生化试验观察血清中谷丙转氨酶的活力变化讲解

血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。

本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。

血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。

正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。

当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。

高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。

此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。

因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。

血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。

一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。

样本会送到实验室进行分析。

实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。

结果会以单位/升（U/L）的形式报告。

正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。

但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。

因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。

ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。

一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。

此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。

需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。

医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。

总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。

需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。

一、实验目的了解谷丙转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义，学习谷丙转氨酶活性测定的原理和方法。

二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要存在于肝脏、心脏等组织中。

它催化丙氨酸与α-酮戊二酸在氨基转移过程中相互转化，生成谷氨酸和丙酮酸。

在正常情况下，血清中的ALT含量较低。

当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。

因此，血清ALT活性的测定在临床诊断中具有重要意义。

本实验采用比色法测定血清ALT活性，通过观察反应体系中丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-P）的生成量，来计算酶的活力。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 血清样本- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- α-酮戊二酸- 丙氨酸- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸二氢钠（NaH2PO4）- 0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）- 0.1mol/L盐酸（HCl）- 标准曲线样品2. 仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅- 移液管- 试管四、实验步骤1. 标准曲线的制作：- 配制不同浓度的标准曲线样品，分别加入丙氨酸和α-酮戊二酸，混匀。

- 将标准曲线样品置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。

- 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 血清ALT活性的测定：- 将血清样本按照一定比例加入反应体系中，加入2，4-DNPH和底物，混匀。

- 将反应体系置于恒温水浴锅中，反应一定时间。

- 反应结束后，加入0.1mol/L氢氧化钠终止反应。

- 将终止后的反应体系置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。

- 根据标准曲线，计算血清ALT活性。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：标准曲线呈线性关系，相关系数R²=0.998，表明本实验采用的方法具有良好的线性。

2. 血清ALT活性的测定：实验结果显示，本实验测定的血清ALT活性为XX单位/L。

卡门氏(Karman)分光光度法的原理如下：

由于NADH在波长340nm处有特异的吸收峰，因此ALT的活性可
通过NADH的消失量，即根据340nm处光密度值的减少量间接作出定
量测定。ALT活性的K洲an氏单位的定义是：在分光光度法规定的
条件(karman分光光度计，25℃，340nm，光径1km)下，1毫升血清
电化学法 同位素法
二、酶活力单位及比活
酶的活力单位
U：特定条件下1min内将1μmol底物转化为产物
所需要的酶量。（国际单位）
临床可以用约定成熟的惯用单位表示。
比活
每毫克蛋白含有的E的活力单位数 U/mg蛋白
转换数
每秒每个酶分子转换底物的微摩尔数 μmol/s
ALT活性测定的方法很多，主要有两类：一是卡门氏(Karman) 分光光度法，二是比色测定法。
实验讨论
1. 为什么设定标准空白和测定空白？
2. E活性的表示方法有哪些？
3. E活性测定的原理是什么？
在终止酶反应后，呈色反应中不仅产物丙酮酸能与2，4-二硝基苯肼 形成苯腙而呈色，而且底物α-酮戊二酸也能反应而呈色，尽管二者在 500－520nm处光吸收有较大差异，但这种非特异性的呈色反应对测定结 果影响较大，所以比色法使用的底物浓度很低，与最适底物浓度相差甚 远。在两种底物浓度中尤显偏低的是α-酮戊二酸（2mmol/L）,在此浓度 下酶促反应只能达到最大反应速度65%左右，由于底物浓度的明显不足使 的酶促反应产生丙酮酸的量与酶活性间不能呈现良好的线性关系。2，4二硝基苯肼本身在碱性溶液中也能显色，为了降低空白读数，反应时不 得不使用较低的2，4-二硝基苯肼（1mmol/L）,相当于反应液中酮酸的浓 度（丙酮酸和α-酮戊二酸总浓度为2mmol/L）的1/2。按反应方程式，一 分子酮酸与一分子2，4-二硝基苯肼生成相应的苯腙，但至少有半量的酮 酸没有与2，4-二硝基苯肼作用，在酶反应后丙酮酸和α-酮戊二酸与2， 4-二硝基苯肼形成苯腙呈色存在着一个人们无法控制的机率问题，据信 这是赖氏法重复性差的主要原因。另外，2，4-二硝基苯肼浓度低也是使 显色反应的工作曲线弯曲的原因之一。

实验十、血液转氨酶（谷丙转氨酶）活力的测定（实验：肝脏谷丙转氨酶活力测定）（本实验分2个实验完成：一、制作标准曲线二、测酶活力和总结。

或就做二就可以）【目的和要求】1、了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。

3、熟悉分光光度计的使用。

【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。

转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。

它们催化的反应如下。

正常人血清中只含有少量转氨酶。

当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。

测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。

谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。

丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，其吸收光谱的峰为439—530nm，因此在波长520nm处吸光度度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本呈线性关系，故可藉可用分光光度法测定。

从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。

【试剂和器材】一、试剂1.试管及试管架2.吸管3.恒温水浴4.分光光度计5、移液管6、电子天平7、研钵8、容量瓶9、冰箱二、器材1、标准丙酮酸溶液[标准丙酮酸（500μg/ml）]：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于pH7.4 0.1M 的PBS中，定容到100ml。

现用现配。

2、谷丙转氨酶底物：0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1M 的PBS中。

然后用1M NaOH调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1mol/L的PBS定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。