南瓜多糖降糖有效部位的提取分离及降糖作用的研究_英文_熊学敏

南瓜多糖提取方法摘要：本文介绍了南瓜多糖的提取方法,如水提醇沉法、碱液提取法、超声波提取法、微波辅助提取法、酶提取法等等。

关键词：南瓜；多糖；多糖提取南瓜又称番瓜、倭瓜、金瓜等，系葫芦科南瓜属一年生蔓性草本植物，是重要药食两用植物之一。

南瓜营养丰富，不仅含有甘露醇，多种氨基酸，维生素C、E 及微量元素Fe、Se、Zn、Mn 等，还含有大量生物碱、南瓜子碱、果胶等活性成分。

南瓜多糖呈棕色粉末，是南瓜活性成分中最重要、最具潜力功能因子之一。

不仅具有复杂、多方面生物活性，作为广谱免疫促进剂，且具有免疫调节，抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质生物合成，控制细胞分裂、分化，调节细胞生长、衰老等作用。

因此，对南瓜多糖分离提取，日益引起人们重视。

1 提取方法的研究现状1.1 水提醇沉法水提醇沉法是通过在天然产物的浓缩的水提取液中加入数倍量高浓度乙醇，利用南瓜多糖溶于水而不溶于高浓度的乙醇的性质，使其生成沉淀而与其他水溶性的杂质分离的方法。

水提醇沉法提取南瓜多糖的工艺，工艺流程如下：市购南瓜洗净、去皮切丁并配水榨汁→加热浸提→过滤→提取液→浓缩→乙醇沉淀→南瓜粗多糖。

通过四因素三水平正交试验法优选，研究发现南瓜多糖提取的最优条件为：南瓜丁的质量与水的体积比为1(g):5(ml)，90℃条件下浸提2h，浓缩水浸提液与乙醇的体积比为1:4，南瓜粗多糖提取率为1.5%左右，纯度可达到21.02%。

1.2 碱液提取法由于D- 葡萄糖醛酸的存在，南瓜多糖为酸性多糖，故可采用稀碱液如氢氧化钠、氢氧化钾等来提取。

由于稀碱液有助于解除植物细胞壁分子间的化学和物理作用，故可增加南瓜多糖的提取率。

利用氢氧化钠溶液提取南瓜多糖的工艺，实验表明：随着碱液浓度的升高，多糖的提取率增加，当达到0.3mol/L 之后，碱液浓度的升高对提取率无显著影响，而且由于碱性条件下，其中的还原糖会分解成分子量更小的色素分子，从而使的产品的色泽加深。

南瓜多糖的多重生理效应研究进展毕新颖;王建南;姜玲玲;石芸【摘要】南瓜多糖属于杂化多糖,成分多样.目前,对其研究最多的功用是通过多种机制降低血糖,是公认的降糖活性物质.但随着对南瓜多糖不断深入地研究,人们发现它还具有降血脂、抗氧化、抗肿瘤、免疫增强等多种生理效应.就近年来南瓜多糖的多重生理效应的研究进展作一综述,为其进一步开发利用提供理论依据.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2014(031)001【总页数】4页(P78-81)【关键词】南瓜多糖;糖尿病;氧化应激;多重生理效应【作者】毕新颖;王建南;姜玲玲;石芸【作者单位】河北医科大学,生物化学与分子生物学研究室,石家庄,050017;河北医科大学,生物化学与分子生物学研究室,石家庄,050017;河北医科大学,生物化学与分子生物学研究室,石家庄,050017;河北医科大学,生物化学与分子生物学研究室,石家庄,050017【正文语种】中文【中图分类】Q946.3;R285南瓜是葫芦科植物南瓜的果实，营养全面，具有多种保健和药用价值。

南瓜多糖是南瓜中重要的活性成分，是公认的降糖物质。

近年的研究发现，南瓜多糖不仅有明显降糖作用，在降血脂、抗氧化、抗肿瘤及免疫增强等方面也有明显功效，表现出广阔的应用前景[1]。

本文就南瓜多糖的多重生理效应作一综述，为其进一步开发利用提供理论依据。

1 南瓜多糖的性质和组成从南瓜中提纯得到的南瓜多糖，粗品为浅黄色，纯品为白色，呈粉末状。

易溶于水，不易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。

南瓜多糖的分子量、组成以及各组成成分的含量，用不同的方法进行检测，所得结果并不一致。

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定南瓜多糖的分子量为1.6×104 Da, 而用高效液相色谱法测得其分子量为1.15×105 Da[2]。

用纸层析法测定南瓜多糖中单糖的种类发现，构成南瓜多糖的单糖包括半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖和葡萄糖醛酸, 薄层扫描显示此5种单糖峰面积的比值为15.09∶40.18∶10.73∶6.56∶26.44, 摩尔比为6∶3∶2∶1∶3；而用高效毛细管电泳法测得其单糖种类为葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、果胶糖、木糖和鼠李糖，摩尔比为21.7∶18.9∶11.5∶9.8∶4.4∶2.8[3]。

南瓜糖蛋白的分离纯化及其糖链结构鉴定张琳;陈俊华;王小雪;马明兰;谭珺隽;刘阳【摘要】Pumpkin glycoproteins were extracted from pumpkin powder with water extraction and alcohol pre-cipitation. The pumpkin glycoproteins were separated and purified in sequence with ammonium sulfate and ethanol precipitation and agarose gel electrophoresis. After qualitative investigation and alkaline β- elimination reaction, 1H NMR and 13C NMR were adopted to measure the structure of glycopeptide linkage. The experiments showed that: the purified glycoprotein did not contain the free reducing sugar and starch. In the spectrum near UV 240 nm, there was a significant change in the absorbance of the hydrolysate of the pumpkin glycoprotein, which proved that the glycopeptide linkage was mainly O-glycopeptide. Meanwhile, the 1H NMR and 13C NMR spectrogram of its polysaccharide showed that the monosaccharide residue of the polysaccharide contained bothα- and β-glycoside bond types, while polysaccharides mainly contained three anomeric carbon which were→4)-α-D-GalpA-(1→,T- α-D-Galp- (1→ and→2)-α-L-Rhap- (1→, at175.57 and 171.25, the reso-nance-absorption peak indicates the polysaccharides contains uronic acid and lipid structure.%采用水提醇沉法从南瓜粉中提取南瓜糖蛋白,分别用硫酸铵、乙醇分级沉淀及琼脂糖凝胶电泳法对南瓜糖蛋白进行分离纯化,定性检测后用碱性β-消除反应及核磁共振氢谱(Proton Nuclear Magnetic Resonance,1H NMR)、核磁共振碳谱(Carbon 13Nuclear Magnetic Resonance,13C NMR)技术测定糖肽键的结构.结果显示:纯化后的糖蛋白不含游离还原糖和淀粉,其在紫外240 nm附近南瓜糖蛋白碱水解液吸光度值发生了明显的变化,证明南瓜糖蛋白的糖肽键主要为O-糖肽键;其多糖的1H NMR和13C NMR谱图表明,该多糖组分的单糖残基中包含α-和β-两种糖苷键类型,且南瓜多糖主要含有3种端基碳分别为→4)-α-D-半乳糖-(1→、T-α-D-半乳糖-(1→和→2)-α-L-鼠李糖-(1→,在175.57和171.25处的共振吸收峰说明多糖中含有糖醛酸和脂类结构.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)016【总页数】5页(P61-65)【关键词】南瓜;糖蛋白;琼脂糖凝胶电泳;核磁共振【作者】张琳;陈俊华;王小雪;马明兰;谭珺隽;刘阳【作者单位】武昌理工学院生命科学学院,湖北武汉 430223;武昌理工学院生命科学学院,湖北武汉 430223;武昌理工学院生命科学学院,湖北武汉 430223;武昌理工学院生命科学学院,湖北武汉 430223;武昌理工学院生命科学学院,湖北武汉430223;武昌理工学院生命科学学院,湖北武汉 430223【正文语种】中文南瓜Cucurbita moschata（Duch.ex Lam.）Duch.ex Poiret）为葫芦科南瓜属植物。

中药科技中药辫甯与１信忘２００３年４月第５卷第４期Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｎＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＡｐｒｉｉ２００３．Ｖ０１．５，Ｎｏ．４多糖研究概述初敏１齐锡祥１朱飞２李跃武１（ｉ．天津中新药韭集团药材分公司天津３０００５０２．黑龙江省中药研究所黑龙江５０００４０）多糖ｐｏｌｙｓａｃｈａｒｉｄｅｓ，ＰＳ，又称多聚糖，是一种具有广泛生物活性的大分子。

多糖广泛存在于许多动植物体内，不仅是生物的营养成分，而Ｈ还参与多种生命活动。

在过去相当长的时问里，未能为人们重视，大多将其作为一种实验废弃物，实为可惜。

随着人们对传统中药的不断深入研究，从上吐纪７０年代开始，陆续有一批活性多糖成分被发现。

在研究其功效的过程中，人们惊喜地发现，多糖作为一种几乎无毒副作用的天然提取物，在许多疾病防治方面，特别是一些顽固病、疑难病，如肿瘤、免疫力低下、高血糖、衰老、病毒性疾病等方面，有其独特的疗效。

多糖的研究已经引起国内外广大药物研究开发者的重视，多糖的研究报告逐年递增。

有学者说，“２ｌ世纪的头２０年，是多糖的时代”。

１多糖的分离纯化１．１分离多糖中的水溶性多糖是人们研究最多，也是活性较大的组分。

一般水溶性多糖溶于热水，在冷却后成粘稠沉淀析出。

通常用热水提取，乙醇沉淀的方法得到粗多糖。

由于蛋白质的溶解性与多糖相似（溶于水，但不溶于乙醇等有机溶剂）。

在水提醇沉的过程中，会引入蛋白质杂质。

除蛋白的方法，有饱和中性盐（Ｎｍ），Ｓ０４，Ｎａ２Ｓ０４，ＮａＣＩ，重金属离子（Ｐｂ“，Ｈ酽＋等）等方法。

将得到的滤液置于半透膜内透析，以除去多糖溶液中的残留离子。

１．２多糖的纯化有分级醇沉法、离子交换柱法，聚酰胺层析法等多种方法，均可得到较纯多糖组分。

１．３多糖的纯度分析“’１．３．１电泳法方法有玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺胶电泳、醋酸纤维素薄膜电泳及琼脂糖电泳等。

由于中性多糖导电性弱，故常采用高压电泳，增加其移动速度。

南瓜的营养价值与保健功能及其应用研究进展摘要:综述了南瓜的营养价值与保健功能及其在食品、药品领域的应用进展情况,并展望其研究和应用的前景。

关键词:南瓜；营养价值；保健功能；应用南瓜Cucurbita) 是葫芦科南瓜属植物。

南瓜的营养价值较高,如中国南瓜( Cucurbita maschata D. ) ,张建农等[1 ] 测定得出各南瓜,南瓜学名Cucurbita spp, 又称麦瓜、番南瓜、番瓜、倭瓜、伏瓜、金瓜、饭瓜、老缅瓜、窝瓜、番蒲。

现代医学临床试验亦表明,南瓜具有多种食疗保健作用和药用价值。

本文就南瓜的营养价值与保健功能及其在食品、医药领域的应用进展情况作一简要综述。

1 南瓜的营养价值1.1 南瓜的营养成分营养成分含量分别为: 水分90.24 %、蛋白质0. 65 %、脂肪0. 13 %、碳水化合物6. 08 %、纤维2. 15 %、灰分0. 73 % ,同时还含有丰富的胡萝卜素、VA 、VC、VE、精氨酸、天门冬氨酸、葫芦巴碱、腺嘌呤、果胶、甘露醇、叶红素、叶黄素及钙、钾、锌、铬等矿物质,特别是稀有氨基酸瓜氨酸含量达0. 21mg/ g ,果胶含量占南瓜干物质的7 %～17 %，热能很低( 每100 g约含有92 kJ 热量) , 含有较多的粗纤维、维生素、β- 胡萝卜素, 为低脂、低钠、高膳食纤维、高维生素E、高β- 胡萝卜素、高钾、高钙食品; 含有人体所需的l7 种氨基酸, 其中赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸等必需氨基酸含量较高,南瓜多糖纯品( 简称PP)由D - 葡萄糖、D - 半乳糖、L - 阿拉伯糖、木糖和D - 葡萄糖醛酸组成。

南瓜中还含较多的类胡萝卜素。

1.2 营养成分含量《辞海》中对营养品质的定义是:“食物中各种营养素含量多少及被机体消化吸收和利用的程度高低的1 种相对指标”。

蔬菜品质是由产品外观和众多的内在因素构成的复合性状, 分感官品质和营养品质。

南瓜多糖降糖有效部位的提取分离及降糖作用的研究
熊学敏;石扬;康明;彭新生;曹珏
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2000(022)008
【摘要】目的:对南瓜多糖有效部位进行提取、分离并进行降糖作用的研究.方法:将葫芦科植物Cucurbiat moschata Duch南瓜由水提、醇沉后经大孔径离子柱和Sepherose柱、SephadexA-200柱分离,获得多糖组份,冷冻干燥后得白色粉末多糖,该多糖经给予四氧嘧啶糖尿病造模大鼠(3.8g/kg)连续21d后测定其空腹血糖的变化情况,以中药消渴丸作为阳性对照组,结果该有效部位有明显降低四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖的作用,且效果优于消渴丸对照组(P＜0.01).结论:南瓜多糖有效部位有明显的降低糖尿病大鼠血糖效果.
【总页数】3页(P563-565)
【作者】熊学敏;石扬;康明;彭新生;曹珏
【作者单位】江西省中医药研究所,江西,南昌,330077;江西省中医药研究所,江西,南昌,330077;江西省中医药研究所,江西,南昌,330077;江西省中医药研究所,江西,南昌,330077;江西医学院,江西,南昌,330006
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.南瓜多糖的提取工艺及其降糖作用的研究 [J], 彭红;黄小茉;欧阳友生;谢小保;陈仪本
2.响应面法优化南瓜多糖的提取工艺及其降糖作用研究 [J], 张则鸣;张拥军;金晖;李佳;朱丽云;姚惠源
3.南瓜多糖降血糖有效部位的提取分离及检测 [J], 熊学敏;石扬;康明;曹珏;赵银鹰
4.南瓜糖蛋白的提取分离及降糖作用的研究 [J], 张琳;李丽芳
5.南瓜多糖的提取工艺及其降糖作用的研究 [J],
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石榴果实多糖对糖尿病大鼠血糖及血脂的调节作用刘晓伟;冯海云【摘要】目的观察石榴果实多糖对糖尿病大鼠血糖、血脂的调节作用.方法取40只大鼠,采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病模型,随机分为模型组及石榴果实多糖低、中、高剂量组各10只;另取10只作为正常组.正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,石榴果实多糖低、中、高剂量组分别给予石榴果实多糖75、150、300mg/kg灌胃,均1次/d,连续28 d.比较治疗后各组大鼠血糖、TC、TG、HDL-C、LDL-C.结果治疗后血糖水平正常组＜石榴果实多糖高剂量组＜中、低剂量组＜模型组,P均＜0.05.模型组血清TC、TG、LDL-C较正常组明显升高,HDL-C明显下降(P均＜0.01);石榴果实多糖各剂量组血清TC、TG、LDL-C均较模型组降低,HDL-C较模型组升高,且高剂量组优于中、低剂量组(P＜0.05或＜0.01).结论石榴果实多糖能够有效降低糖尿病大鼠的血糖,并调节其血脂水平.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)038【总页数】2页(P40-41)【关键词】糖尿病;石榴果实多糖;血糖;血脂;大鼠【作者】刘晓伟;冯海云【作者单位】延安大学附属医院,陕西延安716000;延安大学附属医院,陕西延安716000【正文语种】中文【中图分类】R587.1石榴为石榴科石榴属落叶灌木或小乔木。

研究证实，石榴的花、皮、籽、果汁具有多种生物活性，包括抗氧化[1]、降血糖[2]、防治肿瘤[3]、抑菌[4]、抗动脉粥样硬化和抗炎[5,6]等。

目前对石榴提取物、石榴多酚的研究较多，对石榴果实多糖的研究较少。

2016年1月，我们从石榴果实中提取多糖，观察其对糖尿病大鼠血糖、血脂的影响。

1.1 材料雄性SD大鼠50只，体质量(170±10)g，购自甘肃中医学院，适应性饲养1周，自由饮水和进食。

石榴果实购买于本地农贸市场，先置于电热恒温鼓风干燥箱中除去水分，粉碎机粉碎、过筛，依次加入石油醚、乙醇获得脱脂、去单糖石榴果实残渣，加蒸馏水并采用微波萃取仪(上海新拓分析仪器科技有限公司)进行提取，水提液活性炭脱色、Sevage法除蛋白，加入乙醇至含醇量达到75%，取沉淀干燥，即得到石榴果实多糖。

基金项目:上海市农业科学院作物所创新基金(编号:作创字２０２１ C X Ｇ０４);上海市农产品保鲜加工专业技术服务平台(编号:２１D Z ２２９２２００)作者简介:陈冰洁,女,上海市农业科学院助理研究员,硕士.通信作者:乔勇进(１９６７ ),男,上海市农业科学院研究员,博士.E Ｇm a i l :y j qi a o ２００２＠１２６．c o m 收稿日期:２０２２Ｇ１１Ｇ２３㊀㊀改回日期:２０２３Ｇ０５Ｇ０２D O I :１０．１３６５２/j ．s p jx ．１００３．５７８８．２０２２．８１０９３[文章编号]１００３Ｇ５７８８(２０２３)０７Ｇ０１６５Ｇ０７金瓜多糖不同分级组分的抗氧化和降血糖活性A n t i o x i d a n t a n dh y p o g l y c e m i ca c t i v i t i e s o f d i f f e r e n t gr a d e d f r a c t i o n s o f p o l ys a c c h a r i d e f r o m g o l d e n m e l o n 陈冰洁１,２C H E N B i n g Ｇj i e １,２㊀乔勇进１,２Q I A OY o n g Ｇj i n １,２㊀王㊀晓１,２WA N G X i a o １,２㊀王春芳１,２WA N GC h u n Ｇf a n g １,２㊀刘贵阁１,２L I UG u i Ｇge １,２(１．上海市农业科学院作物育种栽培研究所,上海㊀２０１４０３;２．上海农产品保鲜加工工程技术研究中心,上海㊀２０１４０３)(１．I n s t i t u t e o f C r o p B r e e d i n g a n dC u l t i v a t i o n ,S h a n g h a iA c a d e m y o f A g r i c u l t u r eS c i e n c e s ,S h a n g h a i ２０１４０３,C h i n a ;２．A g r i ＧF o o dS t o r a g e a n dP r o c e s s i n g E n g i n e e r i n g T e c h n o l o g y R e s e a r c hC e n t e r o fS h a n g h a i ,S h a n gh a i ２０１４０３,C h i n a )摘要:目的:研究金瓜多糖不同分级组分的理化特性㊁结构㊁抗氧化性和降血糖活性.方法:采用水提醇沉法分级纯化得到４种金瓜多糖(C P Ｇ４０㊁C P Ｇ６０㊁C P Ｇ７０㊁C P Ｇ８０),通过高效液相色谱㊁傅里叶变换红外光谱等对其分子量㊁单糖组成㊁基团构成㊁抗氧化和降血糖活性进行研究.结果:金瓜多糖组分随着乙醇体积分数的增加,总糖含量升高,糖醛酸含量降低.４种多糖分子量不同,单糖组成相同但组成比例不同,且均具有多糖类物质的特征吸收峰.金瓜多糖体外抗氧化能力和降血糖活性存在明显的量 效关系,C P Ｇ７０对D P P H 自由基㊁羟自由基和超氧阴离子自由基清除作用高于其他组,抗氧化性最强,C P Ｇ８０对αＧ葡萄糖苷酶和αＧ淀粉酶抑制作用最强,降血糖活性最佳.结论:金瓜多糖具有良好的抗氧化性和降血糖活性.关键词:金瓜;多糖;体外抗氧化性;降血糖活性A b s t r a c t :O b je c t i v e :T h e s t u d y a i m e d t o r e s e a r c h t h e p h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s ,s t r u c t u r e ,a n t i o x i d a n ta c t i v i t y a n d h y p o g l y c e m i ca c t i v i t y o fd if f e r e n t f r a c t i o n so f p o l ys a c c h a r i d eo f go l d e n m e l o n ．M e t h o d s :F o u rk i n d so fgo l d e n m e l o n p o l y s a c c h a r i d e s (C P Ｇ４０,C P Ｇ６０,C P Ｇ７０,C P Ｇ８０)w e r eo b t a i n e d b y gr a d e d p u r i f i c a t i o n o f w a t e r e x t r a c t i o n a n d a l c o h o l i c p r e c i pi t a t i o n ．T h e i r m o l e c u l a rw e i gh t ,m o n o s a c c h a r i d ec o m p o s i t i o n ,g r o u p c o m p o s i t i o n ,a n t i o x id a n ta n dh y p o g l y ce m i c a c t i v i t i e s w e r e i n v e s t i g a t e d b y h i g h p e rf o r m a n c e l i qu i d c h r o m a t o g r a p h y a n d f o u r i e r t r a n s f o r m i n f r a r e d s p e c t r o s c o p y ．R e s u l t s :W i t ht h e i n c r e a s eo f e t h a n o l v o l u m e f r a c t i o n ,t h et o t a ls u g a r c o n t e n t i n c r e a s e d a n d t h e g l u c u r o n i c a c i d c o n t e n t d e c r e a s e d ．T h e m o l e c u l a r w e i g h t s o f t h e s e f o u r p o l ys a c c h a r i d e s w e r e d i f f e r e n t ,w h i c h i n d i c a t e d b y t h e s a m e c o m p o s i t i o n o f m o n o s a c c h a r i d e sb u td i f f e r e n tc o m p o s i t i o nr a t i o s ,a n dt h e y al l h a d t h ec h a r a c t e r i s t i ca b s o r p t i o n p e a k so f p o l y s a c c h a r i d e s ．T h e a n t i o x i d a n t c a p a c i t y a n d h y p o g l y c e m i c a c t i v i t y of t h e p o l y s a c c h a r i d e s i nv i t r o h a d o b v i o u s q u a n t i t y Ｇe f f e c t r e l a t i o n s h i p s ,C P Ｇ７０h a dt h es t r o n ge s ta n t i o x i d a n tef f e c to n D P P H r a d i c a l s ,h y d r o x y l r a d i c a l sa n ds u p e r o x i d ea n i o n ss c a v e ng i n g th a n o t h e r g r o u p s ,w hi l eC P Ｇ８０h a dt h eb e s th y p o g l y c e m i ca c t i v i t y s i n c e i t h a d t h e s t r o n g e s t i n h i b i t o r y e f f e c t s o n αＧg l u c o s i d a s e a n d αＧa m y l a s e ．C o n c l u s i o n :T h e p o l y s a c c h a r i d eo f g o l d e n m e l o n h a d g o o d a n t i o x i d a n t p r o p e r t i e s a n dh y p o g l y c e m i c a c t i v i t y ．K e yw o r d s :g o l d e n m e l o n ;p o l y s a c c h a r i d e ;a n t i o x i d a n t a c t i v i t y ;h y p o g l y c e m i c a c t i v i t y金瓜(C u c u r b i t a p e po L ．v a r ．m e d u l l o s a A l e f ．)又名金丝瓜㊁搅瓜和面条瓜,是葫芦科南瓜属美洲南瓜(C u c u r b i t a p e po L ．)的一个变种,因果皮呈金黄色而得名[１].金丝瓜在欧美地区及东南亚地区均有栽培,目前中国南北各地均广泛种植,其中以上海市崇明县的金瓜最著名[２].金瓜和中国南瓜同为南瓜属,南瓜(C u c u r b i t am o s c h a t a )多糖是公认的降糖活性物质且具有较好的抗氧化功能[３－４],但目前并未针对性地对金瓜多糖及其相关功能特性进行研究,不利于金瓜的开发利用.乙醇体积分数会直接影响所获得多糖的结构及其性质.研究拟采用梯度醇沉的方法对金瓜多糖进行分级处理,考察乙醇体积分数对多糖理化性质㊁分子量㊁单糖组成㊁基团构成㊁抗氧化和降血糖活性等的影响,阐释金瓜多糖的结构５６１F O O D &MA C H I N E R Y 第３９卷第７期总第２６１期|２０２３年７月|Copyright ©博看网. All Rights Reserved.特征与活性之间的相关性,旨在为制备具有特定营养活性的金瓜多糖提供理论依据.１㊀材料与方法１．１㊀材料与试剂金瓜:崇金３号,上海崇明生产基地;１,１Ｇ二苯基Ｇ２Ｇ三硝基苯肼(D P P H )㊁甘露糖㊁鼠李糖㊁葡萄糖醛酸㊁葡萄糖和半乳糖:光谱级,美国S i gm a 公司;透析袋:３５００D ,上海源叶生物科技有限公司;其他试剂均为分析纯.１．２㊀仪器与设备电热恒温鼓风干燥箱:L D ０O Ｇ１０１Ｇ３型,上海龙跃仪器设备有限公司;冷冻干燥机:T e l s t a r (L y o Q u e s t )型,西班牙T e l s t a r 公司;酶标仪:MQ X ２００型,美国百特仪器有限公司;高效液相色谱:A g i l e n t １１００型,美国安捷伦公司;傅里叶红外光谱仪:N I C O L E T Ｇ３８０型,美国N i c o l e t公司.１．３㊀方法１．３．１㊀金瓜多糖的提取及分级醇沉㊀根据刘继攀等[５]的方法修改,选取肉质呈橘黄色的金瓜,除去果皮和籽粒后将果肉切成薄片,５０ħ烘干１２h,粉碎机粉碎成粉末.称取５００g 的金瓜粉加入２０倍的蒸馏水,于８５ħ提取３次,提取时间分别为３,２,２h .收集滤液,８０００r /m i n 离心５m i n ,收集上清液,真空浓缩,加入９５％的乙醇醇沉１２h 以上,离心得沉淀物并透析(M w c u t Ｇo f f ３５００D a )３d ,浓缩,冷冻干燥得粗多糖.粗多糖配成１０％的多糖溶液后,与无水乙醇混合使乙醇体积分数达到４０％,醇沉１２h ,离心㊁沉淀冷冻干燥得到４０％醇沉组分,上述上清液与乙醇溶液混合使乙醇体积分数达到５０％,重复醇沉干燥过程得到５０％醇沉多糖,以此类推得到６０％,７０％,８０％醇沉多糖,得到金瓜多糖的５种组分分别命名为:C P Ｇ４０㊁C P Ｇ５０㊁C P Ｇ６０㊁C P Ｇ７０㊁C P Ｇ８０.称重并按式(１)计算其得率.y ＝m １m ２ˑ１００％,(１)式中:c 得率,％;m １ 各组分质量,g;m ２ 粗多糖质量,g.１．３．２㊀金瓜多糖理化性质测定(１)总糖含量:采用苯酚 硫酸法[６],以葡萄糖为标准品.(２)蛋白质含量:采用考马斯亮蓝法[７],以牛血清白蛋白为标准品.(３)葡萄糖醛酸含量:采用硫酸 咔唑法[８],以葡萄糖醛酸为标准品.１．３．３㊀金瓜多糖分子量测定㊀采用H P G P C 法[９].１．３．４㊀金瓜多糖的单糖组成分析㊀采用高效液相色谱法.根据文献[１０],修改如下:多糖样品(１０m g )与三氯乙酸(４m L ,２m o l /L ,T F A )混匀后加入密封管９０ħ下水解４h ,用氮吹仪吹干T F A 后加入甲醇溶液重复操作２~３次.N a OH 溶液调节至中性,进行１Ｇ苯基Ｇ３Ｇ甲基Ｇ５Ｇ吡唑啉酮(P M P )衍生.１．３．５㊀金瓜多糖红外光谱(F T ＧI R )分析㊀将样品与K B r 按m 样品ʒm K B r ＝１ʒ１００的比例混合,研磨均匀,压成薄片后在４０００~５００c m －１范围内用F T ＧI R 仪扫描.１．３．６㊀体外抗氧化能力测定(１)D P P H 自由基清除能力:根据文献[１１].(２)羟自由基清除能力:根据文献[１２].(３)超氧阴离子自由基清除能力:根据文献[１３].(４)还原力:根据文献[１４].１．３．７㊀降血糖活性测定㊀根据文献[１５].１．４㊀数据处理所有数据均以３次重复后的平均值ʃ标准差(S D )表示.样品间差异的显著性通过单因素方差分析(O r i gi n P r o ８．５)进行.由O r i gi n 软件制作图表.２㊀结果与分析２．１㊀理化性质金瓜粗多糖分别经体积分数４０％,５０％,６０％,７０％,８０％的乙醇醇沉后得到５种多糖组分:C P Ｇ４０㊁C P Ｇ５０㊁C P Ｇ６０㊁C P Ｇ７０㊁C P Ｇ８０.由于C P Ｇ５０提取率极低,故不做后续研究.由表１得出,多糖的得率和组成随醇沉时乙醇体积分数的不同而变化.各组分多糖的提取率存在显著差异(P ＜０．０５),C P Ｇ４０的提取率较高,达５１．１％,远远高于其他组分.随着乙醇体积分数的增加,金瓜多糖的总糖含量升高,说明多糖含量随乙醇体积分数的升高而增加,表１㊀多糖的理化性质†T a b l e １㊀P h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s o f p o l ys a c c h a r i d e s ％组分提取率总糖含量葡萄糖醛酸含量蛋白质含量C P Ｇ４０５１．１０ʃ０．１１d４５．０８ʃ０．２１a２１．２６ʃ０．３３d１．２２ʃ０．０６C P Ｇ６０４．９０ʃ０．０８a ４５．９９ʃ０．１７b １６．１２ʃ０．１１c １．０３ʃ０．０４C P Ｇ７０５．８０ʃ０．０７b ５７．４２ʃ０．２２c １４．１６ʃ０．０９b １．０６ʃ０．０３C P Ｇ８０１３．８０ʃ０．０９c６１．５２ʃ０．０８d １０．１４ʃ０．１４a １．１４ʃ０．０９㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀†㊀同列字母不同表示差异显著(P ＜０．０５).６６１营养与活性N U T R I T I O N &A C T I V I T Y 总第２６１期|２０２３年７月|Copyright ©博看网. All Rights Reserved.可能与高浓度的乙醇能沉淀更多小分子的多糖有关.葡萄糖醛酸含量随醇沉浓度的增大而降低,４种多糖中均含有一定量的糖醛酸,说明金瓜多糖各组分均是酸性多糖.同时,各醇沉组分均含有少量蛋白质,推测金瓜多糖中可能含有部分糖蛋白.２．２㊀分子量如图１所示,C PＧ４０㊁C PＧ６０为单一对称峰(其中２１．５７５处为溶剂峰),说明在乙醇体积分数为４０％和６０％的条件下沉淀所得的金瓜多糖纯度较高,根据葡聚糖标准曲线y＝－０．３４１x＋１０．６８５(R２＝０．９９６),得出C PＧ４０和C PＧ６０的相对分子量分别为２６．８,１１．５k D a.而C PＧ７０㊁C PＧ８０除了溶剂峰外,还有１个不对称的峰,说明存在不同相对分子量的金瓜多糖组分,其中C PＧ７０㊁C PＧ８０中占比较大的多糖的分子量为１０．０,８．１k D a,表明体积分数较低的乙醇醇沉的是大分子量的多糖,而体积分数较高的乙醇醇沉的主要是小分子量的多糖,与蔡冰洁等[１６]的研究结果一致.２．３㊀单糖组成由表２和图２可知,C PＧ４０㊁C PＧ６０㊁C PＧ７０㊁C PＧ８０的单糖组成一样,均含有甘露糖㊁鼠李糖㊁葡萄糖醛酸㊁葡萄糖和半乳糖,但组成比例不同.２．４㊀红外分析如图３所示,３４００c m－１处较宽的吸收峰(O H键伸缩振动)和２９００c m－１处的吸收峰(C H键伸缩振动)被认为是多糖的特征吸收峰.１７３２c m－１处的吸收峰为果胶类多糖中甲氧基的特征吸收峰[１７],证明了多糖中甲氧基的存在.１６００,１４１５c m－１处的两个吸收峰来自于羧基的不对称和对称伸缩振动,证明多糖中糖醛酸的存在[１８],与表１测定结果一致.１０１３c m－１处的吸收峰可能是由吡喃环伸缩振动引起的,这也是多糖的典型吸收图１㊀多糖分子量检测F i g u r e１㊀D e t e r m i n a t i o no fm o l e c u l a rw e i g h t o f p o l y s a c c h a r i d e表２㊀多糖单糖组成T a b l e２㊀M o n o s a c c h a r i d e c o m p o s i t i o no f p o l y s a c c h a r i d e s％组分单糖组成(以摩尔百分比表示)甘露糖鼠李糖葡萄糖醛酸葡萄糖半乳糖C PＧ４０１０．８４８．１２２０．３６７．５３８．８１C PＧ６０７．８６５．３４１１．９３２２．４７１６．９４C PＧ７０１１．７８８．１６１８．２１１２．３０８．２６C PＧ８０４．７１３．５６８．２８３２．５８３０．４０峰[１９].推测出不同浓度乙醇沉淀所得４种金瓜多糖都具有多糖的典型基团,且所含基团无明显差异,与周慧吉等[２０]研究的结果相似,分级醇沉对多糖红外光谱影响较小.２．５㊀多糖的抗氧化活性如图４(a)所示,随着多糖质量浓度的增加,D P P H自由基的清除活性逐渐增加,表现出良好的剂量依赖关系.其中C PＧ７０的D P P H自由基清除作用最强,明显高于其他组分,当多糖质量浓度为０．９０m g/m L时,C PＧ７０对７６１|V o l．３９,N o．７陈冰洁等:金瓜多糖不同分级组分的抗氧化和降血糖活性Copyright©博看网. All Rights Reserved.M a n ．甘露糖㊀R h a ．鼠李糖㊀G l c u a ．葡萄糖醛酸㊀G l c ．葡萄糖㊀G a l ．半乳糖图２㊀单糖组成色谱图F i g u r e ２㊀C h r o m a t o g r a mo fm o n o s a c c h a r i d e c o m po s i t i on 图多糖红外光谱扫描图F i g u r e ３㊀I n f r a r e d s p e c t r u mo f p o l ys a c c h a r i d e s D P P H 自由基的清除能力达７６．４７％,低于阳性对照V C (９７．４４％),可见金瓜多糖C P Ｇ７０具有明显清除D P P H 自由基的能力.C P Ｇ７０和V C 的I C ５０分别是０．１１８,０．４８２m g /m L .㊀㊀从图４(b )可以看出,４种多糖对羟自由基的清除能力呈一定的剂量依赖性,当多糖质量浓度为０．９m g/m L 时,C P Ｇ４０㊁C P Ｇ６０㊁C P Ｇ７０和C P Ｇ８０的羟自由基清除率分别为２８．０２％,３２．７４％,３５．６５％,２６．６６％,明显小于阳性对照V C 的,说明金瓜多糖有一定的羟自由基清除作用,且C P Ｇ７０的清除能力略高于其他组分.由图４(c)可得出,金瓜多糖的还原能力低于V C ,随着多糖质量浓度的增加,其相应的还原力逐渐增加,但不同醇沉组分还原力不同,C P Ｇ７０的还原力高于其他组分,当多糖质量浓度为０．９m g /m L 时,还原力表现为C P Ｇ７０＞C P Ｇ６０＞C P Ｇ８０＞C P Ｇ４０.这与王佳等[２１]报道指出的不同体积分数乙醇(３０％,５０％,７０％,９０％)分级沉淀得到虎杖多糖(P C P Ｇ３０㊁P C P Ｇ５０㊁P C P Ｇ７０㊁P C P Ｇ９０)中P C P Ｇ７０还原力最强的结果相似.从图４(d )可以看出,４种多糖和V C 清除超氧阴离子自由基能力具有浓度依赖性,且清除作用大小为:V C ＞C P Ｇ７０＞C P Ｇ８０＞C P Ｇ４０＞C P Ｇ６０,V C 清除超氧阴离子自由基能力显著高于各组分多糖,且金瓜多糖醇沉组分间抑制作用差异不显著.多糖的分子量和多糖理化性质是影响多糖抗氧化活性的重要因素,研究[２２]表明,低分子量的多糖具有更好的抗氧化活性;也有研究[２３]证实,糖醛酸含量越高的多糖表现出越强的抗氧化活性,由此得出金瓜多糖C P Ｇ７０较强的抗氧化性与其分子量和糖醛酸含量密切相关,但可能还受多糖结构和构象的影响,这有待后续的深入研究.综合以上抗氧化性指标可知,金瓜多糖具有较好的清除D P P H 自由基能力和还原能力,以及一定的清除羟自由基及超氧阴离子自由基的能力.通过对比发现,金瓜多糖的抗氧化性高于南瓜多糖,金瓜多糖(C P Ｇ７０)质量浓度为０．９m g /m L 时,D P P H 自由基清除率为７６．４７％,而南瓜纯化组分S L W P P Ｇ３质量浓度为１．０m g/m L 时,８６１营养与活性N U T R I T I O N &A C T I V I T Y 总第２６１期|２０２３年７月|Copyright ©博看网. All Rights Reserved.图４㊀多糖的抗氧化能力F i g u r e ４㊀A n t i o x i d a n t c a p a c i t y o f p o l ys a c c h a r i d e D P P H 自由基清除率为４３．７％[２４].同时,金瓜清除超氧阴离子自由基能力[２５]及还原力[２６]也高于南瓜多糖.说明金瓜多糖具有良好的抗氧化活性,可作为一种天然的抗氧化剂.２．６㊀多糖的降血糖活性如图５所示,各组分多糖在试验浓度范围内对αＧ葡萄糖苷酶㊁αＧ淀粉酶均有显著的抑制作用(P ＜０．０５),且随着乙醇体积分数的增加,抑制能力增强,即C P Ｇ８０＞C P Ｇ７０＞C P Ｇ６０＞C P Ｇ４０,但阿卡波糖的降血糖作用优于金瓜多糖.此外,在试验浓度范围内,种多糖组分对αＧ葡萄糖苷酶的抑制作用优于αＧ淀粉酶.通过比较得出:当多糖质量浓度为２m g/m L 时,C P Ｇ８０的αＧ葡萄糖苷酶和αＧ淀粉酶抑制率分别为４７．１１％,４４．０２％,而南瓜多糖对αＧ葡萄糖苷酶和αＧ淀粉酶抑制率分别为１７．８％,３０．４％,证实金瓜多糖的降血糖活性优于南瓜多糖的降血糖活性[４].魏鑫悦等[１５]研究证实,多糖的降血糖活性与其分子量相关,在合适的范围内,分子量越低的多糖组分对αＧ葡萄糖苷酶和αＧ淀粉酶抑制活性的抑制效果越高,这与C P 具有较小分子量且具有较高的降血糖活性结果一图５㊀多糖的降血糖能力F i g u r e ５㊀H y p o g l y c e m i c e f f e c t o f p o l ys a c c h a r i d e ９６１|V o l ．３９,N o ．７陈冰洁等:金瓜多糖不同分级组分的抗氧化和降血糖活性Copyright ©博看网. All Rights Reserved.致.同时,有研究[２７]证明,多糖抑制αＧ葡萄糖苷酶的活性与多糖的组成有关,当多糖主要单糖组成由G a l㊁G l c㊁M a n构成时,具有较强的αＧ葡萄糖苷酶抑制活性.试验中C PＧ８０的G a l㊁G l c和M a n所占比例高于其他组分,因此对αＧ葡萄糖苷酶的抑制活性最强.３㊀结论试验研究了不同体积分数乙醇沉淀对金瓜多糖理化性质㊁结构和活性的影响,发现随着乙醇体积分数的增加,多糖的总糖含量升高,糖醛酸含量降低;不同醇沉组分的分子量不同,单糖组成(组成比例存在差异)及所含基团相同;金瓜多糖组分C PＧ７０具有较好的抗氧化作用,金瓜多糖组分C PＧ８０具有较好的降血糖作用.金瓜多糖优良的抗氧化和降血糖活性有助于其在医药㊁保健品及化妆品中发挥作用,筛选出活性较高的组分.研究对多糖的理化性质㊁抗氧化和降血糖活性进行了分析,但是对其结构表征较少,后续研究可在多糖分离纯化的基础上采用核磁㊁甲基化㊁圆二色谱技术等对多糖结构进行分析.同时,可以通过细胞及动物模型深入研究金瓜多糖的抗氧化及降血糖的作用机理.参考文献[1]刘晨霞,乔勇进,王晓,等.崇明金瓜贮藏保鲜技术研究进展[J].农产品加工,2020(3):69Ｇ72,78.LIU C X,QIAO Y J,WANG X,et al.Advances in research on quality changes and storage and preservation techniques of postharvest Chongming Goldenmelon[J].Farm Products Processing, 2020(3):69Ｇ72,78.[2]沙勤,朱爱萍,乔勇进,等.金瓜果实贮藏特性评价指标的确定与应用[J].中国瓜菜,2020(6):46Ｇ49.SHA Q,ZHU A P,QIAO Y J,et al.Determination and application of evaluation indexes for storage characteristics of goldenＧmelon[J]. 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南瓜多糖制剂的制备及其降糖作用的研究陈立江;焉喜臣;刘宇;李丽;王金晶;张文君【摘要】目的:观察南瓜多糖、南瓜多糖口服液和颗粒剂对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的降糖作用.方法:采用水提醇沉法提取南瓜多糖,苯酚一硫酸法测定多糖含量；制备南瓜多糖口服液和颗粒剂；建立链脲佐菌素诱导的糖尿病模型,灌胃给药21 d 后观察各组的降糖效果.结果:各给药组给药后与给药前相比血糖下降明显.结论:南瓜多糖、南瓜多糖口服液和颗粒剂对糖尿病大鼠有降糖作用.【期刊名称】《辽宁大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(040)003【总页数】6页(P266-271)【关键词】南瓜多糖;南瓜多糖口服液;南瓜多糖颗粒剂;链脲佐菌素;降糖【作者】陈立江;焉喜臣;刘宇;李丽;王金晶;张文君【作者单位】辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036【正文语种】中文【中图分类】R9650 引言糖尿病(diabetes mellitus,DM)是由于体内胰岛素绝对或相对分泌不足而引起的，以糖、脂肪、蛋白质等代谢紊乱为主要特征的一种内分泌疾病.临床表现为“三多一少”，即进食、饮水和尿量增多，体重减轻.糖尿病可引发多种并发症，严重危害人类健康，且发病率有逐步上升趋势[1].糖尿病是一种终身性疾病，无法根治，需长期坚持治疗.而目前糖尿病临床治疗药物主要有胰岛素、磺酰脲类和双胍类药物，这些药物都有一定的副作用[2，3]，如导致低血糖、长期使用引起并发症等.因此研发高效低毒、患者容易接受的药物，将会有非常广泛的市场前景.南瓜为葫芦科植物.南瓜的果实，富含多种氨基酸、蛋白质、多糖、维生素、淀粉、纤维素及微量元素等，具有较高的食用价值[4，5].南瓜具有降血糖、降血脂、防治癌症[6]、解毒和保肝肾等功效.南瓜多糖(pumpkin polysaccharide，PP)是南瓜中主要的降糖活性成分.实验表明，南瓜多糖具有较好的降糖作用[7～11].将南瓜多糖制备成有效成份稳定、质量标准统一、口感好、便于服用携带、便于储存的口服液和颗粒剂，为南瓜多糖的进一步开发利用提供理论依据.链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)是一种DNA烷基化试剂，具有升血糖的副作用[12]，对实验动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用[13]，能诱发动物产生糖尿病.本文通过建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型，观察南瓜多糖口服液和颗粒剂对糖尿病大鼠血糖的影响.1 材料与方法1.1 材料与试剂成熟南瓜(市场上购买)；链脲佐菌素(上海华蓝化学科技有限公司)；盐酸二甲双胍肠溶片(贵州天安药业股份有限公司).葡萄糖(分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)；苯酚(分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)；浓硫酸(分析纯，沈阳经济技术开发区试剂厂)；无水乙醇(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)；甘露醇(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)；可溶性淀粉(分析纯，天津市博迪化工有限公司)；羧甲基纤维素钠(分析纯，沈阳化学试剂厂).1.2 仪器与设备RE52CS旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；UV-2550紫外/可见分光光度计(日本岛津仪器公司)；FD-80真空冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司)；迈瑞BS-380全自动生化分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司).1.3 受试动物SD大鼠，雄性，体重170～200 g，由沈阳市沈河区龙元经济动物养殖场提供，合格证号：SCXK(辽)2010-0001.1.4 实验方法1.4.1 南瓜多糖的制备[14]将成熟的南瓜洗净，去表皮、籽、瓤后切成薄片.烘干粉碎后，加入3倍量的水，热水浸提两次，每次4 h，过滤，合并滤液，将滤液浓缩至约原体积的1/3，加95%乙醇醇沉，低温过夜，离心得到沉淀，少量水复溶，加95%乙醇进行第二次醇沉，离心，冷冻干燥得到疏松多孔略带淡黄色的固体，即为南瓜多糖.1.4.2 南瓜多糖含量测定多糖含量的测定采用苯酚-硫酸(phenol-sulfuric acid)法[15，16].此法简单、显色稳定、灵敏度高、重现性好.因此应用苯酚-硫酸法测定南瓜多糖含量具有一定的参考价值[17].1.4.2.1 标准曲线绘制精密称取烘干(105 ℃)至恒重的无水葡萄糖100 mg于100 mL容量瓶中，加水至刻度，分别精密量取0.1 mL，0.2 mL，0.3 mL，0.4 mL，0.5 mL于10 mL容量瓶中，加水至刻度，各取2mL加入6%苯酚1.0 mL及浓H2SO4 5.0 mL，振荡摇匀，沸水浴中加热15 min，冷却至室温后于490 nm波长处测吸光度A，以2.0 mL的水按同样显色操作为空白，以对照品溶液浓度为横坐标X，吸光度测定值为纵坐标Y，做标准曲线，得标准曲线方程为Y=0.012X+0.068 4，r=0.999 6，在10～50 μg/mL范围内线性关系良好.图1 苯酚-硫酸法的标准曲线1.4.2.2 方法学考察(1)精密度试验精密配制高、中、低三种浓度的样品溶液，按标准曲线项下方法操作测定吸光度，重复5次，计算日内、日间精密度均小于3%，表明本方法精密度良好.(2)重复性试验精密配制已知浓度的样品溶液6份，按标准曲线项下方法操作测定吸光度，计算相对标准偏差为1.409%，表明本方法重复性较好.(3)稳定性试验精密配制已知浓度的样品溶液，按标准曲线项下方法操作测定其吸光度，每隔30 min测1次吸光度，一共测定6次，计算相对标准偏差为0.815%.表明样品溶液在3 h内稳定.1.4.2.3 南瓜多糖含量测定精密称取南瓜多糖200 mg置于100 mL容量瓶中，加入20 mL水超声溶解，然后加入80 mL无水乙醇醇沉，超声1 h，冷却至室温后过滤，残渣用80%乙醇洗涤2～3次，用少量沸水将滤渣洗入原容量瓶，加水定容到100 mL.从上述溶液中精密量取2 mL溶液定容至50 mL，作为供试液.精密量取供试液2 mL，按1.4.2.1方法操作，并按标准曲线计算南瓜多糖含量.测得的多糖含量为50%～60%.1.4.3 南瓜多糖口服液和颗粒剂的制备口服液制备：羧甲基纤维素钠在热水和冷水中溶解度均较好，安全可靠，可作为食品的稳定剂、增稠剂.加入适量的羧甲基纤维素钠可明显提高南瓜多糖口服液的稳定性.精确称取羧甲基纤维素钠4 g，加少量蒸馏水.待其自然膨胀溶解后，与南瓜多糖40 g、山梨酸钾2 g混合，加蒸馏水超声溶解，最后补水至1 000 mL，搅拌混匀，玻璃瓶灌装，高温灭菌，冷却即得南瓜多糖口服液.颗粒剂制备：南瓜多糖粘度大、吸湿性强，制粒困难，所以考虑加入填充剂.甘露醇溶解性好、抗湿性好但可压性差、价格稍贵；可溶性淀粉价格低廉、性质稳定但溶解度差.综合考虑采用混合辅料以便取长补短，共同做为填充剂，制备多糖颗粒剂.将南瓜多糖、甘露醇、可溶性淀粉研磨成细粉，过100目筛备用.精确称取南瓜多糖30 g，甘露醇40 g，可溶性淀粉30 g，充分混匀，75%乙醇制软材，20目制粒，60 ℃干燥1 h，整粒，筛除细粉，即得南瓜多糖颗粒.1.4.4 南瓜多糖口服液和颗粒剂的主要质量指标的测定方法1.4.4.1 口服液主要质量指标的测定方法(1)南瓜多糖口服液的含量测定精密量取口服液10 mL，溶于10 mL蒸馏水中，超声溶解30 min，过滤，作为储备液.精密量取储备液1 mL置于10 mL离心管中，加入5 mL无水乙醇，摇匀，静置5 min，4 000 r/min离心10 min，倾去上层液体，沉淀用蒸馏水溶解并定容至50 mL容量瓶中，作为供试液.精确吸取2 mL供试液，按1.4.2.1方法操作，按照标准曲线计算南瓜多糖口服液中多糖的含量.(2)菌落总数的测定：GB 47892-2010；大肠菌群的测定：GB 47893-2010；致病菌的测定：SN/T1869-2007.1.4.4.2 颗粒剂主要质量指标的测定方法(1)南瓜多糖颗粒剂的含量测定精确称取南瓜多糖颗粒500 mg，溶于50 mL蒸馏水中，超声溶解30 min，过滤，作为储备液.精密量取储备液1 mL置于10 mL离心管中，加入5 mL无水乙醇，摇匀，静置5 min，4 000 r/min离心10 min，倾去上层液体，沉淀用蒸馏水溶解并定容至50 mL容量瓶中，作为供试液.精确吸取2 mL供试液，按1.4.2.1方法操作，按照标准曲线计算南瓜多糖颗粒剂中多糖的含量.(2)溶化性试验称取颗粒10 g，加热水200 mL，搅拌5 min后观察颗粒溶解情况.(3)粒度试验：称取颗粒10 g置于药筛内过筛，过筛时，保持水平状态过筛，左右往返边筛动边轻叩3 min，不能通过1号筛(10目)和能通过5号筛(80目)的颗粒不得超过总颗粒质量的15%.(4)灰分测定试验称取颗粒3 g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，至完全炭化时，逐渐升高温度至500 ℃～600 ℃，使完全灰化并至恒重.根据残渣重量，计算颗粒的总灰分.(5)水分测定试验称取颗粒2 g置于干燥至恒重的称量瓶中，厚度不超过5 mm，精密称定，打开瓶盖在105 ℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30 min，精密称定，再在上述温度干燥1 h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止，两次干燥称重的差值与初始颗粒的重量比即为含水量.根据减失的重量，计算供试品中含水量(%)，不得超过6%.1.4.5 南瓜多糖的降糖实验1.4.5.1 动物分组及模型制备大鼠适应性喂养1 w后，禁食24 h(禁食不禁水)，连续两天腹腔注射链脲佐菌素55 mg/kg.注射后2 h喂以6%的糖水，72 h后测空腹血糖值.把血糖值大于11.0 mmol/L大鼠定为糖尿病大鼠[18,19].将50只糖尿病大鼠按血糖值随机分为5组，每组10只，分别为：模型对照组，阳性对照组，南瓜多糖组，南瓜多糖口服液组，南瓜多糖颗粒剂组.模型对照组给予等体积的生理盐水，阳性对照组给予二甲双胍(剂量为280 mg/kg)，给药组分别给予南瓜多糖、南瓜多糖口服液，南瓜多糖颗粒剂(剂量为280 mg/kg).造模成功后1 w灌胃给药.每组灌胃给药21 d，一日两次，每次2 mL.每2 d称体重一次，及时调整灌胃剂量.1.4.5.2 检测指标分别于第11、21 d，给药后7 h测定血糖值.每日观察动物体重、进食、饮水、尿量、皮毛等情况.1.4.5.3 血糖测定方法采用眼眶取血，37 ℃恒温放置30 min，4 000 r/min离心20 min，取上层血清，采用全自动生化分析仪测定血糖值.1.4.5.4 统计方法采用PASW Statistics 18.0统计软件进行T检验.各组数据以(x±s)表示.P<0.05为差异有统计学意义.2 结果与分析2.1 口服液的主要质量指标2.1.1 感官指标色泽：淡黄色，均匀一致；气味：具有南瓜特有的芳香；滋味：入口微甜，无异味；组织状态：半透明，无杂质.2.1.2 理化指标南瓜多糖含量≥32.20 mg/mL；pH值5.0～6.0；重金属含量及农药残留均符合国家卫生标准.2.1.3 微生物指标细菌总数≤100 CFU/mL；大肠菌群≤40 CFU/mL；致病菌：不得检出.2.2 颗粒剂的主要质量指标南瓜多糖颗粒剂中南瓜多糖的含量：18.79%.溶化性试验：随着搅拌，颗粒逐渐崩解.溶解时间1 min左右，最终得到澄清透明的淡黄色溶液.粒度试验：不能通过1号筛(10目)和能通过5号筛(80目)的颗粒质量为0.873g，占总颗粒重的8.73%，符合要求.灰分测定试验：最终得到残渣质量为0.096g，颗粒的总灰分为3.2%，符合要求.水分测定试验：两次干燥称重的差值为0.048 g，含水量为2.4%，符合要求.2.3 南瓜多糖对STZ诱导的糖尿病大鼠血糖的影响给药21 d后，模型对照组的血糖仍处于较高的水平.给药后与给药前相比血糖下降明显(P<0.05)；给药组中，南瓜多糖组、口服液组和颗粒剂组降糖率分别为43.53%、44.97%和46.20%.南瓜多糖组与制剂组相比无显著差异.实验表明，辅料对南瓜多糖的降糖作用影响较小.南瓜多糖、南瓜多糖口服液和南瓜多糖颗粒剂对糖尿病大鼠具有降糖作用.结果见表1.2.4 一般情况观察糖尿病大鼠一般表现为多饮、多食、多尿、体重下降、体毛松散无光泽.给药21 d 后，给药组精神逐渐好转，进食、饮水、尿量均减少、体重较造模初期有所上升.而模型对照组的糖尿病体征没有明显好转.表1 南瓜多糖对STZ诱导的糖尿病大鼠血糖的影响组别动物数存活动物数平均血糖值/(mmol/L)第0d第11d第21d降糖率/(%)模型对照组101016.85±5.7916.96±2.6819.61±0.59-16.38阳性对照组101022.33±5.295.43±3.18*4.89±2.13*78.10南瓜多糖组101020.49±3.6411.98±1.90*11.57±5.27*43.53口服液组101018.90±3.1113.94±3.98*10.41±5.71*44.97颗粒剂组101018.81±2.4613.82±3.80*10.12±4.45*46.20注：*P<0.05，与给药前相比较.3 讨论南瓜资源丰富且价廉，具有极高的营养价值.南瓜多糖具有明显的降糖作用.因此，具有良好的发展前景.然而，目前进行的研究大多是南瓜多糖的活性研究，已上市的南瓜产品多是南瓜粉、南瓜籽、南瓜汁等粗加工类保健食品，南瓜多糖剂型的研究相对较少，更没有上市的剂型.本文将南瓜中的降糖活性成分南瓜多糖提取出来并将其制成单一成分的口服液与颗粒剂，具有口感好、无不良气味、易于服用、携带方便、质量稳定、毒副作用小等优点，提高了患者的依从性.药理实验结果表明南瓜多糖口服液和颗粒剂对STZ糖尿病大鼠具有明显的降糖作用，为南瓜多糖的进一步临床应用提供指导，并为预防及治疗糖尿病提供了可靠的途径.STZ是一种常用的诱导糖尿病模型的药物.其易见光分解，因此需避光操作.pH为4.2～4.5时，STZ活性最好.本文所用柠檬酸缓冲液pH值为4.31.为了提高造模成功率，本文采取多次小剂量腹腔注射STZ的方法，最终可形成稳定持久的糖尿病.多次小剂量注射STZ与一次性大剂量注射STZ相比，不仅可以提高造模成功率，还可以明显地降低实验动物的死亡率.在分离血清的过程中，比较容易出现溶血现象.溶血对血液标本的检测会产生不同程度的影响，使检验结果的准确性大幅降低.本文采用37 ℃恒温放置30 min，4000 r/min离心20 min，可大大降低溶血概率，进而提高检测的准确性.本文中，同剂量的二甲双胍与南瓜多糖相比，降糖效果更为显著，但是南瓜多糖副作用更低，服用更安全，患者更放心.给药组大鼠的血糖值并没有降到正常血糖范围，与大部分研究相似，所以可以进行增大南瓜多糖剂量的试验，以确定其疗效与剂量的关系，进而得到南瓜多糖的最佳给药剂量.另外，南瓜多糖的降糖机理尚不明确，有待于进一步研究.还需进一步探讨南瓜多糖结构与降糖作用的关系.参考文献：[1] 戴建峰,陈美娟.糖尿病的中药治疗进展[J].医学综述,2008,14(18):2847-2849.[2] 肖华凤,宋黎军.常用口服降糖药的不良反应分析[J].中国医药导报,2006,3(24):14-15.[3] 胡万华.要重视降糖药的副作用[J].中国乡村医药杂志,2002,9(11):6-7.[4] 范文秀,李新峥.南瓜营养成分分析及功能特性的研究[J].广东微量元素科学,2005,12(2):38-41.[5] Jacobo-valenzuela 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