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根瘤菌的培养
王素英
【期刊名称】《生物学杂志》
【年(卷),期】1993(000)006
【摘要】根瘤菌系统分类离不开对其进行核酸分析(如DNA同源性分析,16srRNA 序列分析等)。
而这种分析的首步工作是菌的活化及液体扩大培养。
目前,尽管根瘤菌的培养方法渐趋成熟。
被科学工作者普遍承认,但由于不同来源的根瘤菌,其生境千变万化。
采取单一的培养方法很难满足一些特殊菌的生长需求。
本人在进行由新疆采集的一群特殊慢生型根瘤菌(分类地位尚未确定)的DNA同源性分析工作时,对其培养条件进行了摸索。
【总页数】1页(P30)
【作者】王素英
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】Q93－335
【相关文献】
1.菌血症患儿血培养放射根瘤菌基因型与药敏分析 [J], 常勇杰;续华东;徐红炜;徐艳;张振
2.大豆根瘤菌AWCS 13－4菌株培养条件的筛选与优化 [J], 李正鹏;何庆元;史钧;祝嫦巍;吴萍
3.转基因莱茵衣藻hemHc-lbac和根瘤菌共培养提高产氢培养条件的优化 [J], 许
丽丽;王全喜;吴双秀;李德志
4.杀线虫解淀粉芽胞杆菌Sneb709与费氏中华根瘤菌Sneb183共培养发酵条件优化 [J], 李佳娣;赵劲捷;范海燕;朱晓峰;王媛媛;刘晓宇;段玉玺;陈立杰
5.浅谈放射型根瘤菌胞外多糖发酵培养基的优化 [J], 刘咏梅;孔琪;沈路
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为TIR 区的自由能绝对值每增加114kcal/ m ol , 基因的翻译起始率即会下降10 %6 。
但是TIR 的范围尚无明确定义, G anoz a 认为应包括起始密码子上下游70 个核苷酸的范围7, 考虑到本研究中起始密码子上游的序列为载体序列, 已经过优化, 我们将重点放在ATG 下游的序列, 并将调整范围延长到60 (即20 个氨基酸) 个核苷酸。
同时我们也考虑到密码子的偏好性, 大肠杆菌稀有密码子的存在会造成很多严重后果: mRNA 的半衰期降低, 翻译提前终止, 和移框突变等8 。
综上所述, 我们在降低G C 含量的同时, 尽量采用大肠杆菌偏好的密码子。
本研究中菌株N o16 的自由能与原始序列相同且较前5 种序列为低, 但表达量在所有序列中位居第二, 与计算机的预测结果并不完全一致, 可能是由于TIR 内部的碱基有因可能与外部的碱基发生配对, 形成更大范围的二级结构, 超出了计算机的分析范围,此人为地适当延长TIR 范围可以增加预测的可靠性。
参考文献1 Rex G , S urin B , Besse G , et al1 J Biol Chem , 1994 , 269 (27) : 8118～812712 Fujita M S , N om ura K C , H ong K G , et al1 Biochem Biophys Res C ommun , 1993 , 197 (3) : 1340～134713 刘北域, 官孝群, 宋后燕1 上海医科大学学报, 1999 , 26 (6) : 401～40414 张淑梅, 张云湖, 赵晓祥, 等1 中国生物化学与分子生物学报, 1999 , 15 (6) : 912～91515 Barrick D , V illanueba K , Childs J , et al1 Nucleic Acids Research , 1994 , 22 (7) : 1287～129516 de Smit M H ,van Duin J 1 Pr oc N atl A cad Sci , 1990 , 87 (19) : 7668～767217 G anoz a M C , K of o id E C , Marliere P ,et al1 Nucleic A cids Res , 1987 , 15 (1) : 345～3601Andersson S G , K urland C G1 Micr obiol Rev , 1990 , 54 (2) : 198～21018从豆科植物的根瘤中直接提取根瘤菌D N A 的方法3强1 ,2张小平1 3 3李登煜1陈文新2K1Lindstrm3 Z1Terefework3陈( 四川农业大学农学院微生物学系雅安625000) 1( 中国农业大学生物学院微生物学系北京100094) 2( Department of Applied Chemistry and Microbiology , University o f Helsinki , Finland 00014) 3摘要: 豆科植物的新鲜根瘤经表面灭菌、破碎后直接加入200μL 4m ol/ L 异硫氰酸胍( G UTC)裂解液混匀, 离心去掉根瘤残留物, 再加入适量R NA 酶, 37 ℃温育30min 后, 加入20μL 硅藻土吸附液, 室温处理15min 离心去掉上清, 沉淀经G UTC 裂解液二次处理, 再分别用洗涤液、70 %酒精洗涤。
慢生根瘤菌接种花生的结瘤能力黄小娜;谭芳;姜福纯【摘要】为筛选合适的花生根瘤菌菌株及提高花生产量提供理论依据,选用分离自花生(DASA03005、DASA 03183和DASA 03028)与合萌(ORS 278与STM 6978)的5种慢生根瘤菌,人工接种至花生植株,检测植株结瘤数,采用乙炔还原法测定固氮酶活性;采用BOX-PCR指纹图谱分析技术,比较接种菌株与结瘤菌株的DNA 指纹图谱,揭示菌株基因组的差异.结果表明:菌株DASA 03005和ORS 278不能与花生形成结瘤,DASA 03028、DASA 03183和STM 6978能与花生形成结瘤,且接种DASA 03028、DASA03183菌株的花生其单株植株结瘤数和生物量都大于接种STM 6978菌株的;菌株DASA 03028、DASA03183和STM 6978与结瘤菌株的DNA指纹图谱基本一致,菌株DASA 03005和ORS 278则与结瘤菌株的差异较大.接种菌株的结瘤数越多,花生植株的干重越重,固氮酶活性越强,地表植株的生物量也相应较大.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2019(047)004【总页数】5页(P74-78)【关键词】花生;慢生根瘤菌;结瘤能力;生物量;固氮酶活性;BOX-PCR【作者】黄小娜;谭芳;姜福纯【作者单位】黔南民族师范学院生物科学与农学院,贵州都匀 558000;黔南民族师范学院生物科学与农学院,贵州都匀 558000;黔南民族师范学院生物科学与农学院,贵州都匀 558000【正文语种】中文【中图分类】S154.3生物固氮主要包括自生固氮和共生固氮。
自生固氮是指某些微生物能够独立地完成固定大气中的分子氮的作用，这种固氮方式效率低下，固氮量有限[1]。
而共生固氮是指固氮微生物和宿主植物共同完成固氮作用，这种固氮量要远远大于自生固氮，是天然的氮肥制造工厂，以豆科植物与根瘤菌的固氮作用最为明显[2]。
6种根瘤菌系统发育分析及其耐硒能力成永丽;陈健;杨琳;杨凡;雷梦成;傅琴;周毅峰;唐巧玉【摘要】[目的]研究不同硒含量土壤中生长的紫云英和大豆共生根瘤菌种类和硒耐受能力.[方法]采用涂布平板法从植物根瘤中分离根瘤菌,提取根瘤菌总DNA,进行16S rDNA扩增、克隆与测序,并建立系统发育树进行分子系统发育分析.再将各菌株在不同浓度含硒平板上进行培养,以菌落变红为临界条件,筛选各菌株的硒耐受能力.[结果]①从高硒土壤上生长的紫云英和大豆根瘤中分离纯化得到5个根瘤菌菌株,从低硒土壤上生长的大豆根瘤中分离纯化出1个根瘤菌菌株.②6个菌株分属4个不同的属别,竹山、炼铁湾、渔塘坝紫云英根瘤菌供试菌株归属土壤杆菌属(Agrobacterium)、低硒大豆根瘤菌供试菌株归属慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)、高硒大豆根瘤菌供试菌株归属中华根瘤菌属(Sinorhizobium)、曾家紫云英根瘤菌供试菌株归属根瘤菌属(Rhiw-bium).③竹山、炼铁湾、渔塘坝紫云英根瘤菌耐硒能力均为6μg/mL,曾家紫云英根瘤菌耐硒能力为5.μg/mL,低硒、高硒大豆根瘤菌耐硒能力均为3μg/mL.[结论]在高硒自然环境(竹山、炼铁湾、渔塘坝、曾家)下生长的根瘤菌有较强耐硒能力,紫云英根瘤菌的耐硒能力高于大豆根瘤菌.【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2018(031)012【总页数】8页(P2616-2623)【关键词】根瘤菌;16S rDNA;系统发育;硒【作者】成永丽;陈健;杨琳;杨凡;雷梦成;傅琴;周毅峰;唐巧玉【作者单位】生物资源保护与利用湖北省重点实验室,湖北民族学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;生物资源保护与利用湖北省重点实验室,湖北民族学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;生物资源保护与利用湖北省重点实验室,湖北民族学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;生物资源保护与利用湖北省重点实验室,湖北民族学院,湖北恩施445000【正文语种】中文【中图分类】S153.6【研究意义】根瘤菌(Rhizobia)，是一类存在于土壤中的革兰氏阴性细菌[1]。
优良根瘤菌菌株筛选与鉴定技术研究优良根瘤菌菌株的筛选与鉴定技术研究根瘤菌是一类生活在植物根部与其共生的微生物，它们与植物形成共生关系，能够固氮和供给植物必需的氮营养，提高植物的生长和产量。
因此，筛选和鉴定优良的根瘤菌菌株对于农业生产和生态环境具有重要意义。
本文将重点探讨根瘤菌菌株筛选与鉴定的相关技术。
1. 根瘤菌菌株筛选技术根瘤菌的筛选是通过鉴定植物根瘤中的菌株来进行的，主要包括以下几个步骤：1.1 植物根瘤的采集与分离首先，我们需要在农田或实验室中收集不同植物根瘤样品，包括豆科植物（如大豆、绿豆）和非豆科植物（如黄连木、山东花椒）。
然后，将根瘤样品进行分离，可以通过灭菌的方法将根瘤剪切并悬浮于适宜的培养基中，培养基中包含碳源、氮源、矿质元素等。
1.2 菌株的纯化与培养将分离得到的根瘤菌菌株进行纯化，可以通过菌落转接法、层析法等方法纯化单株。
然后，在合适的培养条件下进行扩培，常用的培养基包括YMA培养基和BMM培养基等。
培养的条件需要控制温度、pH值等因素，以保证菌株的生长。
1.3 菌株的特性筛选在菌株的培养基上观察和筛选菌株的生理和形态特性。
例如，根瘤菌菌株的菌落形状、色素产生、胞外多糖分泌等特性可以通过目测进行初步筛选。
此外，一些生理指标如产生IAA（吲哚-3-乙酸）、溶磷、溶钾等也可以作为筛选指标。
1.4 微生物学特性的鉴定对于分离得到的根瘤菌菌株，可以通过一系列的微生物学鉴定方法进行准确定性。
包括菌落形态观察、生理生化测试、结构鉴定、酶谱分析、抗生素抗性分析等。
这些方法可以帮助我们了解根瘤菌的基本特性，并与已有的参考菌株进行比较。
2. 根瘤菌菌株鉴定技术鉴定根瘤菌的最终目的是确定其分类学和系统学地位置。
鉴定可以根据菌株的形态特征、生理生化特性、分子生物学特性等方面进行。
2.1 形态特征的鉴定根瘤菌菌株的形态特征是鉴定的重要依据之一。
通过观察菌株的菌落形态、菌丝形态、孢子形态等可以对菌株进行初步的鉴定分类。
根瘤菌菌剂的研究进展和应用前景植物生长中的一种重要因素是植物与根瘤菌的共生关系，这种共生关系对农作物的生长和发展起着至关重要的作用。
根瘤菌是一类存在于土壤中的益生菌，它们能够与植物根系共生，并通过固氮作用为植物提供可用氮源。
根瘤菌菌剂的研究和应用对于实现可持续农业发展、改善农业生产环境、提高农作物产量具有巨大的潜力。
本文将就根瘤菌菌剂的研究进展和应用前景进行探讨。
根瘤菌菌剂的研究进展方面，目前已经取得了一系列重要的突破。
研究人员通过对根瘤菌菌种的筛选和培养条件的优化，成功地研发出了多种高效的根瘤菌菌剂。
这些菌剂能够与不同种类的植物建立良好的共生关系，为植物提供生长所需的氮源，提高植物的养分吸收能力，增强植物的抗逆性和适应性。
此外，还有研究表明，根瘤菌菌剂能够通过生物调节作用改善土壤环境，促进土壤微生物活性，提高土壤肥力。
一些研究还发现，根瘤菌菌剂可以降低化肥的使用量，减少对环境的污染，并节约生产成本。
因此，根瘤菌菌剂在农业生产中的研究和应用已经成为当前农业可持续发展中的热点领域。
根瘤菌菌剂的应用前景也非常广阔。
首先，根瘤菌菌剂可以应用于各种农作物的生产中，包括粮食作物、蔬菜、果树和草地等。
通过与根瘤菌进行共生，作物可以更好地吸收土壤中的氮源，从而实现增产和提高品质的目标。
其次，根瘤菌菌剂可以应用于荒漠化地区的土壤改良中。
荒漠化地区土壤的肥力较差，通过引入根瘤菌菌剂，可以改善土壤的水分保持能力、肥力和微生物活性，恢复土壤生态系统的功能，从而实现荒漠化地区的绿化和生态恢复。
此外，根瘤菌菌剂还可以应用于生物有机肥料的生产中，通过与有机物质结合，提高有机肥料的效果，增加养分的利用率。
然而，根瘤菌菌剂在应用过程中还存在一些挑战和问题需要解决。
首先，根瘤菌菌剂的应用技术还需要进一步完善，包括菌株的选择、培养方法的优化、添加剂的开发等。
其次，菌剂的稳定性和存活率也需要提高，以保证菌剂在不同环境条件下的有效存活和生物活性。
54卷花生根瘤菌的分离筛选及应用杜普旋1，陈荣华2，邓权清1，鲁清1，刘浩1，范呈根2，李少雄1，洪彦彬1*（1广东省农业科学院作物研究所/国家油料作物改良中心南方分中心/广东省农作物遗传改良重点实验室，广东广州510640；2赣州市农业科学研究所，江西赣州341000）摘要：【目的】分离筛选高效结瘤固氮的花生根瘤菌，为花生根瘤菌的田间推广应用提供理论依据和候选菌种。
【方法】采用植物捕获法从田间采集的土样中分离纯化根瘤菌，扩增其16S rDNA序列进行分子鉴定。
经回接试验和匹配试验筛选优良菌株及最佳共生组合，并通过土壤盆栽田间试验探究优良菌株的接种效果。
【结果】共分离纯化出15株花生根瘤菌，均属于α-变形菌纲的慢生根瘤菌属（Bradyrhizobium）。
回接试验筛选出2株共生固氮性状优良的花生根瘤菌GDHS-5和GDHS-14。
匹配试验表明这2个菌株具有广谱结瘤性，GDHS-5与粤油901的匹配效果最好，GDHS-14次之。
土壤盆栽条件下接种GDHS-5显著提高了粤油901的地上部分高度、根瘤数量和根瘤鲜重（P<0.05，下同），而接种GDHS-14与不接种对照（CK）无显著差异（P>0.05，下同）。
田间条件下接种GDHS-5分别使单株荚果数、产量和花生蔗糖含量显著增加35.82%、9.92%、165.88%，接种GDHS-14与CK无显著差异。
【结论】花生根瘤菌GDHS-5和GDHS-14共生固氮表现优异，其中GDHS-5能高效共生固氮，具有广谱结瘤性，在田间条件下可显著提高花生单株荚果数和产量，具有较大的田间应用潜力。
关键词：花生；根瘤菌；共生固氮；分离筛选中图分类号：S565.2；Q939.9文献标志码：A文章编号：2095-1191（2023）01-0102-08Isolation，screening and application of peanut rhizobiaDU Pu-xuan1，CHEN Rong-hua2，DENG Quan-qing1，LU Qing1，LIU Hao1，FAN Cheng-gen2，LI Shao-xiong1，HONG Yan-bin1*（1Crops Research Institute，Guangdong Academy of Agricultural Sciences/South China Peanut Sub-center，National Cen-ter of Oilseed Crops Improvement/Guangdong Provincial Key Laboratory of Crop Genetic Improvement，Guangzhou，Guangdong510640，China；2Institute of Agricultural Sciences in Ganzhou，Ganzhou，Jiangxi341000，China）Abstract：【Objective】To isolate and screen peanut rhizobia of efficient nodulation and nitrogen fixation effects，and to provide theoretical basis and candidate strains for promotion and application of peanut rhizobia in field.【Method】Rhi-zobia were isolated and purified from soil samples collected in field by plant capture method，and their16S rDNA sequen-ces were amplified for molecular identification.Excellent rhizobia strains and optimal symbiotic combination were screened by reinoculation and matching tests，and effects of inoculation with the excellent strains were investigated through soil pot field tests.【Result】Fifteen strains of peanut rhizobia were isolated and purified，all belonging to Bradyrhi-zobium ofα-proteobacteria.Two strains of peanut rhizobia，GDHS-5and GDHS-14，with excellent symbiotic nitrogen fi-xation traits were screened through the reinoculation test.The matching test showed that these2strains had broad-spectrum nodulation，and matching Yueyou901with GDHS-5produced the best effects，followed by matching it with GDHS-14.Under soil pot culture conditions，inoculation with GDHS-5significantly increased above-ground part height，root nodule number and root nodule fresh weight of Yueyou901（P<0.05，the same below），but no significant difference was found be-tween strains inoculated with GDHS-14and non-inoculated control（CK）（P>0.05，the same below）.Pod number per plant，yield and sucrose content in peanut were significantly increased by35.82%，9.92%and165.88%respectively after inoculation with GDHS-5under field conditions，and no significant difference was found between strains inoculated with收稿日期：2022-10-20基金项目：广东省重点领域研发计划项目（2022B020*******）；广东省科技计划项目（2021A0505030047）；广东省现代农业产业技术体系项目（2022KJ136-02）通讯作者：洪彦彬（1979-），https：///0000-0002-8589-8184，研究员，主要从事花生遗传育种研究工作，E-mail：hongyan-************第一作者：杜普旋（1996-），https：///0000-0002-5634-6225，主要从事生物固氮与菌植互作研究工作，E-mail：dupuxuan ************1期·103·0引言【研究意义】氮素是植物正常生长发育不可或缺的关键生命元素（杨正等，2021）。
一株高效慢生型花生根瘤菌的筛选孙杉杉;朱瑞艳;杜迎辉;徐志文【摘要】[目的]为筛选出一株更加高效促生的花生根瘤菌.[方法]从山东、河北、河南、辽宁4个花生种植地区的20个土样中分离出20株野生型花生根瘤菌.[结果]与现有生产使用的花生根瘤菌144相比,高效固氮的慢生型花生根瘤菌单株结瘤数提高27.4％,单株干重提高8.7％,单株全氮含量提高6.5％,单株产量提高30.45％.[结论]经过16s鉴定及盆栽试验比较,最终筛选出一株高效固氮的慢生型花生根瘤菌.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)012【总页数】3页(P79-80,84)【关键词】慢生花生根瘤菌;筛选;高效【作者】孙杉杉;朱瑞艳;杜迎辉;徐志文【作者单位】领先生物农业股份有限公司,河北秦皇岛066000;领先生物农业股份有限公司,河北秦皇岛066000;领先生物农业股份有限公司,河北秦皇岛066000;领先生物农业股份有限公司,河北秦皇岛066000【正文语种】中文【中图分类】S144.3花生是一年生豆科植物，有丰富的营养价值，富含维生素、蛋白质和脂肪，是世界上种植面积最大的油料作物，在我国各地均有种植。
作为我国主要的油、粮两用作物，花生是营养比较全面的作物食品［1］。
花生根瘤菌能与花生形成共生根瘤，固定空气中的氮气，为植物生长提供营养，提高花生的产量和品质，可使花生在贫瘠的土壤中生长。
花生根瘤菌与花生通过有效的共生固氮作用可提供花生生育期有效氮素的50%［2］。
因此，用高效固氮根瘤菌菌株制成的根瘤菌菌剂应用在农业生产上具有效果好、成本低、不污染环境、增加土壤氮素、提高土壤肥力的作用［3］。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 培养基。
固体和液体培养均使用YMA培养基，组成为:10 g甘露醇、0.8 g酵母浸膏粉、0.25 g 磷酸氢二钾、0.25 g磷酸二氢钾、0.2 g硫酸镁、0.1 g氯化钠、15～20 g琼脂、1 000 ml蒸馏水，pH 6.8 ～7.0。
