2.植物硝态氮的比色测定

实验二植物体内硝态氮含量的测定实验目的：掌握比色法测定硝态氮含量。

实验原理：在浓酸条件下，NO3－与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。

生成的硝基水杨酸在碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量呈正比，可直接比色测定。

实验仪器：可见分光光度计、天平（感量0.1 mg）、20 mL刻度试管、50 ml容量瓶、小漏斗、玻棒、洗耳球、水浴锅、封口膜、滤纸、移液管。

植物材料：菠菜试剂：500 mg/L 硝态氮标准溶液；5% 水杨酸－硫酸溶液；8% 氢氧化钠溶液。

实验注意事项：1.一定不要将5%水杨酸－硫酸溶液溅到桌面、试管外或衣物及皮肤上。

2.加热煮沸时要小心，以免烫伤。

实验内容：1.标准溶液配制吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液2、4、6、8、10 ml分别放入50 ml 容量瓶中，用去离子水定容至刻度，使之成20、40、60、80、100 mg/L的系列标准溶液。

2.样品中NO3－的提取取一定量的植物材料，剪碎混匀，用天平精确称取材料2 g ，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。

到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。

3.反应吸取上述系列标准溶液和样品提取液各0.1 ml，分别放入烘干的试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。

再分别放入0.4 ml 5%水杨酸－硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20 min后，再加入8% NaOH溶液9.5 ml，摇匀冷却至室温。

则显色液总体积为10 ml。

4.绘制标准曲线以空白作参比，在410 nm波长下测定吸光度。

以硝态氮浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。

5.样品中NO3—含量的计算在标准曲线上查得或用回归方程计算出硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含量。

NO3－－N含量= (C×V/1000 )/W式中C—标准曲线上查得或回归方程计算得NO3－－N浓度；V—提取样品液总量；W—样品鲜重。

硝态氮是植物最主要的氮源。

植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。

测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。

（二）仪器与用具（1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。

试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。

5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。

置冰箱保存一周有效。

8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。

（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。

（2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。

（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。

高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。

测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。

α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。

根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。

本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。

二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。

5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。

保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。

四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。

盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。

冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。

植物组织中硝态氮含量的测定目的意义根系吸收的无机态氮，有铵态氮和硝态氯。

植物体内硝态氮合量可以反映土壤氮素供应情况，常作为施肥指标。

叶菜类和根菜类中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害人体健康。

测定植物组织硝态氮含量对研究植物氮素营养和农产品安全性均有重要作用。

一、实验原理本实验采用硝基水杨酸比色法测硝态氮，其原理是在有浓硫酸的条件下NO3-与水杨酸生成硝基水杨酸。

产物硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)呈黄色，在410 nm处有最大吸收峰，在范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。

二、材料、设备和试剂1.材料玉米、接骨木、瓜类、葡萄等植株幼苗。

2.设备电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、滤纸等。

3.试剂（1）100mg/L硝态氮标准溶液精确称取烘干至恒重的KNO3 0.7221g溶于蒸馏水（无离子水）中，定容至1000ml。

（2）5%水杨酸-硫酸溶液称取5g水杨酸溶于100ml浓硫酸中（密度为1.84），搅拌溶解后，贮存于棕色瓶中，置冰箱保存1周有效。

（3）8%氢氧化钠溶液称取20g氢氧化钠溶于250ml蒸馏水中。

三、操作方法1．标准曲线的制作(1)吸取100 mg/L硝态氯标准溶液1m1、2ml、4m1、6m1、8ml、10ml、12m1分别放入10ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，使之成为10、20、40、60、80、100、120µg /m1硝态氮的系列标准液。

(2)取8支试管，分别编号为0-7，以0号管加入0.1ml蒸馏水作空白，1-7号管分别吸取上述系列标准溶液0.1ml。

再分别加入0.4ml 5％水杨酸—硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后，再加入8％NaOH溶液9.5ml，摇勾冷却至室温，以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度，以硝态氯含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

见下表。

2．样品制备称新鲜植物组织l-2g研成匀浆，(或称经70℃烘干磨碎过60目即孔径0.25mm筛的干样100mg)装入20m1具塞刻度试管，加无离子水10-20ml，盖紧塞子，置于45℃恒温水浴浸提1h，其间不断摇动，然后过滤或离心(如含色素需脱色)，滤液备用。

植物生理学实验课程名称：植物生理学实验名称：植物组织含水量的测定（一）实验属性：基本实验计划时数：3学时教学目标与基本要求：1．掌握植物组织自然含水量和相对含水量的测定方法2．能够利用所学测定方法测定同一植物在不同生态环境下的自然含水量和相对含水量。

实验内容或指导思想：1．自然含水量：⑴求称量瓶重量；⑵求称量瓶与植物样品总重量；⑶将材料烘至恒重；⑷结果计算。

2．相对含水量：⑴同1方法先求材料鲜重；⑵求饱和鲜重；⑶求组织干重；⑷结果计算。

实验教材及参考书：1．张志良，1997。

植物生理学实验指导，高等教育出版社。

2．A.И.耶尔马科夫等著，吴相钰译：1956。

植物生物化学研究法，科学出版社。

实验名称：植物组织渗透势的测定（二）实验属性：基本实验计划时数：3学时教学目标与基本要求：1．学习以质壁分离法测定植物组织渗透势的方法。

2．以所学方法测定不同植物材料的组织渗透势。

实验内容或指导思想：1.配制梯度浓度蔗糖溶液；2.撕取植物材料表皮，浸入不同溶液5—10分钟；3. 显微镜观察确定引起半数以上细胞发生初始质壁分离的浓度和不引起质壁分离的最高浓度；④计算。

实验教材及参考书：1．张志良，1997。

植物生理学实验指导，高等教育出版社。

2．F.H.魏海姆等，中国科学院植物研究所生理生化研究室译：1974。

植物生理学实验，科学出版社。

实验名称：植物组织水势的测定（三）实验属性：基本实验计划时数：3学时教学目标与基本要求：1．学习以小液流法测定植物组织水势的方法；2．运用所学方法测定不同生态环境下植物组织的水势。

实验内容及指导思想：1. 配制浓度梯度蔗糖溶液并将各浓度溶液分为试验组和对照组；2 将植物材料置试验组溶液中30min，并在其中加入甲烯蓝粉末少许，震荡均匀；3 以弯头滴管取蓝色溶液置于相应浓度对照组试管中部，轻轻挤出，观察蓝色液流动向。

4 计算。

实验教材及参考书：1．张志良，1997。

植物生理学实验指导，高等教育出版社。

硝态氮的测定方法
硝态氮是污染水体中的重要指标，它是水体中有害物质浓度的重要反映，是水质污染的重要指标之一。

硝态氮的测定对于检测水质污染有重要意义。

硝态氮的测定，可以采用分光光度法、离子选择电极法和高效液相色谱法。

分光光度法是测定硝态氮水体中最常用的方法，原理是利用不同浓度的氮溶液和其他溶液，用比色杯比色，在一定波长的紫外光照射下，当硝态氮的浓度达到一定的程度时，其色度值才能达到一定的标准。

离子选择电极法是测定硝态氮最常用的方法之一，其原理是通过使用离子选择电极来测定水体中硝态氮的浓度，利用电极反应产生的电流大小来确定硝态氮的浓度，从而测
定硝态氮的含量。

高效液相色谱法是一种常用的测定硝态氮的方法，其原理是将待测样品中的硝态氮离子进行分离，然后用高效液相色谱仪进行检测，最终给出硝态氮的浓度。

硝态氮的测定是水质污染的重要指标，它的测定方法有分光光度法、离子选择电极法和高效液相色谱法。

这三种方法各有优缺点，应根据测定要求和检测结果来选择最合适
的方法，以便准确测定硝态氮的含量。

植物硝酸盐含量的测定（紫外光度法）
一、实验试剂
1. 100mg/L硝态氮标准溶液：精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221g溶于蒸馏水中，定容至1000ml。

2. 5%水杨酸─硫酸溶液：称取5g水杨酸溶于100ml比重为1.84的浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。

3. 8%氢氧化钠溶液：80g氢氧化钠溶于1L蒸馏水中即可。

二、操作步骤
1.样品中可溶性蛋白的提取
取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克分别放入三支刻度试管中，加入10ml 无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分钟，到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。

2．标准曲线的绘制
分别吸取0.00、10.00、20.00、30.00、40.00、50.00ml标液于50ml试管中定容，配制成浓度分别为0、20、40、60、80、100mg/ml的葡萄糖溶液。

3．可溶性蛋白的测定
吸取0.2ml溶液，加入0.8ml水杨酸，混匀（黄色），置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，在410nm测定吸光度。

硝态氮测定---酚二磺酸比色法硝态氮是水体中一种重要的污染物质，它们来源于农业、城市污水、化学工业废水等。

硝态氮的含量过高会导致水生态系统的生物多样性减少、水体富营养化、藻类爆发等不良影响。

因此，快速准确地测定水体中的硝态氮含量对环境监测和治理具有重要意义。

本文将介绍一种常用的硝态氮测定方法——酚二磺酸比色法。

一、测定原理酚二磺酸比色法是常用的硝态氮测定方法之一。

它的原理是在弱酸条件下，硝酸根离子（NO3-）和苯环（C6H5）反应生成蓝色的化合物——苯醛磺酸（C6H5SO2OH）和硝基苯（C6H5NO2），其反应方程式为：NO3- + C6H5SO3H → C6H5SO2OH + N2O5N2O5 + C6H5SO3H → C6H5NO2 + HSO4- + H2O测定条件：pH值在2.5~3.5之间、温度在25~30℃、时间在10~20min内。

测定范围：0.001~50mg/L。

二、试剂和设备1、试剂：硝酸钠（NaNO3）、酚二磺酸（C6H5SO3H）、硝酸甲酯（CH3ONO2）、氯化汞（HgCl2）、亚硫酸氢钠（NaHSO3）、水铁氰化钾（K4[Fe(CN)6]）、硫酸（H2SO4）、无水乙醇（C2H5OH）。

2、设备：分光光度计、比色皿、倒吸滤器、分析天平、移液管、恒温水浴器、热板。

三、操作步骤1、制备标准曲线（1）分别称取50mL、25mL、10mL、5mL和2.5mL的1.0mg/L硝酸钠溶液放入50mL瓶中，用水定容。

（2）取出每个瓶子中的5mL溶液，用20%的氯化汞溶液处理5min后，加入2mL酚二磺酸溶液，然后加入适量的饱和的氯化钾溶液和1mL硝酸甲酯溶液（作为载体），加水至50mL。

（3）等待颜色稳定后，在505nm波长下测量吸光度。

（4）用去离子水作为空白对照，制备标准曲线。

2、样品测定（1）取适量水样，过滤掉颗粒物质。

（2）取1mL样液，加入5mL20%氯化汞溶液，混合均匀30s。

硝态氮检测试剂盒(磺胺比色法)简介：硝态氮是植物最主要的氮源。

植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标。

测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

Leagene 硝态氮检测试剂盒(磺胺比色法)检测原理是硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基磺酸和萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮化合物，其颜色深浅与氮含量在一定范围内呈正比，以分光光度计测定处吸光度，根据NO 2-反应的标准曲线将A 520换算成NO 2-浓度，再依据上述关系式即可计算出硝态氮含量。

该试剂盒主要用于测定植物组织、血液、组织样本等中的硝态氮含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：植物组织(大豆、玉米等叶柄)、血液、组织样本等3、 离心管或试管4、 离心机5、 比色杯6、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，剪碎成碎片，加入硝态氮裂解液，剧烈振荡，静置澄清后，上清液即为硝态氮提取液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，保存，用于硝态氮的检测。

编号 名称TC2333 50T Storage试剂(A): NO 2-标准(100μg/ml) 1ml RT 试剂(B): 硝态氮裂解液 500ml RT 试剂(C): NO 2- Assay buffer 500ml RT 试剂(D): 磺胺混合粉剂 10gRT 避光 使用说明书1份③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的硝态氮，可以使用硝态氮裂解液或蒸馏水进行恰当的稀释。

2、配制系NO2-标准溶液：取NO2-标准(100μg/ml)按下表继续稀释：加入物(ml) 1 2 3 4 5NO2-标准(100μg/ml)0.02 0.04 0.08 0.1 0.15蒸馏水0.98 0.96 0.92 0.9 0.85NO2-浓度(μg/ml) 2 4 8 10 153、O2-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

NH+—N、N03-—N的测定：称取相当于10g干样的新鲜堆肥样品。

用去离子水按肥水比1：10在室温条件下以200r／min下水平振荡1h，纱布过滤并经离心机以l000r／min离心30min。

上清液用慢速定量滤纸过滤．收集滤液。

NH4+—N用2 mol﹒L-1KCl浸提-靛酚蓝比色法，NO3-一N用紫外分光光度法测定。

NH4+—N2 mol﹒L-1KCl浸提-靛酚蓝比色法：一、原理2 mol﹒L-1 KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。

土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性燃料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。

在含氮0.05~0.5 mol﹒L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

二、仪器1、振荡机2、分光光度计三、试剂（1）2 mol﹒L-1 KCl溶液：称取149.1 g氯化钾（分析纯）溶于水中，稀释至1L。

（2）苯酚溶液：称取苯酚（分析纯）10g和硝基铁氰化钠（硝普钠，有剧毒）100mg，稀释至1L。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（3）次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（分析纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4﹒7H2O）7.06g、磷酸钠（Na3PO4﹒12H2O）31.8g和52.5 g﹒L-1次氯酸钠（即含5%有效率的漂白粉溶液）10 mL 溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（4）掩蔽剂：将400g﹒L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.4H2O,化学纯）溶液与100 g﹒L-1的EDTA 二钠盐溶液等体积混合。

每100mL混合液中加入10 mol﹒L-1氢氧化钠0.5mL。

（5）2.5μg.ml-1铵态氮（NH4+-N）标准溶液：称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4,分析纯]0.4717g 溶于水中，定容至1L。

即配制成含铵态氮（N）100μg.mL-1的贮存溶液；使用前将其加入水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5μg.mL-1的标准溶液备用。

二.亚硝态氮、硝态氮、铵态氮、尿素测定1.硝态氮测定（紫外分光光度校正因数法）1.约测：吸取水样（土壤浸提液）注入1cm光径石英比色杯中，以浸提剂为参比，在210nm波长处约测吸收值。

根据约测结果，测定浸出液应予稀释的倍数，使吸收溶液吸收值在0.1~0.8之间。

2.测定：水样（浸出液）稀释一定倍数后，吸取25ml放入50ml三角瓶中，加入1.00ml 1：9硫酸溶液，摇匀。

装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275，以同样稀释酸化后的饱和硫酸钙溶液为参比溶液，调节仪器的零点。

3.工作曲线绘制：吸取10mg/LNO3—N标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00ml于50ml容量瓶中，（加一定体积浸提剂）定容。

即得0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60mg/LNO3—N标准溶液。

各取25.00mL于50ml三角瓶中，加1.00ml1：9硫酸溶液，摇匀。

装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275。

4.结果计算：ΔA= A210-A275f其中f为校正因数，在土壤有机质含量小于50g/kg时，f可取2.2，若大于土壤有机质含量大于50g/kg，需重新测定。

硝态氮含量（mg/kg）=c*V*D/m其中c为溶液中硝态氮浓度（mg/L），V为浸提液体积（mL），m为烘干土样质量（g），D为浸出液稀释倍数，不稀释时为1。

2.亚硝酸根的测定（重氮化耦合分光光度法）吸取50mL水样于100mL容量瓶中，加4mL对氨基苯磺酸显色剂及4mLa-萘胺显色剂，加蒸馏水至刻度摇匀。

放置20min后在分光光度计上用530nm波长进行比色，读取透光度。

绘制标准曲线：吸取亚硝酸盐标准溶液0、0.5、1、3、5mL，分别放入100mL容量瓶中，此标准系列含亚硝酸根分别为0、0.05、0.1、0.3、0.5mg/L，与待测水样同样条件进行比色，绘制标准曲线。

硝态氮检测试剂盒(水杨酸比色法)产品：硝态氮是植物最主要的氮源。

植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标。

测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

Leagene 硝态氮检测试剂盒(水杨酸比色法)检测原理是在强酸条件下，NO 3-与水杨酸反应生成硝基水杨酸，后者在碱性条件下呈黄色，其颜色深浅与氮含量在一定范围内呈正比，以分光光度计或酶标仪测定410nm 处吸光度，根据NO 3-反应的标准曲线将A 520换算成NO 3-浓度，再依据上述关系式即可计算出硝态氮含量。

该试剂盒主要用于测定植物组织、血液、组织样本等中的硝态氮含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：植物组织(大豆、玉米等叶柄)、血液等3、 浓硫酸4、 离心管或试管5、 离心机6、 比色杯7、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取植物组织，清洗干净，擦干，剪碎成1-2mm 的碎片，加入蒸馏水，煮沸30min ，冷却至室温，中速滤纸过滤，补水至，即为硝态氮提取液。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，编号 名称TC2337 100T Storage试剂(A): NO 3-标准(500μg/ml) 1ml RT 试剂(B): 水杨酸3g RT 试剂(C): NO 3- Assay Buffer 500mlRT使用说明书1份用于硝态氮的检测。

③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的硝态氮，可以使用硝态氮裂解液或蒸馏水进行恰当的稀释。

2、配制水杨酸工作液：按水杨酸：浓硫酸=的比例，把水杨酸溶解于浓硫酸，4℃避光保存，1周有效。

注意：浓硫酸为强酸，请小心操作。

3、配制系NO3-标准溶液：取NO3-标准(500μg/ml)按下表继续稀释：加入物(ml) 1 2 3 4 5NO3-标准(500μg/ml)0.002 0.004 0.008 0.016 0.024蒸馏水0.098 0.096 0.092 0.084 0.076NO3-浓度(μg/ml) 10 20 40 80 1204、NO3-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

硝态氮测定（紫外分光光度校正因数法）双波长紫外比色法1.浸提：称取20.00g 1mm风干土，加入氯化钾溶液100ml，在振荡机上振荡1h，过滤。

2mol/l氯化钾溶液：称取149.1g氯化钾，溶于水中，稀释至1L。

10μg/ml NO3-—N标准溶液：准确称取硝酸钾0.7221g溶于水，定容1L，此为100μg/ml NO3-—N标准溶液，将此液准确稀释10倍，即为10 NO3-—N标准溶液。

2.约测：吸取水样（土壤浸提液）注入1cm光径石英比色杯中，以浸提剂为参比，在210nm波长处约测吸收值。

根据约测结果，测定浸出液应予稀释的倍数，使吸收溶液吸收值在0.1~0.8之间。

3.测定：水样（浸出液）稀释一定倍数后，吸取25ml放入50ml三角瓶中，加入1.00ml 1：9硫酸溶液（防止铵态氮转化为硝态氮），摇匀。

装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275，以同样稀释酸化后的饱和硫酸钙溶液为参比溶液，调节仪器的零点。

4.工作曲线绘制：吸取10mg/LNO3—N标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00ml于50ml容量瓶中，（加一定体积浸提剂）定容。

即得0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60mg/LNO3—N标准溶液。

各取25.00mL于50ml三角瓶中，加1.00ml1：9硫酸溶液，摇匀。

装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275。

5.结果计算：ΔA=A210-A275f其中f为校正因数，在土壤有机质含量小于50g/kg时，f可取2.2，若大于土壤有机质含量大于50g/kg，需重新测定。

硝态氮含量（mg/kg）=c*V*D/m其中c为溶液中硝态氮浓度（mg/L），V为浸提液体积（mL），m为烘干土样质量（g），D为浸出液稀释倍数，不稀释时为1。

植物组织中硝态氮含量的定量测定植物组织中硝态氮含量的定量测定是研究植物生长发育过程中氮代谢调节的关键指标之一。

硝态氮是植物体内氮代谢过程中的重要中间产物，在植物体内具有重要的生理作用，能作为植物施肥效果评估的重要参考指标。

目前植物硝态氮含量的常规检测方法有色谱法、分光光度法、酶联免疫吸附法等。

1. 色谱法色谱法是比较常用的植物硝态氮含量检测方法之一。

该法主要分为气相色谱和高效液相色谱两种。

气相色谱法主要是利用气相柱进行分离，并以热导检测器检测硝态氮的含量。

使用气相色谱方法检测硝态氮含量时，需要样品经过完全的蒸馏和净化，才能避免样品中其它杂质的影响。

高效液相色谱法主要是利用液相柱进行分离，并以紫外检测器检测硝态氮的含量。

该方法比气相色谱法具有更高的准确度和灵敏度。

2. 分光光度法分光光度法是另一种常用的植物硝态氮含量检测方法。

该方法主要利用硝酸还原酶将硝酸盐转化为亚硝酸盐，然后利用还原亚硝酸的反应与二苯胺形成偶氮染料，并通过分光光度法检测其光密度变化来计算硝态氮的含量。

分光光度法比较适用于样品数目较小的试验。

3. 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法是一种快速、敏感的植物硝态氮含量检测方法。

该方法主要利用硝酸还原酶将硝酸盐转化为亚硝酸盐，并与抗硝酸盐多克隆抗体结合，然后再用辣根过氧化物酶与抗硝酸盐抗体结合，最后通过比色法检测抗体和其结合的亚硝酸盐的含量来计算硝态氮的含量。

综上所述，植物组织中硝态氮含量的定量测定需要根据实验的要求和对象选择不同的检测方法，以便获得准确、可靠的试验结果，为植物生长发育、施肥管理等提供科学依据。

硝态氮—水杨酸比色法概述说明以及解释1. 引言1.1 概述本文旨在提供关于硝态氮—水杨酸比色法的概述、操作步骤、详解以及其应用领域和案例分析的全面说明。

硝态氮是一种重要的环境指标，广泛应用于土壤和水体中的农业、环境和工业领域。

而水杨酸比色法则是目前最常用的测定硝态氮浓度的方法之一，具有简便快速、准确可靠等优点。

1.2 文章结构本文按照以下结构进行论述：第二部分将对硝态氮—水杨酸比色法进行概述，包括其基本原理、硝态氮测定的重要性以及操作步骤。

第三部分将详细解释硝态氮—水杨酸比色法，并涉及其反应机理和化学方程式、实验条件和样品处理方法以及普遍适用性和准确度评估。

第四部分将介绍硝态氮—水杨酸比色法在各个应用领域中的案例分析，包括农业领域、水体环境监测和工业生产过程中的实际应用实践。

最后一部分将对全文进行总结与展望，包括总结已有研究成果及发现问题与不足之处、展望硝态氮—水杨酸比色法在未来的发展方向以及对该方法的改进和优化设想。

1.3 目的本文的目的主要有以下几点：·提供读者对硝态氮—水杨酸比色法的基本认识和了解，包括原理、操作步骤等。

·详细阐述硝态氮—水杨酸比色法的反应机理和化学方程式，以及实验条件和样品处理方法。

·分析硝态氮—水杨酸比色法在农业领域、水体环境监测和工业生产过程中的应用案例，并探讨其意义和价值。

·总结已有研究成果并指出存在的问题，并展望硝态氮—水杨酸比色法未来可扩展和改进之处。

2. 硝态氮—水杨酸比色法概述2.1 水杨酸比色法基本原理水杨酸比色法是一种常用于测定硝态氮含量的方法。

其基本原理是依据硝态氮（NO3-）和水杨酸之间的反应产生的紫红色化合物的吸光度来测定硝态氮的浓度。

该方法基于硝态氮与偶氮盐（如砷酸钠等）反应生成偶氮苯，然后与水杨酸在强碱性条件下反应形成紫红色呈吸光峰，通过分光光度计测得吸收峰值的吸光度，进而计算出样品中硝态氮的含量。

2.2 硝态氮测定的重要性硝态氮是一种重要的环境指标，在农业、环境监测和工业生产等领域具有广泛应用。

植株硝态氮的速测方法（硝酸试粉比色法）一、试剂配制1、硝粉试剂：称取硫酸钡50克，分成数份，分别与硫酸锰（MnSO4*H2O）5克，锌粉1克，对氨基苯磺酸2克,α-萘胺1克，在研钵中研细混匀，最后与37.5克柠檬酸一起研磨均匀,贮于暗色瓶中,防潮避光.此试粉呈灰白色,若变为粉红色,则不能使用.2、pH5.0柠檬酸缓冲液：称取化学纯柠檬酸4.31克,柠檬酸钠6.86克,溶于500ml水中.(新鲜配制)3、硝态氮标准溶液：称取7.22克分析纯硝酸钾,加水,定容至1000ml,即为1000 ppm(NO2--N)二、标准色阶的配制.1、50ppm硝酸钾溶液配制：取10ml1000ppm硝酸钾,定容至200ml2、加数三、清晨在待测田块中，选取有代表性的植株10-20株的敏感部位，用湿布擦净，剪碎，榨汁备用。

于15ml刻度试管中，加入5 ml柠檬酸，滴入1滴（水稻为2滴）组织液，加入5ml水，摇匀后加入0.2克硝酸试粉,塞紧，纵向摇匀1分钟（200次），静置15分，比色。

（可用硝态氮标准色阶溶液进行同样显色，目测出硝态氮ppm数）四、结果计算。

植株组织液硝态氮含量（ppm）=标准色阶硝态氮ppm*V1\V2（200）V1—显色溶液的ml数V2—所取汁液的ml数1滴=2002滴=100植株中的有效磷速测法(磷钼蓝比色法)一、试剂配制1、1.5%钼酸铵—盐酸溶液：称取钼酸铵1.5克溶于约30ml温水中,冷却后,缓缓加入浓盐酸30ml边加边搅拌,用水稀释至100ml,贮于棕色瓶中.2、2.5%氯化亚锡—甘油溶液:称取氯化亚锡2.5克加浓盐酸10ml,加热促进溶解(如混浊,应过滤)再加甘油90ml.混匀,贮于棕色瓶中,存放暗处,可存半年3、标准磷溶液:称取0.2194克磷酸二氢钾,溶于400ml水中,加入7N硫酸2.5ml(将4.9ml浓硫酸缓缓加入20ml水中)混匀,定容至1000ml,即为50ppm标准磷溶液,制备标准色阶,稀释成5ppm的磷标准溶液即可二、标准色阶配制水三、测定方法于15ml刻度试管中,加入4ml水,滴入1滴组织液,摇匀;加入1ml钼酸铵,摇匀,再加入氯化亚锡甘油1滴,再次摇匀后5-15分后比色.四、结果计算植株磷含量ppm=测得的ppm数*(V1\V2)（100）（1滴=100）植株中钾的测定方法一、试剂配制1.钾试剂母液:称取1克亚硝酸钴钠和6克化学纯亚硝酸钠,溶于14ml水中,加入5ml冰醋酸(乙酸),再用水稀释至20ml,盛于棕色瓶开口放置两天,让有毒气体逸出后备用.放入冰箱可保存2-3周.2.钾试剂稀释液:测定前吸母液5ml,加入溶有15克亚硝酸钠的100ml水中.二、操作步骤于15ml试管中，加入2.5ml钾试剂稀释液,滴入1滴组织液,摇匀后加入1ml异丙醇再摇匀,15分钟后目测,在小试管后衬一张印有5号印刷体的报刊,透过溶液看字迹.若字迹清楚放大表示缺钾(5-10ppm),若字迹模糊尚能看出字迹适中(10-15ppm),看不出字迹表示钾含量充足(20ppm以上)三、结果计算植株汁液钾含量ppm=测出的ppm*(V1\V2)50四、取样部位棉花：定苗前取茎叶混合组织蕾期取主茎顶部下已展开的第三叶片或叶柄花铃期打顶后取主茎下第一叶片或叶柄吐絮期取主茎顶下经一叶片或叶柄水稻：取心叶下第3-5叶鞘或茎节（小麦同）玉米：取下部老叶鞘。