新城疫抗体水平检测

新城疫抗体水平检测 1 / 4

新城疫的血凝和血凝克制试验

高若开 一、实验目的

1.掌握血凝和血凝克制试验的基来源理、操作方法和结果判断方法。

2.剖析血凝和血凝克制试验的影响要素，用以确立最正确免疫时间、判断免疫成效和协助疾病诊疗。

二、实验内容

1.血凝试验 (HA) 检测新城疫抗原

2.血凝克制试验 (HI) 检测新城疫抗体

三、实验原理

1.血凝试验（ HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝聚，这类

凝聚红细胞的现象称为血凝（ HA ）,也称直接血凝反响。

病

毒

红 颗

细 粒 胞

2.血凝克制试验（ HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这类抗体的量足以克制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不可以与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝聚现

象就被克制，称为红细胞凝聚克制（ HI ）反响，也称血凝克制反响。

抗原 抗体

I am late ！ 新城疫抗体水平检测 2 / 4

四、实验资料

离心计、恒温箱、冰箱、振荡器、 96 孔血凝版（ 5 块）、微量移液器（ 20-100 （若干）、洗耳球、离心试管、一般试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、

微升可调）、吸液尖

ND 标准抗原、

1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。

五、实验步骤

（一）抗凝剂的配制

将 1 克柠檬酸钠用 25 毫升生理盐水稀释备用。 1 毫升抗凝剂可用于收集 9 毫升血液。

（二） 10%红细胞悬液的配制

1、用注射器汲取 0.5 毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞 4.5 毫升。

2、 1500 转离心 5 分钟，吸弃上清液。

3、用 5-10 倍生理盐水 1500 转清洗 3 次，前两次 5 分钟，后一次 10 分钟。

4、吸弃上清液，用吸量管汲取红细胞，配制成 10%红细胞悬液。

5、 2-6 摄氏度储藏，备用。

（三）血凝试验（ HA)

1.在血凝板上第一排的 1－ 12 孔内各加入 50ul 生理盐水

2.将系苗用生理盐水 5 毫升稀释，在第 1 孔内加入 50ul 病毒抗原，而后挨次倍比稀释至第 11 孔，最

后弃 50ul。

3.每孔加入 1％鸡红细胞悬液 50ul

4.轻轻振荡均匀，后放于室温或 37℃中静置 30 分钟

5.结果判断

血凝效价测定

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

2× 4× 8× 16× 32× 64× 128× 256× 512× 1024× 2048 × 红细胞

比较

生理 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

盐水

抗原 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 50

红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

结果 ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ －－－－

＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋

结果判断标准

1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即 100％凝聚；

2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边沿不齐整而稍向孔底集中，即 75％凝聚；

3、＋＋ ：红细胞形成一个环状，周围有凝聚块，即 50％凝聚；

4、＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边沿不够圆滑，周围稍有凝聚块，即 25％凝聚；

5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边沿圆滑齐整，即无凝聚。

血凝价的判断

以 100% 凝聚的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝聚单位。上表看出，该新城疫

病毒液的血凝价为 1:32 ，则 l:32 为 1 个血凝单位， 1:16 、l:8 分别为 2 、4 个血凝单位， 或将 32/4=8 ， 新城疫抗体水平检测 3 / 4

即 1:8 稀释的病毒液为 4 个血凝单位。（四） 4 个血凝单位抗原的配制

依据判断结果，汲取 1 毫升已稀释的病原溶液再以 8 倍稀释，即为 4 个血凝单位的标准抗原。

（五）血凝克制试验

1、在血凝板上 1－ 12 孔内各加入 50ul 生理盐水；

2、在第 1 孔内加入被检血清 50ul ，而后倍比稀释至第 11 孔，最后弃 50ul ；

3、第 1－ 12 孔内加入 4 单位抗原 50ul （第 12 孔为病毒比较） ；

4、每孔加入 1％鸡红细胞悬液 50ul ；

5、轻轻振荡均匀，后放于室温或 37℃中静置 30 分钟

6、结果判断

血凝克制效价测定

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

2× 4× 8× 16× 32× 64× 128× 256× 512× 1024× 2048 × 病毒

比较

生理 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

盐水

血清 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 50

4 单位50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

抗原

红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

结果－－ ＋ ＋＋ ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－

＋ ＋ ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋

结果判断标准

1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即 100％凝聚；

2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边沿不齐整而稍向孔底集中，即 75％凝聚；

3、＋＋ ：红细胞形成一个环状，周围有凝聚块，即 50％凝聚；

4、＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边沿不够圆滑，周围稍有凝聚块，即 25％凝聚；

5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边沿圆滑齐整，即无凝聚。

血凝克制价的判断

将反响板倾斜成 45 度角， 沉于管底的细细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为积淀， 表示红细胞

未被或不完整被病毒凝聚；假如孔底的红细胞摊平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说

明红细胞被病毒所凝聚。能将 4 单位病毒物质凝聚红细胞的作用完整克制的血清最高稀释倍数，称

为该血清的红细胞凝聚克制效价，用被检血清的稀释倍数或以 2 为底的对数 (10g2) 表示。如上例，

该血清的红细胞凝聚克制效价为 1：4 或 HI 效价为 2(10g2) 。

稀释 2× 4× 8× 16× 32× 64× 128× 256× 512× 1024× 2048 × 血清

倍数 比较

结果 — — ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ —

＋ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ 新城疫抗体水平检测 4 / 4

结果剖析： 在比较出现正确结果的状况下，已完整克制红细胞凝聚的最大稀释度为该血清的血凝克制滴度。

(1) 一般以为鸡的免疫临界水平为1:8( 成年 ) 或 1:16( 雏鸡 ) ，随处区不一样而稍有差别。

(2) 鸡血清 HI 抗体效价高于 1:16 时可适合推延新城疫免疫的时间， HI 抗体效价在 1:16 以下，

须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地域或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提升。

(3) 鸡群的 HI 抗体水平（血凝克制滴度）是以抽检样品的 HI 抗体效价 ( ㏒ 2) 的几何均匀值表示

的。假如某鸡群的 10 份样品中， HI 抗体效价 ( ㏒ 2) 为 8 的有 3 份样品，为 7 的有 5 份样品，为 6 的

有 2 份样品，它们的均匀值为：

（ 8 × 3＋ 7× 5＋ 6× 2） / （ 3＋5＋ 2）＝ 7.1 均匀水平在 4(10g2) 以上，说明该鸡群为免疫鸡群。

若在检样中

HI

抗体效价的最高值与最低值相差太大时，

则不可以用上法计算均匀水平，

应依据临界水

平以下的样品数在所有样品中所占的百分比决定免疫与否。

(4) 大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于

0.1 ％一

0.5 ％，小型鸡群，抽样率应有

所增添，一般以为理想的抽样率应为

2.0 ％。

(5) 鸡群接种新城疫疫苗后，经 2～ 3 周测血清中的 HI 抗体效价，若提升 2 个滴度以上，表示鸡

的免疫应答优秀，疫苗接种成功；若HI 抗体效价无显然提升，表示免疫失败。

（ 6）如有 10%以上的鸡群出现 11(10g2) 以上的高血凝克制滴度， 说明鸡群已受新城疫强毒感染。

若监测鸡群的免疫水平，用血凝克制滴度在4(10g2) 的鸡群保护率为 50%左右；在 4(10g2) 以上保护

率达 90-100%；在 4(10g2) 以下的非免疫鸡群保护率约 9%，免疫过的鸡群为 43%。

六、注意事项

1、红细胞用前请摇匀。

2、用枪加样定要正确，尽量不要有气泡。

3、结果判断要有耐心。

4、HA 和 HI 勿相混。

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