基因诊断
基因诊断的目的:
就是要通过各种手段,如杂交、扩增等,去寻找和发现这些 独特基因组、基因或基因片段的存在,从而证实某种病原体的存 在。
传统诊断与基因诊断的比较:
传统诊断的缺陷多,方法大多为:
1、表型诊断:以疾病或病原体的表型为依据。而表型的改变 在多数情况下是非特异的,出现的时间也比较晚,易错过治疗的 最佳时期。某些疾病本身不呈现显著的表型改变,用传统的检测 方法亦出现假阴性。
基因诊断
根据诊断目的或要求
分为定性诊断Biblioteka 定量诊断和半定量诊断,以及序列分析等。
二,基因诊断的策略
1, 从基因产物入手
这是一种比较早期的诊断策略。首先分析异常基因的产物 (蛋白质),并弄清是如何引起临床症状的。在纯化了该蛋白质 以后,进行氨基酸序列测定,据此合成致 疾病的分子缺陷。这种策略是由蛋白质至DNA,由表型至基因型。 迄今分离的绝大部分分子病和遗传性代谢缺陷病如白化病,苯丙酮 尿症(PKU)和镰状细胞贫血等的相关基因都是根据这一策略分离 的。
1、杂交Southern印迹用于检测DNA;Northern印 迹用于检测RNA;斑点印迹或称斑点杂交 ,既可检测 DNA也可检测RNA。
2、PCR法主要用为直接扩增DNA,但是通过逆转 录技术,可以将RNA先转变为cDNA再行扩增,称逆 转录PCR,如检测HCV,HGV,HIV等。
3、原位杂交,或原位PCR,也可分DNA或RNA原位 杂交和原位PCR或逆转录PCR。
基因诊断
根据待测标本的性质
分析体中的(血,尿,粪,痰液,胸腹水等等),细胞和组织 基因检测。
1、体液中的待测基因可在将标本适当处理后,根据需要 采用上述各种方法检测
2、组织切片内基因检测则可采用原位杂交和原位PCR法