血清层粘连蛋白(laminin ,LN)的测定

细胞粘附检测丨Cell Biolabs细胞粘附分析试剂盒解决方案细胞粘附即细胞与细胞外机制分子之间的相关作用，其在肿瘤细胞转移、浸润、胚胎发生等过程中起着重要的作用，例如，我们知道肿瘤细胞的一大特点是易转移，这主要就是因为肿瘤细胞比正常组织细胞粘附力低的原因，目前，细胞粘附机制也已成为癌细胞侵袭和转移研究的热点之一。

细胞粘附实验通常分为两类，即细胞-细胞粘附(cell-cell adhesion)和细胞-基质（cell-ECM adhesion）粘附。

其中细胞外基质（extracellular matrix,ECM）由细胞分泌到细胞外间质中的大分子物质，在细胞之间或细胞表面组装成网络状的高度水合的凝胶结构，ECM按照组成可分为三大类：1.结构蛋白：胶原（Collagen）和弹性蛋白（Elastin），其中，胶原是ECM中最主要的水不溶性纤维蛋白，目前已发现的胶原类型有20多种，I~Ⅲ型胶原含量最丰富。

2.粘着蛋白：包括：纤粘连蛋白（Fibronectin,FN）、层粘连蛋白（Laminin,LN），FN是一种大型的糖蛋白，可将细胞连接到细胞外基质上，LN也是一种大型的糖蛋白，是基膜的重要成分，是胚胎发育中出现最早的细胞外基质成分。

3.氨基聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）与蛋白聚糖（Proteoglycan）：它们能够形成水性的胶状物，在这种胶状物中包埋有许多其它的基质成分。

Cell BioLabs针对于细胞粘附，提供全套细胞分析检测方案，除了细胞与ECM大分子粘附分析方案外，还有针对白细胞与内皮细胞之间（还有白细胞与上皮细胞之间、肿瘤细胞与内皮细胞之间）的粘附分析试剂盒提供。

如CytoSelect 48孔板细胞粘附分析试剂盒（纤连蛋白，比色法）#CBA-050——定量评估细胞粘附。

48孔板预先涂有纤连蛋白。

细胞与ECM大分子粘附分析结果图：将来自三种不同细胞系的血清细胞以100,000个细胞/孔的速度附着到包被有ECM分子的板上1小时，结果如上图白细胞与内皮细胞之间的粘附分析流程图：文章来源：艾美捷科技。

血清层粘连蛋白的临床应用价值摘要为探讨血清层粘连蛋白对良恶性肿瘤的诊断价值，我们检测了各类肝病及肿瘤患者的血清层粘连蛋白，其结果肿瘤患者较肝病患者高，肝病患者较健康者高，有显著差异(P＜0.01)我们认为：检测血清层粘连蛋白对良恶性肿瘤的诊断和治疗具有重要价值。

关键词肿瘤；层粘连蛋白；检测The dinical use value of the serum laminin proteinBao Xiusheng Bao JiangpingThe central Hospital of Jiang Han oil Field,Qianjiang 433124 To study the diagnosis value of laminin protein for the patients with benign or melignant neoplasm.The laminin protein of all willing men (including patients with carcinoma) in Jiang Hang oil Field had been examed by us.The result was that the difference between the patients with carcinoma and the patients with hepatocellular disease or the healthy men (P＜0.01).We consider that there is important value to check the serum laminin protein for the diagnosis and therapy of henign or malignant neoplasm.Key words:Heoplasm;laminin protein;check层粘连蛋白(Lamin,LN)是细胞外间质中非胶原糖蛋白的主要成分，广泛分布于基底膜的透明层中，与IV型胶原结合形成基底膜的骨架参与细胞代谢。

肝纤维化四项指标及其临床意义HA ,Hyaluronidase（透明质酸酶）：为基质成分，可较准确灵敏地反映肝内已生成的纤维量及肝细胞受损状况，有认为本指标较之肝活检更能完整反映出肝全貌，是肝纤维化和肝硬变的敏感指标。

1）血清HA在急肝、慢迁肝时轻度升高；慢活肝时显著升高；肝硬化病人血清HA极度升高。

2）血清HA水平是反映肝损害严重程度、判断有无活动性肝纤维化的定量指标。

3）对慢迁肝与慢活肝的鉴别诊断，慢迁肝HA浓度与正常人无差别，而慢活肝的升高明显。

4）反映肝细胞功能，肝脏纤维化形成和程度，反映肝脏炎症性病变。

5）有助于估价肝病发展趋势，在急性肝炎→慢活肝→肝硬化发展中，血清HA逐步并优于其他肝硬化诊断指标等。

6）肝硬化时，有些病人HA却不升高，与其肝脏合成功能有关LN ,Laminin （层粘连蛋白）：为基底膜中特有的非胶原性结构蛋白，与肝纤维化活动程度及门静脉压力呈正相关，慢活肝和肝硬变及原发性肝癌时明显增高，LN也可以反映肝纤维化的进展与严重程度。

另外，LN水平越高，肝硬变病人的食管静脉曲张越明显。

1）反映肝纤维化：正常肝脏间质含少量LN，在肝纤维化和肝硬化时，→肌成纤维细胞增多→大量合成和分泌胶原、LN等间质成分→形成完整的基底膜（肝窦毛细血管化）。

肝窦毛细血管化是肝硬化的特征性病理改变， LN与纤维化程度和门脉高压正相关，纤维化后期升高尤为显著。

2）可诊断酒精肝是否存在门脉高压3）与基底膜相关疾病有关：如先兆子痫孕妇血清较正常妊娠者显著升高，提示可能与肾小球及胎盘螺旋动脉损伤有关。

血清LN与糖尿病、肾小球硬化等疾病有关。

PCIII ,Procollagen Ⅲ（III型前胶原）：反映肝内III型胶原合成，血清含量与肝纤程度一致。

1）PCIII与肝纤维化形成的活动程度密切相关，但无特异性，其它器官纤维化时，PCIII也升高。

2）持续PCIII升高的慢活肝，提示病情可能会恶化并向肝硬变形成发展，而PCIII降至正常可预示病情缓解，说明PCIII 不仅在肝纤维化早期诊断上有价值，在慢性肝病的预后判断上也有意义。

综述doi:10．3969／j．issn．1009－0002．2010．01．029层粘连蛋白与疾病相关性的研究进展赵晓芳1,2，孟程程1,2，李招发1,21．华侨大学分子药物学研究所，福建泉州362021；2．分子药物教育部工程研究中心，福建泉州362021［摘要］层粘连蛋白（lanminin，LN）是由3条多肽链组成的异源三聚体，是基膜的主要成分，存在于多种组织中，它可识别细胞表面受体从而使基膜与细胞紧密结合。

LN参与基膜的构建及细胞的黏附、生长、增殖、迁移和分化，是机体正常生长发育所必需的。

LN的不正常表达常常与肿瘤以及皮肤、神经－骨骼肌、肝、肾等组织疾病的发生发展密切相关。

通过深入探讨LN与疾病及肿瘤发生、发展的关系，有望为相关疾病及肿瘤的治疗开拓新的思路。

［关键词］基膜；层粘连蛋白；疾病；肿瘤［中图分类号］Q73［文献标识码］A［文章编号］1009－0002(2010)01－0116－05Progress of Relationship Between Laminins andTheir Related DiseasesZHAO Xiao－Fang1,2,MENG Cheng－Cheng1,2,LI Zhao－Fa1,21．Institue of Molecular Medicine,Huaqiao University,Quanzhou362021;2．Molecular Medicine Engineering Research Center of Ministry of Education,Quanzhou362021;China［Abstract］The members of the laminin（LN）family composed of three different polypeptide chains are major basement membrane proteins．They are present in almost all organs．The LN bind to cell surface receptors and thereby tightly connect the basement membrane to the adjacent cell layer．LN is involved in the construction of basement membrane and cell adhesion,growth,proliferation,migration and differentiation,so it is essential to nor-mal growth and development．Abnormal expression of LN is closely related to the development and progression of tumors as well as skin,neuromuscular,liver,kidney and other organizations diseases．Thoroughly study of the con-nection between the LN and pathological changes can provide the scientific basis for prevention and treatment of inflammatory diseases and tumor．［Key words］basement membrane;laminin;disease;cancer基膜（basement membrane，BM）是由多种纤维蛋白构成的复杂的膜状结构，它不仅对组织细胞起支持连接作用，同时具有渗透性屏障的作用，并调节多种分子及细胞的活动。

层粘连蛋白及其受体整合素β3在子宫腺肌病内膜-肌层界面的表达及意义骆婕;荆永萍;郭妹;廖凤儿;陶莹【摘要】目的探讨层粘连蛋白(LN)及其受体整合素β3(integrin-β3)在子宫腺肌病内膜-肌层界面(EMI)的表达及意义.方法收集2015年7月至2016年6月在我院因子宫腺肌病行全子宫切除的患者共40例为病例组,因CIN Ⅲ行全子宫切除的患者20例为对照组,应用免疫组织化学和图像分析技术检测两组EMI组织中LN 和integrin-β3蛋白的表达,同时检测病例组子宫腺肌病病灶( adenomyosis lesion,AL)组织中LN和integrin-β3蛋白的表达.结果 LN 和 integrin-β3在病例组 EMI 组织中的表达为( 8. 22 ± 2.76)PU和(17.79±5.11)PU,LN在病例组EMI 组织中的表达明显低于对照组(P<0.05),而integrin-β3的表达与对照组比较差异无统计学意义. LN和integrin-β3在病例组AL组织中的表达为(5.12±0.88) PU和(13.58±4.08)PU,两者均明显低于病例组EMI组织中的表达(P<0.05). LN和integrin-β3在病例组EMI组织中的表达无明显相关性.结论 LN参与了子宫腺肌病的发病过程,而LN和integrin-β3还可能与子宫腺肌病病灶增大扩散有关,影响子宫腺肌病的病程发展.%Objective To investigate the expression and significance of laminin ( LN ) and its receptor integrin-β3in the endometrial-myometrial interface ( EMI) of adenomyosis. Methods A total of 40 patients who underwent hysterectomy for adenomyosis in our hospital from July 2015 to June 2016 were selected as the case group, and 20 patients with hysterectomy due to CIN Ⅲ were the control group at the same time. Immunohistochemistry and image analysis were used to observe the expression of LN and intrigrin-β3in EMI, and the expression ofLN and intrigrin-β3protein in the adenomyosis lesion ( AL) tissue were detected. Results The expression of LN and intrigrin-β3in E MI tissue of the case group was ( 8.22+2.76) PU and ( 17.79+5.11) PU. LN expression in EMI of the case group was significantly lower than that in the control group ( P<0.05) , but the expression of intrigrin-β3was not different between two groups. The expression of LN and intrigrin-β3in AL tissues of the case group was ( 5.12+0.88) PU and ( 13.58+4.08) PU, both of which were significantly lower than that of the EMI tissues ( P<0.05) . There was no significant correlation between the expression of LN and intrigrin-β3in EMI tissues of the case group. Conclusion LN is involved in the pathogenesis of adenomyosis. LN and intrigrin-β3may also be related to the enlargement and proliferation of adenomyosis, which may be involved in the development of adenomyosis.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2018(034)003【总页数】4页(P376-379)【关键词】子宫腺肌病;子宫内膜-肌层界面;层粘连蛋白;整合素β3;子宫腺肌病病灶【作者】骆婕;荆永萍;郭妹;廖凤儿;陶莹【作者单位】广东药科大学附属第一医院/临床医学院妇产科,广东广州510080;广东药科大学附属第一医院/临床医学院妇产科,广东广州510080;广东药科大学附属第一医院/临床医学院妇产科,广东广州510080;广东药科大学附属第一医院/临床医学院妇产科,广东广州510080;广东药科大学附属第一医院/临床医学院妇产科,广东广州510080【正文语种】中文【中图分类】R711.74子宫腺肌病是子宫内膜腺体及间质侵入子宫肌层并生长，常引起痛经、月经过多等临床表现[1]。

肝脏纤维化检测方法及应用肝纤维化是各种慢性肝病损伤修复过程的共同后果，在肝细胞性功能障碍和门静脉性高压的发病机制中起直接作用。

同时，肝纤维化、甚至早期肝硬化具有可逆性已成为共识。

因此早期诊断和正确评估肝纤维化程度显得十分重要。

相对于肝穿刺，利用血清学指标评价肝纤维化具有无创、无风险、可多次测定降低偶然误差等优点。

目前血清学指标包括间接指标，如临床最常应用的血常规、肝功能以及凝血酶原时间（PT）等；直接指标，如细胞外基质（ECM）成分及其裂解物包括透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）和Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP）等。

综合多项有价值的无创指标构建诊断模型，可提高诊断准确度。

本节主要介绍直接指标的检测方法。

目前临床常用的直接指标检测法均是基于免疫学技术，包括单抗原抗体包被和酶标记抗体的三步法、双表位抗体酶免一步法、时间分辨和放免法等方法。

由于环境的污染和辐射损伤，放免法基本被淘汰；时间分辨方法需专门的仪器；酶免多步法由于采用单表位抗体包被与标记，敏感性和特异性与双抗原表位抗体的一步法没有优势，并且操作步骤复杂，故本文只介绍酶免一步法。

一、Ⅲ型前胶原氨基端肽（一）原理用纯化的Ⅲ型前胶原（procollagenⅢ，PCⅢ）制备抗血清，包被反应板，在加入样本后，样本中PCⅢ与抗血清结合，洗板后加入指示酶，通过与标准品比对显色深浅程度，测定血清中PCⅢ浓度。

（二）试剂组成PCⅢ包被板；PCⅢ标准品（2000ng/ml）及其稀释液；PCⅢ酶结合物；洗涤缓冲液10ml，使用前用蒸馏水20倍稀释；底物3，3′，5，5′-四甲基联苯胺（TMB）缓冲液；反应终止液。

（三）操作步骤1.试剂准备按样本数量需求，提前半小时将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温使用。

2.标准品在酶标板孔中按A1～A8或A1～H1的顺序加入标准品稀释液100μl，取100μl标准品，按照酶标仪定量格式要求自高到低依次进行倍比稀释。

肝硬化一、定义肝硬化（cirrhosisofliver）是一种常见的由不同病因引起的肝脏慢性、进行性、弥漫性病变，是在肝细胞广泛变性和坏死基础上产生肝脏纤维组织弥漫性增生，并形成再生结节和假小叶，导致正常肝小叶结构和血管解剖的破坏。

病变逐渐进展，晚期出现肝功能衰竭、门静脉高压和多种并发症。

它是严重和不可逆的肝脏疾病，我国城市50～60岁年龄男性组肝硬化年死亡率为112/10万。

二、临床表现在我国本病患者以20～50岁男性多见，青壮年患者的发病多与病毒性肝炎有关。

肝硬化的起病和病程一般缓慢，可能隐伏数年至十数年之久（平均3～5年）。

起病时可无症状，病情逐渐发展，到后期出现两大类主要症状，即肝功能衰退和门静脉高压症。

此时可出现黄疸、腹水及消化道出血和肝性脑病等并发症。

临床分类也以是否出现上述表现将肝硬化划分为代偿和失代偿期。

（一）代偿期肝硬化无上述临床表现。

无症状者占30%～40%，常在体格检查或因其他疾病行剖腹术时，甚至尸体解剖时才被发现。

其他一部分患者症状无特异性，如低热、乏力、恶心、体重减轻、白细胞及血小板低下，在求诊时怀疑此诊断。

部分慢性肝炎患者行肝活检时诊断此病。

（二）失代偿期肝硬化1.一般症状包括食欲减退、乏力和体重减轻。

前者常伴恶心呕吐，多由于胃肠瘀阻性充血、胃肠道分泌与吸收功能紊乱所致。

腹水形成、消化道出血和肝功能衰竭更加重此症。

由于进食、吸收消化功能障碍引起体重减轻。

有时由于腹水和水肿，体重减轻并不明显，但可见患者有明显的肌肉萎缩。

乏力常与肝病活动程度一致，除由于摄入热量不足外还与肝功能损害导致胆碱酯酶减少影响神经肌肉正常功能以及乳酸转化为肝糖原过程障碍，肌肉活动时乳酸蓄积有关。

2.腹水患者主诉腹胀，少量腹水常由超声或CT诊断，中等以上腹水在临床检查时可发现，后者常伴下肢水肿。

5%～l0%腹水者可出现肝性胸水，见于右侧，但也有双侧甚至仅为左侧胸水者。

这是由于胸腔负压导致腹水经过隔肌缺损处进入胸腔有关。

标本采集：空腹安静状态采血单独一管（促凝管）4ml-5ml参考值：1.血清β2-MG（β2微球蛋白）0-3mg/L（0.8-2.0）是反映肾小球滤过功能的较好指标肾小球滤过率（GFR）及肾血流量降低，则血清β2-MG升高。

尿液β2-MG（β2微球蛋白）↑1、是反映近端小管受损的非常灵敏和特异性的指标；2、鉴别上下尿路感染：上尿路感染时，β2-MG明显增高，而下尿路感染则正常。

2.血清hsCRP（C反应蛋白(CRP)）0-3mg/L是反应炎症的敏感指标3.血清Cys C （半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C）肾移植术后肾功能的检测、监测化疗药物对肾功能的损害、诊断肾脏纤维化判断纤维化程度的一个重要指标1-14岁0.51-0.95mg/L14-50岁男0.63-1.25mg/L女0.54-1.15mg/L50岁以上0.60-1.55mg/L4.血清HA （血清透明质酸）0-110ng/ml血清HA浓度的变化,对鉴别急、慢性肾病及对肾病综合征与单部位损害的部位和程度,反映肾脏的病情变化有重要意义,对肾脏疾病诊断具有重要意义5.血清LN（层粘连蛋白）0-95ng/ml肝纤维化、肿瘤转移的最新指标6.血清PCⅢ（血清Ⅲ型前胶原）0-90ng/ml联合检测血清Ⅲ型前胶元（ＰＣⅢ）、透明质酸（ＨＡ）、层粘连蛋白（ＬＮ）三项指标升高与肝纤维组织增生呈同步性，显示出良好的正相关（Ｐ＜０．０１）结论三项指标的联合检测可极大增加临床诊断7.血清C-Ⅳ（血清Ⅳ型胶原）0-85 ng/ml8.血清TIMP-1（血清组织金属蛋白酶抑制物-1）53-153pg/ml血清TIMP-1水平反映了慢性肝病肝内炎症和纤维化的一些重要特征，在目前情况下是一种较好的肝脏纤维化无创诊断和随访指标。

肾小管三项，包括尿β2-MG、尿NAG、尿GGT/尿Cr肾纤维化标记物至少包括ECM成分及其裂解物、ECM代谢相关的酶、纤维化相关细胞因子和其他相关检测等四大类。