实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

血清醋酸纤维素薄膜电泳一、目的要求1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。

2.了解猪血清蛋白质的各种成分。

3.熟悉猪血清中各种蛋白质相对含量的测定原理和方法。

4.熟悉分光光度计的工作原理及使用方法。

二、实验原理1.电泳的基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。

许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。

电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。

电泳过程必须在一种支持介质中进行。

自由界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强，影响分离效果。

于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。

最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。

由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变，进而影响其电泳迁移的速度，所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行，缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。

2.醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜,待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维素薄膜。

该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。

本实验采用醋酸纤维素薄膜作为介质。

3.蛋白质蛋白质是由氨基酸组成的，其分子中除两端的游离氨基和羧基外，侧链中尚有一些解离基，作为带电颗粒它可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。

蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，又受所处溶液的pH影响。

当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。

实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素薄膜电泳分析技术是目前临床常规测定中应用最广的方法;具有微量、快速、简便、吸附作用和电渗作用小、分离区带清晰、灵敏度及分辨率高等特点..醋酸纤维素薄膜还可进行透明化处理;便于照相和扫描计算结果..广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同工酶的分离和测定..目的1.掌握电泳法分离蛋白质的原理、操作方法..2.了解电泳法分离蛋白质的临床意义..原理带电粒子在电场中向与其电性相反的电极泳动的现象称为电泳..血清中各种蛋白质的等电点大多在pH4.0～7.3之间;在pH8.6的缓冲液中均带负电荷;在电场中都向正极移动..由于血清中各种蛋白质的等电点不同;因此在同一pH环境中所带负电荷多少不同;又由于其分子大小不同;所以在电场中泳动速度也不同..分子小而带电荷多者;泳动速度较快；反之;则泳动速度较慢..因此通过电泳可将血清蛋白质分为5条区带;从正极端依次分为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ球蛋白等;经染色可计算出各蛋白质含量的百分数..器材醋酸纤维素薄膜2cm×8cm、培养皿、滤纸、无齿镊、剪子、加样器可用盖玻片或或微量加样器、直尺、铅笔、玻璃板8cm×12cm、试管、试管架、吸管、电泳仪、电泳槽、分光光度计或吸光度扫描计..试剂1. 巴比妥缓冲液pH8.6;0.07mol/L;离子强度0.06称取巴比妥钠12.76g、巴比妥1.66g;加500毫升蒸馏水;加热溶解..待冷至室温后;再加蒸馏水至1000毫升..2. 氨基黑10B染色液称取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml;混匀;加蒸馏水至100ml..3. 漂洗液甲醇45ml、冰醋酸5ml;混匀后加蒸馏水至100ml..4. 洗脱液 0.4mol／LNaOH溶液..5. 透明液称取柠檬酸21g;N-甲基-2-吡咯烷酮150g;以蒸馏水溶解并稀释至500ml..操作1. 准备将缓冲液加入电泳槽的两槽内;并使两侧的液面等高..裁剪尺寸合适的滤纸条;叠成四层贴在电泳槽的两侧支架上;一端与支架前沿对齐;另一端侵入电泳槽的缓冲液内;使滤纸全部湿润;此即“滤纸桥”图3-1..将醋酸纤维素薄膜切成2cm×8cm大小;在无光泽面的一端约1.5cm处;用铅笔轻划一直线;作为点样位置..然后将无光泽面向下;置于盛有巴比妥缓冲液的培养皿中浸泡;待充分浸透约20分钟即无白色斑点后取出;用洁净滤纸轻轻吸去表面的多余缓冲液..2. 点样取少量血清于玻璃板上;用加样器取少量血清约2～3μl;加在点样线上;待血清渗入膜内;移开加样器..点样时应注意血清要适量;应形成均匀的直线;并避免弄破薄膜图3-2..3. 平衡与电泳将点样后的薄膜有光面朝上;点样的一端靠近负极;平直地贴于电泳槽支架的滤纸上;平衡约5分钟..盖上电泳槽盖;通电进行电泳..调节电压为100～160伏;电流0.4～0.6mA ／cm 宽;夏季通电45分钟;冬季通电60分钟;待电泳区带展开2.5～3.5cm 时断电..4. 染色用无齿镊小心取出薄膜;浸于染色液中1～3分钟以清蛋白带染透为止..染色过程中应轻轻晃动染色皿;使薄膜与染色液充分接触;薄膜量较多时;应避免彼此紧贴而影响染色效果..5. 漂洗准备3个培养皿;装入漂洗液..从染色液中取出薄膜;依次在漂洗液中连续浸洗数次;直至背景无色为止..将漂净的薄膜用滤纸吸干;从正极端起依次为清蛋白A 、α1、α2、β及γ-球蛋白图3-3..6.定量1洗脱法：取6支试管;编号;分别为A 、α1、α2、β、γ和空白管..于清蛋白管加入0.4mol/LNaOH 溶液4ml;其余5管加2ml..剪下各条蛋白区带;另于空白部分剪一条与各蛋白区带宽度近似的薄膜作为空白;分别浸入各管中;振摇数次;置37℃水浴20分钟;使色泽完全浸出..用620nm 波长以空白管调零比色;读取各管吸光度;按下式计算：T = A ×2 + α1 + α2 + β + γ清蛋白% ＝ 清蛋白管吸光度×2/T ×100α1-球蛋白% ＝ α1-球蛋白管吸光度/T ×100α2-球蛋白% ＝ α2-球蛋白管吸光度/T ×100β-球蛋白% ＝ β-球蛋白管吸光度/T ×100γ-球蛋白% ＝ γ-清蛋白管吸光度/T ×1002扫描法：待染色的醋酸纤维素薄膜完全干燥;置透明液中约3分钟;取出贴于玻片上;薄膜完全透明..将已透明的薄膜放入全自动光密度计中;对蛋白区带进行扫描;自动绘出电泳图;并直接打印出各区带的百分含量..注意事项1. 标本不能溶血;否则;β球蛋白浓度偏高..2．每次电泳时应交换电极;以使两侧电泳槽内缓冲液的正负离子相互交换;使缓冲液的pH维持在一定水平..3．电泳槽缓冲液的液面要保持一定高度;过低可能出现了球蛋白的电渗现象向阴极移动..同时;电泳槽两侧的液面应保持在同一水平面;否则;通过薄膜时有虹吸现象;将会影响蛋白质分子的泳动速度..4．电泳时电泳槽要密闭;以保持湿度;否则;薄膜水分蒸发干燥;使电流下降;分离不佳..5．电泳失败或图谱不理想的常见原因..1电泳图谱不整齐：①点样不均匀；②薄膜未完全浸透或温度过高致使膜面局部干燥或水分补给不足；③缓冲液变质；④电泳时薄膜放置不正;与电流方向不平行..2各蛋白区带分离不清晰：①点样过多；②电流过低;多由薄膜过于致密、吸水性差、导电能力差引起；③膜面干燥；④薄膜过薄..3清蛋白中间着色浅：①染色时间不够或染色液陈旧；②清蛋白含量过高;可减少血清用量或延长染色时间..4电泳速度慢：①电流过低；②供给薄膜的缓冲液不足;连接薄膜与缓冲液的滤纸或纱布过薄一般需4层；③温度过低;冬季电泳速度较夏季慢；④薄膜结构过于致密;导电性差；⑤缓冲液中水分蒸发;致使离子强度增大..6．样品要求点在粗糙面无光泽面;否则;样品很难吸人膜内..电泳时最好将点有样品的一面朝下;以防电泳过程中水分蒸发;影响电泳结果..7．染色时间以2分钟为佳室温低时;时间可稍长;若时间过长;可使α1球蛋白与染料结合率增加;导致α1球蛋白百分比上升..正常参考值清蛋白： 57.45～71.73%α1-球蛋白： 1.76～4.48%α2-球蛋白： 4.04～8.28%β-球蛋白： 6.79～11.39%γ-球蛋白： 11.85～22.97%A/G 1.24～2.36临床意义急慢性肾炎、肾病综合征、肾功能衰竭时;清蛋白降低;α1、α2和β-球蛋白升高；慢性活动性肝炎、肝硬化时;清蛋白降低;β、γ-球蛋白升高；急性炎症时;α1、α2-球蛋白升高；慢性炎症时;清蛋白降低;α2、γ-球蛋白升高；红斑狼疮、类风湿关节炎时;清蛋白降低;γ-球蛋白显着升高；多发性骨髓瘤时;清蛋白降低;γ-球蛋白升高;于β和γ-球蛋白区带之间出现“M ”带..结果及分析思考题1.血清蛋白质电泳时为什么要将点样的一端靠近负极端2.醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白依次分为哪几条区带;有哪些临床意义。

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告实验原理1. 电泳的基本原理带电颗粒在电场中向着与其电性相反方向移动的现象称为电泳。

电泳时不同的带电粒子在同一电场中泳动速度不同。

带电颗粒 ( 球形分子 ) 在电场中的电泳速度 (V )从上式看出，带电颗粒在电场中的移动速度 (V ) 与颗粒带电荷量 (Q ) 以及电场强度 (E ) 成正比，与球形分子的大小 ( 半径为 r ) 及所在介质的粘度(η) 成反比。

因此 , 在同一电场、同一介质中进行电泳时，带不同电荷，不同大小的颗粒就可以通过电泳而被分离。

在实际操作中，为了不考虑不同电压对电泳速度的影响，我们常用迁移率（ move rate,M ）来表示带电颗粒的电泳特性，迁移率指带电颗粒在单位电场强度下的电泳速度，即可见，带电颗粒的净电荷越多，分子颗粒越小，在电场中的迁移率就越快；反之越慢。

但电泳速度和电泳迁移率是两个不同的概念，后者有利于不同电场强度下电泳结果的比较，各种带电颗粒在一定条件下测得的迁移率是一个常数。

2. 影响电泳的主要因素(1) 电泳介质pH 值的影响: 对于蛋白质和氨基酸等两性分子，电泳介质的pH 值影响蛋白质的电离情况，即可决定蛋白质的带电量 (Q ) 。

pH 值小于等电点，分子带正电荷，向负极泳动，如果 pH 大于等电点，分子带负电荷，向正极泳动。

pH 值偏离等电点越远，分子所带净电荷越多，其泳动速度越快。

当缓冲液 pH 等于其等电点时，分子处于等电状态，不移动。

由于血清蛋白质的等电点多在 pH4 ～ 6 之间，因此，分离血清蛋白常用 pH 8.6 的巴比妥缓冲液或三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 缓冲液。

(2) 缓冲液的离子强度 : 离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰；离子强度高，电泳速度慢，但区带分离清晰。

如离子强度过低，缓冲液的缓冲量小，不易维持 pH 的恒定；离子强度过高，则降低蛋白质的带电量 ( 压缩双电层 ) 使电泳速度减慢。

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告实验报告：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量一、实验目的本实验旨在通过醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清中的蛋白质进行分离和定性，同时利用扫描仪对电泳条带进行定量分析，加深对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量的理解。

二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离方法，主要是利用电泳的原理将血清中的蛋白质进行分离并定性地鉴定。

其原理是基于各种蛋白质在电场中的迁移率不同，大小不同的蛋白质在电场的作用下，向正极或负极移动的速度也不同，从而将血清中的蛋白质分成不同的区带。

三、实验步骤1.准备试剂和仪器：醋酸纤维薄膜电泳试剂盒、电泳仪、醋酸纤维薄膜、玻璃板、移液器、注射器等。

2.配制试剂：按照醋酸纤维薄膜电泳试剂盒的说明书配制分离液、浓缩液和电极液等。

3.加样：将血清样品用移液器加到醋酸纤维薄膜上，控制加样量为5μL。

4.浸泡：将加好样的醋酸纤维薄膜放入分离液中浸泡10分钟，使其完全湿润。

5.电泳：将湿润的醋酸纤维薄膜放在玻璃板上，再覆盖上另一块玻璃板，然后将电泳槽装配好，接通电源进行电泳。

电泳时间和电压根据具体实验条件进行调整。

6.染色：电泳结束后，将醋酸纤维薄膜取出，放入染色液中染色10分钟，以便更好地观察蛋白质条带。

7.脱色：将染色后的醋酸纤维薄膜放入脱色液中脱色，直到背景清晰，蛋白质条带颜色较浅为止。

8.扫描定量：利用扫描仪对脱色后的醋酸纤维薄膜进行扫描，获取各蛋白质条带的OD值（吸光度），计算各蛋白质的相对含量。

四、实验结果通过醋酸纤维薄膜电泳，我们可以成功地将血清中的蛋白质分离成不同的条带。

从扫描结果中我们可以得到各条带的OD值，通过这些数据可以进一步计算出各蛋白质的相对含量。

以下是本实验的部分实验数据：OD值（吸光度）数据分析表：通过本次实验，我们成功地利用醋酸纤维薄膜电泳对血清中的蛋白质进行了分离和定性分析。

同时通过扫描定量，我们得到了各蛋白质条带的OD值以及相对含量。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
标题：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的：
1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理和方法。

2.了解血清蛋白质的组成和分布。

二、实验原理：
醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和鉴定蛋白质的方法。

其原理基于不同蛋白质分子在电场中的迁移率不同，从而实现对蛋白质的分离。

这种电泳方法具有快速、简便、分辨率高等优点。

三、实验步骤：
1.准备试剂和器材：醋酸纤维素薄膜、电极缓冲液、血清样
品、水浴锅、电泳仪、计时器、移液管、剪刀、镊子等。

2.加样：将适量血清样品用移液管加到醋酸纤维素薄膜上，
注意不要形成气泡。

3.电泳：将加好样的醋酸纤维素薄膜放入电泳仪中，接通电
源，开始电泳。

记录电泳时间和电流强度。

4.染色：电泳结束后，将醋酸纤维素薄膜取出，放入染色液
中染色。

5.观察和拍照：观察染色后的醋酸纤维素薄膜，记录各蛋白
带的颜色和位置。

用相机拍摄结果。

四、实验结果：
五、实验结论：
通过本次实验，我们成功地分离了血清中的各种蛋白质，并观察到了它们在醋酸纤维素薄膜上的分布情况。

实验结果表明，血清中含有白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等多种蛋白质。

这种方法有助于我们进一步了解血清蛋白质的组成和分布，为临床诊断和治疗提供参考。

同时，本实验也锻炼了我们实际操作的能力和对醋酸纤维素薄膜电泳原理的理解。

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告一、实验目的1、掌握血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的基本原理。

2、熟悉电泳操作的基本技术和方法。

3、了解血清蛋白质的组成和相对含量。

二、实验原理血清中含有多种蛋白质，它们在 pH 值为 86 的缓冲液中均带负电荷，在电场中会向正极移动。

由于各种蛋白质分子大小、形状及所带电荷量不同，在电场中的迁移速度也就不同，从而可将血清蛋白质分离成不同的区带。

醋酸纤维薄膜具有均一的泡沫样结构，渗透性强，对蛋白质吸附极少，因此适合用于电泳。

三、实验材料1、器材电泳仪、电泳槽、醋酸纤维薄膜（2×8cm）、点样器、镊子、培养皿、滤纸、铅笔、直尺。

2、试剂巴比妥缓冲液（pH 86，离子强度 006）、染色液（氨基黑 10B）、漂洗液。

3、样本新鲜血清四、实验步骤1、准备醋酸纤维薄膜将醋酸纤维薄膜浸泡于巴比妥缓冲液中，浸泡时间约为 30 分钟，直至薄膜完全浸透。

2、点样取出浸透的薄膜，用滤纸吸去多余的缓冲液，在无光泽面距一端15cm 处，用铅笔轻轻划一条横线作为点样线。

然后，用点样器蘸取血清，均匀地点在点样线上，使血清形成一条细窄的直线。

点样量要适中，过多会导致蛋白质区带扩散，过少则不易观察到清晰的区带。

3、电泳将点样后的薄膜小心地放入电泳槽中，点样端靠近负极，使薄膜平整地贴在电泳槽的支架上。

盖上电泳槽盖，接通电源，调节电压为120V，电泳时间约为 50 60 分钟。

4、染色电泳结束后，取出薄膜，直接放入染色液中浸泡 5 10 分钟，使蛋白质区带染上颜色。

5、漂洗将染色后的薄膜取出，放入漂洗液中漂洗数次，直至背景无色，蛋白质区带清晰可见。

五、实验结果经过染色和漂洗后，在醋酸纤维薄膜上可以观察到清晰的血清蛋白质区带。

从正极到负极依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。

通过与标准图谱对比，可以大致估算出各蛋白质组分的相对含量。

六、结果分析1、影响电泳结果的因素（1）点样不均匀或点样量过多过少都会导致区带不清晰或不完整。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验报告引言：血清蛋白质是构成血浆中主要蛋白质的一类物质，对于人体的健康状况具有重要的指示作用。

醋酸纤维素薄膜电泳技术是一种常用的分离和检测血清蛋白质的方法。

本实验旨在探究血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳的原理、操作步骤以及实验结果的分析和讨论。

一、实验原理血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于电荷和大小的分离技术。

首先，将血清样品与醋酸盐缓冲液混合，并加载到预制的醋酸纤维素薄膜中。

然后，将电泳槽中的电源接通，利用电场作用使蛋白质在薄膜上移动。

不同的蛋白质根据其分子量和电荷大小的不同，在电场作用下向阳极或阴极方向移动，从而实现蛋白质的分离。

二、实验步骤1. 准备工作：将醋酸纤维素薄膜剪成适当的大小，并在电泳槽中放置好阳极和阴极。

2. 样品制备：取适量的血清样品，加入醋酸盐缓冲液，并充分混合。

3. 样品加载：将样品缓冲液混合物加载到醋酸纤维素薄膜中，并确保完全覆盖薄膜表面。

4. 电泳条件设置：根据实验需要，设置适当的电场强度和电泳时间。

5. 开始电泳：将电泳槽连接电源，开启电源使电泳进行。

6. 实验结束：根据设定的电泳时间，关闭电源，取出醋酸纤维素薄膜。

三、实验结果分析和讨论通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验，可以观察到不同蛋白质在薄膜上的迁移情况。

根据迁移距离和迁移速度，可以初步判断不同蛋白质的分子量和电荷大小。

在实验中，我们可以根据薄膜上不同蛋白质的迁移位置，进行进一步的分析和鉴定。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳还可以用于检测某些疾病的诊断。

例如，肝功能异常时，血清中白蛋白和球蛋白的比例会发生变化，通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳可以明确出现异常的蛋白质成分，为临床诊断提供重要依据。

实验中需要注意的是，样品的制备和加载过程要尽量避免氧化、污染和杂质的引入，以保证实验结果的准确性。

此外，在设置电泳条件时，应根据样品特性和实验目的进行合理选择，以获得最佳的分离效果。

结论：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和检测血清蛋白质的方法。

生物化学实验三血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳实验三血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳一、目的要求学习和掌握电泳技术的基本原理；学习掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作。

二、实验原理蛋白质是两性电解质。

在pH小于其等电点的溶液中蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。

血清中含有的蛋白质等电点大部分低于pH 7.0，所以在缓冲液(pH 8.6)中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。

醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。

醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它具有均一的泡沫样结构，厚度仅120um，有强渗性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少，应用范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。

目前已广泛应用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白和同工酶的分离。

三、材料、器材与试剂1〉材料马血清样品2〉器材醋酸纤维薄膜(2c m×8cm)、常压电泳仪、点样器、培养皿、粗滤纸、玻璃板、镊子。

3〉试剂(1)硼酸缓冲液(pH 8.6，离子强度0.075)：称取硼酸5.6025g、硼砂5.6099g、氧化钠1.3163g，加水至1000ml。

(2)染色液：含氨基黑10B 0.25g、甲醇(A.R)50ml、冰醋酸10ml、水40ml(可重复使用)。

(3)漂洗剂：含甲醇或乙醇45ml、冰醋酸5ml、水50ml，混合即可得100ml。

(4)透明性：无水乙醇70ml、冰醋酸30ml。

四、实验步骤(1)浸泡：用镊子取醋酸纤维薄膜1张(识别出光泽面和粗糙面，并在光滑面角上用笔做上记号)放在缓冲液中浸泡20min。

(2)点样：把膜条从缓冲液中取出，用滤纸吸干膜条表面多余的液体，然后平铺在玻璃板上(粗糙面朝上)，用玻棒蘸一点血清，再将点样器沾一下玻棒，则血清就会均匀地分布在点样器上，将点样器在膜条一端2~3cm处轻轻、水平地落下并随之提起，这样在膜条上点上了细条状的血清样品。

综合性实验实验报告实验名称: 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳姓名:指导教师:专业: 生物技术实验班级:实验时间:实验地点: 实验楼生物化学实验室成绩: _________________________________一、实验目的1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理和操作方法。

2、作出清晰合格的人血清蛋白的电泳图谱。

二、实验原理1.带电颗粒在电场的作用下, 向着与其电性相反的方向移动, 这种现象称为电泳, 采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法称为醋酸纤维薄膜电泳。

影响泳动速度的重要因素: ①电场强度E ②溶液的pH ③溶液的离子强度④电渗现象⑤其他影响因素正常人血清蛋白的相对含量: 清蛋白 54.0~73.0％α₁－球蛋白 2.8~5.1％α₂－球蛋白 6.3~10.6％β－球蛋白 5.2~11.0％γ－球蛋白 12.5~20.0％三、实验仪器与试剂3.1实验仪器: 醋酸纤维薄膜（2×8㎝）常压电泳仪点样器培养皿粗滤纸玻璃板竹镊白瓷反应板3.2.实验试剂: 巴比妥缓冲液1000ml 染色液300ml 漂洗液2000ml透明液300ml四、实验步骤与方法①醋酸薄膜的浸泡（30min左右）②制作滤纸桥③平衡: 用平衡装置使三个电泳槽内的缓冲液面处于同一水平④点样: 在毛面距边界1~1.5cm处点样⑤电泳: 110V电泳60min⑥染色 5~10min⑦漂洗四次五、实验结果5.1实验结果醋酸纤维薄膜血清蛋白电泳图谱显示在滤纸条上从点样处开始依次为γ－球蛋白、β－球蛋白、α₂－球蛋白、α₁－球蛋白、清蛋白5.2注意问题:六． 1, 薄膜本身的质量问题（涂层不均匀等）,2, 点样技术问题,3, 电压电流控制问题,4, 样品本身是否有降解、污染；5, 实验过程其他可能影响结果的问题, 如平衡时间、浸泡时间、染脱色透明时间等。

七．参考文献1.王秀奇秦淑媛高天慧等基础生物化学实验（第二版）2011年12月2.王镜岩朱圣庚徐长法等生物化学（第三版） 2012年5月2.芦晓红宁夏医学杂志维普资讯网 2002。

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验报
告
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离和定量技术。

本实验旨在通过电泳分离血清样品中的蛋白质，并利用醋酸纤维薄膜定量测定其含量。

以下是实验的具体步骤和结果。

实验步骤：
1. 样品制备：将血清样品离心并取上清液。

2. 样品混合：将取得的血清样品与等体积的缓冲液混合。

3. 样品加载：将混合样品加在聚丙烯酰胺凝胶电泳板上。

4. 电泳分离：通电使蛋白质沿着凝胶板移动，根据分子大小进行分离。

5. 醋酸纤维薄膜染色：将凝胶板放在染色缸中进行染色。

6. 图像采集：使用分析软件采集凝胶板图像。

7. 定量分析：利用染色蛋白质的光密度值进行定量分析。

实验结果：
经过电泳分离和醋酸纤维薄膜染色后，我们成功地分离出血清样品中的主要蛋白质，并通过定量分析得出各蛋白质的相对含量。

在实验中，我们发现血清蛋白主要包括白蛋白、球蛋白和纤维蛋白等。

结论：
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的蛋白质分离和定量技术，能够帮助我们了解血清样品中的蛋白质组成及含量。

通过实验，我们成功地完成了蛋白质的分离和定量分析，为后续的研究奠定了基础。

以上就是本次实验的全部内容及结果，希望对您有所帮助。

感谢您的阅读！。