2.3溶血性贫血的实验室检查

溶⾎性贫⾎的诊断溶⾎性贫⾎的诊断可分成两步：①⾸先明确有⽆溶⾎，应寻找红细胞破坏增加的证据；②查明溶⾎的原因，则须经过病史、症状、体征以及实验室等资料的综合分析来作判断。

⼀、病史除询问发病缓急，主要症状以及病情进程外还应着重询问以下各项：（⼀）地区性强调家庭籍贯，如地中海贫⾎多见于⼴东、⼴西及浙江等沿海地区。

（⼆）家族史近亲中如有贫⾎、黄疸、脾肿⼤者，则有先天性溶⾎性贫⾎可能。

（三）药物接触史药物可诱发免疫性溶⾎性贫⾎，氧化性药物可使不稳定⾎红蛋⽩病及G6PD缺乏症发⽣溶⾎。

（四）引起溶⾎性贫⾎的原发病史如淋巴瘤可伴有免疫性溶⾎性贫⾎。

（五）诱发因素如过劳、寒冷刺激及服蚕⾖等。

⼆、体征应注意贫⾎、黄疽、肝脾肿⼤等。

三、实验室检查检查⽬的和步骤有：（⼀）确定是否为溶⾎性贫⾎可根据红细胞破坏增加和⾻髓代偿功能增强⽽确定。

1.红细胞破坏增加的证据（1）红细胞计数下降，⼀般呈正细胞正⾊素性贫⾎。

（2）⾎清间接胆红素增多。

⾎清胆红素浓度不仅决定于溶⾎的程度，还决定于肝脏清除间接胆红素的能⼒，故黄疸为轻度或中度，⾎清胆红素⼀般在17.1-51.3ukmol/L（1-3mg/dl）左右，很少超过136.8umol/L（8mg/dl），当黄疸不显时，并不能排除溶⾎性贫⾎。

（3）尿内尿胆原的排泄量增多。

尿内尿胆原和尿胆素常增加。

在肝功能减退时，肝脏⽆能重复处理从肠内吸收来的尿胆原，尿中尿胆原也会增加，故对溶⾎性贫⾎的诊断，价值不是很⼤。

粪内尿胆原是增加的，但粪内尿胆原的定量测定现在已不在⽤作诊断⽅法之⼀。

尿内胆红素阴性，除⾮同时有阻塞性黄疸。

（4）⾎浆结合珠蛋⽩明显减少或消失。

结合珠蛋⽩是在肝脏产⽣能与⾎红蛋⽩结合的清糖蛋⽩，正常值为0.7-1.5g/L（70-150mg/dl）。

⾎管内和⾎管外溶⾎结合珠蛋⽩含量均降低。

在感染、炎症、恶性肿瘤或⽪质类固醇治疗时可以增多。

因此，在解释结果时须考虑其他因素的影响。

（5）⾎浆游离⾎红蛋⽩浓度增⾼。

溶血性贫血的实验室检查1.1原理红细胞渗透脆性试验是根据红细胞在低渗盐水溶液可逐渐胀大而破坏的原理来测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力。

红细胞的表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大(脆性减低)；反之，则抵抗力较小(脆性增加)。

1.2试剂 10g/L NaCl溶液：取分析纯氯化钠事先于100℃下烘干，再置于干燥器中冷却，准确称取1.00g置100ml容量瓶中，加适量双蒸馏水溶解后，再加双蒸馏水至刻度[1]。

1.3参考值开始溶血 4.2～4.6g/L。

完全溶血 3.2～3.4g/L。

患者与正常对照，溶血管的NaCl浓度相差0.4g/L具有诊断价值。

1.4注意事项 NaCl必须干燥，称量精确，要用前新鲜配制溶液；本试验忌用抗凝血以免影响溶液的渗透压，如需要时可用肝素按10～20IU/ml血液进行抗凝；血液与低渗盐水混匀时避免强烈振荡，以免机械性溶血，黄疸患者开始溶血管不易观察，严重贫血患者红细胞太少，皆可用等渗盐水将红细胞洗涤后再配成50%红细胞悬液进行试验。

2红细胞孵育渗透脆性试验2.1原理将血液置于37℃孵育24h，由于葡萄糖消耗，贮备的 ATP减少，需要能量的红细胞膜对阳性离子的主动传递受阻，造成钠离子在红细胞内储积，细胞膨胀，孵育渗透脆性增加。

有细胞膜缺陷及某些酶缺陷的红细胞能源限快耗尽，孵育渗透脆性明显增加。

2.2试剂10g/L缓冲液(pH7.4)：9g NaCl(AR)。

1.365g Na2HPO4(AR)。

0.184g NaH2PO4(AR)。

蒸馏水加至1 000ml。

此氯化钠磷酸盐缓冲液中氯化钠的浓度为9g/L，但其渗透压相当于10g/L氯化钠溶液[2]。

2.3操作取静脉血3ml，肝素抗凝后分为2份，1份立即试验，另1份在37℃温育24h再作试验；将10g/L氯化钠缓冲液按下表稀释成不同浓度；每管加肝素抗凝血0.05ml，轻轻颠倒混匀；放置室温(20℃左右)30min后，将各管混匀1次，1500r/min离心5min，取上清，波长540nm以8.5g/L氯化钠磷酸盐缓冲液调零，以1g/LNaCl完全溶血管的吸光度为完全溶血管A值，测定各溶血管上清液的吸光度并计算出相应的溶血度；红细胞中间脆性(MCF)，以溶血度为纵坐标、不同浓度氯化钠浓度为横坐标作溶血曲线图，在曲线上，50%溶血的氯化钠浓度为红细胞中间脆性。

溶血性贫血的实验室检查溶血性贫血是由于红细胞寿命缩短、破坏增加，超过骨髓造血的代偿能力而发生的贫血。

要准确诊断溶血性贫血，实验室检查起着至关重要的作用。

接下来，让我们详细了解一下溶血性贫血的实验室检查项目。

一、血常规检查血常规是最基本的检查之一。

在溶血性贫血患者中，通常会出现血红蛋白降低，也就是贫血的表现。

红细胞计数减少，但程度可能不如血红蛋白降低那么明显，导致红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）和红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）大多在正常范围或轻度降低。

网织红细胞计数通常会显著增高，这是因为骨髓造血功能增强，试图弥补红细胞的破坏。

此外，外周血涂片检查也很重要，可能会观察到球形红细胞增多、红细胞碎片、嗜多色性红细胞等异常形态。

二、骨髓象检查骨髓象检查可以反映骨髓的造血情况。

溶血性贫血患者的骨髓通常增生活跃，粒红比例倒置，即红细胞系增生明显活跃，以中、晚幼红细胞增生为主，粒系相对减少。

同时，还可以观察到细胞形态大致正常，可见核分裂象增多。

三、胆红素代谢检查胆红素代谢异常也是溶血性贫血的一个重要特征。

由于红细胞破坏增加，释放出大量的血红蛋白，经过代谢转化为胆红素。

血清总胆红素升高，以非结合胆红素增高为主，结合胆红素基本正常。

尿胆红素阴性，而尿胆原明显增加。

四、抗人球蛋白试验（Coombs 试验）这是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要试验。

直接抗人球蛋白试验（DAT）检测红细胞表面是否被不完全抗体或补体致敏；间接抗人球蛋白试验（IAT）检测血清中是否存在不完全抗体。

阳性结果对于自身免疫性溶血性贫血的诊断具有重要意义。

五、酸溶血试验（Ham 试验）主要用于诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）。

患者的红细胞在酸化的血清中（pH 68-70），经过 37℃孵育后会发生溶血。

六、蔗糖溶血试验同样对 PNH 有一定的诊断价值。

阳性结果提示可能存在 PNH 克隆，但特异性不如 Ham 试验。

七、蛇毒因子溶血试验也是用于诊断 PNH 的一种方法，其原理与 Ham 试验相似。

第一节：溶血性贫血的实验室检查一、红细胞破坏过多的检查1.外周血液常规红细胞计数、血红蛋白含量减低，血涂片中可见破碎红细胞、异形红细胞等。

出现典型的异形红细胞或自身凝集现象时，可提供溶血原因的线索。

2.血浆游离血红蛋白测定意义正常血浆只有微量游离血红蛋白，>40mg/L是溶血尤其是血管内溶血的重要指标，如阵发性睡眠血红蛋白尿、血型不合输血反应等。

血管外溶血，如遗传性球形细胞增多症，一般不增高。

3.血清结合珠蛋白测定（Hp）意义1.血清结合珠蛋白降低见于：⑴各种溶血性贫血，包括血管内或血管外溶血；⑵肝细胞损害、传染性单核细胞增多症、先天性无结合珠蛋白血症等。

2.血清结合珠蛋白增高见于感染、组织损伤、肝外阻塞性黄疸、恶性肿瘤等。

4.血浆高铁血红素白蛋白试验意义本试验有助于鉴别血管内或血管外溶血，阳性表示严重血管内溶血。

如阵发性睡眠性血红蛋白尿时，出现一条高铁血红素白蛋白区带，而球形细胞增多症系血管外溶血则无此区带。

5.尿液检查⑴尿胆原排出增多；⑵隐血试验阳性，这是因为当血浆游离血红蛋白显著增高，超过结合珠蛋白的量和肾小管再吸收功能时，出现的血红蛋白尿；⑶尿含铁血黄素试验呈阳性反应，是反映慢性溶血，尤其是血管内溶血。

6.红细胞寿命测定是检测溶血的可靠指标，常用51Cr、3P-DFP或二异丙基氟磷酸标记红细胞法，能反映红细胞寿命的指数。

此项测定显示红细胞寿命缩短表明有溶血。

二、红细胞代偿性增生的检查1.网织红细胞增多在5%～20%以上。

2.外周血出现幼红细胞，主要是晚幼红细胞。

由于网织红细胞及幼红细胞的出现，故可表现大红细胞增多。

3.骨髓幼红细胞显著增生，以中幼红和晚幼红细胞增生为主，粒红比例常发生倒置。

三、红细胞膜缺陷的检查1.红细胞渗透脆性试验意义1. 红细胞渗透脆性增高见于：遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多等。

2.红细胞渗透脆性减低见于：缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血等。

SOP_09-3 溶血性贫血检查标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：溶血性贫血检验。

三、操作人员：检验科授权工作人员。

四、操作步骤：1 红细胞渗透脆性试验：1.1 原理：本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力。

这种抵抗力与红细胞表面积和体积的比值有密切关系。

表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大(脆性减低)；反之，则抵抗力较小(脆性增加)。

球形细胞表面积／体积比值减少，脆性显著增加。

1.2 试剂 171mmol ／L NaCl 溶液(10g ／L)：取经1OO ℃烘干的分析纯氯化钠1000g 置100ml 容量瓶中，加适量双蒸馏水溶解后，再加双蒸馏水至刻度。

1.3 操作：(1)．分别取1Og ／L NaCl 液和蒸馏水，按下表加入小试管中。

红细胞渗透脆性试验操作表试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12NaCL(ml) 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 H 2O(ml) 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 浓度g/l6.86.46.05.6 5.24.84.44.03.63.22.8 2.4mmol 116.3 109.4 102.6 95.8 88.982.175.268.461.654.747.9 41.0(2)．将试管架带至患者面前，用配备6号针头的干燥灭菌注射器取静脉血1～1.5ml ，立即滴于各管中，每管1滴(贫血患者可加2滴)，轻轻摇匀，室温静置。

(3)．每次试验均应同时作正常对照。

1.4 结果判断：静置室温2h ，观察结果，从高浓度管开始观察，上层溶液开始出现透明红色且管底有红细胞者为开始溶血管；溶液透明红色，管底完全无红细胞者为完全溶血管。

1.5 参考值：开始溶血：4.2～4.6g ／L(71.8～78.6mmol ／L)；完全溶血：3.2～3.4g ／L(54.7～58.1mmol ／L)患者与正常对照溶血管的NaCl 浓度相差0.4g ／L 具有诊断价值。

马骢（１９５３－），女，河北人，教授，主任技师，主要从事白血病和贫血的实验室诊断和海洋微生物的研究及教学工作。

溶血是指红细胞非自然衰老而提前遭受破坏的过程。

因骨髓有相当于正常造血能力６～８倍的代偿潜力，所以发生溶血而骨髓能够代偿时，可以不出现贫血（称为溶血性疾病）。

仅当红细胞破坏多于生成导致的贫血才称为溶血性贫血。

１ 溶血性贫血的临床分类溶血性贫血分为先天性（或遗传性）和后天获得性两大类［１，２］。

（１）红细胞内部异常所致的溶血性贫血：①遗传性红细胞膜结构与功能缺陷：遗传性球形细胞增多症（ＨＳ）；遗传性棘细胞增多症等。

②遗传性红细胞内酶缺乏：葡萄糖－６－磷酸脱氢酶缺乏症（Ｇ６ＰＤ）。

③遗传性血红蛋白病：海洋性贫血。

④获得性红细胞膜锚连膜蛋白（ＧＰＩ）异常：阵发性睡眠性血红蛋白尿（ＰＮＨ）。

（２）红细胞外部因素所致的溶血性贫血：①物理与机械因素：大面积烧伤；心瓣膜钙化狭窄；心脏人工瓣膜；微血管病性溶血性贫血。

②化学因素：苯肼；砷化氢；蛇毒等。

③感染因素：疟疾（原虫）；传染性单核细胞增多症（病毒）；支原体肺炎（支原体）等。

④免疫因素：新生儿溶血性贫血；血型不符的输血反应；自身免疫性溶血性贫血（温抗体型或冷抗体型）；药物性免疫溶血性贫血（青霉素，甲基多巴）。

溶血性贫血还可基于病情、病程、病因、病理机制、溶血部位进行分类，如根据溶血发生的主要场所分为：（１）血管内溶血（急性溶血）：指红细胞在循环血中遭到破坏。

（２）血管外溶血（慢性溶血）：红细胞在单核－巨噬细胞系统（主要是脾脏）所吞噬破坏。

２ 溶血性贫血的实验室检查溶血性贫血的病因十分复杂，临床表现和实验溶血性贫血的实验检查及进展Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ａｎｄ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｔｅｘｔ　ｏｎ　Ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ　Ａｎｅｍｉａ马骢（海军总医院，北京，１０００３７）ＭＡ　Ｃｏｎｇ室检查各有不同，可先进行有共性的项目有以下几种。

２．１　确定贫血红细胞计数、血红蛋白浓度和红细胞压积测定，通过三项指标即可判定是否有贫血。

溶血性贫血的实验室检测（二）引言：溶血性贫血是一种由于红细胞溶解增加引起的血液疾病。

实验室检测在诊断和评估溶血性贫血的病因时起着重要作用。

本文将介绍溶血性贫血的实验室检测方法，以便提供更准确的诊断和治疗指导。

正文：一、红细胞指标的测定1. 血红蛋白测定：通过测定全血或血清中的红细胞血红蛋白含量，评估溶血性贫血的程度。

2. 红细胞计数：通过计算单位体积内红细胞的数量，确定溶血性贫血患者红细胞的减少情况。

3. 红细胞体积分布宽度测定：反映红细胞体积的分布情况，帮助鉴别溶血性贫血与其他疾病。

二、血清标志物的测定1. 胆红素测定：通过测定血清中的胆红素水平来评估溶血性贫血的程度，可区分溶血性贫血的类型。

2. 血清乳酸脱氢酶测定：高乳酸脱氢酶水平提示溶血性贫血进展较严重，可协助评估疾病的严重程度。

3. 血清间接胆红素测定：通过测定血清中的间接胆红素水平，推测血红蛋白溶解释放的胆红素量。

三、血型与抗人球蛋白试验1. ABO血型与Rh(D)血型测定：确定患者血型，为输血提供参考依据。

2. 抗人球蛋白试验：通过检测患者血清对人类红细胞的球蛋白反应，判断溶血性贫血存在的机制。

四、外周血涂片与骨髓涂片检查1. 外周血涂片检查：观察红细胞形态，鉴别溶血性贫血与其他类型贫血的区别。

2. 骨髓涂片检查：观察骨髓中红细胞的生成情况和异常，评估溶血性贫血的病因。

五、其他辅助检查方法1. 血培养：筛查溶血性贫血与感染相关的细菌或寄生虫。

2. 自身抗体检测：检测患者血清中的自身抗体，帮助诊断自身免疫性溶血性贫血。

总结：溶血性贫血的实验室检测方法包括红细胞指标测定、血清标志物测定、血型与抗人球蛋白试验、外周血涂片与骨髓涂片检查以及其他辅助检查方法。

通过这些检测手段的组合使用，能够准确诊断溶血性贫血的类型和病因，为治疗方案的选择和疾病的监测提供依据。

溶血性贫血溶血危象（临床危象实用总结⑩完）病生理基础知识：①血红蛋白（血色素）：红细胞的90%由血红蛋白组成，血红蛋白由一个珠蛋白+四个血红素组成，每个血红素由四个吡咯类亚基组成一个环，环中心为一个亚铁离子(故血红素又称亚铁原卟啉)，亚铁离子在氧分压高时与氧结合，氧分压低时和氧解离释放氧。

②游离胆红素（即非结合胆红素或间接胆红素）生成：由血红素在单核巨噬系统代谢产生，血红素—（催化酶）—胆绿素—（还原酶）—胆红素。

③游离胆红素的代谢：衰老红细胞被单核巨噬细胞（外周血中单核细胞/组织内巨噬细胞）吞噬代谢生成胆红素（非结合胆红素/游离胆红素/间接胆红素）------》肝脏内与葡萄糖醛酸结合形成直接胆红素/结合胆红素------》胆汁排泄-----》肠道细菌作用下还原为无色的尿胆原-----》随粪便排出或少量再入血进入肝脏变为结合胆红素形成肝肠循环（如果肝功能障碍随尿排出尿胆原）。

④胆红素异常的原因：胆道梗阻时排出受阻结合胆红素增高，结合胆红素是水溶性的可以通过肾小球滤过从尿中排泄；肝功能异常或者红细胞分解增多时间接胆红素增高。

一：病因：（溶血实质就是红细胞被破坏）红细胞本身内在缺陷和红细胞外部因素异常：1.红细胞内在缺陷（多为遗传性或基因突变）：红细胞膜缺陷、红细胞酶缺陷、珠蛋白异常等。

2.红细胞外部因素异常（免疫性、非免疫性）（1）免疫因素：自身免疫性溶血性贫血、新生儿溶血、血型不合的输血、药物性溶贫等。

抗原抗体介导红细胞破坏，抗体IgG与IgM 通过不同机制介导溶血，据抗体最佳活动温度分为温抗体型抗体和冷抗体型抗体。

（2）非免疫性因素：①物理机械因素：人工心脏瓣膜、心瓣膜钙化狭窄、弥散性血管内凝血（DIC）、血栓性血小板减少性紫癜（TTP）；行军性血红蛋白尿、大面积烧伤等；②化学因素：蛇毒、毒蕈、苯肼等；③感染因素：疟疾、支原体肺炎、传染性单核细胞增多症等。

二：发病机制：红细胞破坏可发生在血循环中或单核-巨噬细胞系统，分别称为血管内溶血和血管外溶血。