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分光光度法云南先锋化工有限公司质量监测中心1、分光光度法引言（1）概念：分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
（是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。
）（2）阐述概念：在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到不同波长相对应的吸收强度。
如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。
利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。
用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。
它们与比色法一样，都以Beer-Lambert定律为基础。
上述的紫外光区与可见光区是常用的。
但分光光度法的应用光区包括紫外光区，可见光区，红外光区。
（3）特点：灵敏度高、精确度高、操作简便、快速。
对于复杂的组分系统，无须分离即可检测出其中所含的微量组分的特点。
（4）波长范围(1)200～400nm的紫外光区，(2)400～760nm的可见光区，(3)2.5～25μm(按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>)的红外光区。
2、分光光度法的原理• Lambert 定律：一束单色光在通过透明溶液时，由于溶液吸收一部分光能，使光的强度减弱，若溶液浓度不变，则溶液的厚度越大，光线强度的减弱也越显著，即光吸收的量与溶液的厚度成比例关系。
若以I 0表示入射光强度，I 表示透过光强度，L 表示溶液的厚度，而I/ I 0表示光线透过溶液的程度，称为透光率，用T 表示，则T= I/I 0。
K 为消光系数，在入射波长、溶液种类和温度一定的条件下，K是一个定值。
• Beer 定律：一束单色光在通过透明溶液时，若溶液的厚度不变，则溶液浓度愈高，光线强度的减弱也愈显著，即溶液对光的吸收与溶液的浓度成比例关系。
第八章分光光度法
第六章 吸光光度法
一、问答题
1. 摩尔吸收系数的物理意义是什么？其大小和哪些因素有关？在分析化学中κ有何意义？
2. 朗伯－比尔定律的物理意义是什么？什么是透光度？什么是吸光度？二者之间的关系是什么？
3. 为社么物质对光发生选择性吸收？
4. 分光光度计有哪些主要部件？它们各起什么作用？
5 当研究一种新的显色剂时，必须做哪些实验条件的研究？为什么？
6 什么是吸收光谱曲线？什么是标准曲线？它们有何实际意义？利用标准曲线进行定量分析时可否使用透光度T 和浓度c 为坐标？
7 测定金属钴中微量锰时在酸性液中用KIO 3将锰氧化为高锰酸根离子后进行吸光度的测定。
若用高锰酸钾配制标准系列，在测定标准系列及试液的吸光度时应选什么作参比溶液？
8 吸光度的测量条件如何选择？为什么？普通光度法与示差法有何异同？
9 光度分析法误差的主要来源有哪些？如何减免这些误差？试根据误差分类分别加以讨论。
10 常见的电子跃迁有哪几种类型？
11 在有机化合物的鉴定和结构判断上，紫外－可见吸收光谱提供信息具有什么特点？
二、计算题
1．以邻二氮菲光度法测定Fe (Ⅱ)，称取试样0.500g ，经处理后，加入显色剂，最后定容
为50.0mL ，用1.0 cm 吸收池在510 nm 波长下测得吸光度A =0.430，计算试样中的w (Fe)(以百分数表示)；当溶液稀释一倍后透射比是多少？（ε510=1.1×104）
2．%0.61%10010=⨯=-A T 已知KMnO 4的ε545=2.2×103，计算此波长下浓度为0.002%
（m/v ）KMnO 4溶液在3.0cm 吸收池中的透射比。
若溶液稀释一倍后透射比是多少？
3. 以丁二酮肟光度法测定镍，若络合物NiDx 2的浓度为1.7×10-5mol ·L -1，用2.0cm 吸收池
在470nm 波长下测得的透射比为30.0%。
计算络合物在该波长的摩尔吸光系数。
4. 根据下列数据绘制磺基水杨酸光度法测定Fe （Ⅲ）的工作曲线。
标准溶液是由0.432g
铁铵矾[NH 4Fe(SO 4)2·12H 2O]溶于水定容到500.0mL 配制成的。
取下列不同量标准溶液于50.0mL 容量瓶中，加显色剂后定容，测量其吸光度。
V (Fe(Ⅲ))（mL ） 1.00 2.00 3.00 4.00
5.00
6.00
A 0.097 0.200 0.304 0.408 0.510 0.618
测定某试液含铁量时，吸取试液5.00mL ，稀释至250.0mL ，再取此稀释溶液2.00mL 置于50.0mL 容量瓶中，与上述工作曲线相同条件下显色后定容，测得的吸光度为0.450，计算试液中Fe(Ⅲ)含量（以g/L 表示）。
5. 以PAR 光度法测定Nb ，络合物最大吸收波长为550nm ，ε=3.6×104；以PAR 光度法测定
Pb ，络合物最大吸收波长为520nm ，ε=4.0×104。
计算并比较两者的桑德尔灵敏度。
6. 有两份不同浓度的某一有色络合物溶液，当液层厚度均为 1.0cm 时，对某一波长的透
射比分别为：（a）65.0%；（b）41.8%。
求
（1）该两份溶液的吸光度A1，A2。
（2）如果溶液（a）的浓度为6.5×10-4mol·L-1，求溶液（b）的浓度。
（3）计算在该波长下有色络合物的摩尔吸光系数和桑德尔灵敏度。
（设待测物质的摩尔质量为47.9g/mol）
7.用吸光光度法测定含有两种络合物x与y的溶液的吸光度（b=1.0cm），获得下列数
8.当光度计透射比测量的读数误差ΔT=0.010时，测得不同浓度的某吸光溶液的吸光度
为：0.010、0.100、0.200、0.434、0.800、1.200。
利用吸光度与浓度成正比以及吸光度与透光率的关系，计算由仪器读数误差引起的浓度测量的相对误差。
9.以联吡啶为显色剂，光度法测定Fe(Ⅱ)，若在浓度为0.2mol·L-1,pH=5.0时的醋酸缓
冲溶液中进行显色反应。
已知过量联吡啶的浓度为1×10-3mol·L-1，lg K H(bipy)=4.4，lg K(FeAc)=1.4，lgβ3=17.6。
试问反应能否定量进行？
10.用示差光度法测量某含铁溶液, 用5.4×10-4mol·L-1Fe3+溶液作参比,在相同条件下显色,用1cm吸收池测得样品溶液和参比溶液吸光度之差为0.300。
已知 =2.8×103L·mol-1·cm-1,则样品溶液中Fe3+的浓度有多大？
11.确称取1.00mmol的指示剂于100mL容量瓶中溶解并定容。
取该溶液2.50mL5份，分别调至不同pH并定容至25.0mL，用1.0cm吸收池在650nm波长下测得如下数据：pH 1.00 2.00 7.00 10.00 11.00
A0.00 0.00 0.588 0.840 0.840 计算在该波长下In-的摩尔吸光系数和该指示剂的p K a。
