下载文档原格式
FCGR3A基因多态性对西妥昔单抗介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用杀伤A549细胞的影响李瑾昱;朱艳云;张国庆;孙胜杰;焦顺昌【摘要】目的探讨FCGR3A基因多态性对西妥昔单抗介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒(ADCC)作用杀伤A549细胞的影响.方法选取肺腺癌A549细胞作为靶细胞,NKTm细胞为效应细胞.基因测序法检测NKTm细胞FCGR3A基因多态性,CCK-8法检测西妥昔单抗介导NKTm细胞的ADCC活性.结果 NKTm细胞FCGR3A具有基因多态性,分别为V/V、V/F及F/F表型.西妥昔单抗介导3种表型的NKTm细胞的ADCC活性差异具有统计学意义(P =0.0015),其中FCGR3A-158V/V表型的NKTm细胞的ADCC活性比V/F及F/F表型强(P＜0.01),而V/F 与F/F表型的NKTm细胞ADCC活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论西妥昔单抗介导的NKTm细胞ADCC活性与FCGR3A基因多态性有关.【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2015(037)006【总页数】5页(P645-649)【关键词】西妥昔单抗;A549细胞;FCGR3A;抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用【作者】李瑾昱;朱艳云;张国庆;孙胜杰;焦顺昌【作者单位】中国人民解放军总医院肿瘤内一科,北京100853;中国人民解放军总医院肿瘤内一科,北京100853;中国人民解放军总医院肿瘤内一科,北京100853;中国人民解放军总医院肿瘤内一科,北京100853;中国人民解放军总医院肿瘤内一科,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R735.5Acta Acad Med Sin，2015,37(6)：645-649西妥昔单抗是一种人源化IgG1抗体类药物，通过与肿瘤细胞膜上的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)结合，阻断自身配体介导的EGFR信号传导通路活化，达到抑制肿瘤的作用。
肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程概述及解释说明1. 引言1.1 概述肿瘤是世界范围内威胁人类健康的重大疾病之一。
近年来，随着单细胞技术的不断进步和发展，越来越多的研究者开始关注肿瘤组织中单个细胞的分析与检测。
通过对肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程的深入研究，我们可以更好地理解肿瘤的异质性、复杂性以及发生机制，为治疗策略提供更准确的依据。
1.2 文章结构本文将围绕肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程展开详细论述。
首先，在引言部分进行概述并介绍文章结构；接下来第二部分将详细介绍肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程的具体步骤和所需材料和设备准备；第三部分简要概述相关的单细胞分离及检测技术；第四部分将涵盖操作中需要注意的事项以及解决常见问题的方案；最后在结论和展望部分总结研究成果，并展望未来的发展方向。
1.3 目的本文的目的是提供一个系统全面的肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程的概述和解释说明，帮助读者了解该操作流程的核心内容和步骤。
通过本文，读者将能够掌握肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程并了解其在单细胞分析中的应用前景和挑战。
2. 肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程:2.1 流程简介:肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程是一种常用的方法，用于将肿瘤组织样本转化为可用于单细胞分离和分析的细胞悬液。
该方法利用机械力对肿瘤组织进行均匀破碎，使得细胞能够以单个的形式存在于悬液中。
随后，可以使用不同的技术对这些单个细胞进行进一步的分离和检测。
2.2 材料和设备准备:在执行肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程之前，我们需要确保准备以下材料和设备：- 新鲜的肿瘤组织样本- 组织切片工具（例如手术刀或镊子）- RNAase防护剂（可选）- 组织及液体收集器皿- 1x PBS溶液（含钙和镁）- 离心管- Vortex混合器- 显微镜2.3 研磨方法与步骤:下面是肿瘤组织制备单细胞研磨操作流程的步骤：步骤1: 准备工作台和实验室安全设施，确保清洁无菌的操作环境。
细胞培养及抗肿瘤药物筛选博哥(中山大学化学与化学工程学院，广州510275)一引言随着分子生物学和细胞生物学的崛起，为了在活细胞中研究生命现象，细胞培养方法得到了广泛的发展和应用。
细胞培养的突出优点，是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响。
因为人工培养条件易于改变，并能得到严格的控制，有利于单因子分析。
另外，细胞培养还便于我们对细胞生长、发育过程的观察，可以用显微镜直接观察亦可应用显微缩时电影技术记录其进程。
因而，细胞培养是探索和解释细胞生命活动规律的一种简而易行的技术。
然而，细胞培养方法也有其局限性，由于培养的细胞生活在脱离了机体的复杂的环境条件下，其生态环境和细胞之间的相互关系都改变了，因此，其细胞生物学性质必然也会发生某些改变。
所以在人工培养条件下观察到的结果难于正确反映细胞或组织在机体内部的状况。
这一点是我们在应用此技术进行研究时应该注意的。
本实验采用的培养基由合成培养基、小牛血清配和双抗制而成。
实验对Hela细胞进行了复苏、传代培养、观察不同状态下的Hela细胞，并用MTT法测定8种药物的抗癌作用。
二、实验原理1．培养基的配制组织培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血清配制而成。
合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配方制成的粉状物质。
其主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其他辅助物质。
它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。
小牛血清含有一定的营养成分，更重要的是它含有细胞生长所必须的生长因子、激素、粘附因子等，这是合成培养基所无法替代的。
此外它还能中和有毒物质的毒性。
故一般体外培养细胞时要加入一定量的小牛血清(10％-20％)。
在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可能存在的细菌的生长。
通常是青霉素和链霉素联合使用(双抗)。
培养液内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。
2．细胞的冻存与复苏细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。
(10)申请公布号 (43)申请公布日 2013.10.16C N 103352027 A (21)申请号 201310163367.0(22)申请日 2013.05.07C12N 5/095(2010.01)C12N 5/02(2006.01)(71)申请人中国人民解放军第二军医大学地址200433 上海市杨浦区翔殷路800号(72)发明人刘善荣 肖潇 胡晶晶(74)专利代理机构上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268代理人赵青(54)发明名称肿瘤干细胞的悬浮培养方法(57)摘要本发明属于现代生物技术之细胞培养技术领域。
本发明的目的是提供一种肿瘤干细胞的悬浮培养方法，可通用于不同组织来源的肿瘤细胞的培养，而且该培养方法获得的肿瘤干细胞具有自我更新能力、且富集。
本发明提供的一种肿瘤干细胞的悬浮培养方法，是将所需要培养的肿瘤细胞消化离心收集后，用PBS 重悬离心，加入本发明制备的悬浮培养基中，吹打成单细胞悬液，再接种于铺制好的超低吸附培养皿中；进行细胞培养。
本发明的方法体外培养各类肿瘤细胞的成球率高，表达多能性因子，OCT4、NANOG 比例都有所增高，为肿瘤干细胞的研究提供了丰富而全面的实验材料，在基础研究及临床应用上都具有广泛的前景。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书6页 附图3页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书6页 附图3页(10)申请公布号CN 103352027 A*CN103352027A*1/1页1.一种肿瘤干细胞的悬浮培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：A、超低吸附培养皿的铺制（a）超低吸附胶的制备：聚甲基丙烯酸2-羟乙脂，用95%的酒精混匀，终浓度为12mg/ ml；（b）用移液器将超低吸附胶覆盖于培养皿底部，吸干残余胶，终密度为0.8mg/cm2，吹风至完全干燥，紫外照射1小时备用；（c）避光干燥通风保存1-2个月；B、悬浮培养基的制备（a）在超净工作台内向基础培养基DMEM/F12中加入胰岛素样生长因子IGF、碱性成纤维细胞生长因子bFGF、表皮生长因子EGF，吹打混匀；所述的IGF浓度为10-30ng/ml，bFGF 浓度为1.0-3ng/ml，EGF浓度为20-30ng/ml，浓度均相对于基础培养基DMEM/F12而言；（b）4℃避光保存1-2个月；C、细胞培养将所需要培养的肿瘤细胞消化离心收集后，用PBS重悬离心5-10分钟，2-3次，加入步骤B制备的悬浮培养基，吹打成单细胞悬液，接种于步骤A铺制好的超低吸附培养皿中；培养从开始起每三天收集全部培养基，离心换一次新鲜的各类培养基，培养时间是7天，7天后用accutase消化酶，轻轻吹打消化成单细胞进行1:2传代，重复前述操作进行传代培养过程；培养环境：温度为35-38℃、CO2浓度为5-8%、湿度为饱和湿度。
