样品的制备包括:样品的分离纯化,扩增,标 记
分离纯化:样品来源于活的细胞,使用一定方 法分离并纯化DNA或RNA(特别是mRNA)。 只有达到一定纯度的样品,才能保证后续操作 的正确。
2021/3/26
DNA芯片技术的原理与应用 ppt课
19
件
样品的扩增:扩增的目的在于获得足够的 样品量。现已发展出固相PCR系统。
5
件
原理如下图:
2021/3/26
DNA芯片技术的原理与应用 ppt课
6
件
集成电子线路
电子芯片
集成分子线路
基因芯片
2021/3/26
DNA芯片技术的原理与应用 ppt课
7
件
基因芯片发展历史
Southern & Northern Blot
Dot Blot
2021/3/26
Macroarray
Microarray
该方法优点是芯片制造速度快,成本低,而且芯片之 间制造误差小。其缺点是与原位合成法相比,构成 方阵的DNA片段需要先合成、纯化,以及在制造 DNA芯片前必须将如此大量具有微小差别的片段 分别保存,并且需要特制的自动点样装置。
2021/3/26
DNA芯片技术的原理与应用 ppt课
17
件
点样法 即预先合成寡核苷酸,肽核苷酸或分 离得到cDNA,再通过点样机直接将其点到芯片上。 寡核苷酸或肽核苷酸的合成主要是通过多孔玻璃合 成法。肽核苷酸虽然在制备上比较复杂,但是它与 DNA探针相比,由于PNA(肽核酸)与DNA结合 的复合物更加稳定和特异,因而更加有利于单碱基 错配基因的检测。
来自某一细胞的cDNA必须进行预处理,纯化, 扩增以及分类,然后再利用机械手把它们准确地固 定在基板的相应位置上,为了保证cDNA芯片检测 的准确性,在制备cDNA芯片以前必须提高低表达 基因cDNA的丰度,降低高表达基因cDNA的丰度。