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流式细胞仪培训手册序论学习仪器的最好方法是操作仪器,然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。
本书介绍了流式细胞仪的基本知识,并从不同角度详尽阐述了各种台式机(FACScanTM , FACSortTM , FACSCaliburTM ,和 BD LSR与大型机(FACS VantageTM, FACSVantageTM SE, 和 FACStarPLUSTM 之间的不同。
阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。
目录第 1章综述…………………………………………………………………… 4 第 2章液流系统………………………………………………………………第 3章散射光信号及荧光信号………………………………………………3.1 散射光信号………………………………………………………3.2 荧光信号…………………………………………………………3.3 荧光补偿第 4章光电系统………………………………………………………………4.1 光平台……………………………………………………………4.2 光学滤片………………………………………………………4.3 信号探测器……………………………………………………4.4 阈值………………………………………………………………第 5章数据分析………………………………………………………………5.1 数据采集及显示…………………………………………………5.2 设门………………………………………………………………5.3 细胞亚群的数据分析…………………………………………5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析………………………………5.5 CellQuest软件使用……………………………………………5.6 MutiSet 软件使用………………………………………………5.7 Simultest 软件使用……………………………………………5.8 B27软件使用…………………………………………………5.9 WinMDI软件使用…………………………………………5.10 FACSPress软件使用…………………………………………5.11 System II软件使用…………………………………………5.12 MultiCycle软件使用…………………………………………5.13 Modfit使件使用……………………………………………第 6章流式基本检测项目6.1淋巴细胞亚群检测 (双色、三色、四色,三种软件分析6.2 B27的检测………………………………………………………6.3 血小板抗体检测………………………………………………6.4 网织血小板及红细胞分析……………………………………6.5 干细胞检测……………………………………………………6.6 DNA倍体分析……………………………………………………6.7 凋亡检测…………………………………………………………第 7章分选6.1 分选………………………………………………………………第 8章激光器及光路校正……………………………………………………7.1 激光器的工作原理………………………………………………7.2 光路校正…………………………………………………………第 9章答案………………………………………………………………第一章综述流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术,通常指细胞通过激光束时在液流中的特性,即粒子的大小,密度或是内部结构,以及相对的荧光强度。
流式抗体培训目录1.流式细胞术的概念与目的2.流式细胞术与其他免疫学实验技术的异同3.流式样本的制备4.流式细胞仪检测原理与数据含义5.流式抗体的选择6.流式实验常见问题不同种类细胞表达的表面标志不一样不同种类细胞形态不一样不同种类细胞内容物不一样流式细胞术是根据不同单个细胞形态、表面标志物、内容物的差异，利用流式细胞仪检测细胞固有的或特异性标记的信号从而实现细胞分析与细胞分选的目的的一种方法荧光标记的方法及原理蛋白质核酸脂质其它…荧光团修饰的抗体遗传表达荧光蛋白抗体可变区对抗原的高亲和力融合表达或者同一启动子控制表达DiO, DiI, PKH等脂质染料细胞的膜系统与脂质染料的高度疏水相互作用荧光素标记的Annexin VAnnexin V与磷脂酰丝氨酸之间的高亲和力CFSE等一系列增殖细胞示踪染料LysoTrack溶酶体特异性染料DAPI、PI、7-AAD等凋亡染料TUNEL中荧光团修饰的EdUTP多环染料与DNA小沟的亲和力TdT针对DNA缺口的亲和力酯酶水解后发光吗啉基决定特异性酯酶水解后与蛋白质结合而被困于胞内目录1.流式细胞术的概念与目的2.流式细胞术与其他免疫学实验技术的异同3.流式样本的制备4.流式细胞仪检测原理与数据含义5.流式抗体的选择6.流式实验常见问题流式抗体抗体荧光基团与常规抗体的区别CD4 Monoclonal AntibodyAnti-Human CD4 Monoclonal Antibody (APC Conjugated) Purified Anti-Human CD4 Monoclonal AntibodyLE/AF Purified Anti-Human CD4 Monoclonal Antibody对照组同型对照组实验组单细胞悬液偶联有荧光基团的抗体细胞或组织匀浆组织固定后切片单细胞悬液细胞或组织平均水平无法反应组织内的异质性定量方便可反映单细胞水平信息可反映细胞之间的空间位置信息只反应单个切面信息细胞固定后会有变化活细胞水平多参数（已有28色报道）高通量（每秒数万细胞）可半定量比较流式细胞术与WB 、IHC 实验的区别目录1.流式细胞术的概念与目的2.流式细胞术与其他免疫学实验技术的异同3.流式样本的制备4.流式细胞仪检测原理与数据含义5.流式抗体的选择6.流式实验常见问题流式样品的制备：不同组织的处理血液：自然状态下已经是单细胞，剔除红细胞即可淋巴器官:（脾脏、淋巴、骨髓、胸腺）含结缔组织较少，研磨即可（脾脏和骨髓需要剔除红细胞）非淋巴器官:（肿瘤组织、脑、肝脏等）一般需要胶原酶处理得到单细胞悬液培养的贴壁生物细胞：避免胰酶消化筛网过滤，除去细胞团缓冲液中加入DNA酶可减少细胞成团尽量使用新鲜细胞，染色后固定，最好在4h内检测流式样品的制备：一般流程流式检测注意事项：染色液中加入BSA，封闭容器和细胞表面抗体的浓度比总量更重要细胞量大的实验需要对抗体进行滴定染色条件：室温vs 4°C流式样品的制备：肿瘤浸润免疫细胞的流式检测肿瘤组织分离--> 剪成小块--> 胶原酶+DNA 酶--> 洗涤+染色-->上机检测/tissuedissociation/• I 型: 各种酶成份均衡，推荐用于上皮组织，肝，肺，脂肪和肾上腺组织样本，可用于获取淋巴细胞•II 型:较高的梭菌肽酶A 含量，通常用于分解心脏，骨，肌肉，甲状腺和软骨瘤组织•III 型:低蛋白水解酶活性，普遍用于乳腺组织•IV 型: 多种蛋白酶成分，能消化多种组织。
