沉淀反应(Precipitation)

抗原抗体反应的类型
抗原抗体反应一般可分为以下几类：
1. 中和反应（Neutralization Reaction）：抗体与抗原结合，形成抗原-抗体复合物。

这种复合物可以结合并中和抗原的毒性或致病性，从而阻止其对细胞或组织的损害。

2. 沉淀反应（Precipitation Reaction）：抗体与抗原结合后，形成大型复合物，它们从溶液中沉淀下来。

这种反应可用于检测抗原的存在和测定其浓度。

3. 凝集反应（Agglutination Reaction）：抗体与抗原结合后，形成可见的凝集或聚集。

这种反应可用于检测细菌、病毒或其他细胞表面的抗原。

4. 激活补体反应（Complement Activation Reaction）：特定的抗体与抗原结合后，能够激活补体系统。

这将引发一系列的酶反应，最终导致目标细胞的溶解或破坏。

5. 细胞介导的免疫反应（Cell-mediated Immune Reaction）：抗体与抗原结合后，可以激活和引导免疫细胞，如吞噬细胞、T细胞等，来清除抗原或抗原表达的细胞。

这些类型的反应可以相互作用，形成复杂的免疫反应网络，以保护机体免受病原体或其他异物的侵害。

二、 絮状沉淀试验
絮状沉淀试验：是将抗原与相应抗体混合， 在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形成肉 眼可见的絮状沉淀物。 方法评价：敏感度较低、简便、受抗原抗体 比例的影响非常明显 应用：性病研究实验室试验（VDRL）、USR、 RPR，本实验只能作为定性或半定量实验方法。
絮 Ag
1:2
状
沉淀线靠近谁浓度则小，沉淀弧趋向谁分子量则大
1表示待检Ag 2表示标准Ag 两条沉淀线互相吻合相连，表明两个抗 原完全相同。 两条沉淀线呈部分相切，表明两个抗
原之间有部分相同。
两条沉淀线交叉而过，表明两个抗原 完全不同。 待检Ag与标准Ag性质相同；但含量较 低；
1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。
＋
－
对流免疫电泳
• 优点及应用 • 电场限制了抗原抗体运动方向，加速了 反应速度，使反应时间大大缩短了，灵 敏度显著提高了，本法主要用于一些病 原微生物及其他蛋白质抗原的检测。
二、火箭免疫电泳
rocket immnoelectrophoresis，RIE
1、原理
单向免疫扩散＋电泳,定量检测技术 电泳时凝胶中抗体不移动，样品孔中的抗原 向正极泳动，随着抗原量的逐渐减少，抗原泳动 的基底区越来越窄，抗原抗体分子复合物形成的 沉淀线逐渐变窄，形成一个形状如火箭的不溶性 复合物沉淀峰，抗体浓度固定时，峰的高度与抗 原量呈正相关。
体量固定，所测吸光度与复合物的量成正比，与
待测抗原量成正比。用已知浓度的抗原标准品建 立标准曲线，根据待测样品的吸光度可得出抗原
的含量。
2、方法：
1) 稀释检测标本和标准抗原（5个浓度） 2) 将稀释标本和标准抗原与适当过量的抗血清混 合反应 3) 在340nm处测各管吸光度（IC：35~100nm，选择 范围：290~410nm）

免疫学和免疫学检验：沉淀反应沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反。

早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反。

早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应。

1905年Bechhold把抗体放在明胶中，将抗原加于其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行。

Oudin（1946）报告了试管免疫扩散技术，Mancini（1965）提出单向免疫扩散技术，使定性免疫试验向定量化发展。

另一方面，免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、微量、自动化的新阶段。

沉淀反应分两个阶段，第一阶段发生抗原抗体特异性结合，第二阶段形成可见的免疫复合物（参见第九章）。

经典的沉淀反应在第二阶段观察或测量沉淀线或沉淀环等来判定结果，称为终点法；而快速免疫浊度法则在第一阶段测定免疫复合物形成的速率，称为速率法。

现代免疫技术（如各种标记免疫技术）多是在沉淀反应的基础上建立起来的，因此沉淀反应是免疫学方法的核心技术。

第一节液体内沉淀试验一、絮状沉淀试验絮状沉淀试验为历史较久，又较有用的方法。

该法要点是：将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在下，抗原与抗体结合，形成絮状沉淀物。

这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响，因而产生了两种最适比例的基本测定方法。

（一）抗原稀释法抗原稀释法（Dean-Webb法）是将可溶性抗原作一系列稀释，与恒定浓度的抗血清等量混合，置室温或37℃反应后，产生的沉淀物随抗原的变化而不同。

表12-1系以牛血清白蛋白为例的实验结果。

表12-1Dean-Webb定量沉淀试验管号抗原抗体总沉淀量反应过剩物抗原沉淀量抗体沉淀量沉淀中Ab/Ag1 0.003 0.68 0.093 Ab 0.003 0.090 30.02 0.005 0.68 0.145 Ab 0.005 0.140 28.03 0.011 0.68 0.249 Ab 0.011 0.238 21.74 0.021 0.68 0.422 Ab 0.021 0.401 19.15 0.032 0.68 0.571 Ab 0.032 0.539 16.86 0.043 0.68 0.734 － 0.043 0.691 16.17 0.064 0.68 0.720 Ab －－－8 0.085 0.68 0.601 Ag －－－9 0.171 0.68 0.464 Ag －－－10 0.341 0.68 0.368 Ag －－－单位：mmol/L 从表12-1可以看出，1～5管为抗体过剩管，7～10管为抗原过剩管，唯第6管沉淀物最多，两者之比为16:1，即最适比。

3.方法评价
操作简便。 灵敏度较高，比双扩高约10倍。 分辨率低于双扩。

4. 临床应用

常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴 定等
(二) 火箭免疫电泳

火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合，在电场中
加速定向扩散的单向免疫扩散技术，由于其沉淀形
似火箭，故称为火箭电泳。
1. 基本原理
一、透射免疫比浊法
（transmission turbidimetry）
(一) 基本原理

抗原抗体结合后形成的CIC引起液体介质出 现浊度改变，光线的透过量减少，被吸收 光线量与CIC形成量呈正相关，依所测吸光 度值推算待测抗原的量 。
二、散射免疫比浊法
（nephelometry）

1967年， Ritchie等
方法稳定、简便的方法，不需特别仪器设 备，重复性好，但灵敏度稍差(1.25mg/L)。
（四）临床应用
1．血清学诊断:出现沉淀线，表明存在相应的Ag或Ab.
2.
免疫化学分析:浓度、分子量、纯度、反应性 沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；反之则反
出现多条沉淀线，则说明抗原和抗体皆不是单 一成分。可用于鉴定抗原或抗体的纯度。
三、速率抑制免疫比浊法
(rate inhibition immunoturbidimetry)

是一种竞争性结合试验，主要用于测定半抗原和 药物等小分子物质。

试验时先将一定量的已知半抗原-载体（大分子） 与限量的特异性抗体发生反应，生成的免疫复合 物可形成一定的速率散射峰值。
待测抗原与抗体竞争结合，速率散射峰值降低， 降低程度与标本中的待测半抗原成正比。
第5章 沉淀反应 Precipitation