生化试验观察血清中谷丙转氨酶的活力变化讲解

血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。

本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。

血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。

正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。

当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。

高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。

此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。

因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。

血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。

一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。

样本会送到实验室进行分析。

实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。

结果会以单位/升（U/L）的形式报告。

正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。

但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。

因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。

ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。

一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。

此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。

需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。

医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。

总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。

需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。

一、实验目的了解谷丙转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义，学习谷丙转氨酶活性测定的原理和方法。

二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要存在于肝脏、心脏等组织中。

它催化丙氨酸与α-酮戊二酸在氨基转移过程中相互转化，生成谷氨酸和丙酮酸。

在正常情况下，血清中的ALT含量较低。

当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。

因此，血清ALT活性的测定在临床诊断中具有重要意义。

本实验采用比色法测定血清ALT活性，通过观察反应体系中丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-P）的生成量，来计算酶的活力。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 血清样本- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- α-酮戊二酸- 丙氨酸- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸二氢钠（NaH2PO4）- 0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）- 0.1mol/L盐酸（HCl）- 标准曲线样品2. 仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅- 移液管- 试管四、实验步骤1. 标准曲线的制作：- 配制不同浓度的标准曲线样品，分别加入丙氨酸和α-酮戊二酸，混匀。

- 将标准曲线样品置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。

- 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 血清ALT活性的测定：- 将血清样本按照一定比例加入反应体系中，加入2，4-DNPH和底物，混匀。

- 将反应体系置于恒温水浴锅中，反应一定时间。

- 反应结束后，加入0.1mol/L氢氧化钠终止反应。

- 将终止后的反应体系置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。

- 根据标准曲线，计算血清ALT活性。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：标准曲线呈线性关系，相关系数R²=0.998，表明本实验采用的方法具有良好的线性。

2. 血清ALT活性的测定：实验结果显示，本实验测定的血清ALT活性为XX单位/L。

实验十、血液转氨酶（谷丙转氨酶）活力的测定（实验：肝脏谷丙转氨酶活力测定）（本实验分2个实验完成：一、制作标准曲线二、测酶活力和总结。

或就做二就可以）【目的和要求】1、了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。

3、熟悉分光光度计的使用。

【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。

转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。

它们催化的反应如下。

正常人血清中只含有少量转氨酶。

当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。

测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。

谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。

丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，其吸收光谱的峰为439—530nm，因此在波长520nm处吸光度度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本呈线性关系，故可藉可用分光光度法测定。

从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。

【试剂和器材】一、试剂1.试管及试管架2.吸管3.恒温水浴4.分光光度计5、移液管6、电子天平7、研钵8、容量瓶9、冰箱二、器材1、标准丙酮酸溶液[标准丙酮酸（500μg/ml）]：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于pH7.4 0.1M 的PBS中，定容到100ml。

现用现配。

2、谷丙转氨酶底物：0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1M 的PBS中。

然后用1M NaOH调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1mol/L的PBS定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。

血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶的测定实验报告引言：血清谷丙转氨酶（AST）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与氨基酸代谢过程。

AST的测定在临床上具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。

本实验旨在通过酶促动力学方法测定血清中AST的活性，并分析实验结果。

实验材料与方法：1. 实验材料：- 血清标本：从健康志愿者采集的血样。

- AST测定试剂盒：包括底物、辅酶、酶标试剂等。

- 酶标仪：用于测定底物的光吸收值。

2. 实验方法：- 步骤一：标定酶标仪将已知浓度的AST酶标溶液分别加入不同的试管中，测定其对应的光吸收值，建立标准曲线。

- 步骤二：制备样本将采集到的血清标本离心，取上清液，稀释至适宜浓度。

- 步骤三：测定AST活性将标定好的试剂和稀释后的血清标本加入试管中，混匀后，放入酶标仪中测定吸光度。

- 步骤四：计算AST活性根据标准曲线，计算出各个样本的AST活性。

结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列样本的AST活性数据。

根据标准曲线，我们可以计算出每个样本的AST活性，并进行进一步的分析。

首先，我们可以观察到不同样本之间AST活性的差异。

正常情况下，AST活性在一个相对稳定的范围内，超出该范围可能提示肝脏功能异常或疾病存在。

因此，通过测定AST活性，我们可以初步判断一个人的肝脏健康状况。

其次，我们还可以对不同条件下AST活性的变化进行研究。

例如，我们可以比较不同性别、不同年龄段、不同体重指数的人群的AST活性是否存在差异。

这样的研究有助于进一步了解AST在人体内的生理变化和代谢过程。

此外，我们还可以将AST活性与其他临床指标进行关联分析。

例如，我们可以比较AST活性与肝功能指标、炎症指标等之间的关系。

这些关联分析可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。

总结：通过本实验，我们成功地测定了血清中AST的活性，并对实验结果进行了分析和讨论。

AST的测定在临床中具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。

谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定一、[实验目的]1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；4.了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。

二、[仪器与试剂]1．实验材料动物肝脏2．实验试剂（1）0.9%NaCl溶液（2）海砂（3）1%谷氨酸溶液（1%KOH溶液中和）（4）1%丙酮酸钠溶液（用1%KOH溶液中和）（5）0.1%KHCO3溶液（6）0.025%一溴乙酸溶液（用1%KOH中和）（7）2%乙酸溶液（8）酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水（按重量计算）混合，放入分液漏斗中，振荡。

静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。

新配制的酚展层剂可以反复使用1周。

（9）0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液（10）0.1%标准谷氨酸溶液（11）0.1%标准丙氨酸溶液（12）1%KOH溶液谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）一、[实验原理]观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。

通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。

为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂溴乙酸。

二、[实验操作]1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂 200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。

2.转氨作用取试管2支，按下表加入试剂，加入试剂的单位为mL加脱脂棉塞，45℃水浴，1.5h，时时振荡内容物沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析3.纸层析操作方法取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。

用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干燥，喷洒水合茚三酮的正丁醇溶液，80-100℃显色。

生物化学--实验十一血清谷—丙转氨酶活性的测定（改良赖氏法）实验十一血清谷—丙转氨酶活性的测定,改良赖氏法,【目的要求】1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。

2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。

3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。

【实验原理】血清中的谷-丙转氨酶(ALT)，在37?、pH7.4的条件下，可催化基质(底物)液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸:COOH COOH CH 3 CH3 CH 2CH2ALT HN,C,H 2C=O CH CH 22+ COOH COOH 37?、pH7.4 + HN,C,H C=O 2 COOH COOH a-酮戊二酸 L-丙氨酸 a-丙酮酸 L-谷氨酸生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸 -2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。

据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。

NO NO22 R H CHH 3 C=O —NO —NO + 22HN—N— C=N—N— 2 COOH COOH HO 2 2,4二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙(黄色) α-酮酸 - OHHO 2 NO2- O CH 3 =N—O C=N—N= COOH苯腙硝醌化合物(红棕色)尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他比色法准确。

故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法。

1981年全国常规生化检验方法学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎协作会议也建议统一使用改良赖氏法。

在医学实验中，测定血清谷丙转氨酶（AST）活力是一项常见的实验项目。

AST是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，其活力的变化与肝脏疾病、心肌梗塞等疾病有关，因此对其活力的测定具有重要的临床意义。

分光光度法是一种常用的测定AST活力的方法，其原理简单、灵敏度高，被广泛应用于实验室教学和临床实验中。

本文将介绍分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的教学方法及实验原理。

二、实验原理1. 原理概述分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的原理是通过测定NADH在340nm处的吸光度变化来间接测定AST的活力。

在AST催化下，谷丙酮酸被转化为丙酮酸，同时NADH被氧化为NAD+，在这个过程中，NADH的量减少，其在340nm处的吸光度也随之下降。

通过测定NADH在340nm处的吸光度变化可以间接测定AST的活力。

2. 实验步骤（1）样品制备：将待测血清标本离心沉淀，取清澈液体作为实验样品。

（2）反应体系配置：在离心管中依次加入0.1mol/L磷酸缓冲液、0.1mol/L谷氨酰胺、0.005mol/L的NADH和待测血清标本，将混合液置于37℃水浴中预温。

（3）光度计调零：将光度计调零，设置吸光度波长为340nm。

（4）反应开始：向预温的混合液中加入谷丙酮酸，开始计时测定吸光（5）记录数据：间隔一定时间（例如30秒）记录一次吸光度值，直至吸光度不再发生变化。

三、教学方法1. 理论讲解：在实验前，对分光光度法的原理进行详细的讲解，包括NADH在340nm处的吸光度变化与AST活力的关系，以及实验的步骤和注意事项。

2. 演示操作：老师可以进行实际的操作演示，展示如何配置反应体系、如何操作光度计、如何记录数据等。

3. 学生操作：让学生分组进行实验操作，指导学生合理分配实验任务，注意安全操作，并及时解答学生在实验中遇到的问题。

4. 数据分析：引导学生利用实验数据进行分析，计算得出血清谷丙转氨酶活力的结果，并进行讨论和总结。

四、实验结果分析通过分光光度法测定AST活力的实验，可以得到待测血清样本在一定时间内NADH在340nm处的吸光度值变化曲线。

一、实验目的1. 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用。

2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。

3. 掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的操作技能。

二、实验原理转氨酶是一种广泛存在于生物体内的氨基转移酶，能催化氨基酸的氨基与酮基酸的酮基互换。

在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。

其中，谷丙转氨酶（ALT）是人体内最重要的转氨酶之一，主要存在于肝脏细胞内。

当肝脏发生病变时，如肝炎、心肌梗死等，血清中ALT活力常显著增加，因此在临床诊断上，ALT活力的测定具有重要的意义。

本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力，通过检测ALT催化丙氨酸与酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，来计算酶的活力。

三、实验材料1. 仪器：分光光度计、离心机、恒温水浴锅、移液器、试管等。

2. 药品与试剂：丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、NaOH、标准ALT溶液、血清样本等。

四、实验步骤1. 准备工作：将所有药品与试剂按照实验要求进行配置，确保实验所需的药品与试剂质量合格。

2. 标准曲线制作：将标准ALT溶液按照实验要求进行稀释，制成一系列不同浓度的标准溶液。

分别取等体积的标准溶液和2，4-二硝基苯肼溶液，混合后加入NaOH，进行显色反应。

在560nm波长下，测定吸光度值，以ALT浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 实验测定：取血清样本，按照实验要求进行稀释，分别加入丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼和NaOH，进行显色反应。

在560nm波长下，测定吸光度值。

4. 数据处理：将实验测定的吸光度值代入标准曲线，计算出血清ALT活力。

五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，线性范围为20～100U。

2. 实验测定：根据实验数据，计算血清ALT活力，结果为X U/L。

3. 结果分析：根据血清ALT活力值，判断肝脏功能是否正常。

一、实验目的通过本实验，了解血清谷丙转氨酶（SGPT）的测定原理、方法及临床意义，掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活性的操作技能。

二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间氨基转移的酶，主要存在于肝细胞内。

当肝细胞受到损害时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。

本实验采用分光光度法测定血清ALT活性，通过测定ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的吸光度，从而计算出ALT的活性。

三、实验材料1. 试剂：丙氨酸标准品、α-酮戊二酸标准品、2，4-二硝基苯肼、磷酸盐缓冲液、氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾等。

2. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。

四、实验方法1. 标准曲线绘制（1）配制丙氨酸标准溶液：准确称取丙氨酸标准品，用磷酸盐缓冲液溶解并定容，配制成0.1mmol/L的丙氨酸标准溶液。

（2）取六支试管，分别加入0.1mmol/L丙氨酸标准溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，各加入磷酸盐缓冲液至1.0ml。

（3）向各试管中加入2，4-二硝基苯肼0.2ml，混匀，37℃水浴30min。

（4）加入氢氧化钠溶液1.0ml，混匀，显色30min。

（5）用分光光度计在540nm波长处测定各试管吸光度，以丙氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血清ALT活性测定（1）取血清样本0.1ml，加入磷酸盐缓冲液至1.0ml。

（2）按标准曲线绘制方法，测定血清样本吸光度。

（3）根据标准曲线，计算血清ALT活性。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以丙氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：Y = 0.0678X - 0.0011，相关系数R²=0.9968。

2. 血清ALT活性测定测定血清样本吸光度为0.560，根据标准曲线计算血清ALT活性为0.9mmol/L。