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植物组织中可溶性糖含量的测定实验报告10科四谭晓东20102501024一、实验目的掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的提取和方法原理；掌握分光光度计中标准曲线制作的使用程序。
二、实验原理植物组织中的糖（包括还原糖和非还原糖）可以与浓硫酸反应生成糠醛，糠醛和蒽酮反应可以生成蓝绿色络合物，在625nm处有最大光吸收值。
三、实验材料大白菜叶片与叶柄四、实验步骤1. 可溶性糖的提取大白菜叶柄和叶片各0.5g鲜重，研磨+10ml 80%乙醇80度水浴30mi n过滤后定容至25ml2.标准葡萄糖液的配制（200ug/ml）葡萄糖浓度020*********（ug/ml）标准匍萄糖液吸00.10.20.30.40.5取量（ml）蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.5蒽酮（ml）5混匀，沸水浴10min，冷却后在625nm下比色3.样品液显色和比色0.1ml提取液+0.9ml蒸馏水冷却后对照标准曲线比色五、实验结果1.葡萄糖标准曲线标准方程：y=184.6x-1.973 R=0.99402. 根据标准曲线测到，叶片的吸光度是0.249，葡萄糖浓度为43.96ug/ml，含糖量为13.82% ;叶柄的吸光度为0.276，葡萄糖浓度为49.01ug/ml，含糖量为15.41%六、分析与讨论植物体内的可溶性糖和淀粉均是光合作用产物。
可溶性糖以蔗糖为主，是植物糖类运输的主要形式，其次是葡萄糖、果糖、麦芽糖、戊糖和糖苷等。
可溶性糖在硫酸作用下生成糖醛或羟甲基糠醛化合物，糖醛或羟甲基糠醛可与蒽酮作用形成蓝绿色络合物（糖醛衍生物），在一定波长范围内，其颜色的深浅与糖含量有定量关系，在625 nm波长下的吸光值与可溶性糖含量成正比。
由于蒽酮与可溶性糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。
该实验方法简便，灵敏度高，可溶性糖含量在30卩g左右就能进行测定，所以可作为测定微量可溶性糖之用。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值•但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
血糖含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
货号：BC2490
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：1mmol/L葡萄糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存；
混合试剂的配制：将试剂二和试剂三等比混合，现配现用。
产品说明：
哺乳动物血液中的葡萄糖称为血糖，是其体内糖的主要运输形式。
血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，调节失衡时出现高血糖和低血糖。
糖尿病、颅内压增加和脱水症等均可引起高血糖；饭后，精神紧张也可出现生理性高血糖。
相反，胰岛β细胞增生或肿癌等，垂体、肾上腺皮质和甲状腺功能减退，以及严重肝病患者均可出现低血糖症状。
此外，饥饿和剧烈运动可引起暂时的低血糖。
葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505nm有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
测定操作表（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：
试剂（μL）空白管标准管测定管
样本100
试剂一100
蒸馏水100
混合试剂900900900
混匀，置37℃水浴中，保温15min，于505nm波长处读取吸光度A。
血糖含量计算：
血糖含量（mmol/L）=1mmol/L×（A测定管－A空白管）÷（A标准管-A空白管)。
海藻糖含量检测试剂盒说明书可见分光光度法UPLC-MS-411250T/48S试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：10mg海藻糖。
临用前加1mL蒸馏水，溶液浓度为10mg/mL，2-8℃保存两周；2、工作液的配制：临用前取1瓶试剂一中加入8mL蒸馏水后，缓慢加入32mL浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。
用不完的试剂2-8℃保存一周，试剂颜色变深后则不可以再使用。
海藻糖存在于大量有机体中，包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。
由于海藻糖具有独特的不同于其他碳水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
测定方法采用蒽酮比色法。
具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样本的测定等优点。
但是蒽酮比色法也存在一定缺陷，如果样本中含有可溶性糖，则会影响测定。
本试剂盒建议用于除海藻糖外不含其他可溶性糖样本的测定。
Trehalose+H2SO4+Anthrone Furfural Derivatives（620nm）最低检出限：0.0016mg/mL线性范围：0.003125-0.1mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机，可调式移液器、超声破碎仪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、浓硫酸和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3秒，间隔10秒，重复30次），室温静置45min，振荡3~5次，冷却后，8000g，常温离心10min，取上清。
植物组织中可溶性糖含量的测定原理：糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
实验材料任何植物鲜样或干样。
试剂80%乙醇葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:准确称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100mL,使用时在稀释10倍（100μg/mL）。
蒽酮试剂称取1.0g蒽酮，溶于80%浓硫酸（将98%浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中）1000mL中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用2~3周。
仪器设备分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管，剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉漏斗，滤纸。
实验步骤1.样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5~1.0g（或干样粉末5~100mg），放入大试管中，加入15mL蒸馏水，在沸水浴中煮沸20min，取出冷却，过滤入100mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。
2.标准曲线制作取6支大试管，从0~5分别编号，按表加入各试剂。
表蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量试剂管号0 1 2 3 4 5100μg/mL葡萄糖溶液（mL）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1蒸馏水（mL） 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0蒽酮试剂（mL） 5 5 5 5 5 5葡萄糖量（μg）0 20 40 60 80 100将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm波长下，用空白调零，测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（μg）为横坐标绘制标准曲线。
3.样品测定取待测样品提取液1.0mL加蒽酮试剂5mL，同以上操作显色测定光密度。
重复3次4.结果计算溶性糖含量（%）=从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积（ml）×样品重量（g）×106]/100 式中：C——从标准曲线查得葡萄糖量，μg。
植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。
溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。
四、材料、仪器及试剂1.材料：苹果2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。
样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。
eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。
）四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。
编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。
实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定一、原理淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料：红薯块根。
（二）试剂1、浓硫酸（比重1.84）。
2、9.2mol/L高氯酸。
3、80%酒精4、葡萄糖标准液（称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成100ml 溶液，既得1mg/ml的标准液）；5、蒽酮试剂：[100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加水至100ml）]。
（三）仪器设备电子天平，容量瓶（100mL、50 mL），漏斗，小试管若干支，恒温水浴锅，刻度吸管（0.5mL、2.0mL、5 mL），分光光度计，记号笔。
三、实验步骤1. 标准曲线制作。
取标准糖溶液将其稀释成一系列0-100μg/μl的不同浓度的溶液中，按上述方法分别测定OD625nm值，然后绘制标准曲线。
管号0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液（μL）0 20 40 60 80 100 糖含量（μg）0 20 40 60 80 100加入的水(μL) 100 80 60 40 20 0蒽酮试剂（mL） 1 1 1 1 1 1 OD62502. 样品提取（1）可溶性糖含量测定称取 50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15mL刻度试管中，加入6～7mL 80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出离心（3000rpm）5min，收集上清液。
重复提取两次（各10 min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3mL，转移至50mL容量瓶，以蒸馏水定容。
吸取上述上清液1ml，加入5ml蒽酮试剂混合，沸水浴10min,取出冷却。
在625nm处测定OD值，从标准曲线上得到提取液中糖的含量（ug）。
（2）淀粉含量的测定向沉淀中加蒸馏水3 mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min 。
植物可溶性糖含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0030
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：粉剂×2瓶，4℃避光保存；
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1mL蒸馏水溶解，配制成10mg/mL葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125mg/mL。
产品说明：
糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
检测原理为蒽酮比色法。
可用于可溶性单糖、寡糖和多糖的含量测定，具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、浓硫酸、研钵和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品中可溶性糖的提取：
称取约0.1～0.2g样本，加入1mL蒸馏水研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，沸水浴10min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，常温离心10min，取上清液于10mL试管中，用蒸馏水定容至10mL，摇匀备用。
二、测定操作表：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2.调节水浴锅至95℃。
3.工作液的配制：在试剂一中加入5mL试剂二，充分溶解后使用，如较难溶解，可加热搅拌。
4.加样表（在EP管中反应)：
试剂（μL）空白管测定管标准管
样本200
标准液200
蒸馏水400200200
工作液100100100
浓硫酸100010001000混匀，置95℃水浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，于620nm处，分别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A测定管-A空白管。
标准曲线的建立：620nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值，A=A标准管-A空白管。
以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。
注意：
1.空白管只要做一管。
2.如果ΔA大于1，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
3.由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
三、可溶性糖含量计算：
1、根据标准曲线，将ΔA带入公式中（x）计算样品浓度y（mg/mL）。
2、按样本鲜重计算：
可溶性糖（mg/g鲜重）＝(y×V1)÷（W×V1÷V2）＝10×y÷W
3、按样本蛋白浓度计算：
可溶性糖（mg/mg prot）=(y×V1)÷（V1×Cpr）＝y÷Cpr
V1：加入样本体积，0.2mL；V2：提取液体积，10mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
