(完整版)白喉棒状杆菌及检验

白喉棒状杆菌（corynebacterium diphtheriae）1、★生物学特点：◆细长微弯，末端膨大，排列呈V 、L等，G+，无荚膜，无鞭毛，无芽孢。

◆异染颗粒：储存的核糖核酸和多磷酸盐颗粒（鉴定）◆吕氏培养基：生长迅速，细小灰白菌落，异染颗粒(metachromatic granules)，亚碲酸钾平板，黑色菌落（鉴定）2、致病性和免疫性：主要致病物质：白喉毒素。

◆毒性强，抑制细胞蛋白质合成，引起组织坏死和病变。

◆由β-棒状杆菌噬菌体毒素基因（tox+）编码，因此，只有携带β-棒状杆菌噬菌体毒素基因的溶源性白喉棒状杆菌才能产生白喉毒素。

◆tox+基因的表达和菌体内无机铁的含量密切相关，铁含量适量时，tox+基因表达，否则不表达。

◆tox+基因可经过细菌遗传和变异传给子代，丢失、获得。

3、白喉毒素的致病机制：。

4、传染：◆飞沫或污染物经过呼吸道传播，易感者：1~5岁的儿童。

◆临床表现：引起局部炎症：假膜；全身中毒症状:心肌炎、软腭麻痹等。

◆所致疾病：急性呼吸道传染病白喉，乙类传染病。

5、免疫性：接种疫苗、隐性感染、愈后→抗病毒免疫6、微生物学检查方法：采集标本：用绵拭子在假膜边缘取材；涂片镜检：典型的白喉棒状杆菌及其异染颗粒；分离培养：吕氏血清斜面：37度培养18小时可见1mm大小、湿润、灰白色的菌落，在亚碲酸钾培养基上培养一个小时，可见1~3mm大小的黑色菌落。

◆毒力鉴定:豚鼠试验，协同凝集试验，Elek平板毒力试验7、白喉的防止原则：白百破三联疫苗。

炭疽芽孢杆菌◆致病菌中最大的革兰氏阳性菌。

1.Shape and structure：◆革兰氏阳性菌（gram positive）◆似竹节状长链◆芽孢位于菌体中央◆形成荚膜是毒力象征◆无鞭毛，无运动2.培养特性：◆需氧或者兼性厌氧，不溶血◆含NaHCO3的血琼脂平板：有毒株会形成粘液性菌落，无毒株会形成粗糙型菌落。

◆在含有0.05U/ml的青霉素液体培养基中培养，使菌体呈串珠状，有鉴别意义。

一、实验目的1. 熟悉白喉棒杆菌的生物学特性；2. 掌握白喉棒杆菌的分离和鉴定方法；3. 提高实验室操作技能，培养严谨的科学态度。

二、实验原理白喉棒杆菌（Corynebacterium diphtheriae）是一种革兰氏阳性杆菌，是白喉的病原菌。

该菌具有特殊的棒状形态，常呈V字形或L字形排列，无鞭毛、无芽孢。

白喉棒杆菌能在亚碲酸钾培养基上形成黑色菌落，对青霉素和红霉素敏感。

本实验通过分离、培养和鉴定白喉棒杆菌，以验证其生物学特性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：白喉棒杆菌标准菌株、亚碲酸钾培养基、营养琼脂培养基、生理盐水、无菌棉签、无菌吸管、酒精灯、显微镜、培养箱等。

2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、电子天平、恒温培养箱、显微镜等。

四、实验方法1. 分离培养（1）将白喉棒杆菌标准菌株接种于营养琼脂培养基，37℃培养24小时。

（2）取适量菌液，用无菌生理盐水稀释至10^-6。

（3）取稀释液0.1ml接种于亚碲酸钾培养基，37℃培养24小时。

2. 鉴定（1）观察菌落形态：在亚碲酸钾培养基上，白喉棒杆菌菌落呈黑色，周围有白色沉淀。

（2）革兰氏染色：取菌落涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察菌体形态。

（3）生化试验：取菌落接种于葡萄糖发酵培养基，观察菌落是否产生气体。

五、实验结果与分析1. 分离培养在亚碲酸钾培养基上，观察到菌落呈黑色，周围有白色沉淀，符合白喉棒杆菌的菌落特征。

2. 鉴定（1）革兰氏染色：观察到菌体呈棒状，两端膨大，排列不规则，符合白喉棒杆菌的形态特征。

（2）生化试验：菌落未产生气体，符合白喉棒杆菌的生化特征。

综上所述，实验结果表明，分离得到的菌落为白喉棒杆菌。

六、实验结论通过本实验，成功分离和鉴定出白喉棒杆菌。

实验过程中，我们掌握了白喉棒杆菌的分离和鉴定方法，熟悉了其生物学特性。

同时，提高了实验室操作技能，培养了严谨的科学态度。

七、实验讨论1. 白喉棒杆菌是一种常见的病原菌，了解其生物学特性对预防和治疗白喉具有重要意义。

需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点总结一、棒状杆菌属G+，杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状。

着色不匀，有异染颗粒。

无鞭毛、无荚膜、无芽胞。

需氧，营养要求较高。

引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。

（一）白喉棒状杆菌1.生物学性状（1）形态与染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。

细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。

无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。

异染颗粒：Neisser（奈瑟）染色；Albert（阿培特）染色。

这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。

异染颗粒（浓染颗粒）Neisser（奈瑟）染色：菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；Albert（阿培特）染色：菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。

（2）培养特性：在普通培养基上生长不良，形态不典型。

1）血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。

2）吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，形成灰白色、湿润、S型菌落。

涂片染色形态典型，异染颗粒明显。

3）亚碲酸钾血琼脂：本菌能吸收亚碲酸盐，并使其还原为元素碲，使菌落呈黑色。

4）液体培养基。

（3）生化反应：触酶试验阳性，氧化酶试验阴性。

分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖，产酸不产气。

不分解乳糖，极少分解蔗糖。

能还原硝酸盐，不液化明胶，不产生吲哚，不分解尿素。

据亚碲酸钾血琼脂培养基、肉汤培养基的生长特点及生化反应，可将本菌分为轻、中、重三型。

在我国以轻型多见。

分型与所致疾病的严重程度无关，可用于流行病学调查。

2.致病性致病物质：白喉棒状杆菌引起白喉，多在秋冬季节流行。

以咽白喉最常见，喉白喉及鼻白喉次之，偶亦引起眼结膜、外耳道、阴道及皮肤的局部病变。

本菌一般不侵入血流，但其产生的大量外毒素可吸收入血，引起毒血症。

毒素能与敏感的心肌、肝、肾、肾上腺等组织细胞及外周神经，尤其与支配咽肌和腭肌的神经结合，引起细胞变性、坏死、内脏出血和神经麻痹等严重损害，是白喉晚期死亡的主要原因。

第十八章需氧 / 兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验本章内容一、棒状杆菌属（一）白喉棒状杆菌（二）其他棒状杆菌（类白喉棒状杆菌）二、芽胞杆菌属（一）炭疽芽胞杆菌（二）蜡样芽胞杆菌三、产单核李斯特菌四、丹毒丝菌属（红斑丹毒丝菌）五、阴道加特纳菌标题记忆图像记忆对比记忆棒状杆菌属· G+杆菌，菌体一端或两端膨大呈棒状，故名棒状杆菌。

·着色不匀，有异染颗粒。

·无鞭毛、无荚膜、无芽胞。

· 需氧，营养要求较高。

·能分解一些糖类，产酸不产气。

·种类较多，有白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌等。

引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。

白喉棒状杆菌——生物学特性·形态与结构形态：细长微弯，一端或两端膨大。

排列：散在 L、V、 Y 字形及不规则栅栏状。

特殊结构：无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。

革兰染色：阳性。

亚甲蓝染色：深浅相间节段或着色较深的颗粒。

Neisser 染色：菌体染成黄褐色，颗粒染成紫黑色。

Albert 染色：菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。

·培养特性营养要求：较高。

气体环境：需氧或兼性厌氧。

温度环境： 35～37℃； pH7.2 ～ 7.8 。

菌落特征：普通培养基上生长不良，形态不典型。

吕氏血清斜面培养基：生长迅速， 10～18h 形成灰白色、湿润、S 型菌落。

异染颗粒明显。

亚碲酸钾血琼脂：菌落呈黑色。

白喉棒状杆菌——微生物检验及鉴定·标本采集：若需培养，应在使用抗生素或其他抗菌药物前用无菌长棉拭子，从可疑的伪膜边缘采集分泌物， 或采集鼻咽部或扁桃体黏膜上的分泌物。

如不能立即送检， 应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油 盐水中保存。

·形态学检查：革兰染色和异染颗粒染色（奈瑟法或阿培特法）。

镜检如见革兰阳性形态典型的棒状杆菌，在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均匀，称为异染颗粒。

白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌的鉴定程序IDENTIFICATION OF CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE , CORYNEBACTERIUM ULCERANS AND CORNYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSISISSUE NO :2 ISSUE DATE:03.02.06 ISSUED BY :Standards Unit, Evaluations andStandars LaboratoryTranslated Copy :复旦大学附属中山医院临床微生物中心本操作规程应当和Health Protection Agency的其它sop文件一起使用Email:hyacinth911@Page no: 1 of 9索引索引 (2)修订程序 (3)本文件主要内容 (4)介绍 (4)毒素特征鉴定原则1 安全事项 (6)2 目标菌株 (6)3 鉴定 (7)4 报告 (9)5 参考资料(略)ISSUE NO :2 ISSUE DATE:03.02.06 ISSUED BY :Standards Unit, Evaluations andStandars LaboratoryTranslated Copy :复旦大学附属中山医院临床微生物中心本操作规程应当和Health Protection Agency的其它sop文件一起使用Email:hyacinth911@Page no: 2 of 9修订程序本文件检索标号BSOP ID 2本文件标题白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌的鉴定程序每一标准操作程序都有一个独立的修订记录.当前本文件的修订记录列在本页. 每一份调整文件都由实验室的校对人员来更新.修订数/ 日期废弃的发行号插入的发行号页码涉及的章节修订2/03/02/2006 1.1 2 7811章节1章节3.3章节6从DH Green Book参考表格内的试验步骤增加联系方式ISSUE NO :2 ISSUE DATE:03.02.06 ISSUED BY :Standards Unit, Evaluations andStandars LaboratoryTranslated Copy :复旦大学附属中山医院临床微生物中心本操作规程应当和Health Protection Agency的其它sop文件一起使用Email:hyacinth911@Page no: 3 of 9白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌的鉴定程序文件主要内容:本sop介绍如何把咽喉、皮肤和其它部位的分离出来的棒状杆菌属鉴定到白喉棒状杆菌、溃疡棒状杆菌和假结核棒状杆菌种水平。

第十三章棒状杆菌属棒状杆菌属是放线菌（分枝杆菌属、诺卡氏菌属、棒状杆菌属）中细胞壁含短链分枝菌酸（碳原子数不同）的菌属,G+,菌体一端或两端膨大呈棒状的杆菌，无荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。

棒状杆菌种类较多(16种），包括致病的白喉杆菌，条件致病的有假白喉棒状杆菌、结膜干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌、痤疮杆菌和阴道棒状杆菌等。

第一节白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌（C. diphtheriae）俗称白喉杆菌，是引起白喉的病原菌。

一、生物学性状(一）形态染色细长稍弯,菌体一端或两端膨大呈棒状，排列不规则，常呈L、V、X、T等字形或排成栅栏状。

G+；用美兰液染色菌体着色不均匀，常呈着色深的颗粒;用奈瑟氏染色，菌体染成黄褐色，一端或二端染成兰色或深兰色颗粒,此颗粒称为异染颗粒（Metachromatic granules），主要成分是核糖核酸和多偏磷酸盐，是本菌储存的养料，是本菌形态特征之一.衰老的细菌此颗粒因被消耗而不明显，革兰染色不定。

（二）培养特性需氧或兼性厌氧,最适温度为37℃，最适PH为7。

2~7。

8，在含血液、血清或鸡蛋的培养基上生长良好。

在血板上过夜，菌落1～3mm，呈灰白色、光滑、圆形凸起。

在含有0.03%～0.04％亚碲酸钾血清培养基上生长繁殖时，能吸收碲盐,并还原为金属碲，使菌落呈黑色，为本属其他棒状杆菌共同特点.且亚碲酸钾能抑制标本中其他细菌的生长，故亚碲酸钾血琼脂平板可作为棒状选择培养基。

根据在此培养基上白喉杆菌落的特点及生化反应，可将白喉杆菌区分为重型、中间型和轻型三型,三型均可致病，病情轻重与类型无明显关系，但其分布常随地区和年份有所不同，有流行病学意义。

（三）抵抗力对湿热的抵抗力不强，对一般消毒剂敏感。

煮沸1分钟或60℃经10分钟可杀死，5%石炭酸中经1分钟死亡，但对干燥、寒冷和日光的抵抗力较其他大多数无芽胞的细菌为强，在日常物品、食品及衣服上能生存多日.对青霉素和常用广谱抗生素比较敏感。