64-0015 肝素钠抗FIIa效价检测EP方法与USP方法对比验证方案0000

低分子肝素药物的质量标准综述作者：张利赟来源：《科技传播》2010年第16期摘要本文通过对国内外低分子肝素质量标准、生产工艺、结构特点、药理作用等比较和总结,为我国低分子肝素产业的进一步发展提供参考。

关键词低分子肝素;质量标准;生产工艺;结构;药理中图分类号R9 文献标识码A 文章编号 1674-6708(2010)25-0091-02肝素是临床常用的抗凝血药,但在临床使用中暴露出很多缺点,如:剂量个体差异大,自发性出血倾向,停药后血栓易复发等,还有可引起血小板减少症,长期应用可产生暂时性脱发、骨质疏松和自发性骨折等不良反应[1]。

随着对肝素的深入研究,特别是对以往认为无活性的低分子组分对Xa因子和凝血酶(thrombin)的作用差异的认识,为开发LMWH的提供了理论依据,20世纪70年代末,LMWH进入临床。

低分子量肝素(low-molecular-weight heparin,LMWH)是未分级肝素(unfractionated heparin,UFH)中具有较低分子量的组分或片段,具有与UFH相同的母体结构。

UFH是一种高度硫酸化的糖胺聚糖,分子量范围为3 000~30 000。

LMWH是近20年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物,是采用适当方法将肝素分级或降解得到的具有较低分子量的肝素组分或片段3 000~8 000。

在临床使用中,与肝素比较,LMWH抗血栓作用强,抗凝血作用弱于肝素,且具有皮下注射吸收良好、生物利用度高、体内半衰期长、出血倾向小,按体重给药,抗凝效果可以预测等优点[2],目前已逐步取代肝素应用于临床。

国外已有超低分子肝素研究[3],其平均分子量为2 000~3 000,抗FXa/FIIa>30,已经进入III期临床研究。

1 国内外几种LMWH的质量标准综述目前,国外LMWH商品约有十多种,我国进口的有6种,国内仿制的四类新药生产企业约有十几家。

我国有低分子肝素钠部颁标准。

吸入气雾剂递送剂量均一性考察抽样方案对比分析晏菊姣;耿颖;魏宁漪;李苗;陈华【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2024(33)10【摘要】目的比较吸入气雾剂递送剂量均一性考察中不同抽样方案的差异。

方法汇总2020年版《中国药典(四部)》(简称ChP)、《European Pharmacopoeia 11.0(VolumeⅠ)》(简称EP)/《British Pharmacopoeia 2023(VolumeⅢ)》(简称BP)、《USP-NF online 2024》(简称USP)及我国进口药品注册标准(简称JX)中吸入气雾剂递送剂量均一性考察的抽样方案和判定标准。

以硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂为例,按ChP及USP抽样方案分别测定4家企业(企业A,B,C,D)6批样品的递送剂量均一性。

采用蒙特卡洛模拟法进行数据模拟,并绘制工作特性曲线。

结果按ChP抽样方案,样品的递送剂量均一性均符合规定;按USP抽样方案,仅企业C有1批样品的平均递送剂量不符合规定(低于70μg),且与企业D样品比较差异显著(P<0.05)。

ChP的工作特性曲线较其他3种判定标准更宽,接受区域更广;EP/BP与JX抽样方案第一阶段接受概率和总接受概率均较接近;USP与JX抽样方案在标准差较小(≤6)时几乎相同,随着标准差的增大,前者的第一阶段接受概率和总接受概率下降程度更显著,在标准差≥10的情况下,其总接受概率<90%。

结论不同抽样方案对吸入气雾剂递送剂量均一性的接受概率存在一定差异,USP较ChP,EP/BP,JX对变异较大的产品容忍度更低。

【总页数】6页(P81-86)【作者】晏菊姣;耿颖;魏宁漪;李苗;陈华【作者单位】湖北省武汉药品医疗器械检验所·国家药品监督管理局药物制剂质量研究与控制重点实验室;中国食品药品检定研究院【正文语种】中文【中图分类】R917【相关文献】1.沙美特罗替卡松吸入粉雾剂递送剂量均一性的测定2.吸入制剂递送剂量均一性取样装置3.单剂量吸入混悬液剂量均一性抽样方案及评价分析4.影响吸入气雾剂递送剂量及吸入有效性的环境因素研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

文件使用类型该报告制定参与人：该报告存放到以下部门办公室：会审批准签名表注：参加会审的人员：1. 海普瑞公司验证委员会的成员；2. 与该验证方案相关部门的主管（班组长）以上成员。

目录1. 目的 (4)2. 范围 (4)3. 参考 (4)4. 验证内容 (4)5. 结论 (9)1. 目的1.1. 海普瑞公司质量控制部对各办事处交来的肝素钠粗品原料进行抗FIIa效价复测时，样品的取样方法有两种：一种是从办事处取过的样品袋中直接抽取。

一种是按照办事处的取样方法重新取样。

1.2. 为了确认两种取样方法得到的样品，其检测结果不存在显著性差异，我们用同一种检测方法对两种取样方法得到的样品进行检测，并对检测结果进行比较确认。

1.3. 本文件为两种取样方法结果的比较确认提供了可执行的程序。

2. 范围被验证的方法适用于肝素钠粗品原料抗FIIa效价复测样品的取样过程。

3. 参考《美国药典》（27版P905）SOP 20-1005《肝素钠粗品取样标准操作规程》SOP 20-1010《肝素钠粗品复检取样标准操作规程》SOP 51-0011《电热恒温水箱使用标准操作规程》SOP 51-1002《一般溶液配制标准操作规程》SOP 54-0010《肝素钠抗FIIa效价检测预实验标准操作规程》SOP 54-0011《肝素钠抗FIIa效价检测标准操作规程》SOP 60-0002《公司验证制度》4. 验证内容待验证的取样方法从六个办事处各取10批粗品原料，对每一批样品采用以下两种方法取样直接从每批原料的原包装袋中抽取原样：颗粒状颗粒状或块状粗品的取样方式：每批粗品的取样区域分为该包装袋的正反两面，根据粗品重量，每面从包装开口处至袋尾设2~3条取样平行线，每条平行线上取样点不少于2个，每批重量在1 kg以下的粗品，正反两面从包装开口处至袋尾各取两条平行线，每条平行线取两个点，共取八个取样点，用长柄取样勺分别从八个取样点取出粗品至粉碎机中，要做到每勺份量大致一样。

EP7与CP2010
检验项目及方法对比
2010年10月
目录
一、比旋度
二、鉴别
三、总氮量
四、酸碱度
五、溶液澄清度
六、溶液颜色
七、吸光度
八、有关物质
九、残留溶剂
十、干燥失重
十一、炽灼残渣十二、钠
十三、重金属
十四、细菌内毒素十五、效价
十六、微生物
十七、
一、比旋度
二、鉴别
三、总氮量
四、酸碱度
五、溶液澄清度
八、有关物质
九、残留溶剂
十、干燥失重
十一、炽灼残渣
分析方法比对：EP无此检验项目。

CP增强了对无机盐的控制。

十二、钠含量
十三、重金属
十四、细菌内毒素
十五、效价
控制方面更严格。

依诺肝素钠相对分子量的EP与USP分析方法对比研究伯小霞;崔慧斐【摘要】目的以国产依诺肝素钠和其原研药为样品,比较欧洲药典(EP)和美国药典(USP)测定依诺肝素钠相对分子质量(Mr)方法的差异,为国内该品种的药典标准制定提供参考.方法采用这两种方法分别检测了10批国产依诺肝素钠原料药和2批原研药注射液LOVENOX的Mr情况.结果 USP方法测得平均Mr均较EP方法结果偏高在200以内,Mr2 000以下组分比例EP方法偏高,而Mr2000 ～8 000组分比例USP方法偏高,但差距均在4％以内.国产依诺肝素钠Mr与原研药的基本一致.结论 EP和USP方法分析依诺肝素钠Mr结果较为接近.%Purpose To analyze the difference of the relative molecular weight (Mr) analysis method of Enoxaparin Sodium in european Pharmacopoeia ( EP) and the United States Pharmacopoeia ( USP ) through the analysis of domestic samples and the branded, and to provide some opinions for Enoxaparin Sodium domestic standard. Methods Ten batches of Enoxaparin Sodium samples and 2 batches brand Injection Lovenox Enoxaparin Sodium were analyzed in EP and USP method. Results The average Mr by EP method was higher than that by USP method with difference of less than 200. The percentage of less than 2 000 by EP method was higher,and that of 2 000 - 8 000 by USP method was higher and both differences within 4% . The Mr of domestic samples was comparable to the branded. Conclusion The results of Mr of Enoxaparin Sodium by EP method were closed to those by USP method.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2012(033)006【总页数】4页(P818-821)【关键词】依诺肝素钠;相对分子量质量;欧洲药典;美国药典【作者】伯小霞;崔慧斐【作者单位】山东大学药学院,山东济南250012;东营天东生化工业有限公司,山东东营257067;山东大学药学院,山东济南250012;(山东大学)国家糖工程技术研究中心,山东济南250012【正文语种】中文【中图分类】R927.1依诺肝素钠是一种低分子肝素钠盐，系通过对猪肠黏膜肝素的苄基酯衍生物进行碱解聚β-消除而获得。

肝素行业分析报告一、肝素行业和主要产品的简介 (3)1、肝素简介及临床应用 (3)2、肝素类产品 (4)（1）肝素粗品 (6)（2）肝素原料药中间体 (6)（3）精制肝素原料药 (6)（4）标准肝素制剂 (7)（5）低分子量肝素 (7)（6）低分子量肝素制剂 (8)（7）肝素类产品在抗肿瘤方面的具体应用 (9)二、行业技术水平及发展趋势 (10)1、肝素行业技术水平及发展趋势 (10)（1）行业技术水平 (10)（2）发展趋势 (11)2、我国肝素行业发展历程 (12)（1）粗品出口阶段 (12)（2）整体产业提升阶段 (12)（3）肝素原料药高速发展与肝素制剂突破阶段 (12)（4）未来发展趋势 (13)三、行业监管 (13)1、行业主管部门及监管体制 (13)2、行业主要法律法规 (14)（1）药品生产许可证制度 (14)（2）新药证书和药品批准文号制度 (15)（3）药品生产质量管理规范（GMP）和药品经营质量管理规范（GSP） (15)（4）药品的知识产权保护制度 (15)（5）药品定价制度 (16)（6）处方药和非处方药分类管理制度 (16)（7）国家药品标准制度和药品召回制度 (17)3、行业相关产业政策 (17)（1）产业政策 (17)（2）国家基本药物制度 (18)四、医药行业发展概况 (19)五、肝素类产品市场需求情况 (20)1、肝素类药品市场需求概况 (20)（1）肝素类药品市场需求增长的驱动因素 (20)（2）肝素类药品市场需求情况 (23)（3）肝素类产品市场供求情况 (23)2、肝素原料药市场需求 (24)3、肝素制剂市场需求情况 (25)（1）我国标准肝素制剂市场需求情况 (26)（2）我国低分子量肝素制剂市场需求状况 (27)六、行业的关联性、上下游行业发展状况对本行业的影响 (28)1、上游行业的发展及对肝素行业的影响 (29)2、下游行业发展对行业的影响 (30)七、我国肝素行业出口情况 (31)1、我国对肝素钠原料药的出口政策 (33)2、国际药典标准、国际认证证书及主要国家对肝素原料药进口政策 (33)3、主要进口国同类产品的竞争情况 (33)4、贸易摩擦对产品出口的影响 (34)八、进入本行业的主要障碍 (34)1、技术壁垒 (34)2、行政许可准入壁垒 (35)3、药品出口认证壁垒 (35)4、人才壁垒 (35)5、资金实力壁垒 (36)6、产品质量壁垒与品牌壁垒 (36)7、成本及规模经济壁垒 (36)8、市场渠道壁垒 (37)九、行业利润水平的变动趋势及变动原因 (37)1、完整的产业链与利润水平 (37)2、肝素原料药的利润水平变动趋势 (38)3、标准肝素制剂的利润水平变动趋势 (38)4、低分子量肝素钙制剂的利润水平变动趋势 (39)十、行业的周期性、区域性及季节性特征 (39)十一、影响行业发展的因素 (40)1、有利因素 (40)（1）国家产业政策扶持 (40)（2）丰富的肝素粗品供应 (41)（3）行业集中度提高 (41)（4）肝素制剂进入《国家基本药物目录》和《国家医保目录》 (41)（5）产业基础与运行环境持续改善 (42)（6）全球抗凝血和抗血栓药品市场增长迅速，肝素类药品临床适用范围日益拓宽 (42)（7）对肝素类药品认识程度日益加深 (42)（8）随着国内经济和科技的发展，国内药企的研发能力提高 (43)2、不利因素 (43)（1）肝素类药品的政府定价政策 (43)（2）肝素粗品价格上涨 (44)（3）融资渠道不畅 (44)（4）人民币的升值 (44)十二、肝素原料药行业竞争格局 (45)1、国际市场的竞争格局与主要厂商情况 (45)2、国内市场的竞争格局与主要厂商情况 (46)十三、标准肝素制剂行业竞争格局 (48)十四、低分子量肝素制剂行业竞争格局 (49)一、肝素行业和主要产品的简介1、肝素简介及临床应用肝素（Heparin）是一种由葡萄糖胺、L-艾杜糖醛酸、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸以及他们的硫酸化衍生物组成的糖胺聚糖。

微量生色底物法测定肝素钠肌醇烟酸酯乳膏中抗Xa因子效价目的建立肝素钠肌醇烟酸酯乳膏中抗Xa因子效价的测定方法。

方法对肝素钠肌醇烟酸酯乳膏进行破乳处理后，采用微量生色底物法、生物检定统计法，测定乳膏中抗Xa因子的效价。

结果建立了肝素钠肌醇烟酸酯乳膏中肝素钠抗Xa因子的测定方法，抗Xa因子在0.0250～0.1020 IU/mL范围内与吸光度（A）值线性关系良好（r=0.996）；低、中、高浓度的平均回收率为99.5%，RSD为1.92%（n=9）。

抗Xa因子和抗Ⅱa因子的效价比值在0.9～1.1范围内。

结论该方法结果准确，重复性好，可用于肝素钠肌醇烟酸酯乳膏中抗Xa因子效价的测定，有效控制该制剂的质量。

[Abstract] Objective To establish a method for determination of anti-FXa potency in heparin sodium and inositol nicotinate cream. Methods The emulsion was broken. The anti-FXa potency was determined by micro-chromogenic substrate method and biological test statistics method. Results The determination method was established for anti-FXa potency in heparin sodium and inositol nicotinate cream. The linear range of anti-FXa was during 0.0250-0.1020 IU/mL （r=0.996）. The average recovery in three levels was 99.5% （RSD=1.92%，n=9）. The ratio of potency was during 0.9-1.1 for anti-FXa and anti-FⅡa. Conclusion The method is accurate and reproduceable. It can be used for the determination of anti-FXa potency in order to control the quality of heparin sodium and inositol nicotinate cream.[Key words] Micro-chromogenic substrate method；Heparin sodium and inositol nicotinate cream；Anti-FXa；Potency凍伤是指机体长时间暴露于寒冷环境，导致全身或局部体温下降而产生的损伤[1-2]。

文件使用类型该报告制定参与人：该报告存放到以下部门办公室：会审批准签名表注：参加会审的人员：1. 海普瑞公司验证委员会的成员；2. 与该验证方案相关部门的主管（班组长）以上成员。

目录1. 目的 (4)2. 范围 (4)3. 参考 (4)4. 试剂、仪器和用具确认 (4)5. 验证内容 (5)6. 验证结果 (10)7. 结论 (10)1. 目的1.1. 海普瑞公司目前对肝素钠成品抗FⅡa效价检测有两种方法：其一，使用的是USP K-5标准品、《美国药典》（现行版）检测方法，检测结果单位是USP U/mg；其二，使用WHO V标准品、《欧洲药典》（第四版）方法进行检测，检测结果单位是IU/mg；两种方法的检测结果之间的换算系数怎样确认，是需要经过对比验证而得到。

1.2. 为了确认使用USP K-5标准品、《美国药典》检测方法与使用WHO V标准品、《欧洲药典》检测方法所得结果之间的换算系数，我们进行两种检测方法所得结果的比较确认。

2. 范围本方法适用于肝素钠抗FⅡa效价检测。

3. 参考3.1. 《美国药典》（USP 27 ） P905肝素钠专论3.2. 《欧洲药典》（EP Ⅳ）3.3. SOP 51-0011《电热恒温水箱使用标准操作规程》3.4. SOP 51-1015《肝素钠抗FⅡa标准品配制标准操作规程》3.5. SOP 54-0010《肝素钠抗FⅡa效价检测标准操作规程》3.6. SOP 54-0018《肝素钠抗FⅡa效价检测预实验标准操作规程》3.7. SOP 51-1002《一般溶液配制标准操作规程》3.8. SOP 60-0002《公司验证制度》4. 试剂、仪器和用具确认4.1.4.2. 仪器与器具配制标准品、试剂用结论：以上试剂、仪器及用具经检查，确认合格。

5. 验证内容5.1. 方法USP5.1.1 精密称取样品的范围在30~50mg，用0.9%氯化钠溶液将样品溶解并配制成1.0 mg/ml的样品溶液A；吸取0.5 ml样品溶液根据估计效再用0.9%氯化钠溶液稀释成8.0 USP U/ml样品溶液B，根据预实验将8.0 USP U/ml的样品溶液B和USP标准品继续稀释至使绵羊血浆不凝固的最小浓度。

抗Xa与抗IIa活性检测方法标准操作规程一、USP方法5.2.12抗IIa活性（20.0~35.0IU/mg）5.2.12.1仪器：紫外可见分光光度计、低温循环槽、电子天平5.2.12.2试液：醋酸溶液：取冰乙酸42ml于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

pH7.4聚乙二醇6000缓冲液：称取三羟甲基氨基甲烷6.08g和氯化钠8.77g于1000ml容量瓶中，加水500ml溶解后，加聚乙二醇6000 1.0g，用盐酸调节pH至7.4，加水稀释至刻度。

pH7.4缓冲溶液：称取三羟甲基氨基甲烷6.08g和氯化钠8.77g于1000ml容量瓶中，加水500ml溶解后，用盐酸调节pH至7.4，加水稀释至刻度。

pH 8.4缓冲溶液：称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、氯化钠5.12g和乙二胺四乙酸二钠1.40g于500ml容量瓶中，加水250ml溶解后，用盐酸调节pH至8.4，加水稀释至刻度。

抗凝血酶III溶液：取1支抗凝血酶III，加水溶解成5Units/ml。

用pH7.4聚乙二醇6000缓冲液稀释成0.5Unit/ml。

人凝血酶溶液：用水将人凝血酶复溶，用pH7.4聚乙二醇6000缓冲液稀释成5Units/ml。

显色底物：选择适合凝血酶的阿米酚试验的显色底物，用水稀释成浓度约3mmol/L。

临用前用pH 8.4缓冲溶液稀释至0.5 mmol/L。

标准溶液：用pH 7.4缓冲溶液将USP依诺肝素钠活性标准品稀释为浓度0.015~0.070USPIU/ml之间的四个浓度梯度。

样品溶液：用pH 7.4缓冲溶液将依诺肝素钠样品稀释为与标准溶液浓度一致的浓度梯度。

5.2.11.3检测过程：取18支检测管，B1、B2为空白；T1、T2、T3、T4为样品溶液，各双份平行；S1、S2、S3、S4为标准溶液，各双份平行。

按B1、S1、S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4、T1、T2、T3、T4、S1、S2、S3、S4、B2的顺序，每管中加入抗凝血酶III的体积为V（20~50μl），和同样体积的pH 7.4缓冲溶液（空白）、标准溶液或样品溶液；混合，但不要产生气泡。

肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。

4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。

估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。

4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。

取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。

并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。

1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。

凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。

②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。

③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。

④1∕4凝固：少量溶液凝固。

⑤0凝固：溶液悟凝固现象。

若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。

)待检样品效价计算公式：4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。

肝素钠GansunaHeparin Sodium■本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，是由不同分子量的糖链组成的混合物，由α-D-氨基葡萄糖（N-硫酸化，O-硫酸化，或N-乙酰化）和O-硫酸化糖醛酸（α-L-艾杜糖醛酸或β-D葡萄糖醛酸）交替连接形成聚合物，具有延长血凝时间的作用。

按干燥品计算，每1mg中抗Ⅱa因子效价不得少于180 IU，抗Xa因子效价与抗IIa因子效价比为0.9～1.1。

■[修订]■核酸取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含4mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）测定，在260nm的波长处，吸光度不得大于0.10。

■[增订]■蛋白质取本品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含30mg的溶液，作为供试品溶液；另取牛血清白蛋白对照品适量，分别加水制成每1ml中各含0、10μg、20μg、30μg、40μg与50μg的溶液，作为对照品溶液，照蛋白质含量测定法（附录ⅦM 第二法）测定。

按干燥品计，含蛋白质不得过0.5%。

■[增订]■有关物质取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含100mg的溶液，涡旋混合至完全溶解，取0.5ml，加入1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加入1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为供试品溶液；取肝素对照品250mg，加水2ml，涡旋混匀至完全溶解，作为对照品溶液（1）；取对照品溶液（1）1.2ml，加2%硫酸皮肤素对照品0.15ml与2%多硫酸软骨素对照品0.15ml，作为对照品溶液（2）；取对照品溶液（2）0.1ml，加水稀释至1ml，作为对照品溶液（3）；取对照品溶液（1）0.4ml，加水0.1ml，混匀，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（4）；取对照品溶液（2）0.5ml，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（5）。

低分子量肝素钙注射液抗Xa因子的效价测定临麻医学工程2010年7月第17卷第7期低分子量肝素钙注射液抗Xa因子的效价测定荫少民(广州I药品检验所,广东广州510160)论着?【摘要】通过发色底物s-2765试剂盒作用及uV吸收度反应读数测定样品三批低分子量肝素钙注射液抗凝血酶Xa因子效价,并用量平行线原理进行统计分析.结果测得批号20060301抗Xa效价为2540.5IU,FL%为2.0%;批号111(10101抗xa效价为4165.3IU,FL%为1.1%;批号1202{)124抗xa效价为6241.3IU,FL%为1.0%;方法重复性好.【关键词】低分子量肝素钙注射液;抗Xa因子效价测定中图分类号:R927.11文献标识码:Adoi:10.3936~.issn.1674—4659.2010.07.016 PotencyEffectonAnti-XaElementofLowMolecularWeightHeparinCalcium InjectionYINShaominrGu~zgzhouInstituteofDrugControl,Guangzhou510160,China)【Abstract】Wecarriedoutthemeasurementofthepotencyofanti—Xaelementoflowmolec ularweighthepafincalciuminjectionthroughS-2765.theresponseofUV absorbencyandtheprincipleofparallelcapa city.Theres ultsshowedthat20060301’santi—Xaeffectwas2540.5IU,FL%:2.0%;the1110010l’santi—Xaeffectwas4165.3IU,FL%:1.1 %,andthe12020124’santi—Xaeffectwas6241.3IU,FL%:1.O%.Thisisagoodrepetitivemethod.【Keywords】Lowmolecularweightheparincalciuminjection;Anti?Xaelement低分子量肝素钙注射液系南肝素钠经亚硝酸裂解精制而得收稿日期:2010—04—03修回日期:2010—05—09作者简介:荫少民(1955一),男,副主任药师,从事药品检验工作.的硫酸氨基葡聚糖的钙盐,具有较强的抗凝血作用和活性:在医药临床上主要用于血液透析体外循环中预防ffn凝块形成,亦片J于防止与手术有关的深部静脉血栓形成.毒性反应主要为咽黏膜炎及唾液腺分泌唾液减少导敛口腔干燥,仅SBIRT组的3/4度粘膜反应发生率略高为30.8%(12/39),CR1强为17.9%,但所有患者通过积极对症支持处理后均能顺利完成整个放化疗疗程.晚期放射损伤主要为咽黏膜萎缩和干燥,放射性脑病,唾液腺分泌唾液减少导致口腔干燥,颞颌关节强直致张口受限及放射性中耳炎.f无严重致死性毒性反应发牛,两组急性和晚期放射反应发生率比较差异均无统计学意义(P&gt;0.05).这说明SBI相较于CRT是同样安全可行的总之,笔者的研究表明对于放射抗拒NPC采用SBI的个体化放射治疗安全有效,并体现H{较常规放疗的初步疗效优势,特别是提高局部控制的临床价值.然而由于本研究病例数相对较少.随访时间也仅3年,是否可以通过进一步增加研究的病例数并延长观察时间而获得疗效具有明确统计学意义的结果.值得开展进一步的深入研究.参考文献[I]夏云飞,李满枝,郑美莲,WilliamA.Brock.14株(亚株)人鼻咽癌细胞的放射生物学特性[J】l癌症,2001,20(7):683-687.【2】ZhiqiangLi,Y un~iXia,QingLiu,etolRadiotherapy—relatedtyping in842patientsincantonwithnasopharyngealcarcinoma[J].Interna-tion01o”rnofradi~iononcologybiologyphysics,2006,66(4):1Ol1.1O16[3]3夏云飞,钱剑扬,张恩罴.实用鼻咽癌放射治疗[M】.北京:北京大学医学出版社,2003:前言.16?[4]方海城,黄晓波,杜协彬,等.放射敏感鼻咽癌个体化放射治疗的可行性研究[J1.临床医学]_程杂志,2009,16(8):12—15.[5】罗伟,汤轶强,黄莹,等从鼻咽癌放疗后复发部位探讨放疗设野范围[J1.癌症,2006,25(2):209.211.[6】LuTX,MaiWY,BinST,et01.Importantprognosticfactorsinpatients withskul1baseerosionfromnasopharyngealcarcinomaafterradiother—apy[J]lntJRculiotOncolBiolPhys,200l,51(3):589—598.[7]WithersHR,TaylorJMG,MacejewskiB.Thehazardofacceleratedtu- morctonogenrepopulationduringradiotherapy[J].ActaOrwol,1988,27f21:131-146.[8]ButlerEB,TehBS,GrantWH,et01.SMART(simultaneousmodulated acceleratedradiationtherapy)boost:Anewacceleratedfractionation scheduleforthetreatmentofheadandneckcancerwithintensitymod—ulatedradiotherapy[J].1ntJRculiatOncolBiolPhys,1999,45(1):21.32.[9]KoomWS,KimTH,ShinKH,et01.SMART(simultaneousmodulated acceleratedradiationtherapy)forlocallyadvancednasopharyngealcar—cinomas[J]kNeck,2008,30(2):159—169.[1O】黄晓波,何智纯,夏云飞,等.互补分野加量照射在局部晚期鼻咽癌治疗中的三维剂量学研究[J]_中山大学(医学科学版),2008,29(3):303—311[11]谢国丰,曹卡加,李茵,等.颅底补量放射对T4期鼻咽癌复发率的影nNJ].癌症,2005,24(10):1246—1248.(责任编辑:常海庆)1仪器仪器紫外分光光度计(型号UV2401).2试剂抗Xa因子效价测定的试剂ItI主要采用以下几种.2.1三羟甲基氨基甲烷一氯化钠缓冲液[Tris—NaCl(pH7.4)】取羟甲基氨基甲烷6.08g,氯化钠8.77g,加水500ml使溶解,加牛血清白蛋白10g,用盐酸调节pH值至7.4,加水稀释至1000ml,备用.2.2三羟甲基氨基甲烷一乙二胺四醋酸二钠缓冲液【Tris—EDTA (pH8.4)】取氯化钠5.】2g,j羟甲基氨基甲烷3.03g和乙二胺四醋酸二钠1.4g,加水250ml使溶解,用盐酸调节pH值至8.4,加水稀释至500ml,备用.2.3抗凝血酶(A TIII)溶液以_二羟甲基氨基甲烷一氯化钠缓冲液(pH7.4)制成1ml中含1IUA TIIl的溶液…,备用.2.4发色底物S2765溶液用水制成0.003rnol/L的溶液,临用前加i羟甲基氨基甲烷一乙二胺四醋酸二钠缓冲液(pH8.4)稀释至0.0005mol/L,备用.2.5牛血Xa溶液(FXa)溶液用羟甲基氨基甲烷一氯化钠缓冲液(pH7.4),配制FXa溶液,调试其浓度,使之在用0.9%氯化钠溶液代替标准品的抗xa因子试验中,于405nnl的波长处的吸收值在0.6～0.7,备用2.630%醋酸溶液30%醋酸溶液.3标准品溶液和供试品溶液制备3.1标准品溶液取LMWH标准品(S)用Tris—Nacl缓冲液(pH7.4)配制成2.124AXaIU/ml溶液.再将标准品(S)用上述缓冲液稀释成4个不同浓度的溶液,各剂量问的剂距比一般为1:0.7,该浓度应存1og剂量一反应的线性范同内,一般为1ml中含0.025 IU～0.21IU.3.2供试品溶液用Tris—Nacl缓冲液(pH7.4)将供试品(T)稀释成4个不同浓度的溶液,各剂间距为1:0.7;浓度的对数剂量与反应的线性范围一般为0.025～0.21IU/ml(如表1).4抗Xa因子效价测定取小试管l6支,分别标记T,,,T及s,s,s,,s,各浓度平行做两管,用1cm光程的半微量比色池,以三羟甲基氨基甲烷一氯化钠缓冲液(pH7.4)为空白,在405nm的)各5O,混匀37cc保温1分钟FXa液)各0HD.混匀37%保温1分钟S-2765液”各250,混匀37℃保温4分钟30%L~)各375,混匀UV405nm波长测定各管吸光度在16支管开始和结尾时.分别测定空白对照管的吸光度.两者的吸光度不得有显着性差异.以吸光度为纵坐标,标准品溶液(或供试品溶液)浓度的对数值为横坐标分别作线性同归,按生物检定统计法(中国药典2005年版二部附录xIV) 中的量反应平行线原理4X4法实验设计,计算效价(Iyr)及实验误差.平均可信限率(FL%)不得大于15%l2_.见表2表2三批供试品抗Xa效价检测结果4讨论抗xa因子效价采用发色底物反应,反应为微量酶反应.标准品和供试品可配制稀浓度进行检测,精确度较高.反应后的溶液用紫外分光光度计直接读数,并用4X4量平行统计, 对实验数据具有较好的准确度.在试验的可靠性测验中,剂问,回归变异非常显着;偏离平行,二次曲线,反向二次曲线不显着.实验结果表明:本效价测定方法切实可行,且重复性好参考文献[1]国家食品药品监督管理局标准(试行)(YBH05342003).[2]中国药典(二部)[M].附录北京:化学]二业出版社,2005:1l6一ll8.[3]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[s].北京:巾国医药科技出版社,2000:464—467.(责任编辑:仇洁)17?。

肝素样品前处理方法比较及荧光定量PCR法鉴定肝素原料种属来源周朝东;白海娇;黄哲甦【摘要】Objective To compare magnetic beads kit,agrose gel recovery kit and heparinase I three methods to purify the micro DNA from crude heparin, then use q-PCR to identify the species origins and select the best method.Methods Using magnetic beads kit,agrose gel recovery kit and heparinase I to purify micro DNA from crude heparin and combined the porcine,bovine and ovine identification kits to identify the species origins and conformed the minimum detection limit of different percentage of ovine crude heparin in porcine crude heparin.Results Three pretreatment methods all can solve the pretreatment difficulties and we found that the haparinase was the best method; the minimum detection limit was0.01%of ovine crude heparin in porcine crude heparin.Conclusion The heparinase method is the best pretreatment method and can successfully solve the pretreatment difficulties.Heparinase combine the porcine, bovine and ovine identification kits can identify the species origins from crude heparin.%目的：比较肝素原料的3种前处理方法，即磁珠吸附法、琼脂糖凝胶回收法和肝素酶降解法的优劣，并对肝素原料的种属来源进行鉴别。