化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法

禁用偶氮染料及其检测标准纺织服装在使用了含有禁用芳香胺的偶氮染料之后，在与人体的长期接触中可能被皮肤吸收，并在人体内扩散。

这些染料在人体正常代谢所发生的生化反应条件下，可能发生还原反应，进而分解出致癌芳香胺。

致癌芳香胺经过活化作用，改变人体的DNA的结构，最终引起人体病变和诱发癌症。

1994年7月，德国政府首次以立法的形式，禁止生产、使用和销售可还原出致癌芳香胺的偶氮染料以及使用这些染料的产品，随后，荷兰政府和奥地利政府也发布了相应的法令。

我国于2003年发布了GB18401-2003《国家纺织产品基本安全技术规范》，正式将禁用偶氮染料列入其中。

目前，禁用偶氮染料的监控已成为国际纺织品服装贸易中最重要的品质控制项目之一，也是生态纺织品最基本的质量指标之一。

1.偶氮染料概述1.1发展历史早在l834年．Mitseherlich就用氢氧化钾与硝基苯在乙醇溶液中作用，制备了偶氮苯。

但是偶氮染料的产生并使用还是在1858年之后，经过重氮化反应制备出了偶氮染料。

1863年，首例商品化偶氮染料Bismark Brown问世之后．偶氮染料开始了工业化生产。

1884年，刚果红的合成，可以说是偶氮染料发展史上的一个里程碑。

第一，用刚果红作为染料，可以不用加入触媒，印染工艺被大大简化；第二，这类偶氮染料可以通过它的不同结构得到不同的颜色；第三，它的合成工艺更为简单，成本更加低廉，染色的性能也更为优越。

1.2 偶氮染料的致癌问题20世纪30年代，日本人Yoshida发现溶剂黄可以引起老鼠的肝细胞癌变后．人们才意识到偶氮染料及其中间体在生产与使用过程中的危险性。

实际上，1905年德国卫生部门已经从染料品红、金胺和萘胺中确认了一些芳香胺的致癌作用。

随着染料化工的高速发展，这种情况进一步恶化。

据不完全统计，到20世纪60年代，世界各国因从事染料化工工作而患上膀胱癌的病例超过了3000例。

自20世纪70年代开始．世界上主要的染料制造商自发地签订议，停止在市场上销售联苯胺及以联苯胺为母体的偶氮染料。

化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范（征求意见稿）为加强化妆品及其原料中禁限用物质检测方法研究技术，指导化妆品及其原料中禁限用物质检测方法研究和验证工作，规范检测方法验证内容和评价标准，进一步提高检测方法的先进性和切实可行性，制定本规范。

本规范规定了适用范围、检测方法验证技术参数、检测方法验证接受标准。

1 适用范围本规范适用于化妆品及其原料中禁用和限用物质标准检测方法的研究；已经经过预研，由相关单位提出，经化妆品标准技术委员会审议通过立项，委托相关部门和化妆品标准技术委员会进行研究的化妆品中禁用和限用物质标准检测方法项目。

2 依据ISO 5725: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 1: General principles and definitions; ISO 5725-2 Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method; Part 4: Basic methods for the determination of the trueness of a standard measurement method.ISO 17025: 1999 General requirement for the competence of calibration and testing laboratories.ISO Guide 43-1: 1997 Proficiency testing by interlaboratory comparisons — Part 1: Development and operation of proficiency testing schemes.ISO Guide 43-2: 1997 Proficiency testing by interlaboratory comparisons — Part 2: Selection and use of proficiency testing schemes by laboratory accreditation bodies. Directive 96/23/EC and Decision 2002/657/ECGB/T 6379.1-2004 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分:总则与定义GB/T 6379.2-2004 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T 6379.4-2006 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第4部分：确定标准测量方法正确度的基本方法GB/T 6379.5-2006 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第5部分：确定标准测量方法精密度的可替代方法GB/T 6379.6-2009 测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第6部分：准确度值的实际应用《化妆品卫生规范》2007年版L. Dencausse etal, Validation of HPLC Method for Quantitative Determination of Tinosorb S and Three Other Sunscreens in A High Protection CosmeticProduct,International Journal of Cosmetic Science, 2008, 30:373-382.Ursula Vincent etal, Validation of An Analytical Procedure for the Determination of Oxidative Hair Dyes in Cosmetic Formulations, J. Cosmet. Sci., 2002,53:43-58.3 释义本规范中所指化妆品及其原料中禁用和限用物质同《化妆品卫生规范》2007版。

附件15：化妆品中颜料橙5等5种禁用着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36（CI 13065）、颜料橙5（CI 12075）、颜料红53:1（CI 15585:1）、苏丹红Ⅱ（CI 12140）和苏丹红Ⅳ（CI 26105）的高效液相色谱测定方法。

本方法适用于唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的测定。

2 方法提要样品经溶剂提取后，用高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外-可见光谱图定性，峰面积外标法定量。

必要时，采用液相色谱-质谱联用法进行确证。

本方法对酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度见表1。

表1 5种着色剂的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度3 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。

3.1 乙腈，色谱纯。

3.2 甲醇，色谱纯。

3.3 四氢呋喃，色谱纯。

3.4 二甲基亚砜。

3.5 乙醇，色谱纯。

3.6 四丁基氢氧化铵，浓度为55%。

3.7 柠檬酸。

3.8 氨水，浓度为25～28%。

3.9 酸性黄36，纯度≥99%。

3.10 苏丹红Ⅳ，纯度≥94%。

3.11 苏丹红Ⅱ，纯度≥90%。

3.12 颜料橙5，纯度≥97%。

3.13 颜料红53:1，纯度≥95%。

3.14 酸性黄36标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取酸性黄36（3.9）对照品50 mg（精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。

3.15 苏丹红Ⅳ标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取苏丹红Ⅳ（3.10）对照品50 mg（按实际含量折算，精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用四氢呋喃（3.3）和乙腈（3.1）混合液（体积比1:9）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。

国家商检局关于印发《染色纺织品上禁用偶氮染料检验方法（试行）》的通知文章属性•【制定机关】国家出入境检验检疫局(已撤销)•【公布日期】1996.04.29•【文号】国检检[1996]96号•【施行日期】1996.04.29•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】通关正文国家商检局关于印发《染色纺织品上禁用偶氮染料检验方法（试行）》的通知（国检检〔１９９６〕９６号一九九六年四月二十九日）各直属商检局：德国政府规定，自１９９６年４月１日起，禁止在纺织品、皮革制品、鞋等与人体直接接触的商品中使用能分离出２０种致癌胺类的偶氮染料。

为做好检验工作，保证我输德的有关商品顺利进入德国市场，现将《染色纺织品上禁用偶氮染料检验方法（试行）》印发你们执行，并将有关事宜通知如下：一、自１９９６年４月１日起，对输德的《种类表》内属纺织品、皮革制品、鞋等与人体直接接触的商品，应进行偶氮染料的检验，各局要做好检验工作，严把质量关。

含禁用偶氮染料超过３０ＰＰＭ的该类商品一律不得放行。

二、现阶段仍由上海、广东、浙江、山东、江苏、湖南、辽宁商检局和中国商检研究所进行偶氮染料的检测。

附件：染色纺织品上禁用偶氮染料检验方法（试行）附件：染色纺织品上禁用偶氮染料检验方法（试行）１范围本方法规定了进出口染色纺织品上染料能裂解出２０种禁用芳香胺（见附录１）检验的抽样、制样和气相色谱－质谱检测器法及气相色谱－火焰离子化检测器分析方法。

本方法适用于进出口染色纺织品（包括棉、麻、丝、毛、化纤）及其制品上染料能裂解出禁用芳香胺的检验。

２抽样和制样２．１检验批以同品种的商品作为一检验批。

同一检验批的商品应是同批生产、同规格、同色／花色、同染料索引号染料染色的货物。

２．２抽样数量从总件数中随要抽取至少３件。

２．３抽样方法将所抽件数逐件开启，首先检查是否属相同货品。

如属相同货品，然后按色／花色抽取代表性样品。

每件、每色／花色至少取１０ｇ，作为原始样品。

化妆品中禁限用成分检测方法化妆品中含有的某些化学物质可以对人体健康产生严重的危害，尤其是有些生产商在化妆品中添加了禁限用物质。

下面咱们看一看近年来在化妆品禁限用物质检测方面的研究进展。

1、激素检测在化妆品生产过程中，一些厂商未来追求快速的特定的功效，在化妆品添加了一些禁限用成分。

我国《化妆品卫生规范》(2007年版)明令禁止化妆品添加性激素类成分。

采用高效液相色谱-质谱法测定化妆品中的激素类成分，包括定性与定量。

适用于膏霜乳液类、液态水基类、液态油基类、凝胶类、面膜类等化妆品中激素类成分的定性与定量。

方法提要：样品以乙腈为溶剂提取，采用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测，根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性、定量离子对峰面积定量，以标准曲线法计算含量。

2、防腐剂检测化妆品中使用防腐剂的目的是为了保护产品，使之免受微生物污染，延长产品的货架寿命，确保产品的安全性，防止消费者因使用受微生物污染的产品而引起可能的感染。

防腐剂可以笼统地分为化学防腐剂、安全性无毒防腐剂和天然有机防腐剂。

化妆品的抑菌能力与防腐剂的种类、含量以及体系酸碱性有密切的关系，所以在如今化妆品种类多样化和原料不断变化和增加的局面下，多种防腐剂复配而成的复合型防腐剂成为了必然的选择，最大的优点是实现了广谱抗菌并且可以立体抗菌。

因此，化妆品中多种防腐剂的正确测定就显得非常重要，这也是为化妆品安全性提供了重要的保障。

目前，关于化妆品中的防腐剂检测以液相色谱和气相色谱串联质谱法，液相色谱法仍是主流的防腐剂检测方法。

液相色谱法中前处理的方法主要是采用有机溶剂超声提取后以有机膜过滤或离心，取上清液直接检测。

3、防晒剂检测近年来，有关防晒剂成分引发的过敏性、刺激性、光毒性反应等事件的报道屡见不鲜。

我国《化妆品卫生规范》(2007年版)规定，允许限量添加的防晒剂有28种，但只对其中15种防晒剂的检测方法做了规定。

4、抗菌类药物检测去痘化妆品中，部分厂商为追求产品短期功效，非法添加各种抗生素，如克林霉素、甲硝唑等均为我国《化妆品卫生规范》(2007年版)规定的禁用成分，长期使用会诱发菌群失调，引起接触性皮炎，甚至会导致严重的内脏损伤，危及生命。

化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范为加强对化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究工作的技术指导，规范化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究和验证工作，明确检测方法验证内容和评价标准，有效保证研究制定的检测方法具备先进性和可行性，特制定本规范。

1 适用范围本规范规定了化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究和建立过程中检测方法验证内容、技术要求和评价指标。

本规范适用于化妆品中禁用物质和限用物质检测方法的验证与评价。

2 依据《化妆品卫生规范》3 释义3.1 本规范中所指化妆品中禁用物质是指《化妆品卫生规范》中规定的化妆品禁用组分。

3.2 本规范中所指化妆品中限用物质是指《化妆品卫生规范》中规定的化妆品组分中限用物质、限用防晒剂、限用防腐剂、限用着色剂、暂时允许使用的染发剂等。

4 定义与术语4.1 被测物质是指本规范第3项规定的禁用物质和限用物质。

4.2特异性在确定的分析条件下，检测方法所具备的检测和区分共存组分中被测物能力的特性。

4.3 线性及线性范围4.3.1 线性是指在设计范围内检测响应值与样品中被测物质浓度或量成比例关系的程度。

4.3.2 线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的检测结果，而且呈线性的被测物质浓度或量的变化范围。

4.4检出限和定量下限4.4.1 检出限：被测物质能被检测出的最低量。

4.4.2 定量下限：能够对被测物质准确定量的最低浓度或质量。

4.5 检出浓度和最低定量浓度4.5.1检出浓度：按照检测方法操作，方法检出限对应的被测物质浓度。

4.5.2最低定量浓度：按照检测方法操作，定量下限对应的被测物质浓度。

4.6 精密度在确定的分析条件下，相同浓度被测物质的一系列独立测量结果的一致程度，包括日内精密度和日间精密度。

日内精密度：同一天测定的精密度。

日间精密度：不同天测定的精密度。

4.7回收率提取回收率：是指在确定的分析条件下，回收到物质的实际浓度的百分比，以样品提取和处理过程前后被测物质含量百分比表示。

化妆品中地氯雷他定等15种物质的检测方法1 范围本方法规定了采用高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中地氯雷他定（CAS No：100643-71-8）、氯苯那敏（CAS No：132-22-9）、阿司咪唑（CAS No：68844-77-9）、曲吡那敏（CAS No：91-81-6）、溴苯那敏（CAS No：86-22-6）、苯海拉明（CAS No：58-73-1）、异丙嗪（CAS No：60-87-7）、羟嗪（CAS No：68-88-2）、奋乃静（CAS No：58-39-9）、西替利嗪（CAS No：83881-51-0）、氟奋乃静（CAS No：69-23-8）、氯丙嗪（CAS No：50-53-3）、氯雷他定（CAS No：79794-75-5）、特非那定（CAS No：50679-08-8）、赛庚啶（CAS No：129-03-3）等15种抗组胺类物含量的方法。

本方法适用于膏霜、乳液、水剂和啫喱等类型化妆品中地氯雷他定、氯苯那敏、阿司咪唑、曲吡那敏、溴苯那敏、苯海拉明、异丙嗪、羟嗪、奋乃静、西替利嗪、氟奋乃静、氯丙嗪、氯雷他定、特非那定、赛庚啶含量的测定。

2 方法提要以甲醇为溶剂提取化妆品中抗组胺类物质，用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测，采用保留时间和特征离子对丰度比定性，以待测物质相对应离子峰面积定量，以标准曲线法计算含量。

本方法对15种抗组胺类物质的检出限均为1 ng/mL，定量下限均为2 ng/mL，如以取样0.2 g计，检出浓度均为250 ng/g，定量下限浓度均为500 ng/g。

3 试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为一级实验用水。

3.1 甲醇，色谱纯。

3.2 甲酸，色谱纯。

3.3 甲酸铵，色谱纯。

3.4 甲酸铵-甲酸水溶液：称取甲酸铵（3.3）6.3 g，加1 mL甲酸（3.2），加水1000 mL溶解，用0.22 µm滤膜过滤。

3.5 标准品，参考附录A。

化妆品安全技术规范限用着色剂
—4 —
—5 —
—10 —
—14 —
—18 —
注(1)：a 所列着色剂与未被包括在禁用组分表中的物质形成的盐和色淀也同样被允许使用。

b 着色剂如有多个盐类用冒号后数字表示, 如15850:1, 15850:2。

如没有特别注明, 则通用中文名取其无冒号主名称。

如有多个通用中文名, 则取含“食品”名称。

注(2)：这些着色剂的不溶性钡、锶、锆色淀、盐和颜料也被允许使用, 它们必须通过不溶性测定。

注(3)：这些着色剂作为防晒剂时, 具体要求见防晒剂表。

注(4)：五倍子为盐肤木、青麸杨或红麸杨叶上的虫瘿。

—25 —。

附件15：化妆品中颜料橙5等5种禁用着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36（CI 13065）、颜料橙5（CI 12075）、颜料红53:1（CI 15585:1）、苏丹红Ⅱ（CI 12140）和苏丹红Ⅳ（CI 26105）的高效液相色谱测定方法。

本方法适用于唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的测定。

2 方法提要样品经溶剂提取后，用高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外-可见光谱图定性，峰面积外标法定量。

必要时，采用液相色谱-质谱联用法进行确证。

本方法对酸性黄36、颜料橙5、颜料红53:1、苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅳ的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度见表1。

表1 5种着色剂的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度3 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。

3.1 乙腈，色谱纯。

3.2 甲醇，色谱纯。

3.3 四氢呋喃，色谱纯。

3.4 二甲基亚砜。

3.5 乙醇，色谱纯。

3.6 四丁基氢氧化铵，浓度为55%。

3.7 柠檬酸。

3.8 氨水，浓度为25～28%。

3.9 酸性黄36，纯度≥99%。

3.10 苏丹红Ⅳ，纯度≥94%。

3.11 苏丹红Ⅱ，纯度≥90%。

3.12 颜料橙5，纯度≥97%。

3.13 颜料红53:1，纯度≥95%。

3.14 酸性黄36标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取酸性黄36（3.9）对照品50 mg（精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。

3.15 苏丹红Ⅳ标准储备溶液（ρ=500 μg/mL）：称取苏丹红Ⅳ（3.10）对照品50 mg（按实际含量折算，精确至0.1 mg），置于100 mL容量瓶中，用四氢呋喃（3.3）和乙腈（3.1）混合液（体积比1:9）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 μg/ mL的标准储备溶液。

高效液相色谱法测定染发剂中32种禁限用染料染发剂是人们最常使用的化妆品之一,氧化型染发剂由于具有染色效果好,色调范围宽,持续时间长等优点应用最为广泛。

氧化型染发剂的有效成分是苯胺和苯酚衍生物,这些物质具有不同程度的致癌、致敏和遗传毒性,长期使用会对人体健康造成损害,所以必须对染发剂中染料的含量和种类加以限定。

氧化型染发剂由于极性较强,挥发性较小,最适合用高效液相色谱法进行检测。

《化妆品卫生规范》中规定了染发剂中93种暂时允许使用的染料和它们的限度。

但是只有8种染料成分有相应的高效液相色谱检测方法,为了弥补数量上的不足,国家食品药品监督管理总局发布化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法,但实践表明该方法重现性、耐用性较差,灵敏度低。

故本论文主要是对该方法进行重建,以适应染发剂检测的需要。

酸性和碱性物质的分离一直都是反相高效液相色谱法的一个难点,酸性物质和碱性物质分离时在流动相中电离,电离后的组分亲水性急剧增强导致离子态组分在色谱柱中几乎不保留。

组分在固定相和流动相发生分配平衡的同时其分子形式和离子形式发生电离平衡,流动相p H值微小的改变都会改变电离平衡的状态导致保留值的改变,解决这个问题的基本思路就是根据组分基团的pKa估算出分子完全呈分子态时流动相的pH范围,然后把该范围之间有一定交集的组分分成一组,如此就可以保证分子在分离时完全呈分子态,从而保证了耐用性和重现性。

当苯胺等碱性物质呈分子态时通常溶剂也为碱性,而普通C18柱可以耐受的pH范围在2-6之间,所以需要选择特殊键合的反相色谱柱。

此外还对缓冲盐种类、缓冲盐浓度、提取溶剂、检测波长等作了优化。

建立了染发剂中32种染料含量的反相高效液相色谱测定方法。

根据每个化合物的p Ka将32种物质分成3组,采用ZORBAX Extend C18(4.6 mm×250 mm,5μm)和ZORBAX Bonus-RP C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇、乙腈和pH 分别为7.0,8.0和9.0的缓冲盐溶液作为流动相,流速为1.0 mL/min,使用二极管阵列检测器,检测波长分别为280,230和250 nm。