免疫细胞分离及NK活性测定

nk细胞检验标准NK细胞检验标准NK细胞是一种重要的免疫细胞，它能够识别并杀死病毒感染的细胞和癌细胞。

因此，检测NK细胞的数量和功能状态对于诊断和治疗某些疾病具有重要意义。

下面将介绍NK细胞检验的标准。

1. NK细胞数量检测NK细胞数量检测是通过流式细胞术或细胞计数器进行的。

正常人的NK细胞占外周血淋巴细胞的10%至15%。

如果NK细胞数量低于正常范围，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

2. NK细胞功能检测NK细胞功能检测是通过测量NK细胞的杀伤活性来进行的。

常用的方法是使用靶细胞，如K562细胞，来评估NK细胞的杀伤能力。

正常人的NK细胞杀伤活性应该在10%至50%之间。

如果NK细胞杀伤活性低于正常范围，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

3. NK细胞表面标志物检测NK细胞表面标志物检测是通过检测NK细胞表面的分子来评估NK 细胞的功能状态。

常用的标志物包括CD56、CD16、NKG2D等。

正常人的NK细胞应该表达这些标志物。

如果NK细胞表面标志物异常，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

4. NK细胞基因检测NK细胞基因检测是通过检测与NK细胞功能相关的基因来评估NK 细胞的功能状态。

常用的基因包括KIR、NKG2A等。

正常人的NK 细胞应该表达这些基因。

如果NK细胞基因异常，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

NK细胞检验是评估免疫功能的重要方法之一。

通过检测NK细胞数量、功能、表面标志物和基因等指标，可以帮助医生诊断和治疗某些疾病，如感染、肿瘤等。

因此，对于需要进行免疫功能检查的患者，建议进行NK细胞检验。

乳腺癌患者T淋巴细胞免疫功能及NK活性检测分析
齐红;单征;于宏波
【期刊名称】《中国实验诊断学》
【年(卷),期】2007(011)001
【摘要】目的本实验旨在比较乳腺癌患者细胞免疫功能与正常人群的差异,以了解细胞免疫功能对肿瘤患者治疗及预后的影响.方法对35例乳腺癌患者外周血T淋巴细胞及NK活性进行检测,并测定了部分患者T淋巴细胞亚群变化,比较其与正常人群对照组的差别.结果肿瘤患者二项指标均低于正常对照组,CD3、CD4阳性细胞数减少,CD8+数增加,Th/Ts比例下降或倒置.结论肿瘤患者均存在不同程度的免疫抑制或功能缺陷.
【总页数】2页(P51-52)
【作者】齐红;单征;于宏波
【作者单位】吉林省肿瘤防治研究所,吉林,长春,130012;吉林省肿瘤防治研究所,吉林,长春,130012;吉林省中医院
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.新辅助化疗对局部进展期乳腺癌患者T淋巴细胞亚群及NK细胞免疫功能的影响[J], 白海亚;马秀芬
2.31例乳腺癌患者外周血T淋巴细胞及NK活性检测分析 [J], 齐红;单征;刘玉侠;
王英丽;张耿月
3.新辅助化疗对局部进展期乳腺癌患者近期疗效及T淋巴细胞免疫功能的影响 [J], 卢曼曼;叶松;冯其柱;杨怀成;王琦;李怀玉
4.54例老年COPD患者红细胞免疫功能与T淋巴细胞亚群检测分析 [J], 赵湘;张锦铭
5.老年人红细胞免疫功能及T淋巴细胞亚群检测分析 [J], 王中东;黄麦华;李忠培因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

免疫系统检查项目第一篇：免疫系统检查项目免疫系统是人体防御外来病原体的重要系统，它的健康与否关系到人体的免疫力，免疫力高，则对疾病的抵御能力增强；反之，免疫力低，则容易受到各种疾病的侵袭。

因此，免疫系统的检查十分重要，可以帮助我们及早发现免疫不良，及早预防、治疗疾病。

1. T细胞子集检查T细胞是免疫系统的一种重要细胞，可以帮助人体识别外来的病原体，并进行攻击。

在T细胞中，CD4+和CD8+细胞是两个重要的子集，它们的相对比例可以反映人体免疫状态。

T细胞子集检查通常采用流式细胞术，可以对血液样本中的T细胞进行分离、筛选和鉴定，从而了解CD4+和CD8+细胞的相对比例、功能以及活力等方面的信息。

2. NK细胞活性检查自然杀伤（NK）细胞是一种特殊的淋巴细胞，具有强烈的杀菌、抗病毒和抗肿瘤作用，是人体免疫系统的重要组成部分。

NK细胞活性检查可以测量NK细胞的活力，判断人体免疫系统的抗病能力。

NK细胞活性检查通常采用靶细胞溶解实验或细胞流式术等方法，通过测量NK细胞对靶细胞的溶解作用来评估NK细胞活性。

3. 免疫球蛋白检查免疫球蛋白是人体免疫系统的重要成分，具有抗体形成和免疫应答等功能。

在临床上，可以通过检测血液中的不同种类免疫球蛋白的水平来评估免疫系统的功能状态。

免疫球蛋白检查可以通过血清免疫电泳、放射免疫测定和酶联免疫吸附试验等方法来进行。

4. 淋巴细胞亚群检查淋巴细胞是免疫系统的重要成分，包括B细胞、T细胞和NK细胞等，它们在免疫应答中起着不同的作用。

淋巴细胞亚群检查可以评估血液中的淋巴细胞比例和功能，反映免疫系统的整体状态。

淋巴细胞亚群检查通常采用流式细胞术和细胞荧光染色等方法，可以对不同亚群淋巴细胞进行鉴定和分离，从而评估免疫系统的功能状态。

5. 细胞因子检测细胞因子是免疫系统中的重要信号分子，可以调节细胞增殖、分化和功能，发挥抗炎、抗肿瘤等重要生物学活性。

细胞因子检测可以评估免疫系统中不同细胞因子的水平变化，反映细胞因子的稳态和免疫系统的功能状态。

nk细胞标准【NK细胞标准】一、定义自然杀伤(NK)细胞是一种具备杀伤能力的淋巴细胞，无需特异性抗原识别即可杀伤多种肿瘤细胞和感染细胞。

二、特点1. 膜表型：CD56+CD3-，无T细胞受体(TCR)。

2. 杀伤方式：NK细胞通过分泌细胞毒素(granzyme、perforin)和靶细胞表面受体的结合来实现杀伤作用。

3. 不依赖免疫记忆：NK细胞杀伤作用不需预先暴露于特定抗原，无需免疫记忆，故对新出现的肿瘤细胞和感染细胞也具有杀伤能力。

三、活化机制NK细胞的活化取决于抑制性和激活性受体的动态平衡。

当激活性受体的信号占优势时，NK细胞活化；当抑制性受体的信号占优势时，NK细胞被抑制。

这一平衡有赖于激活性受体和抑制性受体与靶细胞上的配体结合，从而决定NK细胞的活性。

四、标准化由于NK细胞具有杀伤特性，临床上可应用于免疫治疗。

为确保治疗效果的稳定性和可比性，对NK细胞的标准化十分重要。

1. NK细胞来源a. 供体：供体来源包括外周血、骨髓、胎盘和胎儿脐血等。

b. 细胞分离：采集后需通过梯度离心法或免疫磁珠法分离出单个NK细胞。

2. NK细胞培养a. 培养基：含有足够的营养物质和生长因子的培养基。

b. 杂交细胞株的辅助：杂交细胞株可作为辅助细胞提供必要的细胞因子。

3. 活化a. 细胞因子：外源性细胞因子（如白细胞介素2、白细胞介素12）可用于活化和扩增NK细胞。

b. 共刺激信号：尽可能提供足够的共刺激信号（如来源于杂交细胞的共刺激分子）。

4. 扩增a. 细胞密度：培养基中的细胞密度需适中，过低或过高都会影响细胞增殖。

b. 培养时间：培养时间应掌握在能够获得足够数量NK细胞的情况下，避免过度扩增导致细胞老化。

5. 质量控制a. 活性检测：NK细胞的活性需通过诸如CD107a脱颗粒实验、IFN-γ释放试验等进行测定。

b. 纯度检测：明确NK细胞的比例以及其他杂质细胞的数量，如CD3+ T细胞。

c. 活存检测：检测细胞的活存状态，确保细胞存活率和功能稳定。

nk细胞提取及培养方法以nk细胞提取及培养方法为标题，本文将介绍NK细胞的提取和培养方法。

NK细胞（Natural Killer cell）是一种重要的免疫细胞，具有杀伤肿瘤细胞和感染病原体的能力。

NK细胞的提取和培养是进行相关研究和应用的前提，下面将详细介绍相关步骤。

一、NK细胞的提取方法1. 从外周血中提取：外周血中富含NK细胞，因此是提取NK细胞的常用来源。

首先，收集供体的外周血样本，并进行离心，分离出白细胞。

然后，使用比重梯度离心法，将白细胞层分离出来。

最后，使用磁珠或流式细胞术等方法，选择性地富集NK细胞。

2. 从脐带血中提取：脐带血中的NK细胞数量相对较多，因此也是提取NK细胞的常用来源。

提取方法与外周血类似，首先收集脐带血样本，并进行离心，分离出白细胞。

然后，使用比重梯度离心法，将白细胞层分离出来。

最后，使用磁珠或流式细胞术等方法，选择性地富集NK细胞。

二、NK细胞的培养方法1. 培养基的准备：选择适合NK细胞生长的培养基，如RPMI 1640培养基。

将培养基加热至37摄氏度，并加入适量的胎牛血清、抗生素和生长因子等。

2. 细胞的接种和培养：将提取到的NK细胞接种在含有培养基的培养皿中。

细胞密度一般为1-2×10^6个/ml。

将培养皿放入培养箱中，保持37摄氏度和5%二氧化碳的恒定环境。

每2-3天更换新的培养基，以保持细胞的正常生长。

3. 细胞的扩增：为了获得足够数量的NK细胞，可以进行细胞的扩增培养。

在细胞密度达到80%左右时，将细胞进行传代，即将细胞从原来的培养皿中移至新的培养皿中，继续进行培养。

每次传代时，可根据需要调整细胞的密度和培养时间。

4. 细胞的活化：为了增强NK细胞的杀伤能力，可以进行细胞的活化处理。

常用的活化方法包括使用细胞因子（如IL-2、IL-15等）刺激细胞，或使用特定的抗体与细胞表面的激活受体结合。

活化后的NK细胞可以更好地发挥其免疫功能。

三、NK细胞的质量控制1. 细胞形态观察：在培养过程中，定期观察NK细胞的形态变化，如细胞的形状、大小、颜色等。

第十三章免疫细胞分离及检测技术本章考点1.免疫细胞的分离2.淋巴细胞表面标志的检测3.淋巴细胞功能检测技术4.免疫细胞检测的临床意义第一节免疫细胞的分离一、外周血单个核细胞的分离1.原理：外周血中单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同，介于1.075～1.090之间，红细胞及粒细胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之间。

因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间，而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。

2.试剂：常用的分层液有Ficoll与Percoll两种（1）Ficoll分层液法：主要用于分离外周血中单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法，其分布由上到下依次为：稀释的血浆层，单个核细胞层，粒细胞层和红细胞层。

Ficoll分层液即聚蔗糖-泛影葡胺，是一种较理想的细胞分层液，其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。

操作时，将分层液置于试管下层，然后将肝素化的全血或白细胞悬液以Hanks或PBS液稀释后，轻轻铺于分层液面上，经2000rpm15-20min离心后，红细胞与粒细胞因比重大于分层液，故较快沉于管底。

血小板则比重小于分层液而悬浮于血浆中。

唯有与分层液比重相当的单核细胞和淋巴细胞密集于血浆层和分层液的界面中。

其分布由上到下依次为：稀释的血浆层，单个核细胞层，粒细胞层和红细胞层。

见下图。

图聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度梯度离心法外周血小分布示意图引自陶义训主编：免疫学和免疫学检验，人民卫生出版社1995年9月第1版第4次印刷（2）Percoll分层液法：是一种连续密度梯度离心分离法，其分布由上至下依次为：死细胞层，富含单核细胞组分层，富含淋巴细胞的组分层及红细胞与粒细胞组分层。

图连续密度梯度离心法分离单个核细胞中各细胞成分的分布示意图引自陶义训主编：免疫学和免疫学检验，人民卫生出版社1995年9月第1版第4次印刷二、淋巴细胞的分离1.纯淋巴细胞群的采集：利用单核细胞在37℃和Ca2+存在时，能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性，从单个核细胞悬液中除去单核细胞，从而获得纯淋巴细胞群。

免疫细胞功能检测技术疫细胞是指参与机体免疫应答的细胞，大致可分为两类，一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显示出特异性应答的功能，主要指淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等；另一类能捕获抗原，处理抗原，以一定方式提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。

淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。

体内试验主要是进行迟发型超敏反应；体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。

一、T细胞功能检测T细胞具有多种免疫生物学功能，如直接杀伤靶细胞、辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原或丝裂原刺激产生增殖反应及产生各种细胞因子。

T细胞增殖试验体外刺激T细胞增殖反应的刺激物包括植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）和美洲商陆（PWM）、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD）和白色念珠菌等。

非特异性增殖-丝裂原：PHA、ConA、PWM特异性增殖-抗原：破伤风类毒素、PPD、白色念珠菌T细胞增殖试验形态学检查法：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。

缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。

3H-TdR掺入法（最标准）：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。

MTT比色法（最常用）：本方法的敏感性虽不及3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。

T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后，分泌各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平，以反映T细胞功能。

T细胞介导的细胞毒试验T细胞介导的细胞毒试验时细胞毒性T细胞（CTL）的特征，凡致敏T细胞再次遇相应白细胞抗原，可表现出破坏和溶解包细胞，他使评价机体细胞免疫水平的一种常用指标。