结核杆菌的分离鉴定程序

（五）鉴定试验
最终鉴定需要进行生化反应及终末代谢产物等检 查。
生化试验主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验 硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂 酶试验、明胶液化试验、硫化氢试验等——厌氧 API条。
目前用于厌氧菌快速鉴定还有自动微生物鉴定系 统等。
实验内容
1、记录抗酸染色步骤。 2、油镜下观察抗酸杆菌涂片，并记
厌氧菌的分离与鉴定
（三）标本接种
标本接种3个血琼脂平板，分别置于有氧、 无氧和含5-10%CO2的环境中培养。若只 要求检测厌氧菌，只需接种1个厌氧血琼 脂平板。
厌氧菌的分离与鉴定
（四）耐氧试验
当厌氧血平板上有细菌生长时，为了确 定是否为厌氧菌，必须做耐氧试验。挑 取菌落分别转种2块需氧血琼脂平板和1 块厌氧血琼脂平板，然后将平板分别放 置在需氧、厌氧和CO2环境中培养。
荧光染色结果报告
—：观察70个视野未发现抗酸杆菌； ±：70个视野内发现1-2条抗酸杆菌； 1+：50个视野内发现2-18条抗酸杆菌； 2+：10个视野内发现4-36条抗酸杆菌； 3+：每个视野内发现4-36条抗酸杆菌； 4+：每个视野内发现36条以上抗酸杆菌。
厌氧菌的分离与鉴定
厌氧菌标本的采集 涂片与染色 标本接种 耐氧试验 鉴定试验
干后油镜下观察结果。
抗酸染色结果观察
油镜下观察涂片，在淡蓝色背景下可见染成红 色细长或分枝状杆菌，此为抗酸染色阳性细菌 。
抗酸染色结果报告
—：观察300个视野未发现抗酸杆菌； ±：300个视野内发现1-2条抗酸杆菌； 1+：100个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 2+：10个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 3+：每个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 4+：每个视野内发现9条以上抗酸杆菌。

1．结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法，其操作简单快捷，特异性高，设备要求低，但是灵敏度较低，不能及时发现病人。

1.2 发光二极管荧光显微镜（LED荧光显微镜）发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源，延长了显微镜使用寿命，不需要暗室，且价格低廉，可以提高涂片的阳性检出率。

目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高，已在部分区县开始使用。

1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下，特殊的引物和特异性探针在酶的作用下，反应体系在一个密闭的反应管内反应。

扩增反应一般不超过一个小时，最短半小时。

目前应用玻璃化试剂，稳定性好，便于运输。

目前在国内区县级应用评估。

1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本（或其它标本）用专用消化灭活液充分消化，完全暴露并保留抗酸杆菌，通过自动离心涂片机（或半自动制片染色机）对消化后的标本进行充分集菌。

直接在夹层杯装置中进行抗酸染色，取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。

夹层杯法操作方便快捷，便于标准化操作，通过消化灭活，安全性改善，阳性检出率也比直接涂片法大大提高。

夹层杯的装置有沉降式和虑过式，适用于不同工作量的医疗机构。

1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增，扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定，诊断是否为结核病。

同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染，整个反应过程只需一个小时即可完成，通过肉眼观察荧光判读结果。

2．结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准，也是获得分离菌株开展耐药检测的前提，我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法，包括简单法和中和离心法。

虽然培养是诊断的精标准，但是花费时间长，需要4-8周时间。

2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂，改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。

肺结核调查处置流程1.患有肺结核的患者需要进行肺部X光检查。

Patients with pulmonary tuberculosis need to undergo chest X-ray examination.2.确诊肺结核后，需要进行血液和痰液检查。

After the diagnosis of pulmonary tuberculosis, blood and sputum tests are needed.3.医生会根据患者的具体情况开具治疗方案。

Doctors will prescribe a treatment plan based on the patient's specific condition.4.患者必须严格按照医嘱进行治疗，并定期复诊。

Patients must strictly follow the doctor's orders for treatment and attend regular follow-up appointments.5.家庭成员需要接受结核杆菌耐药性检查。

Family members need to undergo drug-resistant tuberculosis screening.6.进行结核病菌株的分离和培养检查。

Perform isolation and culture testing of tuberculosis bacteria.7.对结核病患者进行隔离治疗。

Isolation treatment for patients with tuberculosis.8.组织传染病监测，追踪病例的接触者。

Organize infectious disease monitoring and track contacts of cases.9.做好结核病的疫情防治工作，加大宣传力度。

Do a good job in the prevention and control of tuberculosis, and increase publicity efforts.10.加强对医务人员的防护和培训。

一、痰标本的采集
1、痰标本的种类 根据痰标本采集时间，可 将标本分为3类： （1）即时痰：就诊时深呼吸后咳出的痰液； （2）清晨痰：患者晨起立即用清水漱口后咳 出的第2口、第3口痰液； （3）夜间痰：送痰前一日患者晚间咳出的痰 液。
2、正确的咳痰方法：
（1）咳嗽前应缓慢的深吸气，吸气后稍屏气片刻。 （2）躯干略向前倾，两侧手臂屈曲，平放在两侧胸 壁下部，内收并稍加力。 （3） 咳嗽时腹肌用力快速收缩，使腹壁内陷。一次 深吸气可连续咳嗽三声。 （4）停止咳嗽并收缩将剩余的气体尽量呼尽。 （5）在缓慢吸气或平静呼吸片刻，准备再次咳嗽的 动作。 （6）勿将漱口水、唾液、呕吐物、鼻咽分泌物等混 入痰内，以免影响检验结果。如标本不合格，检验 人员应当拒收，并和临床医生对接，重新采样。 （7）标本量一般在3～5毫升。
分支杆菌培养阳性（3+）：菌落占斜面面3/4 分支杆菌培养阳性（4+）菌落布满全斜面。
5、培养基污染情况报告
在观察分支杆菌生长情况时，发现有非分支 杆菌生长，报告污染，重新送检。污染必须 控制在2%以下，当污染率高于2%时，提示 培养基污染或消化处理不当，应采取相应措 施，查寻和分析原因。
结核分支杆菌培养
讲述内容： 一、痰标本的采集 二、结核分支杆菌培养操作规程
结核分支杆菌培养是结核病诊断 细菌学检验的重要内容之一（另外是 “抗酸杆菌涂片检查法”）这里我只 讲结核分支杆菌培养。 讲之前我还是要强调下要保护好 自己（即生物安全问题）。结核分支 杆菌是怎样传播我想你们比பைடு நூலகம்懂，由 于时间关系，这里也不展开讲，进入 正题………
3、接种方法：取前处理消 化后痰液0.1mL,无菌操作接 种于培养基斜面上，每份标 本同时接种两支酸性改良罗 氏培养基，放37℃孵育。