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Bradford法蛋白定量（Bradford Protein Assay ）Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250 shifts from 465 nm to 595 nm when binding to protein occurs. Both hydrophobic and ionic interactions stabilize the anionic form of the dye, causing a visible color change. Within the linear range of the assay (~5-25 mcg/mL), the more protein present, the more Coomassie binds.ReferenceBradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. (1976) 72, 248-254.考马斯亮蓝染色法(Bradford法)测定蛋白质含量原理1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的原理，迅速、敏感的定量测定蛋白质的方法。
BCA 法微量蛋白质浓度测定试剂盒 Micro BCA Protein Assay Kit产品编号：C503061包装规格：250 Assays/1250 Assays 产品简介BCA 法是理想的蛋白质定量方法，在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu 2+络合并将Cu 2+还原成Cu 1+。
BCA 特异地与Cu 1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM 处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。
该测定方法灵敏度高，操作简单，并且受干扰物质去垢剂等影响小。
本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定。
若采用分光光度法，标准曲线的线性范围为0.5-20 μg/mL 。
若采用酶标板法，标准曲线的线性范围为2-40 μg/mL 。
产品特点 1. 适用于浓度比较稀的蛋白质样品的定量。
2. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
3.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝，线性关系良好。
运输和保存条件在常温下运输，收到后将溶液A 、溶液B 和溶液C 于4°C 保存，BSA 蛋白标准液-20°C ，保质期两年。
试剂盒组成 组分 C503061 试剂 A 60 mL 试剂 B 60 mL试剂 C3 mL BSA 标准溶液 5mg/mL 2 mL 操作步骤A 试剂准备 1. 按照以下公式计算所需的BCA 工作液总体积。
ü BCA 工作液总体积=（标准曲线测定点数+样品数）×重复次数×每个样品所需的BCA 工作液体积 2. 根据所需的BCA 工作液总体积，定量取溶液A ：溶液B ：溶液C=25：24：1，混匀，制成BCA 工作液。
3. 取一定量的BSA 标准溶液，用1XPBS 溶液稀释为40 μg/mL 。
S a ng onB i o te chB. 分光光度法 1.取22支1.5 mL 离心管，分为标准组和样品组。
For personal use only in study and research; not for commercial use一. 原理BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
检测浓度下限达到25 微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。
二. 试剂盒组份组份Cat: KGPBCA （250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯）蛋白标准溶液（0. 5 μg/μL ）5 mL BCA试剂A 25 mL×2 BCA试剂B 1mL三. 操作步骤A．酶标板操作1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL）0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水（μL）20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量（μg）0 0.5作液，充分混匀；3. 各孔加入200μL BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
B．分光光度计测定1. 标准曲线的绘制：各管按照下表加入试剂孔号0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL）0 5 10 20 40 60 80 100 去离子水（μL）100 95 90 80 60 40 20 0 对应蛋白含量（μg）02.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.02. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3. 各管加入1000μL BCA工作液；4. 各管充分混匀，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
For personal use only in study and research; not for commercial use一. 原理BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
检测浓度下限达到25 微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。
二. 试剂盒组份组份Cat: KGPBCA （250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯）蛋白标准溶液（0. 5 μg/μL ）5 mL BCA试剂A 25 mL×2 BCA试剂B 1mL三. 操作步骤A．酶标板操作1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL）0 1 2 4 8 12 16 20 去离子水（μL）20 19 18 16 12 8 4 0 对应蛋白含量（μg）0 0.5作液，充分混匀；3. 各孔加入200μL BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
B．分光光度计测定1. 标准曲线的绘制：各管按照下表加入试剂孔号0 1 2 3 4 5 6 7 蛋白标准溶液（μL）0 5 10 20 40 60 80 100 去离子水（μL）100 95 90 80 60 40 20 0 对应蛋白含量（μg）02.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.02. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3. 各管加入1000μL BCA工作液；4. 各管充分混匀，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
BCA蛋白检测方法Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。
其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。
与Bradford法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
BCA定量中的A和B液BCA定量中的A和B液的成分是什么，作用是什么？试剂A：BCA(bicinchonininc acid)碱性溶液试剂B：硫酸铜溶液作用：BCA与二价铜离子的硫酸铜溶液等其他试剂组成的试剂，混合后显示苹果绿色。
在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu2+ 还原为Cu+，一个Cu+螯合两个BCA 分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物。
试剂(1)试剂A:含1%BCA二钠盐、2%无水碳酸钠、0.16%酒石酸钠、0.4%氢氧化钠、0.95%碳酸氢钠，将上述液体混合后调pH至11.25。
（2）试剂B：4%硫酸铜。
（3）BCA工作液：试剂A100mL+试剂B2L，混合。
（4）蛋白质标准液：准确称取150mg牛血清白蛋白，溶于100mL蒸馏水中，即为1.5mg/mL的蛋白质标准液。
(5)待测样品。
1、将上述各管混匀后于37°C保温30分钟，用562nm波长比色测定吸光度值。
2、以蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。
3、用测定管光吸收值在标准曲线上查找相应的蛋白质含量，再计算出待测血清中蛋白质浓度（g/L)。
待测样品浓度在50～2000微克／毫升浓度范围内有较好的线性关系BCA蛋白检测BCA Protein Assay 是基于在碱性条件下，Cu2+ 被蛋白还原成Cu+，进而发生高敏感性和选择性的颜色变化，通过分光测定，精确定量蛋白质浓度。
bsa蛋白定量流程English Answer:Introduction:Bovine serum albumin (BSA) is a widely used protein standard for quantitative protein assays. Its abundance in bovine serum, high solubility, and relatively low cost make it an ideal choice for calibration and standardization purposes. This protocol describes a step-by-step procedure for BSA protein quantification using a spectrophotometer.Materials:BSA standard solution.Protein assay reagent compatible with BCA or Bradford method.Cuvettes.Spectrophotometer.Pipettes.Vortex mixer.Microcentrifuge tubes.Procedure:1. Prepare BSA Standards:Dilute the BSA standard solution to create a series of known concentrations, typically ranging from 0 to 2mg/mL.2. Prepare Protein Assay Mixture:Mix the protein assay reagent with the appropriate volume of water according to the manufacturer's instructions.3. Incubate Reaction:Add equal volumes of the protein assay mixture to each standard and sample.Incubate the reaction at the recommended temperature and time for the specific assay method.4. Measure Absorbance:Transfer the reaction mixtures to cuvettes and measure the absorbance at the appropriate wavelength (usually 562 nm for BCA and 600 nm for Bradford).5. Create Standard Curve:Plot the absorbance values obtained from the BSA standards against their corresponding concentrations.Fit a linear regression line to the standard curve.6. Determine Sample Concentration:Measure the absorbance of the unknown samples.Use the standard curve equation to calculate the protein concentration in the samples.Additional Notes:Use high-quality reagents and equipment for accurate measurements.Calibrate the spectrophotometer regularly to ensure accuracy.Perform replicates for each sample to minimize errors.Refer to the specific protein assay reagent manufacturer's instructions for detailed protocols.中文回答：牛血清白蛋白（BSA）定量流程。
《欧洲药典》中蛋白含量的测定方法1.《欧洲药典》第7版2.5.33，USP<1057>Biotechnology-derived articles-Total protei n assay。
EP2.5.33收录了7种检测方法，即扫描法、Lowry 法、Bradford 法、BCA法、Biuret 法、荧光法和氮分析法。
1.1 扫描法：原理：依据蛋白质结构中含有芳香族氨基酸（如酪氨酸、色氨酸），其在280nm处有吸光值。
检测时，如果溶解蛋白质的溶剂也有高吸光度，则采用干扰对照液进行补偿消除。
但如果干扰对照液吸光值也很高，则检测结果误差大。
此外，低浓度蛋白质溶液会因蛋白质吸附至检测池上而影响浓度，后者可使用高浓度或用去离子去污剂处理样品。
待测品：蛋白质溶液浓度一般为0.2mg/mL~2 mg/mL。
对照品：选择合适的对照品，用溶解待测品蛋白质的溶剂配制，浓度与待测品溶液一致。
检测：检测过程中，将待测蛋白溶液、对照品溶液和干扰对照液保持在相同温度。
使用石英比色皿检测280nm处吸光值，并使用规定的溶液进行补偿。
溶液浓度应尽可能保持在适宜范围内以便获取准确结果。
光散射影响：样品引起的光散射会导致蛋白质检测结果准确度降低。
如果蛋白质溶液中存在颗粒大小与检测波长（250nm到300nm）相当的颗粒，光散射将导致样品的吸光值大大增加。
为了校正光散射引起的在280nm处的吸光值，则可检测待测样品在320nm、325 nm、330 nm、335 nm、340 nm和350 nm处的吸光值，以所得的吸光值对数值为纵坐标，以检测波长对数值为横坐标作图，并通过线性回归确定标准曲线，将曲线延伸到280nm，得到280nm处吸光值的对数，再通过反对数计算获得280nm处由光散射引起的吸光值。
从检测的总吸光值中扣除光散射引起的吸光值即为样品吸光值。
用0.2μm滤膜过滤或离心可减少光散射作用，特别是明显浑浊的蛋白溶液。
欧洲药典蛋白含量测定方法《欧洲药典》中蛋白含量的测定方法1. 《欧洲药典》第7版2.5.33，USPBiotechnology-derived articles-Total protein assay。
EP2.5.33收录了7种检测方法，即扫描法、Lowry 法、Bradford 法、BCA法、Biuret 法、荧光法和氮分析法。
1.1 扫描法：原理：依据蛋白质结构中含有芳香族氨基酸〔如酪氨酸、色氨酸〕，其在280nm 处有吸光值。
检测时，如果溶解蛋白质的溶剂也有高吸光度，那么采用干扰对照液进行补偿消除。
但如果干扰对照液吸光值也很高，那么检测结果误差大。
此外，低浓度蛋白质溶液会因蛋白质吸附至检测池上而影响浓度，后者可使用高浓度或用去离子去污剂处理样品。
待测品：蛋白质溶液浓度一般为0.2mg/mL~2 mg/mL。
对照品：选择适宜的对照品，用溶解待测品蛋白质的溶剂配制，浓度与待测品溶液一致。
检测：检测过程中，将待测蛋白溶液、对照品溶液和干扰对照液保持在相同温度。
使用石英比色皿检测280nm处吸光值，并使用规定的溶液进行补偿。
溶液浓度应尽可能保持在适宜范围内以便获取准确结果。
μm滤膜过滤或离心可减少光散射作用，特别是明显浑浊的蛋白溶液。
计算：应使用校正过的吸光值进行计算，按以下公式进行计算。
CU=CS (AU/AS)其中，CS为对照液浓度，AU、AS分别为单侧样品和对照液的校正后的吸光值。
1.2 Lowry 法：原理：此方法是依据蛋白质中的酪氨酸能将磷钼酸-钨酸混合物复原，复原后物质在750nm处有最大吸收值。
室温下，其颜色在20~30min内最深，随后将随时间逐渐减弱。
这个方法干扰物质较多，因此可使用沉淀法处理蛋白样品。
多数的干扰物质产生较低颜色，一些去污剂可明显加深溶液颜色。
可使用高盐沉淀法提纯蛋白。
由于不同蛋白质的吸光强度不同，因此对照品应与待测品一致。
如果有必要除去干扰物质，那么应在样品制备前按下述的方法处理。
