结果误差较大，这主要是由于纯化水和蒸馏水内在质量不同所造成的。
因纯化水中存在的阴阳离子经250℃高温干烤不能完全被破坏，这时不同的离子就产生对鲎试剂酶反应抑制或增强的反应，为了保证试验结果的准确性和检验报告的权威性，我们应该严格遵守操作规程，用新鲜多效蒸馏水冲洗鲎试验用玻璃器皿。
二、抗干扰能力和鲎试剂的特异性
有客户在做白蛋白的干扰试验时使用两个厂家的鲎试剂，干扰试验结果其中一个厂家的鲎试剂需要稀释4倍而另一个厂家的鲎试剂需要稀释8倍才能排除干扰。
据此向我们咨询是否稀释倍数小的鲎试剂抗干扰能力强？而稀释倍数大的鲎试剂抗干扰能力就差？我们认为对一些粘度较大
的产品白蛋白、医用透明质酸钠，建议使用8倍或16倍稀释来建立内毒素常规检查规程（SOP），因为鲎试验是一种复杂酶反应，任何一种药品、生物制品的浓度或粘度对试验结果皆有影响，是抑制还是增强反应仍需做具体的分析。
单纯以干扰试验的稀释倍数来判断鲎试剂的质量是片面的。
如何判断鲎试剂抗干扰能力，必须从几个方面进行分析：
1、鲎试剂灵敏度的差异不同厂家的鲎试剂虽然标示值（λ）相同，但仍然存在较大的误差。
比如，标示值为0.5EU/ml的鲎试剂，若有的产品真实灵敏度可能是0.75EU/ml或1.0EU/ml；而另一个厂家的鲎试剂可能是0.35EU/ml或0.25EU/ml时，按0.5-2λ误差标准都是合格产品，但对同一检品虽然在相同的稀释倍数下，这两个厂家的鲎试剂产品对内毒素的检出水平却不同。
2、鲎试剂与内毒素脂多糖反应的差异在正常的药品、生物制品生产时，因不同时期的原料来源和水源的因素，都可能导致半成品或成品污染的菌株不同，而导致内毒素脂多糖物质与鲎试剂反应的活性不同。
有的鲎试剂对革兰氏阴性菌或各种微生物产生的内毒素脂多糖均有敏感性，有的鲎试剂可能只对革兰氏阴性菌产生的内毒素敏感而对其它微生物产
生的内毒素脂多糖不敏感，故同一检品虽然在相同稀释倍数下，两个厂家的鲎试剂对内毒素的检出能力亦不同。
3、PH值的影响鲎试剂生产用水质量和BET水PH值的差异，可影响鲎试剂对内毒素脂多糖反应敏感性。
有的鲎试剂生产公司（或厂）的原料用水不是多效蒸馏水，而是利用一般纯化水，而且PH值都在6.0以下。
而鲎试剂的酶反应最佳PH值为6.8-8.0，所以一直以来美国、英国药典和日本药局方规定检品必须调节PH值6.0-8.0。
近几年来，鲎试剂特异性差所造成的后果比较隐蔽，不易被使用者所发现，但是这种危害性往往以人的生命为代价所表现出来。
《法律在线》报道：２０００年５月４日晚１０时，８岁女童何某某因扁桃体发炎，被父亲带到河南省某中心医院就诊。
医院为她所用的药物为青霉素，所用液体是该医院自己生产的２５０ｍｌ袋装生理盐水（批号20000427）。
输液约２０分钟后，何某某开始出现胸闷、全身颤抖等症状。
６小时后，经抢
救无效死亡。
２０００年５月８日，该医院将何一一使用的该院自制氯化钠注射液样品送往省质量检验部门检验，检验结果是：细菌内毒素不符合规定。
经医疗事故技术鉴定委员会鉴定，“患儿何某某因输入细菌内毒素超标的液体引起输液反应，输液反应导致主要脏器缺血缺氧，功能衰竭死亡”（豫医鉴〖2001〗10号），这是一起严重的由于内毒素漏检所造成的悲剧。
用我厂生产的海浪牌鲎试剂来检验该批生理盐水，同样检测出该药品注射液内毒素不合格。
同样的事故还发生在吉林省公主岭地区某制药厂和河北邯郸某制药厂，他们分别使用某企业的鲎试剂都没有检验出。
产品中的内毒素而造成产品漏检，造成临床大面积严重的输液反应，这种情况都是鲎试剂特异性差的一种表现。
对内毒素不合格的药品，便威胁到人民群众的生命安全。
鲎试剂的特异性系指在药品、生物制品和血液制品中鲎试剂能准确测出被测物质内毒素的能力，既不能造成样品内毒素的漏检，也不能将其它物质错判为内毒素。
目前我厂研究证明，已知能与鲎试剂发生反应的物质有细菌内毒素和β-葡聚糖，而内毒素反应曲线为S型特征曲线，β-葡聚糖反应曲线为经过0点的斜线。
如下图：
鲎试剂的特异性（专属性）差的另一种表现，是将其它物质（如β-葡聚糖）判定为内毒素，错误将合格药品判为不合格，造成制药厂直接经济损失。
例如在山东省青州某制药厂，该药厂生产5%葡萄糖注射液（规格：100ml 产品批号：0307040101）内毒素限量是合格的，但是用某公司的鲎试剂检验却是阳性。
该产品经我厂（湛江海洋生物制品厂）通过凝胶法检验是合格的。
我们对这种现象进行研究分析，认为应从鲎试剂的特异性方面考察。
我们通过定量检测，对这一批药品的反应数据、反应曲线和反应速率曲线进行研究分析，认为该批药品内毒素检测合格，验证了凝胶法结论的正确性，为该制药厂挽回经济损失。
通过以上几个方面的分析，干扰试验结果时稀释几倍能排除干扰并不重要，而对内毒素的检出能力（鲎试剂的特异性）才是最关键的，也是判定鲎试剂质量的唯一标准。
三、污染的全面理解
通过以上几个方面的分析，我们应认识到内毒素的污染只是其中之一，污染物的种类很多，影响情况也很复杂，比如样品中的药品及其它成分影响了样品的PH值、鲎试剂的特异性、内毒素的活性等。
这些污染物可能对鲎试剂与内毒素反应产生增强和抑制作用，其中以抑制作用为主。
试验环境（检验室空气洁净度、温度和湿度等）和操作程序都可能引起试验结果的差异，应引起大家的注意。
问题在于，虽然乙醇能破乳并在一定浓度一下没有干扰，但我的产品本身存在干扰。
在稀释倍数已经不能再大的情况下，参照药典的说明进行了过滤后（滤头用的是milipore的无菌无热源的专用滤头），就不存在干扰了。
可是对于验证的做法存在疑问，方法一，按05版SOP的方法，制备4λ工作标准品和2倍样品等比混合，得到的“2λ/供试品”为阳性，即没有干扰，方法二，按课题组长的提议制备400λ及供试品原液（稀释200倍后成为供试品）混合，共同稀释200倍后，得到的“2λ/供试品”为阴性，即有干扰。
（两种方法均过滤）
另外，我单独验证了过滤环节，不存在干扰。
这样的试验重复了好几次，结果无一例外。
分析下来，很有可能内毒素被吸附了，在样品稀释倍数较大的情况下，吸附不明显。
像这种情况应该选择那种方法？按照药典规范操作样品的确是合格的。
