实验二 生物化学需氧量测定——BOD5

BOD5检测步骤五大步骤：一、试剂的配制：1.盐溶液1磷酸盐缓冲溶液：将8.5g磷酸二氢钾、21.8g磷酸氢二钾、33.4g七水合磷酸氢二钠和1.7g氯化铵溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月。

此溶液的pH值为7.2。

2硫酸镁溶液，ρ（MgSO4）=11.0g/L：将2.25g七水合硫酸镁溶于水中，稀释至100ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。

3氯化钙溶液，ρ（CaCl2）=27.6g/L：将2.76g无水氯化钙溶于水中，稀释至100ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。

4氯化铁溶液，p（FeCl3）=0.15g/L：将0.25g六水合氯化铁溶于水中，稀释至1000ml，此溶液在0~4℃可稳定保存6个月，若发现任何沉淀或微生物生长应弃去。

2.稀释水：在1L的玻璃瓶中加入1L纯水，控制水温在（20±1）℃，用曝气装置曝气1小时，使稀释水中的溶解氧达到8mg/L以上，使用前加入上述4中盐溶液各1ml，混匀，20℃保存。

曝气过程中防止污染。

3.盐酸溶液，c(HCl)=0.5mol/L：将4ml浓盐酸（HCl）溶于水中，稀释至100ml4.氢氧化钠溶液，c(NaOH)=0.5mol/L：将2g氢氧化钠溶于水中，稀释至100ml5.亚硫酸钠溶液，c(Na2SO3)=0.025mol/L：将1.575g亚硫酸钠溶于水中，稀释至1000ml。

此溶液不稳定，需现用现配。

6.丙烯基硫脲硝化抑制剂，ρ(C4H8N2S)=1.0g/L：溶解0.20g丙烯基硫脲于200ml水中混合，4℃保存，此溶液可稳定保存14d。

7.碘化钾溶液,ρ(KI)=100g/L：将10g碘化钾溶于水中，稀释至100ml。

8.淀粉溶液,ρ=5g/L：将0.50g淀粉溶于水中，稀释至100ml。

二、采集水样：采集1000ml的水样，放置于棕色玻璃瓶中，保存于0-4℃中，24小时内尽快分析。

五日生化需氧量（BOD 5）的测定1.用BOD 营养盐缓冲剂粉枕包2.选择样品体积。

详见样品容量3.用移液管轻轻搅匀样品。

向第4.向另一个BOD 瓶中加入稀释水。

这瓶就是稀释水空白。

准备稀释水。

详见稀释水准备。

选择。

一个BOD 瓶中加入最小采样量 注：如果最小采样量在3mL 左 的样品。

右，不需稀释直接测溶解氧。

再向另外4个BOD 瓶中加入不当测生活污水或沉降后的污水 同体积的样品。

做好标记，并等溶解氧浓度约为0mg/L 的样记录下每瓶水样的体积。

品时，这一步可以省略。

5.如果测试CBOD ，向每个瓶中6.向每个瓶中倒稀释水至瓶口7.小心地盖上瓶塞防止气泡。

按8.测试每个瓶中最初的溶解氧浓度。

使用电极、仪器或滴定 法。

若使用滴定法则需准备2套BOD 瓶。

记得测量稀释水空白的溶解氧 浓度。

加入2管硝化抑制剂（约 边缘，沿着瓶壁倒入以防产生 住瓶塞并上下颠倒瓶子数次以 0.16g ）。

阻止氮化合物的氧化， 气泡。

混匀液体。

结果是CBOD 。

9.小心地盖上瓶塞防止气泡。

10.在每个BOD 瓶上置一个塑 料盖。

将BOD 瓶置于20（±1）°C 的培养箱内培养5天。

11.5天后测每瓶中剩余溶解氧 12.计算BOD 值。

（详见计算方法——标准方法） 向每个 BOD 瓶内倒入稀释水作的浓度。

每瓶中剩余溶解氧的浓度至少 为水封。

应为1.0mg/L 。

稀释水准备•为了得到最好的结果，使用经过碱性高锰酸盐蒸馏的水。

•不要使用经离子交换柱所得的去离子水。

柱中的树脂(尤其是新柱)有时会释放有需氧量的有机物。

另外，细菌会在柱中滋生污染稀释水。

•在20°C条件下将蒸馏水储存在干净的容器里并放在培养箱中。

向容器中倒入蒸馏水至3/4体积，并摇晃容器使得空气进入水中饱和，或者较松地盖住容器并放置 24 小时或更久，以使氧气溶解。

•使用小型玻璃抽水泵或者气体压缩机使水中的空气饱和。

确保空气是经无菌过滤器过滤的。

BOD5测定方法BOD5（Biochemical Oxygen Demand）测定方法是一种用于测定水体中有机污染物的含量的方法。

通过测定水样中的生化需氧量，可以确定水体的污染程度，并评估水体的水质。

首先，需要根据需要选择合适的取样点，保证取样的代表性。

在取样前，应准备好干净的容器，并保证取样容器没有杂质的污染。

取样时要尽量避免空气接触，以防有机物氧化。

取样后，需要标定溶液。

标定溶液一般为硫酸钾溶液，其浓度需要根据实际情况来确定。

溶液的标定需要使用溶液中已知浓度的氧化剂，如硫酸钾溶液和氧气的混合溶液，根据溶液的消耗量计算出生化需氧量的含量。

样品处理是BOD5测定中一个重要的步骤。

通常采用两个相同样品，一个样品经过接种和密封处理，另一个样品则作为对照。

在处理样品之前，需要记录样品pH值和温度，并调整样品的pH值，使其接近生物活动的最佳范围，一般为6-8之间。

然后将样品接种BOD5菌种，接种菌种需要根据实际情况来选择，常用的有标准菌种、海水菌种等。

接种完毕后，将样品密封，以防氧气的进入。

在样品处理期间，需要测定样品的溶解氧浓度，并补充溶液以维持足够的溶解氧。

测定溶解氧浓度可使用溶解氧仪进行测定。

当溶解氧浓度低于1-2mg/L时应及时补充溶液。

BOD5值的测定通常需要在5天内进行，此期间需要定期检查样品的溶解氧浓度和温度，并记录下来。

在测定结束后，将样品取出，进行滤液和修正。

滤液可以使用滤纸或其他合适的滤膜进行过滤，以去除固体颗粒。

修正是根据样品的补充溶液量进行计算，以修正样品的生化需氧量。

最后，根据测定结果计算出BOD5值。

根据样品最初和最终的溶解氧浓度，以及样品的体积和补充溶液的量，可以计算出BOD5的含量。

计算公式如下：BOD5=(溶解氧浓度1-溶解氧浓度2)*V*F/m其中，溶解氧浓度1和溶解氧浓度2分别为样品的初始和最终溶解氧浓度，V为样品的体积，F为修正系数，m为样品的补充溶液量。

综上所述，BOD5测定方法是一种用于评估水体污染程度的重要方法。

BOD 5的测定一、实验原理生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在于水中的可氧化物质，主要是有机物质所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。

分别测定水样培养前的溶解氧的含量和在20±1℃培养五天后的溶解氧的含量，二者之差即为五天生化过程所消耗的养量（BOD 5）。

对于某些地面水及大多数工业废水、生活污水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度，保证降解过程在有足够溶解氧的条件下进行。

其具体水样稀释倍数可借助于高锰酸钾指数或化学需氧量（COD Cr ）推算。

对于不含或少含微生物的工业废水，在测定BOD5时应进行接种，以引入能分解废水种有机伍的微生物。

当废水中存在难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应接种经过驯化的微生物。

二、实验仪器设备和材料仪器1、 恒温培养箱2、 5—20L 细口玻璃瓶3、 1000－2000ML 量筒4、 玻璃搅棒：棒长应比所用量筒高度长20cm 。

在棒的底端固定一个比直径比量筒直径略小，并带有几个小孔的硬橡胶板5、 溶解氧瓶：200－300ml ，带有磨口玻璃塞并具有供水封口用的钟型口6、 虹吸管：供分取水样和添加稀释水用试剂1、 磷酸盐缓冲溶液：将8.5g 磷酸二氢钾（KH 2PO 4）,21.75g 磷酸氢二钾（k 2HPO 4）,33.4g 磷酸氢二钠（Na 2HPO 4·7H 2O ）和1.7g 氯化氨（NH 4Cl ）溶于水中，稀释至1000mL 。

此溶液的ph 应为7.22、 硫酸镁溶液：将22.5g 硫酸镁（MgSO 4·7H 2O ）溶于水中，稀释至1000mL3、 氯化钙溶液：将27.5g 无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL4、 氯化铁溶液：将0.25g 氯化铁（FeCl 3·6H 2O ）·稀释至1000mL5、 盐酸溶液：（0.5mol/L ）:将40ml （ρ=1.18g/mL ）盐酸溶于水，稀释至1000mL6、 氢氧化钠溶液（0.5mol/L ）: 将20g 氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL7、 亚硫酸钠溶液（C 1/2 Na 2SO 3=0.025mol/L ）：将1.575g 亚硫酸钠溶于水，稀释至1000mL 。

水中生化需氧量(BOD5)的测定水中生化需氧量（BOD5）的测定实验目的：1.研究测定BOD5的方法；2.掌握实验数据处理方法。

实验要求：1.了解实验目的；2.研究实验方法和数据处理；3.实验后，理解相关理论知识。

实验原理：生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物进行的生物化学过程中所消耗溶解氧的量。

此生物氧化全过程目前国内外普遍规定于20±1℃培养5天，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为BOD5值，以氧的质量浓度（mg/L）表示。

生活污水与工业废水中含有大量各类有机物，这些有机物在水体中分解时需要消耗大量溶解氧，从而破坏水体中氧的平衡，使水质恶化。

水体因缺氧造成鱼类及其他水声生物的死亡。

水中所含的有机物成分复杂，难以一一测定其成分，人们常常利用水中有机物在一定条件下所消耗的氧来间接表示水体中有机物的含量，生化需氧量即属于这类的一个重要指标。

生化需氧量的经典测定方法是稀释接种法。

采集化学测定生化需氧量的水样时应充满并密封于瓶中，在0~4℃下进行保存，一般应在6小时内进行分析。

若需要远距离转运，贮存时间不应超过24小时。

对于某些地面水及大多数工业废水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度和保证有充足的溶解氧。

稀释的程度应使培养中所消耗的溶解氧为2mg/L，而剩余溶解氧在1mg/L以上。

为了保证水样稀释后有足够的溶解氧，稀释水通常要通入空气进行曝气（或通入氧气）使稀释水中溶解氧接近饱和。

稀释水中还应加入一定量的无机营养盐和缓冲物质（磷酸盐、钙、镁和铁盐）以保证微生物生长的需要。

本方法适用于测定BOD5大于或等于2mg/L，最大不超过6000mg/L的水样。

当水样BOD5大于6000mg/L时，会因稀释带来一定的误差。

仪器：1.恒温培养箱；2.细口玻璃瓶；3.大量筒；4.玻璃搅拌棒，棒的长度应比所用量筒高度长200mm。

在棒的底端固定一个直径比底小，并带有几个小孔的硬橡胶板；5.溶解氧瓶为250~350mL之间，带有磨口玻璃塞并且有供水封用的钟形（每组8个）；6.虹吸管，供分取水样和添加稀释水用（乳胶管即可）；7.酸式滴定管（50.00mL一个）；8.三角烧瓶（500mL一个）。

课程名称：实验日期：班 级：学生姓名：1、掌握用稀释接种法测定BOD5的基本原理和操作技能。

2、掌握控制条件，保证测定准确度。

生物化学需氧量是指在好氧条件下，微生物分解有机物质的生物化学过程中所需要的溶解氧量。

微生物分解有机物是一个缓慢的过程，要把可分解的有机物全部分解掉常需要20d 以上，的时间，微生物的活动与温度有关，所以测定生化需氧量时，常以20℃作为测定的标准温度。

一般来说，在第5天消耗的氧量大约是总需氧量的70％，为便于测定，目前国内外普遍采用20℃培养5d所需要的氧作为指标，以氧的mg/L表示，简称BOD5。

水体发生生物化学过程必须具备：1、水体中存在能降解有机物的好气微生物。

对易降解的有机物，如碳水化合物、脂肪酸、油脂等，一般微生物均能将其降解，如硝基或磺酸基取代芳烃等，则必须进行生物菌种驯化。

2、有足够的溶解氧。

为此，稀释水要充分曝气以达到氧的饱和或接近饱和。

稀释还可以降低水中有机污染物的浓度，使整个分解过程在有足够的溶解氧的条件下进行。

3、有微生物生长所需的营养物质。

必须加人了一定量的无机营养物质，如磷酸盐、钙盐、镁盐和铁盐等。

稀释法测定BOD是将水样经过适当稀释后，使其中含有足够的溶解氧供微生物和生化需氧的要求，将此水样分成两份。

一份测定培养前的溶解氧；另一份放人20℃恒温箱内培养5d后测定溶解氧，两者的差值即为BOD 5。

水中有机污染物的含量越高，水中溶解氧消耗愈多，BOD值也愈高，水质愈差。

BOD是一种量度水中可被生物降解部分有机物（包括某些无机物）的综合指标，常用来评价水体有机物的污染程度，并已成为污水处理过程中的一项基本指标。

1、仪器：恒温培养箱、虹吸管、1L大量筒、移液管、锥形瓶、搅拌棒、滴管、滴定管、 铁架台，洗耳球等。

2、药品：氯化钙溶液、硫酸镁溶液、碱性碘化钾-叠氮化钠溶液，浓硫酸、重铬酸钾 溶液、标准硫代硫酸钠溶液、葡萄糖-谷氨酸标准溶液。

1、水样预处理：（1）用虹吸管取1000ml的稀释水至1000ml大量筒中，在大量筒中加入营养物质各 1ml，用特制搅拌棒在水面以下慢慢搅匀（不应产生气泡）。

实验（一）生化需氧量(BOD5)的测定一．实验原理在水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾溶液，水中的溶解氧将二价锰氧化成四价锰的氢氧化物棕色沉淀。

加酸后，沉淀溶解，四价锰又可氧化碘离子而释放出与溶解氧量相当的游离碘。

以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液滴定释放出的碘，可计算出溶解氧含量。

反应式如下：MnSO4+2NaOH=Na2SO4+Mn(OH)2↓2Mn(OH)2 +O2=2 MnO(OH)2↓（棕色沉淀）MnO(OH)2+2H2SO4=Mn(SO4)2+3H2OMn(SO4)2+2KI= MnSO4+K2SO4+I22Na2S2O3+I2=Na2S4O6+2NaI二．实验仪器、设备1．250mL溶解氧瓶。

2．250mL锥形瓶。

3．25mL酸式滴定管。

4．1mL、2mL吸管。

5．50mL移液管。

三．实验试剂1．硫酸锰溶液：称取36.4g硫酸锰(MnSO4·H2O )或48g（MnSO4·4H2O）溶于水中，稀释至100mL。

此溶液加至酸化过的碘化钾溶液中，遇淀粉不得产生蓝色。

2．碱性碘化钾溶液：称取50g氢氧化钠，溶解于30～40mL水中，另称取15g 碘化钾溶于20mL水中，待氢氧化钠溶液冷却后，将两溶液混合，加水稀释至100mL。

如有沉淀则放置过夜，倾出上清液，贮于棕色瓶中，用橡胶塞塞紧，避光保存。

此溶液酸化后，遇淀粉应不呈蓝色。

3．（1+5）硫酸溶液（标定硫代硫酸钠溶液用）。

4．1%（m/V）淀粉溶液：称取1g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，再用刚煮沸的水稀释至100mL。

冷却后，加入0.1g水杨酸或0.4g氯化锌防腐。

5．重铬酸钾标准溶液（c 1/6 K2Cr2O7=0.025mol/L）：称取在105～110℃烘干2h，并冷却的优级纯重铬酸钾1.2258g溶于水中，移入1000mL容量瓶内，稀释至标线，摇匀。

6．硫代硫酸钠溶液[c Na2S2O3·5H2O≈0.0125 mol/L]：称取3.1g硫代硫酸钠溶于煮沸放冷的水中，加入0.2g碳酸钠，用水稀释至1000mL，贮于棕色瓶中。

生化需氧量(BOD5)的测定生化需氧量（Biological Oxygen Demand，BOD5）是指在水体中一定温度下，在一定的时间内，细菌消耗可溶态有机物质的氧气需求量。

其测定可以用来判断水体自身的净化能力和水质的优劣，也是水处理工程中设计和运营的重要参数之一。

BOD5测定的原理是将水样放置在一定的温度下，让水样中的生物在水中消耗容易被生物分解的有机物质，同时减少氧气的含量。

通过测量水样在不同时间点上的氧气需求量，可以推算出水样中的生物需氧量。

通常选择5天为测定时间。

因为5天对于水中细菌的生长和分解有机物质而言，是一个相对恰当的时间。

BOD5的测定方法分为两种：灭菌法和不灭菌法。

灭菌法是指将水样在一定的条件下灭菌，然后添加一定量的有机物质，测定样品在一定时间内的氧气需求量。

随着时间的推移，细菌利用有机物质的速度变慢，直到完全消耗，样品中的氧气浓度将重新升高，最终通过测定样品中氧气需求量的变化来计算BOD5值。

不灭菌法仅仅是不进行灭菌处理的BOD5测定方法。

下面是BOD5的实验步骤：1. 样品采集：水样应选取代表性的、代表整个水体的样品。

样品应该在整个水体的深度和位置中等抽样，以减小结果偏差。

测定之前样品应该在室温下保存。

2. 制备样品：将收集到的样品过滤、纳滤或沉淀，得到干净的无悬浮颗粒的液体。

样品调整pH值可以提高细菌活性，pH值应控制在6.5-7.5之间。

3. 分装样品：将待测样品分装到250ml比色皿中，并严密封闭。

4. 测定初始DO值：将分装好的比色皿洗净后，分别注入DO电极和温度计。

测定样品的溶解氧（DO）值，得到的数值为初始DO值。

5. 培养细菌：选取合适的细菌培养液，按标准稀释后加入样品中，并将样品放置在恒定的温度下（一般为20℃）。

并在样品中搅动以促进氧气的溶解。

6. 5天后测定终点DO值：在培养5天之后，再次测定样品中的DO值，得到的值为终点DO值。

7. 计算BOD5值：通过初始DO值和终点DO值的差值计算出需要细胞呼吸的氧气量，即5天内的BOD5值。

实验(一)生化需氧量(B0D5)的测定一．实验原理在水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾溶液，水中的溶解氧将二价锰氧化成四价锰的氢氧化物棕色沉淀。

加酸后，沉淀溶解，四价锰又可氧化碘离子而释放出与溶解氧量相当的游离碘。

以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液滴定释放出的碘，可计算出溶解氧含量。

反应式如下：MnSO4+2NaOH二Na2SO4+Mn(OH)2 J2Mn(OH)2 +O2=2 MnO(OH)2 J (棕色沉淀)MnO(OH)2+2H2SO4=Mn(SO4)2+3H2OMn(SO4)2+2KI= MnSO4+K2SO4+I22Na2S2O3+I2=Na2S4O6+2NaI二．实验仪器、设备1. 250mL溶解氧瓶。

2 . 250mL锥形瓶。

3 . 25mL酸式滴定管。

4 . 1mL 2mL吸管。

5 . 50mL移液管。

三．实验试剂1 .硫酸锰溶液：称取36.4g硫酸锰(MnSO4 H2O )或48g (MnSO4 4H2O溶于水中，稀释至100mL此溶液加至酸化过的碘化钾溶液中，遇淀粉不得产生蓝色。

2 .碱性碘化钾溶液：称取50g氢氧化钠，溶解于30〜40mL水中，另称取15g 碘化钾溶于20mL水中，待氢氧化钠溶液冷却后，将两溶液混合，加水稀释至100mL 如有沉淀则放置过夜，倾出上清液，贮于棕色瓶中，用橡胶塞塞紧，避光保存。

此溶液酸化后，遇淀粉应不呈蓝色。

3 .( 1+5)硫酸溶液(标定硫代硫酸钠溶液用) 。

4 . 1%( m/V)淀粉溶液：称取1g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，再用刚煮沸的水稀释至100mL冷却后，加入0.1g水酸或0.4g氯化锌防腐。

5 .重铬酸钾标准溶液(c 1/6 K2Cr2O7=0.025mol/L ):称取在105〜110C烘干2h，并冷却的优级纯重铬酸钾1.2258g溶于水中，移入1000mL容量瓶，稀释至标线，摇匀。

6 .硫代硫酸钠溶液[c Na2S2O3 - 5H2S 0.0125 mol/L]:称取3.1g硫代硫酸钠溶于煮沸放冷的水中，加入0.2g碳酸钠，用水稀释至1000mL贮于棕色瓶中。