葡萄糖酸钙含量测定

中国医药生物技术2020年2月第15卷第1期Chin Med Biotechnol, February 2020, V ol. 15, No. 1 71 DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2020.01.014·技术与方法·定量核磁共振波谱法测定葡萄糖酸钙原料药的绝对含量李怡然，朱明慧，朱志玲，姚静，山广志葡萄糖酸钙作为临床常用药物，主要起降低毛细血管渗透性的作用。

适用于过敏性皮肤病，如荨麻疹、湿疹、皮肤瘙痒症、接触性皮炎等。

作为产后出血的辅助用药使用，能够减少心血管不良反应[1-3]，同时也是一种膳食补充剂，用于儿童、孕妇、老年人钙的补充[4]。

葡萄糖酸钙的制备方法有电解氧化法、溴化法、金属催化合成法、发酵法等。

发酵法因工艺稳定，成本低廉，被多数厂家应用。

发酵法是以黑曲霉为生产菌种，经菌种逐级培养，发酵代谢的酶将葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，再经碳酸钙中和精制而成[5]。

《中国药典》2015 年版采用EDTA 滴定法测定葡萄糖酸钙制剂中钙的含量[6]，对葡萄糖酸基仅采用鉴别反应进行考察，未对其含量进行控制。

有文献采用HPLC 法[7]或离子色谱法[8]测定葡萄糖酸钙的含量，但由于葡萄糖酸在水溶液中存在糖酸和内酯的转化，容易造成测量误差。

自1963 年qNMR 法[9]应用于定量分析以来，其应用范围日益广泛，各国药典均收载了该方法。

qNMR 技术的优势在于不需要对照品，仅以已知含量的核磁对照品作为内标，扫描待测物的共振峰面积直接计算H 的个数，对化合物进行绝对含量的测定[10]，适用于无对照品原料药的首次定量。

本文采用qNMR 技术，利用无水氘代溶剂，排除了水分和残留溶剂及其他无机物干扰，准确测定了葡萄糖酸钙原料的绝对含量。

1 材料与方法1.1 仪器与试剂Bruker Avance III HD 600 MHz 核磁共振波谱仪（BBO 探头）购自德国布鲁克公司；Mettler Toledo MS105 电子分析天平购自瑞士梅特勒-托利多公司；氘代DMSO（批号：PR-28072/07206DM1）购自美国Cambridge Isotope Laboratories 公司；葡萄糖酸钙（批号：LC80Q34）购自北京百灵威科技有限公司；顺丁烯二酸（批号：BCBM8127V，NMR对照品级，纯度：99.94%）购自美国Sigma-Aldrich 公司。

1 感官要求取10g被测样品，置于洁净的白瓷盘中，用肉眼在自然光线下观察其色泽、组织形态、杂质，品尝其滋味，嗅其气味。

2一般规定本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682—2008中规定的三级水。

试验方法中所需标准滴定溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 603之规定制备。

3 鉴别试验3.1 试剂和材料3.1.1 冰乙酸。

3.1.2 苯肼：临用时蒸馏。

3.2 鉴别试验3.2.1 钙盐鉴别3.2.1.1 方法原理钙盐与草酸铵试液反应，生成白色沉淀，沉淀在乙酸中不溶解，但可溶解于稀盐酸。

3.2.1.2 分析步骤取约 1.0 g实验室样品，精确至 0.01 g，加 40 mL水溶解，必要时加热使溶解，取此溶液按《中华人民共和国药典》 2005年版二部附录Ⅲ一般鉴别试验钙盐项下（ 2），应显钙盐的鉴别反应。

3.2.2 葡萄糖的鉴别 3.2.2.1 方法原理样品在乙酸介质中，与苯肼共热，生成黄色葡萄糖酰苯肼结晶。

3.2.2.2 分析步骤取约 0.5 g 实验室样品，精确至 0.01 g ，置 10 mL 试管中，加 5 mL 水，溶解（必要时加热），加 0.7 mL 冰乙酸和 1 mL 苯肼，在水浴上加热 30min ，放至室温，用玻璃棒摩擦试管内壁，则析出黄色的结晶。

3.2.3 红外光吸收图谱鉴别采用溴化钾压片法测定，实验室样品的红外光吸收图谱应与对照的图谱《药品红外光谱集》465图）一致，对照图谱见附录 B 。

4 葡萄糖酸钙的测定 4.1 方法提要以钙紫红素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准滴定液滴定样品水溶液，根据乙二胺四乙酸二钠标准滴定液的用量，计算以 C12H22CaO14·H2O 计的葡萄糖酸钙的含量。

4.2 试剂与材料4.2.1 钙紫红素指示剂。

4.2.2 氢氧化钠溶液：40g/L 。

4.2.3 乙二胺四乙酸二钠标准滴定液：c(EDTA)=0.05mol/L 。

葡萄糖酸钙含量的测定实验目的：1.强化滴定法的操作2.强化分析天平，容量瓶移液管，吸量管，滴定管 ，锥形瓶 ，溶液配制及转移容量仪器的洗涤干燥，滴定分析操作实验原理：)/(1000)()()(22L mmol V EDTA V EDTA C ca C ⨯⨯=+水样1，EDTA 是常用的螯合滴定剂，可滴定多种金属离子，与金属离子按1:1的比例结合2.在待测液中加入钙红指示剂（蓝色） 它与钙离子配位呈红色3.滴定时，EDTA 先与游离钙离子配位，然后夺取已和指示剂配位的钙离子，从而使指示剂被释放出来，达终点时，溶液由红色变为蓝色，此时可根据EDTA 标准溶液消耗量计算出钙离子的含量仪器与试剂:仪器：分析天平，100ml 容量瓶，5ml 吸量管 滴定管，锥形瓶 ，烧杯，滴定台，药勺,洗耳球，玻璃棒，胶头滴管试剂:待测葡萄糖酸钙粉末，钙红指示剂，蒸馏水，0.05 mol/L 的EDTA 标准溶液实验步骤:1，用分析天平称量3g葡萄糖酸钙粉末2.将葡萄糖酸钙粉末溶于10ml50～60℃的蒸馏水中3. 将葡萄糖酸钙溶液转移到100ml容量瓶中，用胶头滴管加入蒸馏水至刻度线4.从容量瓶中取出部分溶液到烧杯中，用吸量管吸取20.00ml溶液到锥形瓶中，0.05mol/L的EDTA标准溶液加入到滴定管中，记下初始读数，6.开始滴定，当溶液由红色变成蓝色时停止滴定，记下此时读数，7.再重复滴定两次数据记录与结果分析日期：温度：结实验编号 1 2 3 葡萄糖酸钙溶液V(EDTA)/mlV初(EDTA)/ml平均(EFTA)/ml相对平均偏差 /％葡萄糖酸钙含量/％讨论。

中国动物保健2022.08实践案例电位滴定法测定葡萄糖酸钙的含量王丽1，王小艳1，李娜1，袁聪1，张秋双1，张跃京1，臧合英1，邱富娜1，赵留涛2（1.河南省兽药饲料监察所郑州450015；2.郑州大学分析测试科技有限公司郑州450000）研究建立了混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量测定的电位滴定法，以改进混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量测定的方法。

通过对方法的准确度、精密度、耐用性、专属性试验的考察，实验结果表明该方法符合GB/T 27417-2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》要求，具有快速简便、定量准确的特点，可以用来检测混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量测定。

糖酸钙；电位滴定法；饲料添加剂混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量测定，目前检测依据GB 15571—2010《食品安全国家标准食品添加剂葡萄糖酸钙中葡萄糖酸钙的含量测定方法》，测定中采用滴定方法，滴定的终点判断标准为紫色转变为纯蓝色。

该判断主观差异大。

本研究参考了部分文献[1-3]，采用电位滴定法测定葡萄糖酸钙的含量，实验结果表明其方法简便、准确可靠，重现性好，能够有效的控制混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量。

1材料与方法1.1仪器与试药1.1.1仪器设备全自动电位滴定仪：万通809型，钙指示电极，银氯化银参比电极；MILIPORE 超纯水处理器；METTLER XP205电子天平。

1.1.2试药试剂葡萄糖酸钙标准品含量：99.5%；乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液（0.05058mol/L ）；氢氧化钠溶液：40g/L ；试验中使用的水为超纯水，试剂均为分析纯。

样品为饲料加工厂提供的混合型饲料添加剂液态葡萄糖酸钙。

1.2方法与结果1.2.1分析步骤1）供试品溶液的制备。

称取样品2g ，精密称定，加水100mL ，使溶解，加15mL 氢氧化钠溶液，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液滴定液滴定。

每1mL 的乙二胺四乙酸二钠滴定液相当于22.42mg 的C 12H 22CaO 14·H 2O 。

葡萄糖酸钙含量测定
葡萄糖酸钙含量测定是一种常用的实验方法，用于检测物质中葡萄糖酸钙的含量。

通常采用考夫曼-福特试剂盒进行测定。

①准备工作：将试剂盒中的T1液和T2液按比例混合，形成反应液。

②样品准备：把样品加入反应液中，并用搅拌器混合，然后在室温下放置30分钟，以得到一个红色的悬液。

③测定：使用光度计测定悬液的吸光度，并凭此数值计算出葡萄糖酸钙的含量。

④结果处理：将计算得到的葡萄糖酸钙含量与标准值进行比较，以判断样品中葡萄糖酸钙的含量是否符合要求。

葡萄糖酸钙含量的测定思考题
1、传统的滴定法：葡萄糖酸钙可以与适当的指示剂配合使用滴定试剂进行滴定，通过观察滴定终点的变化来确定含量。

思考如何选择合适的滴定试剂和指示剂，并确定滴定过程的适当条件。

2、分光光度法：葡萄糖酸钙溶液的吸光度可以在特定波长下测量，可以利用标准曲线来计算含量。

思考如何选择合适的测量波长和建立准确的标准曲线。

3、离子色谱法：通过离子色谱仪分析样品中的葡萄糖酸钙离子。

思考如何选择合适的色谱柱和流动相，并优化分析条件以实现准确的测定。

4、原子吸收光谱法：使用原子吸收光谱仪测量样品中钙离子的浓度，从而计算葡萄糖酸钙的含量。

思考如何选择合适的工作波长和优化样品的制备条件。

5、红外光谱法：通过红外光谱仪对葡萄糖酸钙样品进行分析。

思考如何解读红外光谱图并确定葡萄糖酸钙的含量。

实验七葡萄糖酸钙含量的测定一、实训目的1．掌握 EDTA 滴定液的配制和标定方法。

2．了解酸度对配位平衡的影响，熟悉控制溶液酸度的方法。

3．掌握葡萄糖酸钙口服溶液的含量测定方法。

4．熟悉金属指示剂的变色原理。

二、实训原理葡萄糖酸钙口服溶液为D-葡萄糖酸钙盐－水合物(C12H22CaO14?H2O), 故可用配位滴定法滴定其中的钙离子，将供试品加水微热使溶解，加氢氧化钠试液与钙紫红素指示剂后用乙二胺四乙酸二钠滴定液滴定至溶液由紫色转变为纯蓝色即可 :滴定前： Ca2+＋HIn 2－CaIn－＋ H+纯蓝色酒红色终点前： Ca2+＋H2Y 2－CaY2－＋2H+终点时： CaIn－＋H22－CaY 2－＋ HIn2－＋H+Y酒红色纯蓝色三、仪器及试剂仪器：酸式滴定管〔50ml〕、容量瓶〔250ml〕、烧杯〔1000ml〕、试剂瓶〔1000ml〕、锥形瓶〔 250ml〕、移液管〔 25ml〕、托盘天平、分析天平或电子天平。

试剂：乙二胺四乙酸二钠盐〔EDTA-2Na·2H2O， A·R〕、ZnO〔基准试剂〕、铬黑 T 指示剂、钙紫红素指示剂、稀盐酸、甲基红指示剂、氨试液、氨-氯化铵缓冲液〔 pH =10〕，葡萄糖酸钙口服溶液〔规格：10%〕。

四、实训内容〔一〕 EDTA 滴定液的配制和标定称取 EDTA 二钠 19g，加水适量使溶解，加水至 1000ml〔浓度约为 0.05mol/L 〕，摇匀待标定。

取于 800℃灼烧至恒重的基准氧化锌，精密称定，加稀盐酸30ml 使溶解，定容于 250 ml 容量瓶中，用移液管精密吸取 25ml 置锥形瓶中，加0.025%甲基红的乙醇溶液 1 滴，滴加氨试液至溶液显微黄色，加水25ml 与氨 -氯化铵缓冲液〔〕10ml ，再加铬黑 T 指示剂少量，用本液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验较正，平行测定 3 次取平均值。

每1ml EDTA 滴定液〔 0.05000 mol/L〕相当于 4.069 mg 的氧化锌。

测定葡萄糖酸钙钙片中钙含量的方法比较贺琼【摘要】详细论述了EDTA滴定法与高锰酸钾间接滴定法测定钙片中钙含量的方法比较,从理论上来说,高锰酸钾法具有更高的准确度.通过对样品的测定结果表明,用EDTA滴定法测得钙含量为8.07％,用高锰酸钾间接滴定法测得钙含量为8.29％.经显著性检验,两种方法间不存在显著性差异,可以用EDTA配位滴定法代替高锰酸钾法进行钙含量的测定.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2013(041)009【总页数】3页(P159-160,183)【关键词】钙含量;测定;EDTA配位滴定法;高锰酸钾法;葡萄糖酸钙【作者】贺琼【作者单位】常州工程职业技术学院,江苏常州213164【正文语种】中文【中图分类】TQ462钙与身体健康息息相关，钙除成骨以支撑身体外，还参与人体的代谢活动，它是细胞的主要阳离子，还是人体最活跃的元素之一，因此，补钙越来越被人们所重视。

由于中国人的膳食结构因素，从儿童到老年普遍存在补钙问题，众多厂家抓住这一商机，大力宣传，全力推出补钙药品、保健品，目前国内市场有100 多种补钙剂。

我们有必要了解补钙剂中钙的含量。

根据人体需要选择适合自己的补钙方法。

钙片中钙含量的测定有滴定分析法、分光光度法和离子色谱法等很多种方法［1－7］。

鉴定于目前许多补钙制剂尚未收入国家药典，国家尚未提出补钙制剂中钙含量的统一方法［5］。

对此，采用EDTA 滴定法与高锰酸钾间接滴定法两种方法对钙片中钙含量进行测定。

由于钙片本身是颗粒状的，所以要研碎后才能作为试样，否则很难使钙片中的钙成分离解，影响对钙含量的测定。

用EDTA 滴定法是使指示剂与钙离子生成酒红色络合物，当EDTA滴定至终点时，游离出指示剂，溶液呈现蓝色。

用高锰酸钾间接滴定法是利用在弱酸性溶液中，，过滤洗涤后，用硫酸溶解，CaC2O4+2H+=Ca2++H2C2O4，生成用高锰酸钾标准溶液滴定，以高锰酸钾自身为指示剂，从而测得钙的含量。

原子吸收法测定葡萄糖酸钙锌口服液的含量发布时间：2021-12-22T08:28:29.722Z 来源：《中国科技人才》2021年第27期作者：张丹丹[导读] 在难以获得量值准确的葡萄糖酸对照品的情况下，色谱方法会造成样品含量测定结果不够准确。

哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要：采用原子吸收分光光度法测定葡萄糖酸钙锌口服液中钙和锌的含量，测钙的回归方程为A=0.0429C-0.0017（r=0.9999），测锌的回归方程为A=0.5743C-0.0082（r=0.9988），葡萄糖酸钙的平均回收率为101.4%，葡萄糖酸锌的平均回收率为99.07%。

建立的方法准确、简便、高效，不需要使用对照品，可用于葡萄糖酸钙锌口服溶液制剂中葡萄糖酸的绝对定量。

关键词：原子吸收；葡萄糖酸钙；葡萄糖酸锌；含量测定引言葡萄糖酸是葡萄糖分子中醛基经氧化生成的糖酸，可与钙锌离子通过配合形成水溶性的有机盐，与无机盐相比具有易吸收、对消化道无刺激的优点，儿童对于这种甜味的口服溶液依从性更好，是目前金属离子载体营养补充剂的首选。

葡萄糖酸钙锌口服溶液的市场定位人群主要为成长期儿童，其质量状况更应该成为关注的重点，以保证儿童用药安全。

各国药典收载的葡萄糖酸盐类制剂的质量标准仅针对钙离子或锌离子进行检测，葡萄糖酸仅采用鉴别反应进行考察，并未控制制剂中葡萄糖酸的含量。

制剂中葡萄糖酸的含量会影响到其与钙锌离子的配合，而且也会对产品的质量带来影响。

目前，葡萄糖酸含量测定方法有比色法、酶法、离子交换色谱(IEC)法、高效液相色谱(HPLC)法等。

比色法专属性较低;酶法操作过程繁琐，结果易受诸多因素影响不易控制，对操作人员的要求高;IEC和HPLC法是目前进行药物质量控制的常用方法，具有分析时间短、专属性强、样品处理简单等特点。

但IEC法中OH－淋洗液容易吸收空气中的二氧化碳，配制条件严苛;HPLC法中，葡萄糖酸保留不强，采用210nm波长检测，易受到背景干扰。