PCR技术简述
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简述PCR技术的主要原理及应用
简述PCR技术的主要原理及应用1. PCR技术的主要原理聚合酶链式反应（PCR）是一种重要的分子生物学技术，其主要通过在一系列循环中扩增特定DNA片段，最终获得大量目标DNA的倍增产物。
PCR技术广泛应用于基因测序、基因克隆、突变分析、分子诊断等领域。
PCR技术的主要原理包括以下三个步骤：1.1 反应体系的准备PCR反应体系主要由以下组分组成： - DNA模板：即待扩增的目标DNA段，可以是从任何来源提取的DNA片段。
- 引物：由两个单链DNA片段构成，分别与目标DNA序列的两个相邻区域互补，作为DNA复制的起始点。
- DNA聚合酶：用于引导DNA的复制，具有高温稳定性。
- 反应缓冲液：提供适宜的酶活性和其他反应条件。
1.2 热循环反应PCR反应通过一系列的循环反应，完成DNA的扩增。
每个循环包括以下三个步骤：1.热变性（Denaturation）：将PCR反应管中的DNA双链变性为单链，提供引物结合的机会。
2.引物结合（Annealing）：反应体系通过降温，使引物与目标DNA互补的区域结合。
3.DNA扩增（Extension）：通过DNA聚合酶在适宜温度下复制DNA模板。
1.3 扩增产物的倍增反复进行热循环反应会连续复制目标DNA段，导致DNA的指数级扩增。
经过多个循环之后，扩增产物的数量将呈指数式增长。
2. PCR技术的应用PCR技术在生物学研究和医学诊断中得到广泛应用，主要包括以下几个方面：2.1 基因测序PCR技术在基因测序中起到关键作用。
通过扩增需要测序的DNA片段，可以获得足够的模板量，用于测序仪的读取。
2.2 基因克隆PCR技术可用于基因克隆，通过引物的设计，扩增目标DNA片段后，将其插入到表达载体中，实现目标基因的表达。
2.3 突变分析PCR技术可以用于突变分析，通过引物的设计，扩增包含突变位点的DNA片段，然后通过测序或其他分析方法确定突变的存在与否。
2.4 分子诊断PCR技术在分子诊断中广泛应用。
pcr技术的名词解释
pcr技术的名词解释PCR技术，全称聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种在生物科学领域广泛应用的核酸扩增技术。
PCR技术可以在体外复制、扩增极微量的DNA或RNA片段，从而使其在实验室中进行更详细和准确的研究。
PCR技术是由美国科学家凯瑟琳·穆利斯（Kary Mullis）于1983年发明的，她因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。
PCR技术的发明被视为生命科学领域的一项突破性发现，它极大地改变了基因分析和诊断的方式。
PCR技术的核心原理是通过一系列温度变化，使DNA模板序列在DNA聚合酶的作用下反复复制。
PCR技术通常需要以下几个步骤。
首先，从待扩增的DNA样本中提取出目标DNA序列。
提取DNA的方式可以根据实验目的不同而有所差异，常见的方法包括酚氯仿法、磁珠法等。
然后，将DNA样本置于PCR反应管中，并添加聚合酶、DNA引物（primer）以及四种碱基（A、T、C和G），混合均匀。
引物是一对短链的DNA片段，它能够特异性地与待扩增的DNA片段的两端结合。
接下来，将PCR反应管置于热循环仪中，进行一系列温度变化的循环。
通过加热至高温（通常为94-98摄氏度），使DNA双链解离成两条单链。
然后，降温到合适的温度（通常为50-65摄氏度），引物与目标DNA序列的两端结合，作为DNA复制的起始点。
最后，加热至适宜的温度（通常为72摄氏度），聚合酶将新的DNA链片段与引物结合，并复制出新的双链DNA。
上述温度循环通常需要重复20-40次，每一轮都会产生比前一轮更多的目标DNA序列。
因此，PCR技术具有极好的扩增效率。
PCR技术在生物科学中有广泛的应用。
它可以用于基因测序、基因突变检测、基因表达分析、DNA指纹鉴定等多个领域。
此外，PCR技术的快速和高效使其成为了病原体检测、法医学和生物工程等领域的重要工具。
总结来说，PCR技术是一种重要的核酸扩增技术，通过循环反应和温度变化的方式可以在实验室中迅速、准确地复制和扩增DNA或RNA序列。
简述pcr的原理和应用
简述PCR的原理和应用1. PCR简介PCR（聚合酶链反应，Polymerase Chain Reaction）是一种通过体外扩增DNA 片段的技术，由美国生物学家Kary B. Mullis于1983年发明。
PCR技术的成功应用在分子生物学和遗传学领域取得了革命性的突破，成为现代生物学研究的重要工具之一。
2. PCR的原理PCR技术主要依赖于DNA的体外复制过程，包括三个主要步骤：变性（Denaturation），退火（Annealing）和延伸（Extension）。
以下是PCR的原理概述：•变性（Denaturation）：将待扩增的DNA双链分离，通常通过加热至94-98℃来破坏氢键，使DNA变为单链。
•退火（Annealing）：将DNA的温度降至反应溶液中引物（引导扩增的短DNA序列）的退火温度，使引物与目标DNA序列互补结合。
•延伸（Extension）：在适宜的温度下加入DNA聚合酶（常用的是Taq聚合酶），使引物的3’端延伸，合成新的DNA链。
经过多个PCR循环，每个循环产生的DNA片段会成倍增加，最终得到大量的目标DNA序列。
3. PCR的应用PCR技术在许多领域具有广泛的应用，以下是PCR在不同方面的应用概述：3.1 基因检测和诊断•PCR可以检测和诊断遗传性疾病，例如常见的唐氏综合征、囊性纤维化等。
通过扩增目标基因的特定序列，可以检测是否存在特定的突变或基因缺陷。
•PCR还可用于检测病原微生物的存在，例如检测病毒、细菌和真菌等。
通过扩增目标基因的保守序列，可以确认病原体的存在并进行鉴定。
3.2 法医学应用•PCR技术被广泛应用于法医学领域，可用于识别个体身份和DNA指纹鉴定。
通过扩增特定DNA区域，可以从样本中获得个体独特的遗传特征，如指纹、DNA序列等。
•PCR还可用于研究遗传疾病的家族史，通过扩增特定基因的片段，可以确定家族成员是否遗传了特定的遗传变异。
3.3 生物学研究•PCR技术在基础生物学研究中扮演着重要角色。
【最全】PCR技术介绍
【最全】PCR技术介绍聚合酶链反应（PCR）是分子生物学中广泛使用的一种方法，可以快速使特定DNA样品复制数百万至数十亿个拷贝，从而使科学家能够提取非常少的DNA样品并将其扩增到足以进行详细研究的数量。
PCR由Kary Mullis于1983年发明。
它是许多基因检测的基础，包括分析古代DNA样本和鉴定传染原。
使用PCR可以在一系列或一系列温度变化中以指数方式扩增非常少量的DNA序列的拷贝。
现在PCR 是医学实验室和临床实验室研究中使用的常见且经常不可缺少的技术，可用于包括生物医学研究和刑事法医学在内的多种应用。
绝大多数PCR方法依赖于热循环。
热循环使反应物经受重复的加热和冷却循环，以允许进行不同的温度依赖性反应，特别是DNA熔解和酶驱动的DNA复制。
PCR使用两种主要试剂–引物（一种短的单链DNA片段，称为寡核苷酸，是与目标DNA区域的互补序列）和一种DNA聚合酶。
随着PCR的进行，生成的DNA本身将用作复制模板，从而启动链式反应，在原始反应中，原始DNA模板被指数扩增。
几乎所有的PCR应用都使用热稳定的DNA聚合酶，例如T aq聚合酶，Taq聚合酶最初是从嗜热细菌水生栖热菌（Thermus aquaticus）中分离出来的。
如果所使用的聚合酶是热敏感的，它将在变性步骤的高温下变性。
在使用Taq聚合酶之前，必须在每个循环中手动添加DNA聚合酶，这是一个繁琐且昂贵的过程。
该技术的应用包括用于测序的DNA克隆，基因克隆和操作，基因诱变；基于DNA的系统发育的构建或基因的功能分析；遗传疾病的诊断和监测; 古代DNA的扩增；用于DNA分析的遗传指纹分析（例如法医科学和亲子鉴定）；传染病诊断用核酸检测中病原菌的检测。
通常，PCR由一系列20–40次重复的温度变化（称为热循环）组成，每个循环通常由两个或三个离散的温度步骤组成（请参见上图）。
大多数PCR方法共有的单个步骤如下：初始化：只有需要通过热启动PCR进行热激活的DNA聚合酶才需要执行此步骤。
简述PCR技术的原理与应用
简述PCR技术的原理与应用1. PCR技术的原理PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种通过复制DNA序列的方法，可以从微量DNA样本中扩增出足够量的DNA片段。
PCR技术主要包括以下几个步骤：1.1. 反应体系的组成•DNA模板：待扩增的DNA片段；•引物：设计特异性引物，用于选择性扩增目标DNA片段；•dNTPs：四种单核苷酸，作为DNA合成的基础单元；•DNA聚合酶：具有DNA合成酶活性，能在适宜温度下催化DNA片段的合成；•缓冲液：提供适宜的pH值和离子浓度；•镁离子：DNA聚合酶的活性所需；•辅酶：某些PCR反应需要添加特定的辅助酶。
1.2. 扩增步骤1.反应体系在高温条件下发生变性，使DNA双链解开，形成两条单链DNA。
2.体系降温，引物结合到目标DNA上，为DNA合成提供起始位置。
3.酶依据引物的模板特异性，在适宜温度下合成DNA链，从而扩增出目标DNA片段。
4.扩增片段在每个循环中成倍增加，经过多个循环后，得到大量目标DNA。
1.3. PCR的循环PCR技术通过多次循环反应来扩增目标DNA。
PCR循环通常包含以下几个阶段：1.变性：将反应体系加热至95°C，使DNA双链变性，分离为两条单链DNA。
2.引物结合：通过降温至较低温度，使引物与目标DNA片段互补结合。
3.DNA合成：在适宜温度下，DNA聚合酶合成新的DNA链，以引物为起始点。
4.循环：重复以上步骤，使目标DNA不断扩增。
2. PCR技术的应用PCR技术在生物医学研究、医学诊断、法医学、农业和环保等领域有广泛的应用。
2.1. 生物医学研究PCR技术在生物医学研究中起到关键作用，主要应用于以下方面：- 基因克隆：通过PCR技术扩增目标基因，再进行重组、克隆等操作。
- 基因分型：PCR技术可以用来检测个体的基因型，研究基因与疾病的关联。
- 基因表达定量：可以通过PCR测定特定基因在不同组织或条件下的表达水平。
PCR技术解析
PCR技术广泛应用于生物医 学、法医学、农业科学等领 域，如疾病诊断、遗传病筛 查、基因克隆等，是现代分 子生物学研究的重要工具CR的引物设计
PCR的变性过程
PCR的延伸阶段
引物是PCR反应的关键，它 需要根据目标DNA序列设计 ，长度一般为18-30个核苷酸 ，具有特异性和稳定性。
PCR技术的应用领域
2
进行的DNA复制过程，能够迅速扩增特定的DNA
PCR技术广泛应用于生物医学、法医学、分子生
片段。
物学等领域，如基因克隆、突变检测、疾病诊断
等。 3 PCR技术的操作步骤
PCR技术主要包括变性、退火和延伸三个步骤，
通过反复进行这三个步骤，可以实现DNA的高效
扩增。
02 PCR的工作原理
变性是PCR的首要步骤，通 过高温使双链DNA分离成单 链，为后续的复性、延伸创 造条件。
延伸阶段在适宜温度下进行 ，利用DNA聚合酶将新合成 的DNA链延长，实现目标 DNA片段的复制。
04 PCR实验设备和材料
PCR实验设备和材料
1 PCR实验设备介绍
PCR实验设备主要包括热循环仪、PCR管和热盖
的使用需要操作者有一定的技能和经验。
05 PCR实验操作技巧
PCR实验操作技巧
PCR实验前的准备
在PCR实验开始之前，需要 准备充足的试剂和设备，确 保所有物品的质量和纯度， 同时对实验室环境进行消毒 处理。
PCR反应条件的优化
通过调整PCR反应的温度、 时间和循环次数等条件，可 以有效提高PCR的特异性和 灵敏度，从而获得更准确的 实验结果。
PCR技术在疾病诊断 中的作用
PCR技术可以用于检测病原 微生物的DNA或RNA，从而 实现疾病的早期诊断和预防 。
PCR技术的简单介绍
PCR技术的简单介绍聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）是在体外酶促扩增特定DNA片段的技术，由美国Kary Mullis及其同事于1985年发明。
热稳定性Taq DNA聚合酶的应用和自动化装置的发明与完善，使PCR技术进入实用阶段。
该技术的发明和广泛应用，大大推动了分子生物学各相关学科的发展，发明者也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。
随着PCR技术的成熟，派生了不少相关技术。
这类技术具有敏感、特异、快速和简单等优势，在微生物检验中的应用越来越广，不少国家将其纳入检验的标准方法；我国检验检疫领域对其应用也日益扩大，国家要求市级以上疾病预防控制中心具有PCR检测技术能力，用于突发公共卫生事件的快速检测和食品安全的有效监管等。
PCR技术的基本原理和DNA在体内天然复制过程相似，是在体外重复进行DNA模板解链、引物与模板DNA结合、DNA聚合酶催化形成新DNA链的过程，只是整个过程在体外进行，而且反应体系比体内更简单。
1．体系组成和基本过程（1）体系组成经典PCR以DNA为模板，体系组成包括原始模板、引物、原料、DNA聚合酶以及合适的盐、缓冲液以及温度循环参数等。
原始模板是指长的双链DNA待扩增目的片段，微生物检验中往往是待测标本中的DNA。
引物是两段单链寡核苷酸，其序列与待扩增片段的两端分别相同和互补。
原料则是4种脱氧核苷三磷酸。
（2）基本过程PCR基本过程分为变性、退火和延伸三个阶段，经过多次循环实现目的片段的扩增。
变性是指将反应体系混合物加热至93℃~95℃，维持较短的时间，一般30s，使待测的双链DNA在高温作用下变性，解链为2条单链DNA模板的过程。
退火是指将反应体系混合物冷却至特定温度（也称退火温度）。
延伸是指将反应体系的温度提高到72℃，在耐热DNA聚合酶作用下，以4种脱氧核苷三磷酸为原料，按碱基配对原则，合成与两条模板DNA互补的2条新的DNA链。
pcr技术的知识点
pcr技术的知识点PCR，全称为聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种在体外扩增DNA分子的技术。
自从其产生以来，PCR技术在生物学、医学等领域都扮演着重要角色。
本文将介绍PCR技术的基本原理、主要步骤及其应用。
一、PCR技术的基本原理PCR技术是利用DNA聚合酶能够在适宜条件下从单链DNA模板向其补体的方向合成新的互补双链DNA的特性，通过体外操作使目标DNA区段被扩增的一种技术。
PCR技术相当于“放大器”，它把少量的DNA分子扩增成数百万分子，这种扩增是平凡的、快速的和特异的。
PCR从样本中扩增一段特定目的序列的DNA，应该是由以下三个部分所组成：一段待扩增的DNA序列，一对荧光探针（引物）和一种特殊的聚合酶。
PCR反应主要可分为以下三个阶段：1. 解旋（Denaturation）：将待扩增的DNA序列在高温条件下变性，形成两条单链DNA模板。
2. 引物与合成（Annealing and Extension）：在低温条件下，引物与模板DNA的互补匹配，并由聚合酶在其5'-3'方向上合成新的DNA链。
3. 延伸（Extension）：利用DNA聚合酶在适宜温度下合成新的互补双链DNA，形成两个完全相同的分子。
通过不断的循环这三个阶段，从而使得PCR反应体系中的待扩增物质呈指数级别的增长。
二、PCR技术的主要步骤PCR主要分为以下几个步骤：1. 样品获取PCR技术对样品数量和质量要求较高。
通常采用的是细胞、肝脏、皮肤、血液等组织或器官中提取DNA分子作为扩增目标。
同时，需要注意样品的保存和处理以避免DNA降解。
2. DNA提取DNA提取技术是PCR技术的基础。
不同的样品需要采用不同的DNA提取方法，常见的DNA提取方法有基于酸性、碱性或复合的物理或化学方法等。
3. 引物设计PCR扩增需要引物特异性和长度适宜，且引物与待扩增的DNA序列互补匹配度高，通常由专业的引物设计软件完成。
PCR介绍
dNTPs:
0.6μl×6 = 3.6μl
引物 P：
2.4μl ×6 = 14.4μl
Taq 酶 (5U/μl)： 0.2μl × 6 = 1.2μl
水：
21μl × 6 = 126μl
共174μl，先用移液器 / 指弹混匀，后用离心机瞬时
混匀（管壁上液体沉至管底）。
2. 另取 5 支0.2ml Ep管，分别加入上述液体29μl。 3. 分别取标本模板各1μl，加入上述5支 Ep 管中，混
加热90～95℃，30 ～ 60 s，再复杂的DNA分子 也可变性为单链。根据模板DNA复杂程度，可以调 整变性温度和时间。一般情况下选择94 ℃ 30 ″，可 使各种复杂的DNA分子完全变性。
温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活 性和dNTP分子造成损害。
⑵ 复性温度和时间：
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板 的结合。
总原则是提高扩增的效率和特异性
引物设计原则
⑴ 长度15～30 b，过短特异性降低，过长则成本增加， 产量也下降。
⑵ 引物碱基尽可能随机分布，避免出现嘌呤、嘧啶堆 积现象，引物 G+C 含量宜在45 ～ 55%左右。
⑶ 引物内部不能含有自身互补序列，否则会形成发夹 样二级结构，两个引物之间尤其在 3’ 末端不应有互 补链存在，不然会形成引物二聚体。
3. 延伸 (Extension):
将反应温度调节到酶的最适温度，在DNA聚合
酶、4种 dNTPs 及镁离子等存在的条件下，以引物 的 3′ 端开始，结合单核苷酸，形成与模板链互补的
新DNA链。72 ℃ 1′
上述 3 步为一个循环，每经过一个循环，样本 中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新 一轮循环的模板，经过25～30个循环后DNA可扩增 106 ～ 109 倍。
简述pcr技术原理
简述pcr技术原理
PCR技术原理
PCR（聚合酶链式反应）是一种在体外扩增DNA片段的技术，它是分子生物学中最重要的技术之一。
PCR技术的原理是利用DNA聚合酶在适当的温度下，将DNA模板的两条链分离，然后在模板DNA的两端引导的引物的作用下，通过DNA聚合酶的催化作用，将引物与模板DNA的单链互补配对，从而在每个引物的5'端开始合成新的DNA链，最终得到两条与模板DNA相同的DNA片段。
PCR技术的步骤包括三个主要的温度阶段：变性、退火和延伸。
在变性阶段，PCR反应体系中的DNA双链被加热至95℃，使其分离成两条单链。
在退火阶段，反应体系中的温度被降低至50-60℃，引物与模板DNA的单链互补配对，形成引物-模板DNA复合物。
在延伸阶段，反应体系中的温度被升高至72℃，DNA聚合酶在引物的作用下，从引物的5'端开始合成新的DNA链，最终得到两条与模板DNA相同的DNA片段。
PCR技术的应用非常广泛，包括基因克隆、基因检测、DNA测序、DNA指纹鉴定等。
PCR技术的优点是快速、灵敏、特异性高、操作简单、成本低等。
PCR技术的发明和应用，极大地促进了分子生物学和生物技术的发展，为人类健康和生命科学研究提供了强有力的工具。
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PCR技术简述
北京大学医学部基础医学院 07级临床一班陈依然 90701114
一、摘要
早在高中时期，生物课教程中就已经出现了“PCR技术”的字样。
但是由于当时知识深度与教学要求、目的所限，教师并未对“PCR技术”即行明确的讲解。
这个疑问一直延伸到今天。
结合查阅的资料，本文对PCR技术进行了简要而比较全面地介绍，内容主要涉及PCR技术的发展历程、原理、主要步骤、反应特点、反应的关键因素——引物与DNA聚合酶、荧光实时定量技术以及PCR在医学与法医学领域的应用，并且将该项技术与用于DNA扩增的常规基因工程技术进行了比较。
基于以上内容，本文呈现了有关PCR技术的基本知识。
二、关键词
PCR技术基本知识原理应用与常规方法的比较
三、正文
3.1 PCR技术简介
多聚酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是近十年来发展最快、应用最广的分子生物学技术。
PCR是在细胞外（体外）快速扩增特定DNA序列的技术，故又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆技术（Cell-free molecular cloning）。
该项技术采用定向酶促扩增法，选择性地富集某一特异性DNA序列，将被认为不可能监测到的极微量靶DNA分子扩增到足以方便地进行监测和分析的数量级。
PCR不但有高的监测能力，还简化了操作程序，省去了诸多繁琐的操作，被人们称为分子克隆技术中的一次重大革命，对基础研究、实际应用，推动现代分子生物学技术的发展，具有难以估量的作用。
而且由于PCR技术在理论和应用上的跨时代意义，该项技术的发明者Mullis也于1993年获得了诺贝尔化学奖。
3.2 PCR技术发展历程
PCR技术的最初设想是由美国Cetus公司的Kary Mullis博士于1983年提出的。
自1993年至今，该项技术一共经历了手动/机械手式水浴基因扩增、自动化控制型定性基因扩增、终点定量/半定量PCR、实时定量PCR四代产品。
随着产品的发展，操作大幅简化，成本迅速降低，而这些都有赖于DNA聚合酶的改良和荧光定时定量PCR等技术的发明与应用。
目前的第四代产品，对PCR可以进行精确的定时定量控制，并采用了微电脑控制全部反应过程，大大简化了操作过程，节省了实验时间，降低了成本，极大促进了PCR 技术的实际应用与发展。
迄今PCR技术在生物科研和临床应用中得到广泛应用，成为分子生物学研究的最重要技术之一。
3.3 PCR技术原理
DNA的半保留复制是生物遗传物质向后代传递的重要途径。
双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两个DNA分子。
在实验中发现，DNA分子在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。
因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
PCR是根据以上原理，以特定顺序DNA的两条链为模板，在一对引物的介导下，在
体外运用DNA聚合酶合成特定DNA序列的反应。
PCR包括以下三个主要的连续步骤：
1、热变性：加热破坏DNA两条链之间的结合力，使目的DNA于高温解链成为
单链模板。
2、退火：退火是属于分子杂交复性的过程，在一定温度条件下，两个人工合
成的寡聚核苷酸引物分别与目的片段两侧的两条链互补结合而起到启动子
的作用。
3、延伸：在最适温度条件下，DNA聚合酶将核苷酸从引物3’端开始掺入，沿
模板由5’至3’方向延伸，合成DNA。
经过几年的探索与实践，在发现耐高温的DNA聚合酶之后，以上三个步骤的温度与循环已有规律可循。
一般情况下，94℃加热1分钟，56℃退火2分钟，72℃延伸5分钟，如此循环25至35次，即可得到所需目的DNA的数量，理论值为2n，n为循环次数。
3.4 PCR的引物设计和DNA聚合酶
正确地设计引物和合理地使用DNA聚合酶是PCR实验工作能否成功的关键所在。
3.4.1引物设计
PCR反应中所使用的引物都是人工合成的一段寡聚核苷酸。
设计引物所须考虑的原则有以下几点：
1、引物须与目的DNA两条链的5’端相匹配；
2、引物的G+C含量应设计为50%左右，尽量避免数个嘌呤或嘧啶的连续排列；
3、引物需要避免内部形成二级结构；
4、两个引物之间不应发生互补，避免形成引物二聚体；
5、人工合成的引物最好通过PAGE或离子交换HPLC进行纯化。
3.4.2 DNA聚合酶（DNA polymerase）
在PCR技术中，DNA聚合酶是关键的因素之一。
DNA聚合酶最早于1955年发现，而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli则是于20世纪70年
代的初期由Dr. H. Klenow所发现，但由于此酶不耐高温，高温能使之变性, 因
此也制约了PCR技术的应用和发展。
经过改进后目前使用的DNA聚合酶是Saiki
等人于1988年从温泉中得到的一种水生嗜热杆菌（Thermus aquaficus）分离出
来的，称为TaqDNA聚合酶。
该聚合酶具有极佳的热稳定性，并且提高了扩增目的
产物的特异性，使PCR技术进入实用化阶段。
3.5 荧光实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR, qPCR)
荧光实时定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
借助于荧光信号来检测PCR产物，一方面提高了灵敏度，另一方面可以在每次PCR循环收集数据，建立实时扩增曲线，准确地确定域值循环数，计算起始DNA复制数，做到了真正意义上的DNA定量。
荧光实时定量PCR技术最早是在1992年由一位日本人Higuchi提出的。
经过不断发展完善，到1996年当时的PE公司（后来的ABI）推出了世界第一台商品化的荧光定量PCR仪，标记方法也由最初的染料法，逐渐发展到了特异性更高的Taqman探针法，以及Molecular Beacon、Fret等不同方法的标记探针。
实时定量PCR技术真正实现了PCR从定性到定量的飞跃，通过对PCR过程的实时监
控，专一、灵敏快速、可重复地精确定量起始模版浓度，已经在科研和临床诊断领域得到了越来越广泛的应用。
3.6 PCR技术与常规基因工程技术的比较
PCR技术为测序的分子克隆和模板制备的大部分重复工作提供了替代者。
过去，为了获得特定的DNA序列和有意义的靶基因的分析研究数量，采用基因工程的方法把带有靶基因的载体导入细菌细胞，经过细菌繁殖后，扩增的靶基因再用同位素探针筛选。
此种方法需要将靶基因在细胞与细胞之间来回搬运，然后经过培养、提取、纯化等程序获得靶基因，操作繁琐，还得使用同位素，效率不高，从而限制了许多重大课题的研究。
直接测序比PCR片段常规的克隆到质粒和病毒的基因组的方法具有以下两大优点：
1、由于它是不依赖于生物体的体外系统，PCR技术更易标准化、自动化；
2、操作简便，更加快速可靠而准确；
PCR反应具有特异性强、灵敏度高、简便、快速、对标本的纯度要求低发等优于常规方法的特点，促进了该项技术的实用化与产业化。
3.7 PCR技术的应用
自PCR技术发明以来，因其操作简便、省时、灵敏度高、特异性强，故应用范围极其广泛，新的方法层出不穷。
以下简述其在医学和法医学的重要应用。
3.7.1 医学应用
特异性核苷酸杂交探针的采用已使传染病病原体的检测和对与疾病关联的遗传变异的鉴定发生了变革。
PCR借助于产生足够量的靶顺序使以DNA为根据的临床诊断成为可能，从而得以采取简易、快捷和有活力的方法来诊断。
PCR技术最先应用于镰刀型细胞贫血症的产前诊断，进而应用于许多遗传疾病的诊断，从而表明，即使疾病位点和突变尚未被确定，PCR扩增也可能有助于基因诊断。
已经证明，PCR不仅在遗传性疾病和癌症的分析中起到重要作用，对诊断多种传染病病原体也有积极贡献。
可以想见，PCR除了应用于对已知病原体以及已知基因疾病的诊断之外，将同样有助于对一些新病原体的识别并有可能增加对某些慢性疾患的病毒病因学的理解。
因此，PCR有望在医学中重要顺序的识别上以及在成为对其检测的重要诊断方法上起到关键性的研究作用。
3.7.2 法医学应用
PCR技术检测生物学证据样本DNA多态性的能力使法医学得以革新。
采用PCR技术扩增特异的多态性DNA顺序可以克服传统方法的限制，耐热的TaqDNA聚合酶的应用明显的改善了PCR的特异性和收获率，并使该过程得以自动化。
其结果是从一根头发、单个二倍体细胞，针织单个精子鉴别其DNA类型成为可能。
为法医学的发展以及生物证据样本的提供做出了巨大贡献。
四、参考文献
[美]HA艾利希主编，田丁、张基增等译《PCR技术——DNA扩增的原理与应用》北京医科大学（现北京大学医学部）中国协和医科大学联合出版社 1991年8月张丰德、吕宪禹主编《现代生物学技术（第三版）》南开大学出版社 2005年2月百度百科/view/2764.htm
医生圈社区网/bbs/viewthread.php?tid=2919
网易博客
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