岛津紫外-可见分光光度计UV-2550

1. 目的（Objectives）本规程规范了岛津UV-2550型紫外分光光度计校验的方法，确保在法定计量部门校验后的有效期内岛津UV-2450型紫外分光光度计使用的有效性，保证检验结果的准确可靠。

2. 范围（Scope）本规程适用于检验部及各车间中间体化验室的岛津UV-2550型紫外分光光度计的定期校验。

3. 定义（Definition）无4. 职责（Responsibilities）4.1. 质量控制部负责本规程的起草、修订、审核、培训和执行。

4.2. 质量保证部、工程部负责本规程的审核。

4.3. 质量负责人负责对本规程的批准。

5. 引用标准（Reference Standards）5.1. 《中国药典》（2010年版）5.2. 中国药品检验标准操作规范2010年版5.3. JJG 178-2007紫外、可见、近红外分光光度计检定规程6. 材料（Resource）6.1. 质量分数为0.060/1000重铬酸钾的0.001mol/L的高氯酸标准溶液。

6.2. 10%高氯酸溶液。

6.3. 4%高氯酸钬溶液。

6.4. 碘化钠标准溶液：浓度为10.0g/L。

6.5. 亚硝酸钠标准溶液：浓度为50.0g/L。

7. 流程图（Flow Chart）无8. 内容（Contents）8.1. 校验项目及可接受标准8.2. 校验前准备8.2.1. 操作室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性物质，无强烈的机械振动和电磁干扰，无强光直射，排风良好。

8.2.2. 温度在15℃~35℃；相对湿度为45%~80%（假如室温大于30℃，相对湿度不得大于70%）。

8.2.3. 仪器应有名称、型号、编号、制造厂名、出厂日期、工作电源电压、频率及检定签标识等8.2.4. 检查吸收池，不得有裂纹，透光面应清洁，无划痕和斑点。

8.3. 校验方法8.3.1. 基线平直度8.3.1.1.8.3.1.2. 操作：按8.3.1.1设定方法，基线扫描3次，记录图谱和数据。

岛津UV-2550紫外可见分光光度计操作规程岛津UV—2550紫外可见分光光度计操作规程一、仪器主要指标及结构波长范围（nm）:190～900，双光束二、操作规程1、开机及仪器自检打开紫外光度计的电源，开启电脑，点击“UV Probe”图标，点击页面下端的“连接”，等待仪器自检（全部指标变绿）。

2、扫描光谱⑴．点击“光谱模块”图标而选定光谱模块。

⑵．点击“基线校正”进行基线校正。

⑶．点击“编辑”烦人“方法”选项，或点击“方法图标”显示光谱方法的对话框。

⑷．设置波长范围。

开始：X X Xnm 结束：X X X240nm扫描速度：中采样间隔：1.0nm⑸．点击“仪器常数”标准，在测试目录中选“吸收”，然后点击“确定”。

⑹．点击“开始”仪器开始扫描光谱，然后点击“确定”。

⑺．点击“峰值检测”图标，显示峰值数据。

⑻．点击“数据打印”图标，显示各波长吸收度。

（记下每隔10nm的数据。

）3、吸光度测定⑴．选定光度测定模块：点击“光度测定”图标。

⑵．选定常数：点击“编辑”的“方法”选项，波长设“X X X nm”，单机“加入”。

点击“校准”选项，设定类型为“多点”，WL1选择“X X X”，然后点击“关闭”。

⑶．输入样品信息：点击“标准表”，输入标准样品“ID,浓度”后按“回车键”，点击“读取Std”，就显示出测定结果的吸光度。

重复以上步骤至标准曲线绘制完成。

点击“样品表”，输入样品“ID”后按“回车键”，点击“读取UNK”，就显示出测定结果烦人吸光度。

⑷．点击“保存”，输入“X X X X”文件名保存。

岛津UV-2550 仪器说明书一、仪器简介岛津UV-2550是一款博得了用户高度评价的紫外可见分光光度计，性能卓越且操作简单方便，与功能强大的操作软件UVProbe结合，可以具备强大的功能。

小光斑的光学系统使得微量的测定更为方便。

1）高水平的超低杂散光UV-2550采用优异的DDM（双闪耀衍射光栅、双单色器）技术实现了超低杂散光（％以下）和高光通量。

低的杂散光可以对高浓度的样品不进行稀释而直接测定。

2）通用型的软件UVProbeUV-2550通过新一代的中英文双语操作软件UVProbe控制，包含光谱测定、光度测定、动力学测定和报告处理四大模块，从基本的测定到研究解析都可以通过它实现。

UVProbe实现了真正的QA/QC功能，完全支持GLP、GMP。

另外还可以加载膜厚测定、色彩分析等软件。

3）丰富的附件选择和广泛的应用领域生命科学领域：可对从生命体内得到的微量样品进行测试。

积分球测试：可以对浑浊样品和粉末状的样品进行测试。

反射附件：可以对光学材料进行相对反射和绝对反射的测定。

二、主要技术指标三、操作流程1、开机预热1.1先打开电脑显示器和主机，再打开仪器的电源（仪器左侧），双击桌面上的图标UVProbe ,出现“运行身份”对话框，选中“当前用户”，把“保护我的计算机”前的“√”去掉，否则进不去程序，点“确定”，进入软件；1.2点击屏幕下方的“连接”，出现“UV-2550PC 系列– (FD 00)”对话框，仪器开始初始化，所有项目前显示绿灯，则初始化通过，点击“确定”，仪器连接成功；1.3初始化结束后，仪器需预热15min。

预热结束，即可往下操作。

2、基线校正2.1点击菜单栏中的“窗口”，在下拉菜单中，点击“光度测定”，打开光度模块；2.2点击屏幕下方光度计按键栏的“基线”，弹出“基线参数”对话框，输入波长范围（实验所需的波长范围），点击“确定”，启动基线校准操作，在基线扫描过程中，注意波长的变化范围，读数变化≤3nm可接受。

分光光度计标准操作规程(SOP)关键词：分光光度计使用目的：熟悉分光光度计使用标准操作规程，以保证检测的准确度和精密度及仪器的良好保养维护。

主体内容：1．使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。

以及各个操作旋钮之功能。

在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固。

通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源开关。

仪器在使用前先检查一下，放大器暗盒的硅胶干燥筒（在仪器的左侧），如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。

2．将灵敏度旋钮调置“1”档（放大倍率最小）。

3．开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至测试用波长。

仪器预热20分钟。

4．打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上试样室盖，将比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。

5．如果显示不到“100.0”，则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能置低倍率档使用，这样仪器将有更高的稳定性。

但改变倍率后必须按(4)重新校正“0”和“100%”。

6．预热后，按(4)连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。

7．吸光度A的测量按(4)调整仪器的“00.0”和“100%”，将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。

8．浓度C的测量：选择开关由“A”旋置“C”，将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度值。

9．如果大幅度改变测试波长时，在调整“0”和“100%”后稍等片刻，（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“0”和“100%”即可工作。

10．每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。

紫外可见分光光度法测定总黄酮含量的方法学考察要点一、本文概述紫外可见分光光度法是一种基于物质对紫外和可见光的吸收特性进行定量分析的方法。

在生物化学和药物分析中，这种方法被广泛应用于测定各类化合物的含量，其中包括黄酮类化合物。

黄酮类化合物，也称为黄酮或黄碱素，是一类具有广泛生物活性的天然产物，它们广泛存在于植物中，并具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。

因此，对黄酮类化合物进行准确、快速的定量分析具有重要意义。

本文旨在探讨紫外可见分光光度法在测定总黄酮含量中的应用，并对其方法学进行考察。

我们将详细介绍紫外可见分光光度法的基本原理、实验操作步骤，以及影响测定结果的各种因素。

我们还将讨论该方法的优点和局限性，以及在实际应用中可能遇到的问题和解决方案。

通过对这些内容的全面探讨，我们希望能够为相关领域的研究人员和技术人员提供有益的参考和指导，推动紫外可见分光光度法在黄酮类化合物分析中的应用和发展。

二、紫外可见分光光度法的基本原理紫外可见分光光度法（UV-Vis spectrophotometry）是一种基于物质对紫外和可见光区域内特定波长光的吸收特性进行定量分析的方法。

该方法基于朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law），即溶液对光的吸收与溶液的浓度成正比，与光通过溶液的路径长度也成正比。

在紫外可见分光光度法中，当一束单色光通过被测溶液时，部分光能会被溶液中的吸光物质吸收，导致光强减弱。

吸光度（A）与吸光物质的浓度（c）和光程长度（l）之间的关系可以表示为 A = εlc，其中ε为摩尔吸光系数，它表示单位浓度、单位光程长度下的吸光度。

对于总黄酮含量的测定，黄酮类化合物在紫外可见光区域内有特定的吸收峰，通过测量这些吸收峰处的吸光度，并结合标准品的工作曲线，可以实现对总黄酮含量的定量分析。

紫外可见分光光度法还具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，因此在黄酮类化合物含量测定中得到了广泛应用。

需要注意的是，紫外可见分光光度法只能测定那些具有吸光特性的物质，且受到溶液的颜色、浊度以及其它共存物质的影响。

实验10紫外可见吸收光谱测试140604班 C组胡晓玲 3214001700【实验目的】本实验的目的是利用紫外光区和可见光区的光学特性的检测方法测试甲基橙的光学特性，同时培养分析和运用材料紫外光区和可见光区光谱特性的能力。

【仪器用具】UV-2550岛津紫外可见分光光度计【实验原理】研究甲基橙在紫外-可见光区的分子吸收光谱的。

其中所利用的紫外-可见分光光度法是利用某些物质的分子吸收200~900 nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法，这种方法广泛用于无机和有机物质的定性和定量测定。

当光作用在物质上时，一部分被表面反射，一部分被物质吸收。

改变入射光的波长时，不同物质对每种波长的光都有对应的吸收程度（A）或透过程度（T），可以做出这种物质在实验波长范围内的吸收光谱曲线或透过光谱曲线。

用紫外-可见分光光度计可以作出材料在紫外光区和可见光区的对紫外光和可见光的吸收光谱曲线或透过光谱曲线。

利用的是朗伯-比尔定律：（10-1）A abcA为吸光度，a为吸光系数，b为光路长度，c为物质浓度。

通过吸收光谱曲线或透过光谱曲线可以判断材料在紫外光区和可见光区的光学特性，为材料的应用作指导。

例如，具有较高的紫外光吸收性能，可作为保温吸热等材料；如具有较高的紫外光反射特性，则可作为好的抗老化材料。

除此以外，紫外-可见吸收光谱还可用于物质的定量分析、定性分析、纯度鉴定和结构分析等。

【实验步骤与结果分析】1.实验步骤①以去离子水为测试参比溶液进行基线校正。

②以去离子水为参比液，不同浓度的甲基蓝溶液为测试样品，测试不同浓度的溶液的紫外可见吸收光谱图。

2.实验结果分析①掌握紫外可见吸收光谱分析的基本原理；②掌握利用紫外可见分光光度计测试液体溶液吸光度的方法，并绘制溶液的紫外可见吸收光谱图如下由图可知：其他条件一定的情况下，在紫外可见吸收区中，甲基橙的浓度越大，其吸收强度越明显。

【注意事项】1. 在光谱基线校正过程中光度计状态窗口的读书变化。

紫外可见分光光度计测定⾷品中苯甲酸钠的含量紫外可见分光光度计法测定⾷品中苯甲酸钠的含量⼀、实验⽬的1.进⼀步了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV2550的操作。

2.掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。

3.掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。

⼆、实验原理为了防⽌⾷品在储存、运输过程中发⽣腐蚀、变质，常在⾷品中添加少量防腐剂。

防腐剂使⽤的品种和⽤量在⾷品卫⽣标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是⾷品卫⽣标准允许使⽤的主要防腐剂之⼀，其使⽤量⼀般在0.1%左右。

苯甲酸具有芳⾹结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。

根据苯甲酸（钠）在225nm处有最⼤吸收，测得其吸光度即可⽤标准曲线法求出样品中苯甲酸的含量。

三、仪器和试剂1.紫外可见分光光度计UV2550（⽇本岛津），1.0cm⽯英⽐⾊⽫，50ml容量瓶。

2.NaOH溶液（0.1mol/L）3.苯甲酸钠标准溶液的配制(1)苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过⼲燥的苯甲酸钠1.000g（105℃⼲燥处理2h）于1000mL容量瓶中，⽤适量的蒸馏⽔溶解后定容。

该贮备液可置于冰箱保存⼀段时间。

(2)苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加⼊蒸馏⽔稀释定容。

(3)系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于6个50mL容量瓶中，各加⼊0.1mol/LNaOH溶液1.00mL后，⽤蒸馏⽔稀释定容。

得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。

4.市售饮料的配制准确移取市售饮料0.5ml于50mL容量瓶中，⽤超声脱⽓5min驱赶⼆氧化碳后，加⼊0.1mol/LNaOH溶液1.00mL，⽤蒸馏⽔稀释定容。

编号：部门：质量控制室版本：1.2起草：审核：替代：1.0Q A审核：批准：执行日期：1 目的建立SHIMADZU UV-2550技术手册，规范SHIMADZU UV-2550的使用、维护行为。

2 范围海正药业成品药质量控制室和研发稳定性对SHIMADZU UV-2550的使用、维护。

3 职责质量控制室、研发稳定性、计量中心4 规程4.1操作规程4.1.1 打开光学台和计算机电源，使氘灯稳定1小时。

4.1.2 进入UV Probe菜单，点击“窗口＞光谱”，打开光度测试模块，再点击光度计键条中的连接按钮，来连接仪器，待仪器自检完成后（标记显绿色），点击确定。

4.1.3 测定样品4.1.3.1 光谱测定模块4.1.3.1.1 建立数据采集方法：点击“编辑＞方法”或点击方法图表M，在弹出的窗口中：“开始框”和“结束框”输入所需的波长范围（波长从大扫描到小），再在“扫描速度”、“采样间隔”及“扫描方式”标签中选定所需的参数，然后点击仪器参数标签，在“测定方式”和“狭缝宽”目录中选择所需的参数。

最后点击确定。

4.1.3.1.2 存储数据采集方法数据采集方法可以储存起来，以后可调出使用。

选择“文件＞另存为”，在文件名输入框中，输入SpecMeth，在另存为类型列表框中，点击方法文件（*.smd），然后点击存储。

4.1.3.1.3 数据采集Ⅰ基线校正在两个样品池中分别加试样的空白溶剂，放入样品室，点击光度计键条中的基线按钮，启动基线校正操作，当基线参数对话框弹出时在“开始波长”和“结束波长”中分别输入测试所需的波长范围。

Ⅱ样品测定将外面的那个样品池拿出，倒掉溶剂，吹干（每次测定样品前，都要先将样品池洗干净，并吹干），加入待测试样，放入样品室，点击光度计键条中的开始按钮，当扫描完毕后，在弹出的新数据集对话框中输入文件名及数据存储元名，点击确定。

4.1.3.1.4 保存数据选择“文件＞另存为”，在对话框顶部的保存位置选择适当的路径，在文编号：部门：质量控制室版本：1.2起草：审核：替代：1.0Q A审核：批准：执行日期：件名输入框中输入文件名，在保存类型中选择“.spc”，在点击保存。