超深低温处理的同种异体神经移植的临床研究
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超低温冷冻同种异体骨与骨制备的骨组织库建立及临床应用
超低温冷冻同种异体骨与骨制备的骨组织库建立及临床应用龚旭;潘剑成;贺立新;聂利;杨文超;蒋华生;梁健铭【摘要】目的建立现代骨组织库,观察系列冷冻干燥同种骨移植的临床效果.方法采用深低温冷冻法、真空冷冻干燥和辐照灭菌法进行保存,临床应用异体骨时,根据患者的需要和骨组织库的记录资料合理选择,运用于骨缺损填充、脊柱和关节融合手术89例.结果术后随访6～24月,89例未见明显排斥反应,疗效满意.结论冷冻干燥同种异体骨制备的松皮质填充骨、颈腰椎融合器等系列使用安全,保存和运输方便,用于修复骨缺损及脊柱融合等,是一种有效的方法.【期刊名称】《生物骨科材料与临床研究》【年(卷),期】2016(013)001【总页数】3页(P36-37,40)【关键词】骨组织库;冷冻干燥法;同种异体骨;骨移植;临床应用【作者】龚旭;潘剑成;贺立新;聂利;杨文超;蒋华生;梁健铭【作者单位】解放军第181中心医院脊柱骨病关节外科,广西桂林541002;解放军第181中心医院脊柱骨病关节外科,广西桂林541002;解放军第181中心医院脊柱骨病关节外科,广西桂林541002;解放军第181中心医院脊柱骨病关节外科,广西桂林541002;解放军第181中心医院脊柱骨病关节外科,广西桂林541002;解放军第181中心医院脊柱骨病关节外科,广西桂林541002;解放军第181中心医院脊柱骨病关节外科,广西桂林541002【正文语种】中文【中图分类】R687.3临床中脊柱病变需融合或因损伤、疾病引起骨缺损，尤其是脊柱椎间隙融合及其大块骨缺损者靠病人自身修复相当困难，这就需要植骨来进行融合及填补骨缺损。
骨组织库的建立能提供替代自体骨的移植材料，因此骨组织库已成为现代骨科的必备设施。
自2012年7月始，本院骨组织库在实验研究和传统同种骨移植技术的基础上，同上级医院合作，参考国内外的先进方法，建立了以深度低温、真空冷冻干燥、真空包装和辐照灭菌为核心技术的现代骨组织库，2013年1月开始将同种异体骨颈腰椎融合器、同种异体填充骨临床应用于骨缺损、脊柱和关节融合手术89例，现将系列冷冻干燥同种异体骨的制备及应用报告如下：1.1 冻干同种异体骨制备相关1.1.1 骨来源获取及其储存方法骨材料来自合法取得的捐献供体，无菌手术切除的骨组织及创伤截肢后的骨骼，如股骨颈骨折患者被置换下来的股骨头、椎管后路减压术切除的椎板和棘突、开胸术切下来的肋骨、开颅减压术切下来的颅骨及关节置换取下的髌骨、能够提供较多骨量的有外伤性截肢无污染的肢体骨；死亡4～8小时以内的捐献供体。
同种异体骨植骨临床应用与研究进展
Stem Cell Transplantation for Refractory Lupus Nephritis［J］.Clin J Am Soc Nephrol，2019，14（5）：719-727.［35］Sattwika PD，Mustafa R，Paramaiswari A，et al.Stem cells for lupus nephritis：a concise review of current knowledge［J］.Lupus，2018，27（12）：1881-1897.［36］Sun L，Akiyama K，Zhang H，et al.Mesenchymal stem cell transplantation reverses multiorgan dysfunction in systemiclupus erythematosus mice and humans［J］.Stem Cells2009，27（6）：1421-1432.［37］Gu Z，Tan W，Feng G，et al.Wnt/β-catenin signaling medi-ates the senescence of bone marrow-mesenchymal stemcells from systemic lupus erythematosus patients throughthe p53/p21pathway［J］.Mol Cell Biochem，2014，387（1-2）：27-37.［38］Deng D，Zhang P，et al.A randomised double-blind，place-bo-controlled trial of allogeneic umbilical cord-derivedmesenchymal stem cell for lupus nephritis［J］.Ann RheumDis，2017，76（8）：1436-1439.（收稿：2019-11-12修回：2019-12-15）同种异体骨植骨临床应用与研究进展滕沙格陈哲范佳俊陈岩松关键词同种异体骨；植骨；骨缺损；骨修复重建；并发症人体骨骼具有自我再生和自我修复功能，这使得受损器官能够完全恢复到其损伤前的组成、结构和功能[1]。
深低温冷冻同种异体骨移植修复良性骨肿瘤及骨折术后骨缺损临床效果观察
℃ 冰 箱进 行 深低 温 冷 冻 储 存 的 健 康 异 体 骨 ， 植 于 １ 移 ７例 因 良 性 骨 肿 瘤 或 骨 折 术 后 形 成 的 骨 缺 损 区 域 、 大段 移 植 或 不 稳
ｌ 患者 ， ７例 平均 随访 ２ ８个 月，６例愈 合 良好 （ ９ ．６ ） １ 占 ２ １％ 。结论 深低 温冷 冻 同种
２ 结 果
骨缺损 原 因 ； 骨囊 肿 ４例 ， 动脉 瘤样 骨囊 肿 ２例 ， 巨细 骨 胞 瘤 ４例 ， 骨纤维 结构 不 良 ３例 ， 折 不 愈 合 或假 关 节 骨
形 成 ３例 。 早期 ｌ ０例体 温在 ３ ８℃ 以下 ， 口无 红 肿 渗 出 ， 切 切
口 Ｉ 愈合 ； 期 ７例术 后 体 温 超 过 ３ ８℃ ， 续 ３～７天 ， 持 １
实用医院临床杂志 ２０ ０ ８年 ９月第 ５卷第 ５期
１５ ０
深低 温 冷 冻 同种 异 体 骨 移 植 修 复 良性 骨 肿瘤 及
Ｃｒ ｏ ｒ ｓ ｎｒｔｏ ｌ ｇ ｎ ｔｃ ｂ ｎ ｒ ｆ ｆ ｒｒ ｐ ｉ ｆｂ ｎ ｆ ｃ ａ ｓ ｄ ｂ ｙ ｐ ｅ ｅ ａ ｉｎ ａｌ ｅ ｅ ｉ ｏ ｅ ｇ ａ ｔ ｏ ｅ ａｒ ｏ ｏ ｅ ｄｅｅ ｔｃ ｕ ｅ ｖ ｏ
３ 讨论
深低温冰箱 中取出骨块后 ， 先以４ ０℃生理盐水复温 ， 剪
． 成细小 骨块 或骨 条 。彻 底清 除 移 植 骨 表 面 软 组织 及 骨 ３ １ 同种 异 体 骨移植 治 疗骨 缺损 的优 点 骨科 在修 复 肿瘤切除等各种原 因造成 的骨缺损时 ， 方法 膜， 艾力 克 浸泡 ４ ０分 钟后 以 ３ 双 氧 水 、． ％ 生 理 盐 由于创伤、 ％ ０９ 异体 骨移 植 ， 水 、 ％酒精反复交替洗涤 ， ７ ５ 直至骨条变白， 洗涤液无脂 有 自体游 离 骨移植 或 带 血 管 显微 骨 移植 ， 自－ 异体 骨混 合 移 植 、 种 骨 移 植 及 人 工 合 成 材 料 等 。 异
同种异体肌腱移植的研究进展
128
World Latest Medicine Information (Electronic Version) 2018 Vo1.18 No.62
·综述·
同种异体肌腱移植的研究进展
崔立舜
（内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特）
摘要：近年来，异体肌腱逐步得到重视并广泛应用于临床。异体肌腱的优势在于容易获取；不损伤机体本来的生物结构和功能；术 后不需要应用特殊药物；缩短了手术时间等。许多学者通过大量的临床应用和实验研究，尤其是在治疗过程中取得了实质性的进展。 本文就同种异体肌腱的保存方法、异体肌腱的免疫原性及相关问题做一综述。 关ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ词：移植；生物力学；免疫原性 中图分类号：R743 文献标识码：A DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2018.62.057 本文引用格式：崔立舜 . 同种异体肌腱移植的研究进展 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(62):128-129.
2 异体肌腱的抗原性
异体肌腱是一种缺乏血供且低抗原性的组织，而肌腱组 织的细胞膜表面本身具有一定的抗原性，直接应用不经处理 的异体肌腱引起较为强烈的免疫反应，导致移植物结构的破 坏崩解。有文献报道移植物的组织相容性抗原或人类白细 胞 通 常 具 有 自 身 的 免 疫 原 性，由 于 免 疫 反 应 的 排 斥 作 用，因 此在基质和胶原上的呈弱抗原性 [4]。在鼠异体肌腱移植的实 验 研 究，发 现 异 体 肌 腱 的 抗 原 性 主 要 存 在 于 其 腱 细 胞 成 分， 经过处理后的异体肌腱被赋予新的抗原性 [5]。
3 免疫原性问题
同种异体肌腱移植同组织或器官一样也存在免疫排斥问 题，只 是 程 度 不 同 而 已，解 决 此 问 题 是 异 体 肌 腱 在 临 床 应 用 发挥作用的关键。Minami 等 [6] 从大量实验发现胶原可以通 过屏障作用而降低肌腱的抗原性，反之，去除胶原后，抗原性 增加。异体肌腱移植的失败主要是由于未经处理的异体肌 腱移植后在受体中会产生大量淋巴细胞并引发细胞毒反应， 在第 2 周达到高峰，之后以细胞免疫为主的免疫排斥反应占 据主导地位并持续数月。冷冻处理不仅能降低异体肌腱的 抗原性，而在降低免疫源性的问题上在国内外也逐渐得到证 实。谢唏衷等 [7] 用深低温保存法及戊二醛处理将异体肌腱 处 理 后，其 抗 原 反 应 明 显 降 低，移 植 物 的 强 度 和 生 物 力 学 特 性也显著增强，大大的提高了移植的成功率。Pinkowski 在体
World Latest Medicine Information (Electronic Version) 2018 Vo1.18 No.62
·综述·
同种异体肌腱移植的研究进展
崔立舜
（内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特）
摘要：近年来，异体肌腱逐步得到重视并广泛应用于临床。异体肌腱的优势在于容易获取；不损伤机体本来的生物结构和功能；术 后不需要应用特殊药物；缩短了手术时间等。许多学者通过大量的临床应用和实验研究，尤其是在治疗过程中取得了实质性的进展。 本文就同种异体肌腱的保存方法、异体肌腱的免疫原性及相关问题做一综述。 关ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ词：移植；生物力学；免疫原性 中图分类号：R743 文献标识码：A DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2018.62.057 本文引用格式：崔立舜 . 同种异体肌腱移植的研究进展 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(62):128-129.
2 异体肌腱的抗原性
异体肌腱是一种缺乏血供且低抗原性的组织，而肌腱组 织的细胞膜表面本身具有一定的抗原性，直接应用不经处理 的异体肌腱引起较为强烈的免疫反应，导致移植物结构的破 坏崩解。有文献报道移植物的组织相容性抗原或人类白细 胞 通 常 具 有 自 身 的 免 疫 原 性，由 于 免 疫 反 应 的 排 斥 作 用，因 此在基质和胶原上的呈弱抗原性 [4]。在鼠异体肌腱移植的实 验 研 究，发 现 异 体 肌 腱 的 抗 原 性 主 要 存 在 于 其 腱 细 胞 成 分， 经过处理后的异体肌腱被赋予新的抗原性 [5]。
3 免疫原性问题
同种异体肌腱移植同组织或器官一样也存在免疫排斥问 题，只 是 程 度 不 同 而 已，解 决 此 问 题 是 异 体 肌 腱 在 临 床 应 用 发挥作用的关键。Minami 等 [6] 从大量实验发现胶原可以通 过屏障作用而降低肌腱的抗原性，反之，去除胶原后，抗原性 增加。异体肌腱移植的失败主要是由于未经处理的异体肌 腱移植后在受体中会产生大量淋巴细胞并引发细胞毒反应， 在第 2 周达到高峰，之后以细胞免疫为主的免疫排斥反应占 据主导地位并持续数月。冷冻处理不仅能降低异体肌腱的 抗原性，而在降低免疫源性的问题上在国内外也逐渐得到证 实。谢唏衷等 [7] 用深低温保存法及戊二醛处理将异体肌腱 处 理 后，其 抗 原 反 应 明 显 降 低，移 植 物 的 强 度 和 生 物 力 学 特 性也显著增强，大大的提高了移植的成功率。Pinkowski 在体
同种异体骨与关节移植的现状
同种异体骨与关节移植的现状摘要】对于关节毁损的治疗一直是困扰骨科临床的一大难题。
人工假体关节置换是目前修复重建关节缺损的有效手段,但对于我们运动强度较大的青少年患者并不适用。
自体关节移植不产生排斥反应,是修复关节毁损的理想方法。
但供体来源紧缺，限制了其在临床上的使用，异体关节来源广泛,具有类似的自然结构、形状、强度、骨诱导能力，可以充分满足临床需要。
经深低温冷冻处理的异体骨已成功地应用于关节修复及关节移植手术，本文综述近几年的对同种异体骨与关节的特殊处理的措施，以及临床上对同种异体关节移植后远期疗效分析。
此外,还简要描述临床上同种异体关节移植的未来及展望。
【关键词】同种异体低温冷冻关节移植【中图分类号】R687 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）27-0343-02创伤性骨与关节端缺损治疗一直是我们骨科临床上的难点。
创伤导致骨关节端缺损后如何修复重建毁损的关节结构与功能?二十世纪70年代,西方以同种异体骨移植治疗骨关节端缺损取得了初步的进展[1]。
随着人工关节假体材料与技术的进步与发展，人体大关节的问题已基本解决，如膝关节、髋关节，肩肘关节置换也有相关报道。
但手部关节如掌指关节、指间关节僵硬缺损的治疗以及远期的关节退化，一直是临床常见而又棘手的问题。
同种异体关节移植术后关节软骨塌陷与吸收。
如何通过相应的处理得到一个有利于软骨成活且免疫原性低的异体关节移植材料成为急需解决的问题。
1 同种异体骨与关节的降低免疫原性的预处理的方法:(1)低温冷冻法：样本由常温状态浸入冷冻液(主要由2.0mol/L二甲基亚砜组成)，经过3个梯度降温至深低温（-70℃），平衡60min，直接投入液氮中。
样本在液氮中保存14d以上。
使用前将样本取出，37℃水浴复温，平衡液洗脱。
然后用于关节及软骨移植手术[2]。
随着低温医学的发展，深低温冷冻方法已经成为目前最常用的软骨保存方法之一，而且伴随着冷冻参数、低温保护剂、冷冻程序等方面的不断改进，此方法也取得了长足的进展。
同种异体周围神经去抗原方法的研究进展
中 图 分 类 号 ：Ｒ ６ １ ３ ２ ． ５ ． ；Ｒ ６２ ３ 文 献 标 识 码 ：Ａ
Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ｐ ｏ ｒ ｓ ｆｒ ｍ ｏ ａ ｆａ ｔｇ ｎ ｉ ｒ ｐ ｅ ａ ｌｏ ｅ ｉ ｒ ｅ ｓ ａ ｃ ｒ ｇ ｅ ｓ ｏ ｅ ｖ ｌｏ ｎ ｉ ｅ ｎ ｐｅ ｉ ｈ ｒ ｌａ ｌ ｇ ｎ ｃ ｎｅ ｖ
ｅｅｔ ｅ ｅｒａｅｔｅｉ ｕ ｏｅ ｉｔ． Ｃ ｍ ａｅ ｉ ｔｅ ｔｏ ｓ ｔ ｒ ｓｎ ｂｉ ｓｉ ｍ ｎ ｅ ｃｉ ｆ ｆ ｃｉ ｌ ｄｃｅｓ ｈ ｍｍ ｎ ｇｎｃ ｙ ｏ ｐｒｄ ｗｔ ｏ ｒｍｅ ｄ ，ｈ ｅｉ ｏｏｖ ｕ ｍ ｕ ｅｒ ｅｔ ｎｏ ｆ ｖｙ ｉ ｈ ｈ ｈ ｅ ｏ ｊ ｏ
ｃ ｍｉａ ｌ ｘｒ ｃｅ ｃ ｌ ａ ｌｏ ｒ ｆ ｒ ｅ ｗｈ ｎ ｃ ｍｐａ ｅ ｔ ｅ ｈ ａ ｔ ｒ ｆ ｎｅ ｅ Ｉ ｓ ｅ ｔ ｎ ｉ ｅｙ ａ ｌｅ ｎ ｈｅ ｃ ｌｙ ｅ ｔａ ｔｄ ａ ｅｌ ｒａｌ ｇａ ｔｎｅｖ ｅ ｏ ｕｌ ｒ ｄ ｗｉ ｆ ｓ ｕｏｇａ ｔ ｒ ． ｔｉ ｘ ｅ ｓｖ ｌ ｐｐｉ ｄ ｉ ｈｒ ｖ ｃｉ ｃ． ｌｎｉ Ｋ ｅ ｗｏｒ ｓ： ｐ ｒｐｈ ｒ ｌｎｅ ｅ； ｎ ｒ ｅ ｇａ ； ｉ ｍｕｎｔ ｙ ｄ ｅ ｉ ｅ ａ ｒ ｖ ｅｖ ｒｆ ｔ ｍ ｉｙ
和放射方法处理 、 冻融处理方法处理等方法技术较成熟 、 方法简 单 ， 在实验及 临床 中都存在着不 能彻底有 但
效 清除抗 原问题 ， 使其效果不稳定 。化学去细胞萃取方法处理同种异 体神经可 以有 效地清除神 经干 内主要
携带组织相容性抗原 复合 物的细胞 及髓鞘 ， 从而极大地降低其免疫原 性而不 出现排斥反应 。这种方 法属于 技术先进 的去除同种 异体 神经抗原性 的方法 。在 目前 临床 上得 到了较广 泛的采纳及应用 。 关键词 ：周 围神 经 ；神经移植 ；免疫
Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ｐ ｏ ｒ ｓ ｆｒ ｍ ｏ ａ ｆａ ｔｇ ｎ ｉ ｒ ｐ ｅ ａ ｌｏ ｅ ｉ ｒ ｅ ｓ ａ ｃ ｒ ｇ ｅ ｓ ｏ ｅ ｖ ｌｏ ｎ ｉ ｅ ｎ ｐｅ ｉ ｈ ｒ ｌａ ｌ ｇ ｎ ｃ ｎｅ ｖ
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和放射方法处理 、 冻融处理方法处理等方法技术较成熟 、 方法简 单 ， 在实验及 临床 中都存在着不 能彻底有 但
效 清除抗 原问题 ， 使其效果不稳定 。化学去细胞萃取方法处理同种异 体神经可 以有 效地清除神 经干 内主要
携带组织相容性抗原 复合 物的细胞 及髓鞘 ， 从而极大地降低其免疫原 性而不 出现排斥反应 。这种方 法属于 技术先进 的去除同种 异体 神经抗原性 的方法 。在 目前 临床 上得 到了较广 泛的采纳及应用 。 关键词 ：周 围神 经 ；神经移植 ；免疫
同种异体骨制备贮存的研究进展
同种异体骨制备贮存的研究进展摘要】同种异体骨移植的应用日益广泛，其对解决骨缺损的难题有大的发展潜力。
当今最常见的制备、贮存方法是深度冷冻和辐照灭菌，除此之外亦有其他多种方法，具有各自的优势。
【关键词】深冻骨冻干骨辐射灭菌同种异体骨【中图分类号】R68 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）03-0336-031880年苏格兰医生Macewen完成了历史上明确的第一例人同种异体骨移植。
到现今骨移植已经成为人类除输血外,最常见的组织移植，自体骨对于年龄小的或者老年患者应用限制明显,而且增加了创伤部位、骨量来源有限、破坏供骨部位稳定。
从而同种异体骨移植的应用日益广泛，其对解决骨缺损的难题有大的发展潜力。
1942年Inclan发表《库存骨在骨科的应用》,提出骨库的概念,随着骨库的建立,异体骨移植的研究和应用才逐渐活跃。
1976年学术性机构美国组织库协会(American association of tissue banks, AATB )的成立奠定了骨库发展的基础，从此同种异体骨移植步入了标准化发展的快车道[1]，欧洲在1991年成立了统一的欧洲组织库协会(European Association of Tissue Banks, EATB) ，并发表EATB标准[2]。
现今骨库己成为现代骨科必须具有的一项设备[3]。
随着供骨来源的增加和相关技术的进步，骨库在全世界逐渐普及。
近年来，在美国计算机程序控制降温技术和营养保存液的合理配方已广泛应用，用于保存异体软骨的细胞，可以使其保持成活达4周之久，极大地方便了软骨组织的移植[4]。
目前研究显示，小型骨库难以达到美国组织库协会和欧洲组织库协会的审核标准，不断被大型组织库兼并，在中国，骨库还处于发展阶段，有望在医学领域得到更好的发展[5]。
良好的骨库储存骨必须满足以下条件: 1、成骨活性良好; 2、免疫原性低; 3、尽可能保存骨的生物力学特性; 4、无菌。
同种异体骨移植后骨愈合的实验研究_周光新
第17卷 第9期医学研究生学报Vol.17 No.9 2004年9月Journal of Medical Postgraduates Sep.2004#论 著#同种异体骨移植后骨愈合的实验研究周光新1, 吴苏稼1, 施 鑫1, 赵建宁1, 王与荣2, 马 捷3(南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院1.骨科;2.医务部;3.病理科,江苏南京210002)摘要: 目的:通过有关的动物实验来探讨有关异体骨移植骨愈合的规律,以达到加速异体骨移植骨愈合的目的。
方法:24只新西兰大白兔为实验动物,随机分为实验组和对照组。
实验组用梯度降温、深低温保存的股骨外侧髁植入,在接触的骨面置入骨形态发生蛋白(B MP)骨基质,以金属螺钉固定;对照组用取下的自体股骨外侧髁原位植入,用与实验组相同的内固定方法固定;术后4、8和12周行大体标本观察,并行苏木精-伊红(H -E)染色及B MP 免疫组化染色,观察异体骨愈合的情况。
结果:深低温保存的同种异体骨移植愈合与自体骨相似。
BMP 染色在新生骨及其周围类基质表达阳性。
其愈合是从宿主骨向移植骨,从周围向中央,从哈佛管向其四周逐渐进行爬行替代的过程。
结论:同种异体骨移植愈合过程主要通过骨传导实现成骨,骨诱导亦发挥积极作用。
使用BMP 、合适的内固定、大小适合的移植物,可以使异体骨愈合的过程与自体骨相似。
关键词: 大段骨移植; 骨愈合; 同种异体骨中图分类号: R687.34 文献标识码: A 文章编号: 1008-8199(2004)09-0788-04*An experimental study to accelerate the healing of massive bone allograftsZHOU Guang -xin 1,WU Su -jia 1,SHI Xin 1,ZHAO Jian -ning 1,WANG Yu -rong 2,MA Jie 3(1.Departrnent o f Ortho paedics,2.Department o f the Medical Affairs,3.Department o f Patholo gy ,Clinical School o f Medical College o f Nanjing University /Nanjing General Hos pital o f Nanjing Command ,Nanjing 210002,Jiangsu ,China)Abstract: Objective:To investigate the mechanism and characteristics of massive bone allografts. Meth -ods:Twenty -four New Zealand rabbits were randomly divided into experimental and control groups.In the ex -perimental group,the bone defect was filled with a segment of osteoarticular allograft which was pretreated with gradient cooling and hypothermic freezer preservation,fixed with B MP and bolt needle.As for the control group,the osteoarticular autograft were inserted,and the bolt needle was applied,the follow -up times were four,eight,and twelve weeks.B one repair progress were compared by gross specimen,hemaloxylin and eosin stain as well as im munohistochemical staining of B MP in the two groups at 4、8、12weeks after transplanta -tion. Results:The cryopreserved allograft was able to produce bone induction with B MP,suitable internal fixation,and proper size,the speed of the union is similar to that of autografts.Ne w bone (osteoblasts and os -teoid)was positive against B MP.The processes of the creep -substitution was from united end to the allogenic bone,from periphery to the center of the allografts and from Harversian canals to its periphery. Conclusion:The creep -substitution process depends on osteoconduction,but osteoinduction plays an important role in the healing of bone allografts.With B MP on the bone surface,suitable internal fixation and proper size of the allo -graft,the bone -healing processes of massive allografts is similar to that of the autografts.Key words: Massive bone transplantation; Bone -healing; Allogeneic bone#788#收稿日期: 2003-07-23; 修订日期: 2004-01-29作者简介: 周光新(1978-),男,江苏建湖人,医师,医学硕士,从事骨科专业。
去细胞同种异体神经修复材料的深低温保存研究要点
１ 图 １ 去细胞神经大体形态
２Ａ
２Ｂ
图 ２ 去 细 胞 神 经 深 低 温 保 存 前 （Ａ）、 保 存 后 （Ｂ） 组 织 学 变 化 ＨＥ 染 色 ，×２００
பைடு நூலகம்
２．力 学 性 能 ：深 低 温 保 存 前 、后 断 裂 力 分 别 为 （１８．０ ± ２．６）Ｎ 和 （１７．０ ± ３．５）Ｎ，差 异 无 统 计 学 意 义 （n ＝ ２０，P > ０．０５）。
材料与方法
１． 材料制备：经患者知情同意，将创伤或肿瘤性截肢者的周 围神经用于制备去细胞同种异体神经修复材料。 将神经萃取 前 先在手 术 显 微 镜 下 剪 去 表 面 的 脂 肪 组 织 和 部 分 神 经 外 膜 ，置 蒸馏水中震荡、漂洗 ６ ｈ。 萃取时将神经放入 ３０ ｍｌ ／ Ｌ 的 Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ-１００ 水 溶 液 中 静 置 １２ ｈ，然 后 在 蒸 馏 水 中 漂 洗 ３ 次 ，再 放 入 ４０ ｇ ／ Ｌ 的脱氧胆酸钠水溶液中室 温 下 震 荡 ２４ ｈ，最 后 在 蒸 馏 水 中漂洗 ３ 次，如此一个循环为萃取 １ 次，共经过 ２ 次萃取循环。
然而我们制备的去细胞神经大多在制备后就立即使用，未 探 讨 长 期 保 存 问 题 。 而 产 业 化 生 产 的 ＡＣＴＭ 材 料 ，从 原 材 料 采 集到产品生产、销售、配送和使用各个环节都面临如何保存的 问题， 如何延长去细胞神经的保存时间是一个亟待解决的问 题 。 自１９４９ 年 英 国 生 物 学 家 Ｐｏｌｇｅ 等 ［８］发 现 加 甘 油 的 精 子 可 以经历低温而不死亡，成功将低温保存技术引入临床，此后 得 到 广 泛 引 用 。 ２０１４ 年 我 们 报 道 了 利 用 低 温 技 术 保 存 大 鼠 后 肢 ，并 在 复 温 后 将 其 原 位 再 植 ［９］，这 促 使 我 们 思 考 采 用 深 低 温 保 存 技 术 保 存 原 材 料 及 成 品 。 ２０１１ 年 １０ 月 至 ２０１６ 年 ６ 月 ，课 题组进行去细胞同种异体神经修复材料深低温保存研究，以 了解深低温保存对其性能的影响。
深低温冷冻同种异体骨在下颌骨大块缺损修复中的应用
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摘 要： 目的
４０ １ ） ０ ０ ５
探 讨深低温冷冻（ 冻） 深 同种 异 体 下 颌 骨 移 植 的 临床 方 法 和 应 用 价 值 。方 法 采 用 深 冻 同种 异 体 下 颌 骨 修 复
１ Ｏ例 下颌 骨 大 块 缺 损 的 病 例 ， 中尽 可 能保 留 受植 床 的 骨 膜 ， 体 骨 浸 泡 生 理 盐 水 加 抗 生 素 ３ ｍｉ， 术 异 ０ ｎ 并在 植 骨 块 与 受植 骨 块 之 间
ＬＩＹｉｇ， Ｕ Ｌｉｈ ａ， ｎ ＱＩ — ｕ ＷＡＮＧ ｏ Ｔａ
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【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｔ ｅ ｏ ｓ ｂｓ ｓ ｎ ｃｎｔｓｅ ａｋｅｈｏ ｇ ｎｔｎ ｄｃ ｇｈ ｒ ｍ ｎｇｎ ｉ ｓ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂ ｃｖ Ｔ ｔ ｌｈ ｇｉ ａｔｉｕ— ｎ ｃｎｌ ｙ ｏｏｌ ｒ ｕｉ ｅ ｅ ｅｍ ｕｏｅｉｔａ ｏ ｅｉ ｅ ａ ｉ ａ ｉ ｆ ｓ ｂ ｔ ｉ ｏ ｙｅ ｎ ｔ ｎ ｖ ｉ ｃｙ ｌ
【 中图分 类号 】 Ｒ６２ ． ３ ２
【 文献标识码 】 Ａ
【 文章编号 】 １ ４ ５１２ １）０１１－ ０ － ０ （００ １— ６ ２ ００ ５ ０
Ｃ ｉｉ ｌ ｔ ｄ ｆｎ ｒ ｅ ａｌ ｒ ｆ ｙ ｄ ｅ ｙ ｏｈ ｒ ａ Ｔ Ｎ ｉ－ ｎ Ｃ Ｅ ａ —ｉ ， Ｕ ａ・ ｎ ｅ ａ． ｈｎ ｄ ｌ ｃ ｕ ｙ ｏ ｅ ｖ ｌ ｇ ａｔ ｂ ｅ ｐ ｈ ｐ ｔ ｅ ｍｉ． Ａ Ｇ Ｌｎ ｕ ， Ｈ Ｎ Ｈ ｏｘａ Ｃ Ｉ Ｔ ｉ ，ｔ １ Ｃ ｅｇ ｕ ｎ ａｓ ｏ ｓ ｊ ｎ ａ
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变性不 明显。临床移植均随访 １ ２个月 ， 静止 两点辨别 觉为 ６～１ｍ 均无 异常感觉 ， ０ ｍ， 患者十分 满意 。结论 理 的指神经是 活体神经 ， 异体移植临床应 用效果好 ， 此种处理的神 经可优 先用于纯感】 同种异体 ； 关 神经； 超深低 温 ； 移植 ； 冻 冷
临床 异 体 移 植 用 。复 苏神 经 用 酶 消 化 法 获 取 细 胞 成 分 ， 用 ０４ 台盼 蓝 染 色确 定 细 胞 活 力 ， 时做 组 织 学检 查 。 临床 并 ．％ 同 应 用 ２例 ， 神 经 ， 中 １例 ４条 ， 均 长 ３２ ｃ ６条 其 平 ． ５ ｍ。结 果 超深低温处理的神经细胞大部成活 ， 光镜 及 电 镜 示 神 经 水 肿
由１ Ｏ％二 甲基亚砜及纯小牛血 清组成的冷冻保护剂 ， 菌取 新鲜人体指神 经放入 液氮 中长期储 存。移植前 ， 氮 中取 无 液 出立即将冷冻 管放入 ４ ￣ ０Ｃ水浴 中快速复温 ， １％胎牛血 清的 Ｒ Ｍ １４ 含 ０ Ｐ Ｉ６ ０液洗 涤复 苏神 经， 二 甲基亚砜缓慢释放后 供 使
ｓｏ ａ ｉ ｇ ｌｎ － ｅ ｍｌ ｔｒ ｇ ｎ ｇ ｔｒ ｙ，ａ ｄ ａ ｐｙ ｐ ｅｉ ｎ ｒｌ ｎ ｃ ｉ ｉ． Ｍ ｅｈ ｄ Ｔ ｅ ｆｅ ｈ ｄ ｎ ｒｆ ｇ ｒ ｎ ｒｅ ｗａ ｒ ｓ ｒ ｅ ｎ ｔ ｅ ｃ ｙ ｐ ｅ ｏ ｎ ｐ ｌ ｒ ｌ ｍｉ ａｉ ｉ ｌ ｃ ｙ ｎ ｔｏ ｓ ｈ ｒ ｓ ｏ ｏ ｎ ｅ ｅ ｖ ｓ ｐ ｅ ｅ ｖ ｄ ｉ ｈ ｒ ｏ ｒ － ｉ
唐 林 俊 陈 浩 贤 崔 太安 杨 志 贤 ， ，
，
（． １成都现代医 院， 四川 成都 ６ ０４ ； １０ １２ 解放军第 ４ １医院 ， ０ 山东 青岛 ２ ６ ７ ） ６０ １
【 要】 目的 摘
建立一种既 能显 著降低神 经免疫源性又能长期储存 的新 的组织库技 术 ， 并初 步临床应 用。方法
ｔｏ ｅ ． Ｂ ｆｒ ｒ ｎ ｐ ａ ｔ ｔ ｎ，ｉ ｗ ｓ ｔｋ ｎ ｏ ｔａ ｄ ｉ ｒｇ ｎ ｅｏ ｅ ｔ ｓ ｌｎ ａｉ ａ ｏ ｔ ａ ａ ｅ ｕ ｎ ｍｍｅ ｉｔｌ ａ ｈ ｄ ａ ０ Ｃ ｔ ｍｐ ｒ ｔ ｒ ｔ ｒｔ ａ ｉ ｅ ｏ ｅ ｙ ａ ｄ ｓｏ ｌ ｄａ ｅｙ ｗ ｓ ｅ ｔ ￣ ｅ ｅａ ｕ ｅ ｗａｅ ｒｐ ｄ ｒ ｃ ｖ ｒ ｎ ｌｗ ｙ ４ ｏ ｒ ｌ ａ ｅ ＤＭＳ ｏ ｌ ｉａ ｌ ｇ ｎ ｉ ｒ ｎ ｐ ａ ｔ Ｒｅ ｏ ｅ ｙ ｎ ｒ ｅ ｃ ｌ ｅ ｅ ｏ ｔｉ ｅ ｙ ｅ ｚ ｍａ ｉ ｄｇ ｓｉ ｎ ａ ｄ ｓ ｉｅ ｙ０ ４ ｅｅ ｓ Ｏ ｆｒｃｉ ｃ ａ ｌ ｅ ｅｃ ｔａ ｓ ｌｎ ． ｃ ｖ ｒ ｅ ｅ ｌ ｗ ｒ ｂａ ｎ ｄ ｂ ｎ ｙ ｔ ｉｅ ｔ ｎ ｔ ｎ ｄ ｂ ． ％ ｎ ｌ ｏ ｖ ｓ ｃ ｏ ａ Ｔ ｐ ｎ ｂ ｕ ｏｄ ｔｒ ｉ ｅ ｃ ｌ ｖａ ｉ ｔ ｙ ａ ｌ ｅ ｔ ｅｅ ｎ ｅｌ ｉｂ ｌ ｙ，ａ ｄ ｈ ｓｏｏ ｙ ｍ ｉ ｎ ｉ ｌｇ ．Ｔ ａｉｎ ｓ ｗ ｔ ｉ ｅｖ ｓ ｗｅ ｅ ｔａ ｓ ｌｎ ｅ ｔ ｎ ａ ｅ ａ ｅ ｌ ｎ ｔ ｆ ｔ ｗｏ ｐ ｔ ｔ ｉ ｓ ｎ ｒ ｅ ｒ ｒ ｎ ｐ ａ ｔｄ ｗ ｈ ａ ｖ ｒ ｅ ｇｈ ｏ ｅ ｈ ｘ ｉ ｇ ３ ２ ｃ Ｒｅ ｕ ｔ Ｔ ｅ ｎ ｒ ｅ ｃ ｌ ｙ ｄ ｅ ｏｄ ｆ ｚ ｎ ｍｏ ｔ ｅ ｅ ｓ ｒ ｉａ ．Ｔ ｅ ｄ ｇ ｎ ｒ ｔ ｎ ａ ｄ ｅ ｅ ｆｎ ｒ ｅｗａ ｏ ｏ ｖ ・ ． ５ ｍ． ｓ ｌ ｓ ｈ ｅ ｅｌ ｂ ｅ ｐ ｃ ｌ ｒ ｅ ｓｌ ｗ ｒ ｕ ｖ ｖ １ ｈ ｅ ｅ ｅ ａｉ ｎ ｄ ｍａ ｏ ｅ ｓｎ ｔ ｂ ｉ ｖ ｓ ｏ ｙ ｏ ｖ
・
１ ６・ ５１
四川 医学 ２ １ ０ ０年 １ Ｏ月第 ３ 卷 （ ｌ ｌ 第 Ｏ期 ） Ｓｃｕ ｎＭｅｉ ｌ ｏｒ ｌ２ １ Ｏ ｔ３ ， ｏ １ ｉ ａ ｄｃ ｕｎ ，００， ｃ １ Ｎ ．０ ｈ ａＪ ａ ．
论 著
超 深 低 温 处 理 的 同种 异 体 神 经 移 植 的 临 床 研 究
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｔ ｅ ｏ ｓ ｂｓ ｓ ｎ ｃｎｔｓｅ ａｋｅｈｏ ｇ ｎｔｎ ｄｃ ｇｈ ｒ ｍ ｎｇｎ ｉ ｓ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂ ｃｖ Ｔ ｔ ｌｈ ｇｉ ａｔｉｕ— ｎ ｃｎｌ ｙ ｏｏｌ ｒ ｕｉ ｅ ｅ ｅｍ ｕｏｅｉｔａ ｏ ｅｉ ｅ ａ ｉ ａ ｉ ｆ ｓ ｂ ｔ ｉ ｏ ｙｅ ｎ ｔ ｎ ｖ ｉ ｃｙ ｌ
【 中图分 类号 】 Ｒ６２ ． ３ ２
【 文献标识码 】 Ａ
【 文章编号 】 １ ４ ５１２ １）０１１－ ０ － ０ （００ １— ６ ２ ００ ５ ０
Ｃ ｉｉ ｌ ｔ ｄ ｆｎ ｒ ｅ ａｌ ｒ ｆ ｙ ｄ ｅ ｙ ｏｈ ｒ ａ Ｔ Ｎ ｉ－ ｎ Ｃ Ｅ ａ —ｉ ， Ｕ ａ・ ｎ ｅ ａ． ｈｎ ｄ ｌ ｃ ｕ ｙ ｏ ｅ ｖ ｌ ｇ ａｔ ｂ ｅ ｐ ｈ ｐ ｔ ｅ ｍｉ． Ａ Ｇ Ｌｎ ｕ ， Ｈ Ｎ Ｈ ｏｘａ Ｃ Ｉ Ｔ ｉ ，ｔ １ Ｃ ｅｇ ｕ ｎ ａｓ ｏ ｓ ｊ ｎ ａ
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变性不 明显。临床移植均随访 １ ２个月 ， 静止 两点辨别 觉为 ６～１ｍ 均无 异常感觉 ， ０ ｍ， 患者十分 满意 。结论 理 的指神经是 活体神经 ， 异体移植临床应 用效果好 ， 此种处理的神 经可优 先用于纯感】 同种异体 ； 关 神经； 超深低 温 ； 移植 ； 冻 冷
临床 异 体 移 植 用 。复 苏神 经 用 酶 消 化 法 获 取 细 胞 成 分 ， 用 ０４ 台盼 蓝 染 色确 定 细 胞 活 力 ， 时做 组 织 学检 查 。 临床 并 ．％ 同 应 用 ２例 ， 神 经 ， 中 １例 ４条 ， 均 长 ３２ ｃ ６条 其 平 ． ５ ｍ。结 果 超深低温处理的神经细胞大部成活 ， 光镜 及 电 镜 示 神 经 水 肿
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【 要】 目的 摘
建立一种既 能显 著降低神 经免疫源性又能长期储存 的新 的组织库技 术 ， 并初 步临床应 用。方法
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四川 医学 ２ １ ０ ０年 １ Ｏ月第 ３ 卷 （ ｌ ｌ 第 Ｏ期 ） Ｓｃｕ ｎＭｅｉ ｌ ｏｒ ｌ２ １ Ｏ ｔ３ ， ｏ １ ｉ ａ ｄｃ ｕｎ ，００， ｃ １ Ｎ ．０ ｈ ａＪ ａ ．
论 著
超 深 低 温 处 理 的 同种 异 体 神 经 移 植 的 临 床 研 究