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实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应姓名：指导教师：实验室：组员：成绩：第三部分：实验记录与分析实验现象记录及分析：（一）蛋白质等电点测定（二）蛋白质的盐析1．蛋白质的盐析2．重金属离子沉淀蛋白质3．有机酸沉淀蛋白质4．有机溶剂沉淀蛋白质5．乙醇引起的变性与沉淀第四部分：课后研讨题1.通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。
适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。
2.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？铅、汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
3.氯化汞为何能做为杀菌剂？细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
5.将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以说明。
（1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。
（2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋白质，用于提纯蛋白质。
（3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml的蛋白质溶液，再加入3%硝酸银溶液1-2滴，振荡试管，观察现象。
（4）某些有机酸沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。
（5）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入2ml 95%乙醇，观察现象。
教师评阅：签名。
实验四蛋⽩质的等电点测定和沉淀反应实验四蛋⽩质的等电点测定和沉淀反应⼀、实验⽬的1、了解蛋⽩质的两性解离性质。
2、学习测定蛋⽩质等电点的⼀种⽅法。
3、加深对蛋⽩质胶体溶液稳定因素的认识。
4、了解沉淀蛋⽩质的⼏种⽅法及其实⽤意义。
⼆、实验原理蛋⽩质是两性电解质。
在蛋⽩质溶液中存在下列平衡：蛋⽩质分⼦的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的PH达到⼀定数值时，蛋⽩质颗粒上正负电荷的数⽬相等，在电场中，蛋⽩质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋⽩质的等电点。
不同蛋⽩质各有特异的等电点。
在等电点时，蛋⽩质的理化性质都有变化，可利⽤此种性质的变化测定各种蛋⽩质的等电点。
最常⽤的⽅法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋⽩的等电点。
⽤醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋⽩溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加⼊酪蛋⽩后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋⽩的等电点。
在⽔溶液中的蛋⽩质分⼦由于表⾯⽣成⽔化层和双电层⽽成为稳定的亲⽔胶体颗粒，在⼀定的理化因素影响下，蛋⽩质颗粒可因失去电荷和脱⽔⽽沉淀。
蛋⽩质的沉淀反应可分为两类：（1）可逆的沉淀反应此时蛋⽩质分⼦的结构尚未发⽣显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋⽩质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质⽽不变性。
如⼤多数蛋⽩质的盐析作⽤或在低温下⽤⼄醇（或丙酮）短时间作⽤于蛋⽩质。
提纯蛋⽩质时，常利⽤此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋⽩质分⼦内部结构发⽣重⼤改变，蛋⽩质常变性⽽沉淀，不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋⽩质沉淀与凝固。
蛋⽩质与重⾦属离⼦或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋⽩质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
因此变性蛋⽩质并不⼀定都表现为沉淀，⽽沉淀的蛋⽩质也未必都已变性。
三、实验器材1、实验仪器1) ⽔浴锅2) 温度计3) 200mL锥形瓶4) 100mL容量瓶5) 吸管6) 试管及试管架7) 乳钵2、实验材料1) 新鲜鸡蛋2) 0.4%酪蛋⽩醋酸钠溶液取0.4g酪蛋⽩，加少量⽔在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋⽩质悬胶液移⼊200mL锥形瓶内，⽤少量40—50℃的温⽔洗涤乳钵，将洗涤液也移⼊锥形瓶内。
实验六蛋白质的性质（二）蛋白质的等电点测定和沉淀反应一、蛋白质等电点的测定（一）目的1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
（二）原理蛋白质是两性电解质，在溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶掖的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的PH值称为此蛋白质的等电点(p1)。
不同的蛋白质有其各自的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质来测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是利用物质在达到等电点时溶解度最小的性质，测定蛋白质溶液的溶解度呈现最低时的溶液pH值，此时的pH倍即为该蛋白质的等电点。
本实验通过观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度，来测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠配制成各种不同PH值的缓冲液．然后向各缓冲溶液中加入酪蛋白，观察沉淀出现并测定酪蛋白的等电点。
（三）实验器材1、水浴锅。
2、温度计。
3、200mL锥形瓶。
4、100mL容量瓶。
5、移液管。
6、试管。
7、试管架。
8、研钵。
（四）材料与试剂1、0.5％酪蛋白醋酸钠溶液：取0.5g酪蛋白．加少量水在研钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质液移入200 mL锥形瓶内，并用少量40～50℃的温水洗涤研钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。
加入10 mLlmol/L醋酸钠溶液。
把锥形瓶放入50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。
将锥形瓶内的溶液全部移至100 mL容量瓶内，加水至到度，塞紧玻璃塞，混匀。
2、1mo1/L醋酸溶液。
3、0.1mo1/L醋酸溶液。
4、0.01mo1/L醋酸镕液.（五）操作方法2、。
静置20min后，再观察每支试管内溶液的混浊度，以—、＋、＋＋，＋＋＋符号表示沉淀的多少，根据观察结果，指出那一个pH是酪蛋白的等电点。
二、蛋白质的沉淀及变性（一）目的1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
实验项目一、蛋白质的等电点测定及沉淀反应姓名：指导教师：实验室：组员：成绩：第三部分：实验记录与分析实验现象记录及分析：（一）蛋白质等电点测定（二）蛋白质的盐析1．蛋白质的盐析2．重金属离子沉淀蛋白质3．有机酸沉淀蛋白质4．有机溶剂沉淀蛋白质5．乙醇引起的变性与沉淀第四部分：课后研讨题1.通过本次合作实验后，有否对该项目改进的合理建议。
适当增加对照组和空白组，使实验数据更加科学可信。
2.鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂铅、汞是重金属离子，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
3.氯化汞为何能做为杀菌剂细菌由蛋白质构成，氧化汞是重金属盐，与蛋白质结合能使蛋白质分子内部结构发生重大改变，发生变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
4.在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在水溶液中的蛋白质分子由于表面生产水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
5.将本实验中所涉及到的几种蛋白质沉淀方法各举一应用实例加以说明。
（1）盐析：硫酸铵的浓溶液能析出蛋白质。
（2）乙醇引起的变性与沉淀：低温下用乙醇或丙酮短时间作用于蛋白质，用于提纯蛋白质。
（3）重金属离子沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml的蛋白质溶液，再加入3%硝酸银溶液1-2滴，振荡试管，观察现象。
（4）某些有机酸沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察现象。
（5）有机溶剂沉淀蛋白质：取一支离心管，加入2ml蛋白质溶液，再加入2ml 95%乙醇，观察现象。
教师评阅：签名。
实验3 蛋白质的等电点测定和沉淀反应
一、目的
1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
二、原理
蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡：
蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的PH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有特异的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。
加热引起的蛋白质沉淀与凝固。
蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、材料、试剂与器具
（一）材料
新鲜鸡蛋
（二）试剂
1、0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200ml
取0.4g酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40—50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。
加入10mL 1mol/L 醋酸钠溶液。
把锥形瓶放到50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。
将锥形瓶内的溶液全部移到100mL容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。
2、1.00mol/L 醋酸溶液100mL
3、0.10 mol/L醋酸溶液300mL
4、0.01 mol/L醋酸溶液50mL
5、蛋白质溶液500mL
5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1:9）
6、pH4.7醋酸—醋酸钠的缓冲溶液100mL
7、3%硝酸银溶液10mL
8、5%三氯乙酸溶液50mL
9、95%乙醇250mL
10、饱和硫酸铵溶液250mL
11、硫酸铵结晶粉末10000mL
12、0.1mol/L盐酸溶液300mL
13、0.1mol/L氢氧化钠溶液300mL
14、0.05mol/L碳酸钠溶液300mL
15、甲基红溶液20mL
（三）器具
1、水浴锅
2、温度计
3、200mL锥形瓶
4、100mL容量瓶
5、吸管
6、试管及试管架
7、
7、乳钵
四、操作步骤
（一）酪蛋白等电点的测定
（1）取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀。
（2）向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。
此时1、2、3、4管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。
观察其混浊度。
静置10分钟后，再观察其混浊度。
最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。
（二）蛋白质的沉淀及变性
1、蛋白质的盐析无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。
盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。
如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
加蛋白质溶液5mL于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。
倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。
此时析出沉淀为清蛋白。
取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。
2、重金属离子沉淀蛋白质重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。
取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加3%硝酸银溶液1—2滴，振荡试管，有沉淀产生。
放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？
3、某些有机酸沉淀蛋白质取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加入1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。
放置片刻倾出清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。
4、有机溶剂沉淀蛋白质取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL95%乙醇。
观察沉淀的生成（如果沉淀不明显，加点NaCl，混匀。
振摇混匀后，观察各管有何变化。
放置片刻向各管内加入水8毫升，然后在第2，3号管中各加一滴甲基红，再分别用0.1mol/L 醋酸溶液及0.05mol/L碳酸钠溶液中和之。
观察各管颜色的变化和沉淀的生成。
每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解。
解释各管发生的全部现象。
五、注意事项
等电点测定的实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。
六、实验报告
以表格形式总结实验结果，包括观察到的现象，分析评价实验结果。
七、思考题
1、什么是蛋白质的等电点？
2、在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？。
