洁净室区沉降菌检测标准操作规程完整

●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。

●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。

●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。

⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。

⏹ 5.3 恒温培养箱。

⏹ 5.4 高压灭菌器。

⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。

⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。

加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。

●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。

洁净区沉降菌监测标准操作规程1目的：制定洁净区（室）沉降菌监测操作规程。

2范围：洁净区（室）沉降菌的监测。

3职责：QC员、QA员、QC主任、品质保证部经理、车间主任及相关人员对本SOP的实施负责4 程序：4.1 QA室根据洁净区（室）的验证结果，制定洁净区（室）的日常监测计划，依计划和生产需要填写洁净区（室）环境监测通知（以下简称通知），经品质保证部经理批准后，下发QC室和生产车间。

4.2 QC主任接通知后，与检验员、车间讨论确定具体监测时间，安排好监测工作，确保监测工作如期完成，如不能按期完成监测，应由QC室主任将情况以书面形式汇报至品质保证部，经品质保证部经理批准后，予以重新安排。

4.3 将培养皿在121℃湿热灭菌30分钟或者180℃干热灭菌2小时。

4.4 将灭菌培养基加热熔化，冷至45-60℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml，待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

制备好的肉汤培养基平皿应保存在洁净的普通冰箱内，以2-8℃为宜，且应在2周内用完。

4.5 在监测前，应对被监测洁净区（室）消毒。

4.6 在空调净化系统正常运行30分钟后，在洁净区（室）内没有生产人员的情况下，监测人员穿戴好符合洁净级别要求的工作服，进入洁净区（不得多于二人）进行测试。

4.7 根据洁净区（室）面积大小确定最少采样点数目，在满足最少采样点数目的同时，还宜同时满足最少培养皿数。

采样点的布置应力求均匀，避免在某局部区域过于集中，培养皿应布置在有代表性的地方（如关键设备或易受污染的地方）和气流扰动最小的地方。

3.8将培养基表面暴露0.5小时后，收集培养皿，将培养皿倒置于恒温培养箱中，30-35℃培养48小时，每批培养基应有对照试验，每批可选定3只培养皿做对照培养，其中2只培养皿做阳性对照，1只培养皿做阴性对照。

4.9 达到规定的培养时间后，菌落数用肉眼直接计数、标记或在菌数计数器上点计，并用5-10倍放大镜检查有否遗漏。

洁净区沉降菌培养检验操作规程管理⽂件⼀、⽬的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准⼆、适⽤范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC⼈员将复核的培养⽫转移⾄恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1⼩时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采⽤⼤⾖酪蛋⽩琼脂培养基配制的培养⽫时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采⽤沙⽒培养基配制的培养⽫时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度⼀次，以培养箱中温度计温度为准。

2.检测（菌落计数）2.1⽤⾁眼对培养⽫上所有菌落直接计数，专⼈复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时⼀般⽤透射光对培养⽫背⾯或正⾯仔细观察，不要漏记培养⽫边缘⽣长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。

必要时，⽤显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进⾏记录，然后进⾏结果计算。

3.结果计算：3.1⽤计数⽅法得出各个培养⽫的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养⽫菌落数M——2号培养⽫菌落数2Mn——n号培养⽫菌落数N——培养⽫总数3.2结果评定：3.2.1⽤平均菌落数判断洁净室（区）空⽓中微⽣物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进⾏消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.⾮主要⼯作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试⼀次，动态测试频次为每⼀年测试⼀次。

范围：洁净区
职责：质量部、生产车间对本规程的实施负责
正文：
1.试剂及仪器、器皿
1.1试剂
——营养琼脂培养基
1.2仪器及器皿
1.3生化培养箱，Φ90mm培养皿、锥形瓶、胶塞、灭菌锅、烧杯等。

2.测试前准备
2.1培养基的配制
——按SOP-QM-424《培养基配制标准操作规程》进行。

2.2培养基平皿的制备
2.2.1将Φ90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或180℃干热灭菌2小时。

2.2.2将培养基加热溶化，冷至45℃时，于无菌检查操作间将培养基注入平皿，每皿约15ml。

2.2.3待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃生化培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

3.采样
3.1采样点的数目及采样点的布置
3.1.2.1采样点的布置力求均匀,避免采样点在某局部区域过于集中或过于稀疏，关键区域可增加采样点。

3.1.2.2采样点位置离地0.8-1.5米左右（略高于工作台面）
3.2采样方法：按3.1的要求放置平皿数，打开培养皿盖，使培养皿暴露30分钟，再将培养皿盖盖上。

4.培养
第1页共2页
所有采样结束后，将平皿倒置在30ºC—35ºC的生化培养箱中培养48小时。

5.操作结果的评价
5.1用肉眼直接计数并记录。

5.2结果计算
式中 M—平均菌落数（CFU）
M i—1，2，3……号平皿菌落数
n—平皿总数
5.3结果评价标准见下表：
测试结果均须合格。

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5.1.3.2.动态测试洁净区已处于正常生产状态下进行的测试。

5.2.试准备5.2.1.仪器与设备5.2.1.1.培养皿：φ90mm×15mm，121℃20分钟湿执灭菌。

5.2.1.2.高压灭菌器、恒温培养箱处于完好状态。

5.2.1.3.制备采样皿：取已配制好的普通营养琼脂培养基，检查品名及使用期是否在规定期限内，外观性状是否有异常，确认无误后，将培养基放入水浴中熔化，冷却到约45℃时，在规定条件下高压蒸气灭菌，在超净工作台以无菌操作技术注入培养皿中，每皿约15ml，冷凝后倒置于30-35℃恒温培养箱培养48小时，无菌生长方可供采样用。

5.2.1.4.编号对培养皿按测定区域及个数进行编号。

编号前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现有质量问题的应以剔除。

5.2.1.5.根据洁净室房间多少及面积，计算所需的培养皿数。

5.3.测试5.4.采样将培养皿在各个测试洁净区域按附表1和附表2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖好。

5.5.培养全部采样结束后，取样员将培养皿和放置记录一并交化验室主任，化验室主任将培养皿交于检验员检测、检验员将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。

5.5.1.1.计数取出用肉眼计数，然后用5-10倍放大镜检查有否遗漏。

5.6.记录按《沉降菌测试记录》填写。

5.7.结果计算计数各个培养皿的菌落数并求其平均值。

计算公式：M—平均菌落数M 1……Mi—分别为1号至I号培养皿菌落数6.2.3.可在关键设备或关键工作范围内增加采样点。

6.3.检测结束后，质量部发检测报告，将所有记录一并归档。

6.4.测定频次车间洁净（区）每3个月测一次；微生物限度检查室每周期测一次，其超净化工作台每次实验时同时测定；有净化要求的取样间或取样车每3个月测一次。

6.5.空气净化系统连续停运1周以上，经对房间进行消毒后测沉降菌。

附表3 ：平均菌落数标准洁净级别100级10000级100000级30000级平均标准1个/皿3个/皿10个/皿15个/皿。

管理文件一、目的：规范洁净区沉降菌培养检验操作标准二、适用范围：洁净区沉降菌培养检验操作操作三、责任者：质量管理部四、内容：1.沉降菌培养1.1由QC人员将复核的培养皿转移至恒温培养箱；1.2培养前，培养箱温度应设为32℃或者22℃，1小时后检测培养箱温度是否恢复正常；1.3采用大豆酪蛋白琼脂培养基配制的培养皿时，在32℃的培养箱中培养，培养时间为2天；采用沙氏培养基配制的培养皿时，在22℃培养箱中培养，时间为5天；1.4培养时每天检测培养箱温度一次，以培养箱中温度计温度为准。

2.检测（菌落计数）2.1用肉眼对培养皿上所有菌落直接计数，专人复核是否计数有遗漏；2.2若平板上有2个或者2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数；2.3计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。

必要时，用显微镜鉴别；2.4将所计数菌落进行记录，然后进行结果计算。

3.结果计算：3.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数，按下式计算：式中：M——平均菌落数M 1——1号培养皿菌落数M——2号培养皿菌落数2Mn——n号培养皿菌落数N——培养皿总数3.2结果评定：3.2.1用平均菌落数判断洁净室（区）空气中微生物；3.2.2洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准；3.2.3若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

4.洁净区沉降菌检测标准：4.1洁净区沉降菌检测静态标准：4.2洁净区沉降菌检测动态标准：5.非主要工作区的其他洁净区域，静态测试频次为每半年测试一次，动态测试频次为每一年测试一次。

01.0目的01.1阐述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，保证药品的质量，防止生产环境对产品的污染，保证实验室的环境达到检测产品的要求。

02.0适用范围02.1适用于本公司的洁净室（区）的沉降菌监测和洁净度等级的验证。

03.0人员职责测试人员对洁净室（区）沉降菌的测试。

04.0内容04.1术语和定义下列术语和定义适用于本规程。

04.1.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU，通常用个数来表示。

04.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下系繁殖到可见到的菌落数。

04.1.3沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以cfu/皿表示。

04.2测试原理：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

04.3监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每周一次，C级每季度一次，D级每半年一次监控。

04.4测试方法：04.4.1使用设备与材料高压灭菌锅：使用时应严格按照操作规程进行。

恒温恒湿培养箱：必须定期对培养箱进行校验。

培养皿：一般采用φ90mm×15mm培养皿。

培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）；已灭菌配制好的培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好的培养基平皿应放在2-8℃的环境中存放。

清洁剂：75%酒精04.4.2测试时间：（1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。

（2）对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。

（3）培养皿的采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4小时。

洁净区沉降菌操作规程洁净区沉降菌操作规程1. 概述洁净区沉降菌操作规程是为了确保洁净区域内的空气质量符合规定标准而制定的。

洁净区是进行微生物检测和培养工作的重要区域，任何存在细菌或其他微生物的污染都可能对结果产生影响。

因此，严格遵守该操作规程对于保证数据的准确性和可靠性至关重要。

2. 操作人员要求2.1. 操作人员必须经过相关培训，了解并熟悉本操作规程的内容。

2.2. 操作人员应具备良好的个人卫生习惯，必须在进入洁净区前进行必要的清洁操作，如洗手、更换工作服等。

2.3. 操作人员在操作过程中应保持安静，避免尘埃、气流等对样品产生污染。

3. 设备要求3.1. 洁净区内的设备必须定期进行消毒和清洁，保证操作环境的洁净度。

3.2. 设备必须符合相关的规定标准，确保其在操作过程中不会对样品产生污染。

3.3. 洁净区内必须配备必要的检测设备，如微生物培养箱、无菌平板等。

4. 操作流程4.1. 操作人员必须穿戴好个人防护装备，包括面罩、手套和工作服等。

4.2. 操作人员应在工作台上摆放必要的试剂和培养基。

4.3. 操作人员在摆放试剂和培养基的过程中应避免尘埃和颗粒物的产生。

4.4. 操作人员在取样过程中应使用无菌工具，避免污染样品。

4.5. 操作人员在操作完成后应及时清理工作台和设备，保持洁净区的干净和整洁。

5. 质量控制5.1. 洁净区内的空气质量必须定期进行检测，确保其符合规定的标准。

5.2. 洁净区内进行的实验必须进行严格的质量控制，包括阳性对照和负性对照的设置等。

5.3. 实验结果必须进行正确的解读和记录，确保数据的准确性和可靠性。

6. 废弃物处理6.1. 操作人员在操作过程中产生的废弃物必须进行正确的分类和处置。

6.2. 废弃物应按照相关规定进行正确的包装和封存，并交由专门的机构进行处理。

6.3. 废弃物的处理过程中必须避免对环境造成二次污染。

7. 紧急情况应对7.1. 在发生紧急情况时，操作人员必须立即停止操作，并按照相关规定采取应急措施。

依据：依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求
目的：建立洁净环境沉降菌监测标准操作规程
范围：生产车间洁净区、生测室
1．仪器与试剂：ф90×150玻璃培养皿、普通肉汤琼脂培养基
2．操作方法：
2.1将培养皿布置在有代表性的地方和气流扰动最小的地方，其最少采样点数目见下表：
洁净级别100000级
面积（㎡）‹10 10 20 40 100
采样点数 2 2 2 2 3
2.2在每一采样点处，不论面积大小应至少放2个培养皿。

3．采样方法及培养：将培养皿按要求位置放置后，打开培养皿盖，使培养皿表面暴露30分钟后，将培养皿盖盖上，然后在30-35℃的条件（可用恒温培养箱）培养48小时后计数。

4．结果计算：
M =ΣM
i n
式中：M为平均菌落数（CFU）
5．结果判定
洁净粒度级别沉降菌落数（CFU/皿） 100000级平均≤10
300000级平均≤15。

1目的检测车间洁净区、冷库沉降菌，验证车间消毒的有效性。

2范围100级、1万级，10万级，30万级车间洁净区和冷库。

3检验依据GB/T16294-2010 医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法YY0033-2000 无菌医疗器具生产管理规范4内容4.1方法概述采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境中的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度已达到验证车间消毒的有效性。

4.2仪器和设备：高压蒸汽灭菌锅恒温培养箱培养皿，¢90mm×15mm玻璃培养皿培养基，平板计数琼脂4.3准备操作4.3.1将¢90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。

4.3.2按比例配置平板计数琼脂培养基，将其装入三角烧瓶，置于121℃湿热灭菌20min。

将加热溶化并冷却至46℃的培养基，在无菌操作要求下倒入培养皿，一般15ml～20ml/皿。

4.4采样点的布置：4.4.1采样点的布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置，布置规则如下图：4.4.2采样点数目：沉降法的最少采样点数可按表1确定。

表1 最少采样点数目面积m2洁净度级别100 1万10万/30万＜10≤≥≥10～＜20 ≥20～＜40 ≥40～＜100 ≥100～＜200 ≥200～＜400 ≥400～＜1000 ≥1000～＜2000≥2000 2～3481640801604008002224102040100200222236133263注：表面的面积：对于单向流洁净室，是指送风面积；对于非单向流洁净室是指房间的面积。

在满足最少采样点的同时，还应满足最少培养皿数，见表2。

表2 最少培养皿数洁净度级别所需¢90mm培养皿数（以沉降0.5h计）1001万10万/30万14 2 24.4.3工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。

贵州西创制药有限公司操作标准文件标题洁净区(室)沉降菌监测标准操作规程文件编号S0P-ZL-082-00正文页数共 4 页起草/日期部门审核/日期QA 审核/日期批准/日期执行日期分发号发放部门质保部、QC警告：相关责任部门和责任人务必于文件执行之日前完成培训变更记载文件编号变更内容执行日期S0P-ZL-082-00企业名称变更；启用新的文件格式和文件编号洁净区(室)沉降菌监测标准操作规程S0P-ZL-082-00目的：建立洁净区(室)中沉降菌的监测规程，使药品生产能在规定洁净级别中进行，确保产品质量。

范围：适用于本公司洁净区(室)的沉降菌的监测。

责任人：QC人员、QC主管。

内容：1．定义：1．1 洁净室：对尘粒及微生物污染需进行控制的房间或区域。

1．2 洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。

其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台等。

1．3 洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子和微生物的允许统计数。

1．4 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。

通常用个数表示。

1．5 沉降菌：用GB/T 16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

1．6 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。

2．测试方法：2．1 方法概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

2．2 人员的职责及培训：使用的仪器和设备：2．2．1高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。

2．2．2 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。

006--洁净室(区)沉降菌的测规程D标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程Document No.Page 2 of 7起草人：Written by 日期：Date部门：质量管理部Dept.生效日期：Effective Date审核人: Reviewe d by 日期：Date部门：质量管理部Dept.替代版本：04Replaced Version批准人: Approved by 日期：Date部门：分管副总Dept.版本号：05Version No.分发部门：质量管理部Distribution标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程Document No.Page 3 of 7起草人：Written by 日期：Date部门：质量管理部Dept.生效日期：Effective Date审核人: Reviewe d by 日期：Date部门：质量管理部Dept.替代版本：04Replaced Version批准人: Approved by 日期：Date部门：分管副总Dept.版本号：05Version No.分发部门：质量管理部Distribution标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程Document No.Page 4 of 7起草人：Written by 日期：Date部门：质量管理部Dept.生效日期：Effective Date审核人: Reviewe d by 日期：Date部门：质量管理部Dept.替代版本：04Replaced Version批准人: Approved by 日期：Date部门：分管副总Dept.版本号：05Version No.分发部门：质量管理部Distribution4.2.3 采样点和监测频次标题Title 洁净室（区）沉降菌监测操作规程Document No.版本号Version No.：05 Page 5 of 10的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。

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1 目的与适用范围
建立洁净区（室）中沉降菌的监测规程，保证药品在规定的洁净级别内进行生产。

本规程适用于洁净区（室）的沉降菌的监测。

2 职责
质量控制部负责人、微生物检验员对本标准的实施负责。

3 内容
3.1 引用标准： GB/T 16294-1996。

3.2 定义：
3.2.1 洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。

3.2.2 洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。

其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。

3.2.3 洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。

3.2.4 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU 。

通常用个数表示。

3.2.5 沉降菌：用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

3.2.6 悬浮粒子：可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001um ～1000um 之间的固体、。

洁净室沉降菌检测标准操作规程⒈目的：建立沉降检测的标准操作程序，用以规范员工的检测操作。

⒉范围：适用于公司内部生产洁净区内的沉降菌检测工作⒊责任：生产部、生产车间、质量管理部、QC检验室主任、检验员对本规程的执行负责。

⒋检测依据： YY/T0188.6－1995药品检验操作规程，第6部分，药品生物测定法。

⒌内容：5.1 设备：高压消毒锅、恒温培养箱；5.2 培养基及平皿制备：5.2.1 培养皿：一般采用￠90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。

5.2.2 培养基一般采用普通肉汤琼脂培养基或其它药典认可的培养基。

5.2.3 将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或于180℃干热灭菌2小时。

5.2.4 将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

5.2.5 待琼脂凝固后，将培养基平面倒置于30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平面上确无菌落生长，即可供采样用。

5.2.6 制备好的培养基平面宜在2～8℃的环境中存放。

5.3 采样点：5.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数。

最少采样点数目5.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。

并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

5.3.3 测试标准洁净区微生物监控的静态标准(a)如下：洁净区微生物监控的动态标准(a)如下：5.4 测试规则5.4.1 测试状态5.4.1.1 沉降菌测试前,被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

5.4.1.2 沉降菌测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。

5.4.1.3 测试状态有静态和动态二种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态。

1. 目的建立洁净室沉降菌检测的标准操作程序，用以规范检测人员的检测操作。

2. 范围适用于洁净区沉降菌的检测。

3. 职责3.1质量部专职检验员负责洁净室沉降菌的检测。

3.2 质量监督员负责监督本规程的执行情况。

4. 内容4.1仪器设备及培养基4.1.1培养皿：玻璃培养皿或一次用无菌培养皿。

4.1.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。

4.1.3仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅。

4.2 检测用培养基平皿的制备玻璃培养皿使用前应先灭菌，制备培养基平皿时注意无菌操作，每批次应设置对照平皿。

制备好的培养基平皿在2～8℃的环境中存放。

4.3采样4.3.1 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。

采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目，并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

图1 采样点位置参考图4.3.2 采样次数对任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点不得少于2个，每个采样点一般采样一次。

表2 最少培养皿数注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积，对于非单向流洁净室，是指房间面积。

4.4采样注意事项4.4.1 测试用具要做无菌处理，以确保测试的可靠性，正确性。

4.4.2 采取一切措施，防止人为对样本的污染。

4.4.3对培养基、培养条件及其它参数做相应的记录。

4.4.4 计数时一般用透射光对培养皿背面或正面仔细观察，不要漏记培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别。

必要时，用显微镜鉴别。

4.4.5采样前应仔细检验每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。

4.5 测试状态空态、静态和动态三种状态均可进行测试。

空态或静态时，室内测试人员不得多于2人。

确保静态测试时洁净室净化空调系统已处于正常运行状态，动态测试时洁净室已处于正常生产状态。

测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

1目的通过对环境进行沉降菌检测，作为确认环境是否符合规定要求及改善环境的依据。

2范围沉降菌检测3职责检验人员按本规程操作，实验主管监督本规程的实施。

4程序4.1洁净（区）clean room(area)对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。

其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。

4.2洁净工作台cleaning work station一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。

其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。

4.3洁净度cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。

4.4菌落colony forming units细菌培养后，有一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。

通常用个数表示。

4.5沉降菌settling microbe用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

4.6单向流unidirectional air flow(曾称为层流laminar flow)沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。

4.7非单向流nonumidirectional air flow(曾称为乱流turbulent flow)具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。

4.8静态测试at-rest test洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。

4.9动态测试operational test洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。

4.10洁净室环境要求、测试项目和频次。

见表1表1洁净室环境要求、测试项目和频次4.11检测流程4.11.1检测条件4.11.2检测仪器、设备、培养基恒温培养箱、蒸汽高压消毒锅、电热恒温干燥箱、百级超净工作台、Φ90mm×15mm培养皿、胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。