白细胞介素_1基因型与慢性牙周炎_冠心病相关性研究_钟良军
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白细胞介素—1家族与炎症疾病的关系作者:李泽李燕来源:《医学信息》2014年第02期摘要:IL-1具参与炎症反应,促进免疫应答,调节睡眠和致热等生物学效应。
近些年研究发现IL-1与多种疾病的发生、发展密切相关。
本文主要对近年来IL-1与炎症疾病的关系进行综述。
关键词:白细胞介素-1;关节炎IL-1是1972年发现的一种细胞因子,它在免疫炎症的机制中起着调节作用。
近些年研究发现IL-1与关节炎、牙周炎、结肠炎等的发生、发展密切相关。
IL-1主要通过激活中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞等,提高它们的吞噬杀伤能力,从而参与炎症过程。
1 IL-1的来源IL-1由活化的单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、内皮细胞、肾上腺嗜铬细胞、成纤维细胞、小脑、嗅球、星形胶质细胞、小胶质细胞等合成。
其中单核细胞、巨噬细胞主要合成IL-1β,存在于血浆与组织液中[1]。
2 IL-1的生物活性IL-1具有参与炎症反应,促进免疫应答,调节睡眠和致热等生物学效应。
星形胶质细胞增生和新血管的形成受IL-1刺激。
中性粒细胞等能被IL-1激活,提高它们的吞噬杀伤能力,直接参与炎症过程。
IL-1还能上调血管内皮细胞和白细胞表达的黏附分子,加强两者的黏附作用,促进白细胞的炎症渗出。
IL-1α、IL-1β与Ⅰ型IL-1受体结合,能引起嗜中性粒细胞的招募与活化和有效的前炎症免疫反应。
3 IL-1-1家族与各种炎症疾病的关系3.1 IL-1α与各种炎症疾病的关系 IL-1α参与了类风湿性关节炎(RA)的慢性炎症与关节骨破坏的过程。
RA患者病情越重的IL-1α、C反应蛋白(CRP)水平越高,病情较轻的IL-1α、CRP水平较低,IL-1α水平的检测对RA的病情的评估具有临床价值。
IL-1α对牙周结缔组织破坏、牙槽骨吸收起着重要的作用。
IL-1α可引发明显的葡萄膜炎,葡萄膜炎产生原因之一是IL-1α在眼组织局部自分泌。
3.2 IL-1β与各种炎症疾病的关系 IL-1β从多方面对骨关节炎发生影响,滑膜组织被它促进表达;Ⅱ型胶原的合成被它抑制;可促进释放胶原酶和前列腺素E2产生促炎作用。
IL-1Ra/IL-1β在冠心病中的作用及其意义[摘要] 目的:研究il-1ra/il-1β在冠心病中的作用及其意义。
方法:回顾性分析急性心肌梗死(ami)组、不稳定性心绞痛(ua)、组稳定性心绞痛(sa)组、对照组用酶联免疫吸附法测定il-1ra/il-1β,严格按说明书操作。
结果:患者血清il-1β水平在急性心肌梗死组与不稳定性心绞痛组均显著高于对照组(p<0.01);患者血清il-ira水平在不稳定性心绞痛组以及患者血清il-1ra/il-1β水平在不稳定性心绞痛组与急性心肌梗死组显著低于对照组(p<0.05)。
结论:因此作为冠心病病情的一种监测指标的il-1ra/il-1β比值将使冠心病患者的治疗和预后更加有利。
[关键词] il-1ra;il-1β;冠心病冠心病(coronary heart disease,chd)是一种自身免疫性疾病;白介素-1作为一种重要的前炎症细胞因子,在调节免疫应答和炎症反应中起着重要作用,与冠心病的发生、发展密切相关[1]。
由于il-a和il-β是il-1家族的两种激动剂,并可能在一定程度上促进动脉硬化的形成[1].而作为这两种激动剂的天然拮抗剂的il-1ra,在一定程度上抑制动脉硬化的形成;在血液循环中il-la 一般不出现,对机体的免疫调节作用主要通过il-1ra/il-1β比值来反映[2]。
此项研究通过检测冠心病患者血清中il-1家族各指标的水平变化,探讨在冠心病发生和发展中il-1家族各指标的功能以及在病情监测中的意义,我们有如下报道结果。
1临床方法与资料1.1研究对象选择2008年1月-2010年6月的在我院住院的冠心病患者,根据临床表现、心电图改变和心肌标志物阳性等确定诊断.急性心肌梗死(ami)组:,共70例(51例男性,19例女性)发病在24h以内,年龄在43-81岁,平均年龄(62.5±12.9)岁。
不稳定性心绞痛(ua)组:81例(男52例,女性29例),年龄44-79岁,平均年龄(63.4±11.3)岁。
白介素-1基因多态性、牙周炎和吸烟因素与种植体周围炎相关性的研究进展种植体周围炎是指发生在正常行使功能的骨性结合种植体周围组织的炎症,它是引起种植体失败的主要原因。
种植体周围炎在临床上表现为种植体周围流脓或者探诊出血、瘘管、牙龈退缩,X线片示种植体周围有骨丧失。
引起种植体周围炎的因素很多,包括微生物、生物力学负载过重、患者基因易感性、有牙周炎病史和吸烟史都会增加种植体周围炎的风险。
大部分学者认为:吸烟和有牙周炎病史会影响种植体的成功率,但是在患者基因易感性和种植体周围组织炎症之间的关系上未达成统一。
本文就白介素-1(IL-1)的基因多态性、牙周炎病史和吸烟因素与种植体周围炎相关性的研究进展作一综述。
标签:种植体周围炎;基因;多态性;牙周炎;吸烟Research progress on peri-implantitis relationship in polymorphisms of interleukin-1 gene, periodontitis and smokingLiu Qiong, Huang Jiansheng.(Dept. of Special Clinic, Guangdong Provincial Stomatological Hospi-tal, Guangzhou 510280, China)[Abstract]Peri-implantitis are inflammatory lesions which effect the tissue near the implant in function. It is the main cause which dues to failed implant. Its clinical manifestations are fistula, bleeding or suppuration on probing, bone loss in the X-ray picture. There are many reasons for peri-implantitis, such as bacterial contamination, overloading. Besides biomechanical factors, genetic susceptibility, patients who have a history of periodontitis and smoking status are more at risk for peri-implant diseases. Most scholars think that smoking and a history of periodontitis may affect implant success rates, but they do not agree on the relationship between genotype and periimplantitis. This article is an overview about the polymorphisms in the interleukin-1(IL-1)gene, the history of periodontitis and smoking status, researching their relations with peri-implantitis.[Key words]peri-implantitis;gene;polymorphism;periodontitis;smoking种植体周围炎是导致种植义齿失败的主要原因。
侵袭性牙周炎患者及其亲属白细胞介素-1基因多态性的研究任秀云;徐莉;孟焕新;路瑞芳;陈智滨;冯向辉;释栋;张立【期刊名称】《北京大学学报(医学版)》【年(卷),期】2008(040)001【摘要】目的:研究侵袭性牙周炎(AgP)患者及其亲属白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)基因多态性与AgP易感性的关系.方法:收集66个核心家系共180名成员,进行全口牙周检查、摄全口根尖片并拍摄口内彩色照片,AgP先证者的诊断参照1999年牙周病分类法,其亲属的诊断参照1999年牙周病分类法和现状与回顾性相结合的评分标准作出评估诊断.提取研究对象外周静脉血基因组DNA,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的方法,分析IL-1A+4845,IL-1B-511位点的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)及IL-1RN第二内含子中的可变数目重复序列(variable number tandem repeats,VNTR)的多态性,采用多因素Logistic回归模型进行各组之间基因型/等位基因分布差异的比较,同时还采用以家系为基础的关联检验的方法(family-based association test)进行关联分析.结果:未发现IL-1基因各位点等位基因/基因型在AgP先证者与其亲属之间、以及亲属各组之间的分布差异有统计学意义(P>0.05).以家系为基础的关联检验表明,IL-1B-511和IL-1A+4845等位基因1在加性、显性及隐性3种遗传模型检验中,P值均大于0.05,即未发现IL-1基因各位点的多态性与AgP存在具有统计学意义的关联.但是,当把所有AgP患者按照全口牙槽骨吸收特点进行亚型分型并经Logistic回归模型调整了年龄、性别和吸烟状况后发现,在IL-1B-511位点,以局限型破坏为主的AgP患者A1A1基因型的频率比非AgP患者显著升高(43.8% vs22.8%,OR=7.32,95% CI=1.84~29.11,P=0.005),等位基因A1的分布差异也有统计学意义(71.9% vs 41.2%,OR=3.64,95% CI=1.55~8.58,P=0.002);而广泛型AgP患者与非AgP患者两组之间差异无统计学意义(基因型A1A1:P=0.88,等位基因A1:P=0.64).结论:IL-1B-511位点的SNP可能与以局限型破坏为主的AgP的易感性有关,但仍需要在更大样本量中验证.【总页数】6页(P28-33)【作者】任秀云;徐莉;孟焕新;路瑞芳;陈智滨;冯向辉;释栋;张立【作者单位】北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京,100081;北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京,100081;北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京,100081;北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京,100081;北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京,100081;北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京,100081;北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京,100081;北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科,北京,100081【正文语种】中文【中图分类】R781.42【相关文献】1.白细胞介素基因多态性与汉族广泛型侵袭性牙周炎易感性的相关性研究 [J], 李毅;赵华;章锦才2.白细胞介素-17基因多态性与侵袭性牙周炎的相关性研究 [J], 夏鑫钰;耿莹;叶宇;李璐;王晓茜;孙颖;徐艳3.FADS1 rs174537基因多态性与侵袭性牙周炎患者血清蛋白的相关性 [J], 宋文莉;孟焕新;田雨;王宪娥;张立;徐莉;释栋;冯向辉;路瑞芳;陈智滨4.白细胞介素-1基因多态性与侵袭性牙周炎的关系 [J], 陈春生;娄新华;叶俊5.白细胞介素-1基因多态性与侵袭性牙周炎的关系 [J], 陈春生;娄新华;叶俊因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
白细胞介素-35与慢性牙周炎和阿尔茨海默病相关的研究摘要:白细胞介素是非常重要的细胞因子家族,其在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中发挥重要作用。
近年发现,白细胞介素在牙周炎和阿尔茨海默病的发病机制中发挥着重要作用。
深入研究白细胞介素和牙周炎、阿尔茨海默病的关系,对牙周炎和阿尔茨海默病的病因研究、预防和治疗以及预后判断具有深远意义。
关键词:白细胞介素;牙周炎;阿尔茨海默病IL参与介导炎症反应和免疫应答,与牙周炎的发病及病情进展关系密切[1]。
目前AD的病因不清,在众多假说中,炎症学说被大部分学者认为是AD发生及发展的重要病理特征之一。
慢性炎症在慢性牙周炎与AD之间扮演了重要的角色,而本综述主要探讨IL-35与牙周炎和阿尔茨海默病的相关性。
IL-35的生物学活性IL-35是一种具有潜在治疗前景的新型抗炎因子。
IL-35由IL-12的α链IL-12A亚基和IL-27的β链EBI3亚基组成的异源二聚体蛋白。
在一系列慢性炎症及感染性疾病、自身免疫病、肿瘤和过敏性疾病中都起到重要作用。
IL-35在急性感染时可明显诱导Th1细胞清除感染,促进调节性T(regulatory T,Treg)增殖,并抑制Th17分化,防止自身免疫反应的出现;在慢性感染期,Treg细胞通过抑制效应细胞而减少免疫损伤的出现。
另外,IL-35还可抵消IL-23-Th17通路的影响,限制由适应性免疫介导的炎症反应程度。
近期大量文献报道许多全身性疾病如冠心病、门静脉高压、类风湿性关节炎、血液病等患者血清IL-35水平显著升高[2]。
IL-35与慢性牙周炎最新研究表明,Treg细胞分泌的免疫抑制细胞因子-IL-35,具有调节效应性T细胞增殖、维持外周免疫耐受、抑制辅助性T细胞(helper T cells,Th)17分化、IL-17合成等功能,成为研究的热点之一[3]。
IL-35在免疫性疾病及感染中具有维持稳态功能及调节性免疫中发挥核心作用。
白细胞介素—1基因多态性与新疆维吾尔族慢性牙周炎易感性的关系钟良军;沈惠兰;等【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2001(23)A07【摘要】目的探讨白细胞介素-1(IL-1)基因多态性与新疆维吾尔族慢性牙周炎(CP)遗传易感性的关系。
方法收集维吾尔族重度CP41例、中度CP43例、轻度CP49例和健康对照92例个体的颊粘膜拭子,提取DNA,采用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)法测定IL-1B+3953/TaqI 和IL-1B-511/AvaI位点的基因型,比较各基因型检出率的差别。
结果(1)IL-1B+3953/TaqI等位基因2在重度CP中的检出率显著高于健康组。
(2)IL -1B-511/AvaI基因型在重度CP、中度CP、轻度CP和健康组之间的分布无显著性差异。
结论 IL-1B+3953/TaqI等位基因2可能与新疆维吾尔族重度CP 遗传易感性相关。
【总页数】3页(P26-28)【关键词】慢性;牙周炎;维吾尔族;白细胞介素-1;基因型;多态性;易感性【作者】钟良军;沈惠兰;等【作者单位】四川大学华西口腔医学院,成都610041;新疆维吾尔自治区人民医院口腔科,乌鲁木齐830000【正文语种】中文【中图分类】R781.42【相关文献】1.白细胞介素10基因多态性与慢性牙周炎易感性的病例对照研究 [J], 王俭;袁伟;浮飞翔;杨君;汤芳2.白细胞介素1基因多态性与维吾尔族群体慢性牙周炎易感性的关系 [J], 钟良军;张蕴惠;章锦才;杨爱玲;黄海云3.白细胞介素-1和肿瘤坏死因子-α基因多态性与宁夏地区回族人群慢性牙周炎易感性相关关系的研究 [J], 马敏;李国凯;韩春华;黄永清4.白细胞介素1受体拮抗剂基因多态性与慢性牙周炎易感性关系的研究 [J], 韩冰;苟建重;陈曦;曹卫彬5.白细胞介素32基因多态性与慢性牙周炎易感性的关系 [J], 郝云菲; 桑国耀; 徐隽因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
汉族成人牙周炎患者白细胞介素-1基因多态性分析梁焕友;吴坚;刘国萍【期刊名称】《中山大学学报(医学科学版)》【年(卷),期】2001(022)006【摘要】[目的]分析汉族成人牙周炎患者的白细胞介素-1(IL-1)基因家族多态性特征.[方法]将109名汉族成人牙周炎患者分为轻、中、重度三组,用PCR和限制性酶切方法,对其与20名正常人的IL-1A-889基因位点,IL-1B+3953基因位点、IL-1RN内含子2进行多态性分析.[结果]重度成人牙周炎患者的IL-1B等位基因2携带率(35.9%)较正常人(15.0%)和轻(6.8%)、中度(18.8%)牙周炎患者的高,其同时携带IL-1A等位基因2、IL-1B等位基因2的发生率亦比其他各组患者的高(P<0.05).而IL-1A、IL-1RN的多态性分布在各组中无明显差异.[结论]汉族重度成人牙周炎患者与轻度、中度患者的IL-1B(+3953)基因多态性差异可能是他们临床表现差异的内在原因,这有助于提高对成人牙周炎疾病本质的认识.【总页数】5页(P468-472)【作者】梁焕友;吴坚;刘国萍【作者单位】中山医科大学附属第三医院口腔科,;中山医科大学附属第三医院口腔科,;中山医科大学附属第三医院口腔科,【正文语种】中文【中图分类】R781.4【相关文献】1.慢性乙型肝炎患者白细胞介素1β及白细胞介素1受体拮抗剂基因多态性分析[J], 张平安;李艳;徐朴2.2633例老年汉族患者SLC01B1及ApoE基因多态性分析 [J], 王海滨; 张冬青; 赵娇; 司英丽3.河北地区汉族心脑血管病患者ApoE和SLCO1B1基因多态性分析 [J], 何莎;苟东芸;王文远;刘紫倩;杨洁;王彦永;孙静娜;张令怡;马晓伟4.498例北京地区汉族人群脑梗死患者SLCO1B1和ApoE基因多态性分析 [J], 杨添尹;雷婷;张曼5.苏南地区汉族精神分裂症患者CYP1A2、CYP2C19及CYP2D6基因多态性分析[J], 隋沂言;陈颖;李琰;刘曼华;钱霖;汤露;汪广剑;瞿发林因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
白细胞介素-1β对人牙周膜纤维细胞生物学的作用牛忠英;陈健;徐默菡;史俊南;肖明振【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】1999(20)2【摘要】@@ 0 引言rn尖周病、牙周病是严重危害人类口腔健康的常见病、多发病. 最近的研究证实,在尖周病、牙周病的病灶中存在着大量的白细胞介素-1β (Interlukin-1β,IL-1β),且IL-1β的活性与尖周病、牙周病的病变程度、临床症状等密切相关[1].但IL-1β在尖周病、牙周病中的作用机理尚不清楚. 人牙周膜纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast, HPLF)是牙周膜组织中的主要细胞. 它参与调节牙周膜组织的新陈代谢,形成胶原纤维、合成细胞外基质,与尖周病、牙周病的发病和修复过程有密切的关系. 本研究采用人基因重组型IL-1β,系统地研究了IL-1β对HPLF的DNA合成,c-myc基因的表达,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的活性,以及HPLF产生前列腺素E2(PGE2)的影响,旨在从细胞和分子水平揭示IL-1β在尖周病、牙周病的发病和损伤修复中的作用.【总页数】1页(P166)【作者】牛忠英;陈健;徐默菡;史俊南;肖明振【作者单位】第四军医大学秦都口腔医学院口腔内科学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学秦都口腔医学院口腔内科学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学秦都口腔医学院口腔内科学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学秦都口腔医学院口腔内科学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学秦都口腔医学院口腔内科学教研室,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】R781【相关文献】1.人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞生物学特性的研究进展 [J], 徐杰;税艳青;2.四环素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用 [J], 葛少华;杨丕山;赵宁;戚向敏;孙钦峰;王艳3.重组人骨形成蛋白2对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用 [J], 司晓辉;刘正4.大蒜素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用 [J], 吴更;徐宏志;李阳飞;谢晓莉;罗小良;张宇;谢静;唐国旗5.人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征 [J], 徐燕;李颂;程继光;胡勇;王明丽因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
收稿日期:2010-10-29基金项目:国家自然科学基金资助项目(30860314)作者简介:钟良军(1965-),汉族,广东五华人。
博士,主任医师;博士、硕士研究生导师通讯作者:张源明,E -mail :zymdyx1962@sina.com 白细胞介素-1基因型与慢性牙周炎、冠心病相关性研究钟良军1,张琼1,张蕾1,孙大磊1,张源明2(新疆乌鲁木齐830054:1.新疆医科大学第一附属医院口腔系;2.新疆医科大学第一附属医院心血管中心)[摘要]目的:探讨白细胞介素-1A +4845(interleukin-1A +4845,IL-1A +4845)、白细胞介素-1B -31(interleukin-1B -31,IL-1B-31)基因型与慢性牙周炎(chronic periodontitis ,CP )、冠心病(coronary heart dis-ease ,CHD )易感性的关系。
方法:收集中重度慢性牙周炎病人127例,冠心病病人123例,慢性牙周炎合并冠心病病人87例和健康对照117例的颊黏膜拭子,提取DNA ,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(poly-merase chain reaction-restriction fragment length polymorphism ,PCR-RFLP )对IL-1A +4845/Fnu 4H1、IL-1B-31/Alu I 位点的基因型进行检测,比较各基因型在4组间检出率的差别。
结果:①IL-1A +4845基因型在4组间基因型的分布无统计学差异;②IL-1B-31等位基因T 在中重度慢性牙周炎组中的检出率显著高于健康对照组,而在冠心病组与健康组、慢性牙周炎合并冠心病组与健康组间的分布无统计学意义。
结论:IL-1B -31等位基因T 可能是中重度慢性牙周炎的一个遗传学标志。
[关键词]慢性牙周炎;冠心病;白细胞介素-1;基因型[中图分类号]R780.2[文献标识码]A[文章编号]1005-2593(2010)12-0694-04[牙体牙髓牙周病学杂志,2010,20(12):694]Interleukin -1genotype and its assocation withchronic periodontitis and coronary heart diseaseZHONG Liang-jun *,ZHANG Qiong ,ZHANG Lei ,SUN Da-lei ,ZHANG Yuan-ming(*Department of Seamatology First Affiliated Hospital ,Xinjiang Medical University ,Urumqi 830054,China )[Abstract ]AIM :To investigate interleukin-1A +4845and interleukin-1B-31(IL-1A +4845.IL-1B-31)genotype and their association with the susceptibility of chronic periodontitis (CP )and coronary heart disease.METH-ODS :DNA was obtained from buccal swabs of 127subjects with moderate to severe chronic periodontitis ,123subjects with coronary heart disease ,87subjects with moderate to severe chronic periodontitis and coronary heart disease and 117matched healthy control individuals.Genotypes of IL-1A +4845/Fnu 4H1and IL-1B -31/Alu I were analyzed by PCR-RFLP method.Then the differences in distribution of genotype were compared.RESULTS :①There was no statistical differences about the distribution of IL-1A +4845genotype among the four groups.②A significant statistical difference about distribution of IL-1B-31genotype was found among the four groups.A more significant over-represen-tation of IL-1B-31allele 2was found in CP group than in the healthy control individuals.CONCLUSION :The allele of IL-1B-31may be associated with CP susceptibility.[Key words ]chronic periodontitis ;coronary heart disease ;interleukin-1;genotype [Chinese Journal of Conservative Dentistry ,2010,20(12):694]冠心病与牙周炎同是严重危害人类健康的疾病,其发生是环境因素与遗传易感因素共同作用的结果。
慢性牙周炎是一种复杂的、多因素的慢性炎症性疾病,是成年人失牙的主要原因。
基础医学研究已表明慢性炎症在冠心病的发生、发展中起重要的作用,牙周感染与患心血管疾病的风险显著相关,慢性牙周炎是心血管疾病发生的一个的独立危险因素[1]。
病变的牙周组织可成为全身炎症介质如TNF,IL-1β的一个储蓄池,这些炎症介质进入循环系统,一方面可引起局部或全身结缔组织的破坏、血小板凝集、血栓栓塞,另一方面可诱发急性期应答,促进动脉粥样斑块的形成[2-6]。
其中炎性介质IL-1不仅可介导牙槽骨吸收和胶原降解[7-8],还可引起血管扩张,诱导黏附分子和趋化因子表达,促进中性粒细胞外渗,从而导致血管内壁损伤。
目前国内外研究表明IL-1不同的基因型可能是牙周炎和冠心病共同的易感因子[9]。
为探讨IL-1A+4845基因型及IL-1B-31基因型与慢性牙周炎、冠心病的关系,本研究采用PCR-RFLP法对IL-1A+4845位点及IL-1B-31位点基因型测定和分析。
1材料和方法1.1主要仪器和试剂恒温水浴锅(HH-SY21-Ni4C,北京);高速台式离心机(TGL-16B,上海);PCR扩增仪(BIO-RAD MyCylerTM Thermal Cycler,美国);凝胶成像仪(BIO-RAD GEL DOC2000,美国);5% Chelex-100(sigma,美国);引物(由上海生工生物工程公司合成)。
1.2研究对象1.2.1资料来源选择新疆医科大学第一附属医院口腔门诊及心血管中心就诊的牙周炎和冠心病病人,单纯冠心病病人123例(男性77例,女性46例,年龄36 76岁);中度以上牙周炎病人127例(男性76例,女性51例,年龄31 74岁);冠心病合并慢性牙周炎病人87例(男性52例,女性35例,年龄40 71岁)。
另选健康志愿者117例作对照(男性68例,女性49例,年龄28 69岁)。
1.2.2诊断标准冠心病的诊断以Judkins法行冠状动脉造影术确定1支或1支以上冠状动脉直径狭窄≥50%为标准。
慢性牙周炎的诊断标准参照Armitage等[10]推荐的诊断标准。
1.2.3纳入和排除标准纳入标准:经冠状动脉造影检查确诊为冠心病者,慢性牙周炎病人均经牙周检查确诊,至少半年内未接受任何牙周治疗且无明显的错牙合畸形以及。
:、其他部位严重感染、肿瘤、传染性疾病,以及缺失牙>14个和不愿合作者。
1.3IL-1基因多态性检测1.3.1样本采集用无菌棉签取各受试者双侧颊黏膜拭子,室温下自然干燥24h后无菌密闭容器中-20ħ保存。
1.3.2DNA提取取各受试者的颊黏膜拭子,剥取拭子表层,加入Chelex-100150μL,使其浸没标本;再加入蛋白酶K4μL,漩涡混匀,55ħ水浴3h,煮沸10min,冰浴3min,14000r/min离心3min,取上清液,-20ħ保存。
1.3.3基因多态性检测1.3.3.1IL-1A+4845和IL-1B-31位点PCR扩增IL-1A+4845上游引物为:5'-ATG GTT TTA GAA ATC ATC AAG CCT AGG GCA-3',下游引物为:5'-AAT GAA AGG AGG GGA GGA TGA CAG AAA TGT-3',PCR反应体系为:模板DNA4μL,2ˑTaq PCR MasterMix12.5μL,引物P1,P2各0.5μL (10pmol/μL),用无菌去离子水补足总体积至25μL,循环参数为:95ħ1min预变性后,进入主循环,共35个循环:94ħ变性1min,59.8ħ退火1min,72ħ延伸2min,末次延伸为72ħ5min终止反应,PCR产物4ħ保存。
IL-1B-31上游引物为:5'-AGA AGC TTC CAC CAA TAC TC-3',下游:5'-AGC ACC TAG TTG TAA GGA AG-3',PCR反应体系为:模板DNA6μL,2ˑTaq PCR MasterMix12.5μL,引物P1,P2各0.5μL (10pmol/μL),用无菌去离子水补足总体积至25μL,循环参数为:94ħ5min预变性后,进入主循环,共35个循环:94ħ变性30s,55ħ退火45s,72ħ延伸45s,末次延伸为72ħ10min终止反应,PCR产物4ħ保存。
产物用20g/L的琼脂糖凝胶(溴化乙锭染色)电泳,100V恒压30min,紫外灯下观察结果。
1.3.3.2PCR产物的限制性内切酶消化取PCR产物10μL,限制性内切酶0.5μL,10ˑ酶切缓冲液2μL,无菌去离子水补足总体积至20μL,混匀,37ħ水浴过夜。
酶切产物经30g/L琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶电泳成像仪直接读取基因型结果。
1.3.4G →C 突变,C →T 突变和RFLP 分析的可靠性证实随机挑选电泳图上显示的两种不同纯合子基因型的PCR 产物送上海生工进行直接测序。