Agilent1200高效液相色谱仪操作规程

仪器名称：Agilent-1200高效液相色谱仪自动主要组成：Agilent1200四元泵+UV检测器+自动进样器简单操作规程(一)、开机：1、启动计算机，进入Windows画面，Bootp Server程序自动运行。

2、打开 1200 LC 各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击“仪器1（2）联机”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入工作站画面。

4、把已超声脱气的流动相及水、甲醇等放入溶剂瓶中，打开Purge阀。

5、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击设置参数选项，进入泵编辑画面。

6、设流速：5ml/min，单击“确定”。

7、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中打开，单击“确定”，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。

8、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“停泵”，单击“确定”，关闭Purge阀。

9、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，单击“确定”。

（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“方法编辑” 项，如上图所示选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一画面，依次设置以下参数：泵参数设定、自动进样器参数设定、柱温箱参数设定、VWD检测器参数设定等，单击“确定”进入下一画面。

2、单击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入一方法名单击“确定”。

3、从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入操作者名称等信息。

4、单击“方法”菜单，选中“方法调用”，调入一方法，单击“确定”。

5、从“仪器控制”菜单选择“运行”。

6、从“序列”菜单，选中“序列编辑”，编辑完所需序列后，单击“确定”。

7、等仪器Ready，基线平稳，单击“开始”，进样。

(三)、关机:1、关机前，用 90%的水冲洗系统40分钟，然后用甲醇或乙腈冲洗系统40分钟，在冲洗时关闭检测器和柱温箱。

Agilent_1200型高效液相色谱仪标准操作规程1 目的建立Agilent 1200高效液相色谱仪的操作规程，保证其正确使用。

2 范围Agilent 1200高效液相色谱仪的操作与维护。

3 职责操作人员和责任人员对本规程的实施负责。

4 内容4.1 组成G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1330B自动进样器恒温器、G1315B可变波长检测器（DAD）、GB16A 柱温箱和一套Agilent 1200 CHEMSTATIONS 软件（软件光盘与说明书原件由工程部保存），打印机。

4.2 在线清洗若实验的流动相中含有的缓冲盐和离子对等试剂干后会留下固体印迹的物质时，必须要进行在线清洗过程。

首先配制好10%异丙醇溶液，经0.45μm有机膜抽滤后，装入已用滤过的10%异丙醇溶液洗过三遍的洁净玻璃瓶内，调整流量为2～3滴/分钟，10%异丙醇溶液必须每周更新。

4.3 开机接通电源，打开计算机，等计算机启动成功后，含四元泵的Agilent 1200高效液相色谱仪系统：从上到下，依次打开脱气机、泵、进样器、进样器恒温器、柱温箱和多波长检测器。

约30秒钟后，各部件自检完毕，进入待机状态，指示灯为黄色或无色。

双击桌面上的Instrument 1 Online，计算机进入工作站的Method and Run Control操作界面。

画面如下所示。

4.4 色谱条件的设定4.4.1 方法的编辑●在method and run control 状态下，单击“method”选择“edit entire method”，请先在复选框中选择method中需要编辑的项目。

●进入method information 在method comments 中输入方法的名称及相关描述，参数设置完毕后单击OK。

●进入泵参数设置画面，设置泵流速（ml/min），流动相组成，冲洗梯度，停针时间等，参数设置完毕后单击OK。

1 目的：建立Agilent1200高效液相色谱仪标准操作程序，规范Agilent1200高效液相色谱仪的使用和操作。

2 范围：Agilent1200高效液相色谱仪。

3 责任者：QC仪器分析人员。

4 程序：4.1 仪器组成本套仪器由脱气机、低压四元梯度泵、柱温箱、可变波长紫外检测器和Agilent 1200色谱工作站组成。

4.2 基本操作4.2.1 准备工作4.2.1.1 按照SOP操作标准配置相应的流动相，用0.45µm的膜过滤并冷却至室温待用，流动相名称和容器序号必须对应，以及在流动过程中检查是否有气泡。

4.2.1.2 色谱柱准备：选择与被测物质匹配的色谱柱，并安装好。

4.2.1.3 预热分析天平5～10分钟，调节水平，确保称量准确。

调节操作环境的温湿度使其达到规定的要求。

4.2.1.4 测试液、对照液的准备：使用品种项下规定的测试液、对照液并按操作规程临用前配置。

4.2.2 接通电源并打开Agilent1200仪器和与之配套的计算机。

4.2.3 双击电脑桌面上的Agilent1200在线工作站（Instrument 1 online）4.2.4 参数设置测试条件和显示条件一致，则无需重新设置。

否则按检测条件设置操作参数。

（如：进样量、柱温箱温度、流量、波长、流动相比例、分析时间等），启动仪器测绘基线并观其状态。

4.2.5 分析操作当以上所有设置参数达到相应的设定值并且基线处于稳定状态时，窗口状态显绿，此时系统显示Ready，放采样瓶于相应位置，按Start键开始采样分析，工作站自动进行数据采集，采样完毕，自动进行数据处理并存盘。

分析前填写被测样品以及工作人员的详细资料，以便查阅。

4.2.6 报告的预览与打印等采样结束直接预览并打印或者双击桌面上的离线工作站（Instrument 1 offline）。

选择“打开”项，按进样信息打开需要的谱图，单击“预览”按钮，显示预览报告，有必要时可以对谱图进行修改，确认无误后，单击“打印”按钮，即可进行报告打印并保存图谱。

Agilent1200高效液相色谱仪操作规程一、Agilent1200化学工作站开机顺序(LAN卡联接)1、将待测样品按要求前处理,准备HPLC 所需流动相,检查线路是否连接完好,废液瓶是否够用等2、打开计算机,进入Bootp;3、打开主机各模块电源(不分先后),等待Bootp接收,等待各模块就绪后, 再双击工作站图标,进入化学工作站;4、调出一个分析方法,检查各参数的设置;5、旋开泵上的排气阀,将工作站中的泵流量设到5ml/min,溶剂A设到100%;6、在工作站中打开泵,排出管线中的气体数分钟;7、依此切换到B、C、D溶剂分别排气;8、将工作站中的泵流量设到1ml/min,多元泵则再设定溶剂配比,如A=80%, B=20%;9、关闭排气阀,检查柱前压力;10、待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况;二、数据采集方法编辑1 由运行控制进入样品信息,设定操作者姓名,样品数据文件名等。

2自动进样器参数设定:1)选择合适的进样方式, “Standard Injection”----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。

“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置,“UnRegistered”--此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。

“Use injectorprogram”---可以点击“Edit ”键进行进样程序编辑。

2)单击确定进入下一画面。

3 泵参数设定:(四元泵)1)在流量(Flow)处输入流量,如 1.5ml/min,在溶剂B处输入70.0,(A=100-B-C-D) ,也可插入一行时间列表(Timetable) ,编辑梯度。

在最大压力极限处(Pressure LimitsMax)输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。

2)单击确定进入下一画面。

4 柱温箱参数设定:1)在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多键,选中与左侧一致,使柱温箱的温度左右一致。

1 目的：建立一个安捷伦1200高效液相色谱仪标准操作程序。

2 范围：本规程适用于安捷伦1200高效液相色谱仪的操作。

3 责任：相关操作人员。

4 程序：4.1 原则与定义4.1.1高效液相色谱法是将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液为流动相，用高压泵将流动相压入装有填充剂的色谱柱，注入供试品，经流动相带入柱内，在填充剂上分离后，各组分先后进入检测器，用记录仪记录色谱图，各供试品谱图与标准或对照品谱图比对，经一定的数据处理进行化合物的定性和定量分析。

4.1.2 除另有规定者外，都应按现行版《中国药典》附录（高效液相色谱法）的要求测定。

4.2 仪器及用具4.2.1 安捷伦1200高效液相色谱仪系统4.2.2 DAD紫外检测器4.2.3 色谱柱4.2.4 色谱工作站4.2.5 溶剂过滤系统4.2.6 样品过滤系统4.2.7 其他用具和试剂应符合现行版《中国药典》规定或仪器说明书上指明的要求。

4.3 准备工作4.3.1流动相临用前过滤并脱气。

4.3.2供试品溶液和标准品(或对照品)溶液应按药品标准中有关规定配制过滤。

4.4 操作方法4.4.1 开机准备好流动相并安装色谱柱。

依次打开仪器各部件电源开关（在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱、检测器等），约15min 后，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应无色或呈黄色。

计算机进入工作站的操作页面。

色谱条件的设定,当色谱参数设置完成后，单击工作站流程图右下角的【on】，仪器开始运行。

4.4.2 样品测定4.4.3 分析报告的打印4.4.4 关机，分析结束后，按规定程序彻底冲洗色谱柱及所用的仪器流路。

4.4.5 实验结束工作4.4.6 全部分析工作结束后，依次关闭电脑、检测器、电源开关。

4.4.7 泵流量调到零，关闭泵电源。

4.4.8 仪器参数设定及操作方法同药典仪器操作规程安捷伦1100。

4.5.1反相高效液相色谱，如所用流动相含有缓冲溶液，实验前需要用重蒸馏水冲洗管路和色谱柱，实验结束时也要用水冲洗约半小时, 然后再用甲醇平衡柱子约30min后关闭仪器，以保护柱子。

Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程1 开机1.1 从上至下依次打开 1200 LC 各模块电源，打开电脑主机。

1.2 待各模块自检完成后双击桌面上的“仪器1（联机）”图标，化学工作站自动与1200LC工作站连接。

1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 单击“视图”菜单中的“系统视图”、“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

2 脱气2.1 把流动相放入溶剂瓶中2.2 打开冲洗阀2.3 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。

2.4 设“流量”为 5mL/min ，单击“确定”。

2.5 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“启动”，单击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止, 切换通道继续冲洗直到所有要用通道无气泡为止。

2.6 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“关闭”，单击“确定”关泵，关闭冲洗阀。

2.7 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“设置泵”选项，进入参数编辑画面，设流速为1.0mL/min。

2.8 单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入停泵的体积，单击确定。

3 数据采集方法编辑3.1 从”方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，点击除“数据分析”外的三项，单击“确定”。

3.2 样品信息从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，在对话框中输入“操作者名称”。

“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”（区别: “手动”每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。

“前缀/计数器”在“前缀”框中输入前缀,在“计数器”框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名。

3.3 方法信息在方法菜单中选择“方法信息”选项，在“方法注释”中加入方法的信息（如测试方法等），单击“确定”。

3.4 泵参数设定在桌面上点击泵图标，从选项菜单中点击“泵设置”，在对话框中“流速”处输入流量,如1mL/min ，在各通道“溶剂”处输入需要的比例 ,也可“插入”一行“时间表”，编辑梯度,在“压力限”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子 ,单击“确定”。

Agilent 1200液相色谱仪操作规程一、准备工作：1、开启计算机系统电源进入Windows XP界面。

1、依次开启在线脱气机、泵、检测器电源开关，等待自检完毕。

2、待网络连接成功后，双击桌面上仪器1（联机） ,启动化学工作站，显示主机各单元图标画面。

3、单击泵图标→Setup Pump（1）设置泵参数：5ml/min（2）打开Purge阀（逆时针2—3圈）排气泡，平时常用此仪器需2—3分钟，不常用时需时间稍长些。

（3）开泵：单击泵图标，在图标上选Control→Pump→On，击OK，观察无气泡止。

（4）降流量=1ml/min（5）关闭Purge阀（顺时针）二、方法编辑：1、在Method and Run Control界面下，单击Method→Edit Entire Method,在该界面下四项都选中，击OK。

（1）在Method Comments下面方框中输入方法描述（如：This Method is for trainning）,击OK。

（2）在泵参数设置（Setup Pump）界面输入泵参数，单击OK。

（3）在检测器参数设置（VWD Signal）界面输入波长及响应时间。

2、在Signal Details: Instrument 1编辑界面击OK。

3、在积分参数设置（Edit Integration Events）界面击OK。

4、在Specify Report界面击OK。

5、在Instrument Curves界面击OK。

6、在Run Time Checklist 编辑界面选Data Acquisition和Standard Data Analysis 击OK。

7、方法保存：击Method→Save Method As 输入存盘方法文件名（扩展名为“ .m”）→确定→OK。

三、运行样品：1、打开Purge阀。

2、运行Instrument菜单下的System On。

3、待废液管中无气泡流出，关闭Purge阀。

Agilent1200高效液相色谱仪操作规程1 仪器组成及开机1.1 仪器组成由真空在线脱气机、四元梯度泵、柱温箱、二极管阵列检测器组成。

1.2 开机1.2.1 接通UPS总电源，按下power键，显示为绿灯。

1.2.2 启动电脑（先开显示器，再开主机），进入WINDOWS界面。

1.2.3 依次打开脱气机、四元泵、柱温箱、二极管阵列检测器等主机电源，待全部灯变为黄色；2 实验条件的设定2.1 打开Agilent1200在线工作站，启动1200工作站中四元泵、检测器、控温箱。

2.2 排气泡：逆时针旋转排气阀，把流速调为5ml/min，依次进行各通道的气泡排空，然后关闭排气阀。

2.3 样品信息输入，选择方法控制下拉菜单的样品信息，填写上操作者姓名，样品名。

2.4 调用已设置好方法，在方法选择选择方法，选定文件名，单击确定。

或编辑新方法，在方法下选择新建方法，按提示逐项进行参数设定，完成后，在方法下选择保存方法，保存新方法。

3 仪器的运行3.1 进样：待基线平稳后，单击运行序列，仪器开始记录，采集样品色谱数据。

3.2 停止样品采集：按停止序列可停止采集样品色谱数据，记下样品采集记录号。

3.3 冲洗色谱柱：必需认真冲洗色谱柱。

在工作站上启动泵，调用预设好的冲洗色谱柱的方法“wash”，把检测器的灯关闭，进样阀扳到进样位置，让仪器按预设的程序彻底冲洗柱子。

4 关机4.1 在工作站上单击OFF键，关闭所有工作单元，再关闭在线工作站，然后关闭电脑。

4.2 依次关上真空脱气机、四元泵、检测器等主机的电源，4.3 关闭UPS总电源。

4.4检查并登记使用记录，搞好实验室清洁卫生。

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Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）操作规程1.目的建立高效液相色谱仪（四原泵）使用维护保养标准操作规程，确保测量结果准确、可靠。

2.适用范围本SOP适用于Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）的使用。

3.责任者化验员应严格遵照该操作规程，管理方负责监督本规程的实施。

4.定义无5.规程5.1准备在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相、供试品及对照品。

流动相装入溶剂储液瓶，确认吸滤头已置于液面以下，供试品溶液和对照品溶液均用0.45μm的膜过滤。

5.2开机5.2.1打开电脑；5.2.2打开1200各模块电源；5.2.3等待各模块就绪后，双击桌面上的工作站图标，进入化学工作站；5.2.4旋开泵上的purge阀（逆时针转动，旋松即可，不要转动太多。

），将流速设置为5.0ml/min，将准备排气的管道的流量设置为100%（如：流路A比例则是100%-B-C-D），在工作站中打开泵，则开始排除管路中的气泡（时间约为5min）；其他通道同理操作。

5.2.5排气完成后，关闭purge阀（顺时针旋转，旋紧即可，不必旋的太紧。

）。

5.2.6连接色谱柱，用适宜的流动相冲洗色谱柱。

如果使用有盐的流动相，要先用80%的水过渡。

5.2.7更换方法规定的流动相。

冲洗约30分钟。

5.3设置方法5.3.1设置新方法5.3.1.1（自动进样器参数设定：单击工作站中“进样针”图标，选择“设置进样器”（一般选择洗针进样，清洗瓶位置一般为100位），单击“确定”按钮即可；5.3.1.2泵参数设定（四元泵）：单击工作站中“泵”图标，选择“设置泵”。

①在“流速”处输入流速（如1.0ml/min）；②在“停止时间”处设定所需采集时间；③在时间表中插入时间列表，编辑梯度；④在压力限处可设定最大耐高压，以保护色谱柱，单击“确定”按钮即可；5.3.1.3检测器参数的设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如280nm，在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min（2s）。