紫外、可见分光光度计技术报告

实验名称：中药有效成分含量测定实验日期：2023年11月15日实验地点：中药分析实验室指导教师：[教师姓名]实验目的：1. 掌握中药有效成分提取、分离和测定的一般方法。

2. 熟悉紫外-可见分光光度法在中药分析中的应用。

3. 了解中药样品的前处理技术。

实验原理：本实验采用紫外-可见分光光度法测定中药中某种有效成分的含量。

紫外-可见分光光度法是一种基于物质对紫外光和可见光的吸收特性来进行定性和定量分析的方法。

通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以计算出样品中有效成分的浓度。

实验仪器与试剂：1. 仪器：紫外-可见分光光度计、电子天平、电热恒温水浴锅、离心机、玻璃仪器（容量瓶、移液管、烧杯等）。

2. 试剂：待测中药样品、溶剂（甲醇、乙醇等）、对照品、显色剂、酸碱指示剂等。

实验步骤：1. 样品前处理：- 称取一定量的中药样品，用溶剂溶解并定容至一定体积。

- 使用离心机离心去除不溶性杂质。

- 取上清液，用适当方法进行浓缩或干燥。

2. 对照品溶液的制备：- 称取一定量的对照品，用溶剂溶解并定容至一定体积，得到一定浓度的对照品溶液。

3. 显色反应：- 将样品溶液和对照品溶液分别加入适量的显色剂，混合均匀。

- 在特定波长下测定溶液的吸光度。

4. 数据处理：- 以对照品溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

- 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得样品中有效成分的浓度。

- 计算样品中有效成分的含量。

实验结果与分析：1. 标准曲线绘制：- 在特定波长下，对照品溶液的吸光度与浓度呈线性关系，相关系数R²大于0.99。

2. 样品测定：- 样品溶液的吸光度从标准曲线上查得有效成分的浓度为[具体数值]mg/g。

- 样品中有效成分的含量为[具体数值]%。

3. 讨论：- 本实验中，样品前处理方法对测定结果有重要影响，应严格控制样品前处理条件。

- 显色反应条件对测定结果也有一定影响，应优化显色反应条件。

- 本实验结果与文献报道相符，说明实验方法可行。

实验标准曲线法测定罗丹明B的含量1．实验目的（1）了解紫外-可见分光光度计的结构及使用方法。

（2）掌握标准曲线法定量分析的技术，了解紫外可见光谱法进行纯组分定量分析的全过程。

（3）掌握不同浓度的配制和样品含量的计算。

2．实验原理E1 带和E2 带是苯环上三个双键共轭体系中的π电子向π*反键轨道跃迁的结果，可简单表示为π→π * 。

B带也是苯环上三个双键共轭体系中的π→π * 跃迁和苯环的振动相重叠引起的，但相对来说，该吸收带强度较弱。

以上各吸收带相对的波长位置由大到小的次序为：R、B、K、E2、E1 ，但一般K和E带常合并成一个吸收带。

与可见光吸收光谱一样，在紫外吸收光谱分析中，在选定的波长下，吸光度与物质浓度的关系，也可用光的吸收定律即朗伯—比尔定律来描述：A= lg (Io /I) =ε bc其中A为溶液吸光度，Io为入射光强度，I为透射光强度，ε为该溶液摩尔吸光系数，b为溶液厚度，c为溶液浓度。

特征峰：1. 吸收峰的形状及所在位置——定性、定结构的依据2. 吸收峰的强度——定量的依据A = lg(1/T)=κCLT：透射率λ：摩尔吸收系数，单位：L·cm⁻¹·mol⁻¹C：浓度L：光程长紫外可见光谱的两个重要特征波峰：λmax, κ例：λmaxEt = 279 nm (κ=5012，logk=3.7)3．仪器与试剂仪器：紫外分光光度计，移液管，吸耳球，微量注射器。

试剂：罗丹明B溶液。

4．实验内容与步骤（1）标准曲线的绘制配制一系列标准浓度的罗丹明B水溶液，用水作空白溶液，测紫外吸收光谱，确定λmax，绘制c-A标准曲线。

（罗丹明B原液浓度1.000mM）（2）未知罗丹明B溶液的紫外可见光谱以水为空白溶液，测未知罗丹明B溶液的的紫外可见吸收光谱。

5．数据处理（1）制作标准曲线。

（2）根据未知罗丹明B溶液在λmax的A，在标准曲线上查浓度。

一、实验目的1. 熟悉紫外分光光度计的仪器结构和工作原理。

2. 掌握紫外-可见吸收光谱法的基本原理和应用。

3. 通过实验掌握紫外-可见分光光度计的操作方法。

4. 学习利用紫外-可见吸收光谱法进行定量分析。

二、实验原理紫外-可见分光光度法是一种基于物质分子对紫外-可见光的选择性吸收而建立的分析方法。

该方法广泛应用于有机化合物的定性、定量分析以及物质的纯度检验。

紫外-可见光波长范围一般为200-800nm，其中200-400nm为紫外区，400-800nm为可见光区。

当物质分子吸收紫外-可见光时，分子中的电子从基态跃迁到激发态。

不同物质的分子结构不同，吸收光的波长和强度也不同。

因此，通过测定物质的吸收光谱，可以实现对物质的定性和定量分析。

朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law）是紫外-可见分光光度法的基础。

该定律表明，在一定波长下，溶液的吸光度（A）与溶液的浓度（c）和光程（l）成正比，即A= εcl，其中ε为摩尔吸光系数。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液管、容量瓶、比色皿、洗耳球等。

2. 试剂：待测样品、标准溶液、溶剂等。

四、实验步骤1. 标准溶液的配制：根据待测样品的浓度，配制一系列标准溶液。

2. 吸收光谱的绘制：将标准溶液和待测样品分别置于比色皿中，在紫外-可见分光光度计上测定其在不同波长下的吸光度值。

3. 标准曲线的制作：以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

4. 待测样品的定量分析：将待测样品的吸光度值代入标准曲线，计算其浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

根据实验数据，标准曲线的线性关系良好，相关系数R²大于0.99。

2. 待测样品的定量分析：将待测样品的吸光度值代入标准曲线，计算其浓度。

实验结果表明，待测样品的浓度为X mg/L。

六、实验总结1. 通过本次实验，我们掌握了紫外-可见分光光度计的基本原理和操作方法。

仪器分析实验报告概述仪器分析是化学和生物技术研究的重要手段之一，通过使用各种仪器来分析和识别物质的性质、结构和组成，从而为科学研究和工业制造提供数据和信息。

本实验旨在通过对三种常用分析仪器的使用与操作，掌握仪器分析的基本方法和技能。

实验一：紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计是一种常用的分析仪器，可以用于测定分子的吸光度，从而确定其浓度。

在实验中，我们使用紫外可见分光光度计来测定苯甲酸的吸收光谱，并根据吸收峰的强度和位置，判断苯甲酸的化学结构和活性。

实验结果表明，苯甲酸的紫外光谱主要在280nm处有一个吸收峰，证明其有芳香环结构；同时，其对紫外光谱的吸收强度与浓度之间呈线性关系，可用于定量分析。

实验二：原子吸收光谱仪原子吸收光谱仪是一种常用的分析仪器，可以用于分析痕量金属元素的含量。

在实验中，我们使用原子吸收光谱仪来测定硬度水样品中钙和镁的含量。

实验结果表明，硬度水样品中钙和镁的含量分别为0.4mg/L和0.5mg/L，与标准值相接近，说明该方法可靠。

实验三：气相色谱-质谱联用仪气相色谱-质谱联用仪是一种高分辨率、高灵敏度的分析仪器，可以用于分离和识别化合物中的各种成分。

在实验中，我们使用气相色谱-质谱联用仪来分析香料中的各种成分，并通过母离子扫描和碎片离子扫描来确定这些成分的分子结构和特征。

实验结果表明，香料中含有多种成分，其中醛类、酮类和酯类物质含量较高，可以作为该香料的主要特征。

同时，根据高准确度的质谱数据，我们还可以对这些成分的分子结构和碎片离子进行进一步分析，为该香料化学成分的研究提供了有力的支持。

结论通过对三种常用的仪器分析方法的使用与操作，我们深入了解了仪器分析的原理和技能，掌握了多种化学和生物信息分析的方法和技术。

同时，我们还进一步加深了对化学和生物学的认知和理解，为今后的科学研究和实践奠定了坚实的基础。

紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验目的1.学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。

2.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。

3.掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。

二、实验原理1.紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。

紫外光：10-400 nm可见光：400-780 nm（可被人们的眼睛所感觉）特点：带光谱、分子光谱应用：定性分析-最大吸收波长；定量分析-朗伯-比尔定律（标准曲线法和标准加入法）a.定性分析原理：吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状.b.定量分析原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c 成正比。

定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。

c.仪器组成部件:各种类型的紫外-可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。

2.本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：（1）蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275--280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。

在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。

该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。

（2）此种方法测量的准确度差一点的原因：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。

据初步统计，浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3—3.0之间，平均值为1.25+/-0.51。

紫外可见光分光光度计实验报告实验目的：本实验旨在了解如何使用紫外可见光分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）来测量溶液的浓度，该技术主要依据吸收波长（Absorption wavelength）和吸收率（Absorption rate）来确定溶液的浓度。

实验原理：紫外可见光分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）是一种测量光谱散射或吸收特征的仪器。

该仪器由光源、分光镜、滤光片和检测器等部件组成。

光源由一个或多个发光管发射出的指定波长的光束来照射试样，经过滤光片后将指定波长的光束照在检测器上，检测器检测试样的吸收率，并将结果显示到测量仪器上。

实验方法：在本次实验中，选择6个不同浓度的NaCl（纯度≥99.5％）溶液: 0.000、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010mol/L，每一种浓度调制三份，每份用量各4mL。

将研究所需试管清洗干净后存放备用；将标样液（0mol/L NaCl）放入研究所需试管中，然后在末端实验室中开启紫外可见光分光光度计；打开设置后，设置分析项，模式为读取浓度，选择绝对值模式，测量范围为400nm-800nm；点击启动测量，根据读取的浓度值确定每种溶液的浓度。

实验结果：经实验所得数据如下表所示：实验研究：根据实验结果的对照，可以得出紫外可见光分光光度计能够准确测定溶液的浓度。

安全操作：（1）实验前必须充分掌握实验要求和安全注意事项，并遵守实验室各项安全规定；（2）实验结束后，要记得及时关闭实验仪器，维持实验室干净整洁；（3）加总液体时必须要戴安全眼镜保护眼部安全，避免易燃，毒性，有害气体及粉尘的污染；（4）严禁把酸，碱溶液和其它有害液体排放到下水道中。

总结：本次实验成功地使用紫外可见光分光光度计来测量NaCl等溶液的浓度。

经过测试，发现紫外可见光分光光度计测定溶液浓度准确可靠，易于控制，可以满足实验需求。

在本次实验过程中，我们还学习到了如何操作紫外可见光分光光度计，以及如何科学安全的配制实验液体等重要知识。

紫外可见光谱实验报告[实验二：LED光源光谱定标LED光谱测量实验报告]本科学生综合性实验报告学号姓名学院物电学院专业、班级光电子实验课程名称光谱技术及应用实验教师及职称开课学期2016 至2017 学年下学期填报时间2017 年 6 月10 日XXXX大学教务处编印一．实验设计方案实验序号二实验名称LED光源光谱定标实验时间2014年6月5日实验室同析三栋318 1．实验目的1、理解波长标定的意义；2、掌握波长标定的方法；3、理解波长最大允许误差和波长重复性的意义；4、掌握检定波长最大允许误差和波长重复性的方法。

2．实验原理、实验流程或装置示意图JJG178‐2007《紫外、可见、近红外分光光度计》检定规程，2007年11月21日经国家质检总局批准发布，并自2008年5月21日起实施。

该规程对波长范围190nm~2600nm，波长连续可调的可见、紫外‐可见、紫外‐可见‐近红外分光光度计的首次检定、后续检定和使用中检定做出了明确要求。

规程首先将仪器的波长划分为三段，分别是A 段（190nm~340nm）、B 段（340nm~900nm）、C 段（900nm~2600nm）。

按照计量性能的高低将仪器划分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ共四个级别。

规程规定需要检定的主要性能指标包括波长最大允许误差、波长重复性、噪声与漂移、最小光谱带宽、透射比最大允许误差、透射比重复性、基线平直度、电源电压的适应性、杂散光、吸收池的配套性。

波长最大允许误差波长最大允许误差也称为波长准确度，是指仪器测定时标称的波长值与仪器出射的光线实际波长值（波长的参考或理论值）之间的符合程度，一般用多次波长测量值平均值与参考值之差（即波长误差）来测量。

波长准确度的大小其实质反映的是波长的系统误差，一般由仪器装置在制造中的缺陷或仪器没有调整到最佳状态而造成的，它对测量的准确度有很大影响，特别是在对不同仪器的测试结果进行比较时，波长准确度显得更为重要。

湖北工程学院生命科学技术学院实验报告课程：学号：姓名：分数：实验（三）紫外-可见分光光度计一．实验目的紫外可见分光光度计是一种历史悠久、覆盖面很广、在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医药卫生、环境保护、生命科学等各个领域的科研、生产工作中都得到了极其广泛的应用。

因此通过此实验，可以了解UVPROBE仪器的实验结构和实验原理，简单操作步骤和注意事项，会用光度计仪器来分析样品镀膜的透射率，来达到工作上对镀膜性质分析的需要。

二．实验原理物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。

分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。

物质在光的照射下会产生对光的吸收效应，而且物质对光的吸收是具有选择性的。

各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。

因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也就是紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。

即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。

三．实验器材及试剂台式电脑，紫外-可见分光光度计，5ppm Cyadox溶液、5ppm邻苯二胺溶液、5ppm 2-硝基酚溶液置于棕色容量瓶中。

四．实验步骤1.首先打开电源的总开关，然后打开电脑，等电脑待机状态的时候再打开光度计仪器的开关。

2.要预热五到十分钟，然后打开软件，进入软件的操作界面。

3.然后初始化，点击菜单的“M”，在“测定”菜单中中的波长范围中改变参数，开始选择900，结束选择300。

计量标准技术报告
计量标准名称紫外可见分光光度计检定装置
计量标准负责人
建标单位名称（公章）新月市质量技术监督检验测试中心填写日期
目录
一、建立计量标准的目的………………………………………………………( 01 )
二、计量标准的工作原理及其组成……………………………………( 01)
三、计量标准器及主要配套设备…………………………………………( 02 )
四、计量标准的主要技术指标………………………………………………( 03 )
五、环境条件…………………………………………………………………( 03 )
六、计量标准的量值溯源和传递框图………………………………………( 04 )
七、计量标准的重复性试验…………………………………………………( 05 )
八、计量标准的稳定性考核……………………………………………………( 06 )
九、检定或校准结果的测量不确定度评定…………………………………( 07 )
十、检定或校准结果的验证…………………………………………………( 11 ) 十一、结论……………………………………………………………………( 12 ) 十二、附加说明…………………………………………………………………( 12 )
十一、结论
本计量标准稳定性和重复性合格，测量不确定度评定合理，并且得到验证。

所有技术指标符合国家计量检定系统表和国家计量检定规程的要求，具备开展对紫外、可见分光光度计进行检定的条件。

十二、附加说明。

第1篇一、实验目的1. 掌握紫外可见分光光度法的基本原理和应用。

2. 学习紫外可见分光光度计的使用方法。

3. 了解苯酚在紫外可见光区的吸收特性，并测定苯酚溶液的浓度。

二、实验原理苯酚是一种有机化合物，分子式为C6H5OH。

苯酚在紫外可见光区具有特征吸收，其最大吸收波长为270-295nm。

紫外可见分光光度法是利用苯酚在紫外可见光区吸收特定波长的光而进行定量分析的方法。

根据朗伯-比尔定律，苯酚溶液的吸光度与其浓度成正比，即A = εcl，其中A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，c为苯酚溶液的浓度，l为光程。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：- 紫外可见分光光度计- 10mL移液管- 50mL容量瓶- 100mL容量瓶- 烧杯- 玻璃棒- 酸式滴定管- pH计- 电子天平2. 试剂：- 苯酚标准溶液（0.1mg/mL）- 硫酸- 氢氧化钠- 水为二次蒸馏水四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：1.1 准备标准溶液：准确移取0.1mg/mL苯酚标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于50mL容量瓶中，用二次蒸馏水定容至刻度，摇匀。

1.2 吸取各标准溶液2.0mL于10mL容量瓶中，用二次蒸馏水定容至刻度，摇匀。

1.3 在紫外可见分光光度计上，选择波长为270nm，以二次蒸馏水为参比溶液，测定各标准溶液的吸光度。

1.4 以苯酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：2.1 准确移取待测苯酚溶液2.0mL于10mL容量瓶中，用二次蒸馏水定容至刻度，摇匀。

2.2 在紫外可见分光光度计上，选择波长为270nm，以二次蒸馏水为参比溶液，测定样品溶液的吸光度。

2.3 根据标准曲线，计算样品溶液中苯酚的浓度。

3. 结果分析：3.1 计算样品溶液中苯酚的浓度，并与理论值进行比较。

3.2 分析实验误差，讨论实验过程中可能存在的问题。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：通过绘制标准曲线，可以得出苯酚溶液的浓度与吸光度之间的关系。

一、实验目的1. 熟悉紫外-可见分光光度计的仪器结构和工作原理。

2. 掌握紫外光谱的基本原理和操作方法。

3. 通过紫外光谱法对未知样品进行定性分析和定量分析。

二、实验原理紫外光谱法是一种基于物质分子对紫外光和可见光的吸收特性而建立的分析方法。

当物质分子中的电子从基态跃迁到激发态时，会吸收特定波长的光，从而产生吸收光谱。

紫外光谱法广泛应用于物质的定性鉴定、结构分析、纯度检验和定量分析等方面。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液器、容量瓶、试管、吸管等。

2. 试剂：待测样品、标准溶液、溶剂等。

四、实验步骤1. 样品制备：根据实验要求，准确称取一定量的待测样品，用溶剂溶解，配制成一定浓度的溶液。

2. 标准曲线绘制：- 准确吸取一定量的标准溶液，用溶剂稀释至一定体积，配制成一系列浓度不同的标准溶液。

- 将标准溶液依次倒入比色皿中，在特定波长下测定其吸光度。

- 以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定：- 将待测样品溶液倒入比色皿中，在相同条件下测定其吸光度。

- 根据标准曲线，计算待测样品的浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

根据实验数据，得到线性方程和相关系数。

2. 样品测定：- 根据标准曲线，计算待测样品的浓度。

六、讨论与结论1. 通过本次实验，掌握了紫外光谱的基本原理和操作方法，学会了如何利用紫外光谱法对物质进行定性分析和定量分析。

2. 实验结果表明，紫外光谱法具有灵敏度高、准确度好、操作简便等优点，在物质分析领域具有广泛的应用前景。

3. 在实验过程中，需要注意以下几点：- 样品制备过程中，应保证溶液的浓度准确，避免误差。

- 标准曲线绘制时，应选择合适的波长和浓度范围。

- 样品测定时，应严格控制实验条件，保证结果的准确性。

七、参考文献[1] 王正平，刘晓燕，赵宇飞. 紫外光谱法在药物分析中的应用[J]. 中国现代应用科学，2016，33（6）：1-4.[2] 陈晓红，王海燕，张敏. 紫外光谱法在食品分析中的应用[J]. 中国食品卫生杂志，2018，30（2）：139-142.[3] 张丽华，刘晓红，王海燕. 紫外光谱法在环境监测中的应用[J]. 环境科学与技术，2019，42（1）：89-92.。

dna纯度实验报告
《DNA纯度实验报告》
DNA纯度是衡量DNA样品质量的重要指标之一，它直接影响到后续实验的可
靠性和准确性。

为了确保实验结果的可靠性，我们进行了一系列的实验来检测DNA样品的纯度。

首先，我们使用了紫外-可见分光光度计来测定DNA样品的吸光度。

吸光度比
值（A260/A280）是评估DNA样品纯度的常用指标，通常情况下，纯净的
DNA样品的A260/A280比值应该在1.8至2.0之间。

我们测定了多个DNA样
品的A260/A280比值，结果显示大部分样品的比值在理想范围内，表明这些样
品具有较高的纯度。

其次，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，通过观察DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况来评估DNA样品的纯度。

纯度较高的DNA样品在凝胶上呈现为清晰的单
一条带，而受到污染或降解的DNA样品则可能呈现为模糊或多条带。

经过凝胶电泳实验，我们发现大部分DNA样品呈现出清晰的单一条带，证实了它们的高纯度。

最后，我们利用荧光定量PCR技术对DNA样品进行定量检测，进一步验证了
它们的纯度。

通过PCR反应，我们成功检测到了目标DNA序列的信号，表明
样品中没有明显的污染物或降解产物。

综合以上实验结果，我们得出结论：所测定的DNA样品具有较高的纯度，适合用于后续的实验操作。

在今后的实验中，我们将继续严格控制DNA样品的纯度，以确保实验结果的可靠性和准确性。

DNA纯度实验报告的完成，也为我们的研
究工作打下了坚实的基础。

紫外可见分光光度计实验报告一、实验目的1. 掌握紫外可见分光光度计的基本原理和技术。

2. 了解紫外光、可见光和小分子有机化合物吸收光谱的基本特征。

3. 通过构建标准吸光度 / 标准曲线，掌握测定小分子有机化合物浓度的方法。

二、实验原理及方法1. 实验原理：紫外可见分光光度计是利用小分子有机化合物在紫外光和可见光区吸收光能的特性，通过光谱分析技术测定样品的质量浓度的仪器。

光谱分析技术基于化合物所吸收光的波长，以及被吸收的光的传递程度，根据比色法或色度法计算样品中化合物的浓度。

紫外可见分光光度计、量筒、离心管、吸光度池、样品瓶、试剂瓶、移液器等。

1）制备标准溶液：取0.1g/L的对苯二酚溶液10ml，分别用移液器移取不同的体积转移到标准瓶中，加去离子水至刻度，制备几个不同浓度的标准溶液。

2）构建标准吸光度曲线：对各标准溶液测得其吸光度，根据吸光度值绘制标准吸光度曲线图。

3）测定样品吸光度：将待测样品加入吸光度池中，分别测量在紫外区（200-400nm）和可见区（400-700nm）的吸光度。

4）计算样品浓度：根据样品的吸光度和标准吸光度曲线，计算出样品的浓度。

三、实验结果及讨论实验中，我们首先制备了不同浓度的对苯二酚标准溶液，并构建标准吸光度曲线如下图所示：在紫外区和可见区测量了待测样品的吸光度，记录结果如下表所示：(插入计算样品浓度表格)通过实验数据，我们可以得出以下结论：1. 标准曲线是一条直线，说明样品中对苯二酚的吸光度和浓度成正比关系，符合比色法原理。

2. 样品的吸光度与浓度、光路长度和吸光度系数有关，而对苯二酚的吸光度在紫外区较高，在可见光区较低，符合分子光谱学原理。

3. 由于实验测量误差、环境因素等原因，在实验中尽量减少这些影响，保证数据的准确性，加深对紫外可见分光光度计的认识。

四、实验总结本次实验，我们成功掌握了紫外可见分光光度计的基本原理和技术，并通过构建标准吸光度曲线，掌握了测定小分子有机化合物浓度的方法。

紫外可见分光光度计量值比对结果及分析陈田新　王为梁　高　猛　陈　辉 / 西安计量技术研究院摘　要　为了评估紫外可见分光光度计的检测能力，进行了陕西省计量技术机构紫外可见分光光度计的量值比对。

介绍了比对依据、组织实施、比对方案和比对过程，阐述了参考值和参考值测量不确定度的选择，测量数据处理方法以及比对结果的判定原则。

同时报告了比对结果，对比对过程中出现的问题进行了分析，并提出建议。

关键词　紫外可见分光光度计；量值比对0　引言紫外可见分光光度计是环境监测、工业生产、食品加工、临床医学等领域最常用的分析仪器之一，其既可用于定性分析亦可用于定量测量，且具有灵敏度高、分析速度快、物质信息准确及选择性好的特点，使得该仪器在化学分析实验室中得到广泛应用。

依据《中华人民共和国计量法》，该仪器被列入强制检定工作计量器具目录。

为保证陕西省紫外可见分光光度计的量值准确、一致、可靠，验证省内各法定及授权计量技术机构的检定能力，提高人员技术水平，陕西省质量技术监督局下达了2016年度陕西省紫外可见分光光度计量值比对任务。

1　技术背景1.1　比对依据1）JJG 178-2007《紫外、可见、近红外分光光度计》；2）JJF 1117-2010《计量比对》；3）JJF 1117.1-2012《化学量测量比对》；4）JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》；5）JJF 1033-2008《计量标准考核规范》；6）GB/T 27043-2012《合格评定能力验证的通用要求》。

1.2　比对组织实施西安计量技术研究院作为主导实验室，承担此次比对的具体组织实施工作，负责制定比对方案，编写比对实施细则，比对用样品选型，汇总参比实验室的实验数据及相关资料，分析比对结果并编写比对总结报告。

陕西省共13家相关技术机构参加本次比对，参比实验室对应代码分别为：A、B、E、F、G、H、J、L、S、T、W、X、Y。

按照比对实施细则的要求，本次比对采用固定场所现场实验的方式进行，即每家参比实验室参比人员携带本实验室的检定装置，按约定时间至主导实验室进行比对实验。

一、实验目的1、学会使用UV-2550型紫外-可见光分光光度计。

2、掌握紫外—可见分光光度计的定量分析方法。

3、学会利用紫外可见光谱技术进行有机化合物特征和定量分析的方法。

二、实验原理基于物质对200-800nm光谱区辐射的吸收特性建立起来的分析测定方法称为紫外—可见吸收光谱法或紫外—可见分光光度法。

紫外—可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。

紫外—可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即：其中A是吸光度，I、I0分别为透过样品后光的强度和测试光的强度，ε为摩尔吸光系数，b为样品厚度，c为浓度。

紫外吸收光谱是由于分子中的电子跃迁产生的。

按分子轨道理论，在有机化合物分子中这种吸收光谱取决于分子中成键电子的种类、电子分布情况，根据其性质不同可分为3种电子：（1）形成单键的σ电子；（2）形成不饱和键的π电子；（3）氧、氮、硫、卤素等杂原子上的未成键的n电子。

图1. 基团中的σ，π，n成键电子当它们吸收一定能量ΔE后，将跃迁到较高的能级，占据反键轨道。

分子内部结构与这种特定的跃迁是有着密切关系的，使得分子轨道分为成键σ轨道、反键σ*轨道、成键π轨道、反键π* 轨道和n轨道，其能量由低到高的顺序为：σ<π<n<π*<σ*。

图2.分子轨道中的能量跃迁示意图仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。

三、仪器与溶液准备1、UV-2550型紫外—可见分光光度计2、1cm石英比色皿一套3、UVprobe电脑软件4、配置好的10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL以及未知浓度的甲基紫溶液，甲基红溶液5、仪器的基本构成：紫外可见分光光度计的基本结构如下：将实验数据用excel作图可得到水杨酸和水杨醛的紫外可见分光波谱图，分别如图3和图4.图3 实验1水杨酸的紫外可见分光波谱图图4 实验2 水杨醛的紫外可见分光波谱图图5 实验3 未知溶液的紫外可见分光波谱图水杨酸X 245 0.86137 水杨醛Y 284 0.5928321.634m g/mL。

紫外分光光度计验证报告记录2017519————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：紫外分光光度计验证方案目录一、引言 (2)1.1概述 (2)1.2主要技术参数 (2)1.3验证目的 (2)1.4验证要求 (2)二、验证的人员及职责 (3)委员会 (3)工程部 (3)质量部 (3)三、安装确认 (4)3.1安装确认所需文件资料 (4)关键性仪表及消耗性备品 (4)评价仪器的安装是否符合GMP及供应商提议的要求 (4)3.2起草标准操作规程 (4)3.3波长准确度校正 (4)3.4操作步骤 (4)3.5百分透光率-吸收度转换 (5)3.6波长校正 (5)3.7基线平直度的检定 (5)3.8百分线和100%线噪声的测定 (5)3.9吸收度的准确度 (6)3.10可接受标准 (6)3.11目的 (7)四、实验步骤 (7)五、验证证书 (10)一、引言1.1 、概述：本紫外分光光度计是双光束紫外分光光度计，波长范围是190～870nm,光谱带宽2nm, 波长精度±0.4nm, 具有数字显示，可以记录吸收光谱。

当单色光通过溶液时，溶液的吸收度与溶液的浓度和溶液的厚度（光路长度）成正比，即L⨯= , 据此通过测定吸收度计算溶液的浓度得到被测物质含量。

EA⨯C本仪器主要用于测定原料和成品的含量。

1.2、主要技术参数波长范围： 190 nm～1100 nm光源：进口钨灯进口氘灯光学系统：双光束1200线平面光栅波长准确度：≤±0.3 nm波长重复性：≤0.1 nm杂散光≤0.05 %T(220 nm NaI 溶液)光度范围－3 A～3 A噪声：≤0.0003 Abs/h基线平直度：≤±0.0005A光谱带宽：1nm漂移：≤± 0.0004 Abs/h光度准确度±0.3 %T (0～100 %T)光度重复性 0.001 Abs (0～0.5 Abs)1.3 验证目的：为确认紫外分光光度计测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对紫外分光光度计进行验证。

一、实验目的本次实验旨在学习实时浓度测量技术，掌握使用相关仪器对溶液浓度进行实时监测的方法，并了解实验原理和数据处理方法。

二、实验原理实时浓度测量是通过将待测物质与已知浓度的标准溶液进行比较，从而得出待测溶液的浓度。

本实验采用紫外-可见分光光度法，通过测量溶液在一定波长下的吸光度，根据比尔定律计算溶液浓度。

比尔定律：A = εlc其中，A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为光程长度，c为溶液浓度。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液器、容量瓶、比色皿、恒温水浴锅、天平等。

2. 试剂：标准溶液、待测溶液、蒸馏水等。

四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）准确移取一定体积的标准溶液，用蒸馏水稀释至一定体积，配制不同浓度的标准溶液。

（2）在紫外-可见分光光度计上，以蒸馏水为空白，依次测定各标准溶液在特定波长下的吸光度。

（3）以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 待测溶液浓度测定（1）准确移取一定体积的待测溶液，用蒸馏水稀释至一定体积。

（2）在紫外-可见分光光度计上，以蒸馏水为空白，测定待测溶液在特定波长下的吸光度。

（3）根据标准曲线，计算待测溶液的浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制根据实验数据，绘制标准曲线如图1所示。

从图中可以看出，在实验浓度范围内，吸光度与浓度呈线性关系。

2. 待测溶液浓度测定根据标准曲线，计算待测溶液的浓度为x mg/L。

六、实验讨论1. 实验误差分析实验误差主要来源于以下几个方面：（1）移液器、容量瓶等仪器的误差。

（2）紫外-可见分光光度计的测量误差。

（3）环境温度、湿度等对实验结果的影响。

2. 实验改进措施（1）选用高精度的移液器和容量瓶，以降低仪器的误差。

（2）使用校准过的紫外-可见分光光度计，提高测量精度。

（3）在实验过程中，注意控制环境温度、湿度等条件，减小环境因素对实验结果的影响。

七、结论本次实验成功绘制了标准曲线，并测定了待测溶液的浓度。