维生素B1标准品 杂质 对照品

紫外分光光度法测定维生素B1片的含量李刚（四川大学华西药学院四川成都）摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。

关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。

中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。

采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。

1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。

1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。

2 实验方法2.1 测定波长的选择：分别称取维生素B1标准品，维生素B1片粉，维生素B1空白辅料各10mg，平行配制：加盐酸溶液适量溶解后，用盐酸溶液定容至50ml，摇匀后精密量取1ml，盐酸溶液定容至25ml，摇匀后在紫外/可见光区进行全波长扫描，测得不同波长下的吸光度值。

2.2 线性与范围：取五个100ml的容量瓶，精密量取维生素B1对照品（200ug/ml）4.00、5.00、6.00、7.00、8.00ml，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀，每瓶中对照液浓度分别为8.00、10.00、12.00、14.00、16.00ug/ml，在246nm波长处进行吸光度测定，以吸光度与维生素B1对照液浓度进行最小乘法回归分析，得到回归方程，此为标准曲线。

维生素B1、B2的测定方法比较比较维生素B1、B2含量测定方法。

方法：采用紫外分光光度法中三种不同方法测定维生素B1、B2含量。

结果：1、按 E 值测标示量维生素B1：98.3 ± 2.51，维生素B2：94.8 ±0.308，复合维生素B片中维生素B1:102.1± 1.70，维生素B1平均回收率为100.4%，RSD为2.13%(n=6)，维生素B2平均回收率为94.9%，RSD为6.5%(n=6)。

2、标准曲线法维生素B1、B2浓度分别在3～18、1～8μg/ml范围内，均呈良好线性关系，标示量分别为：102.9±0.661，98.4±0.152。

3、双波长法测维生素B1标示量：94.2±1.97。

结论：三种方法用于维生素B1、B2含量测定，操作简便、快速、准确，精密度好。

近年来对维生素B1、B2测定方法报道较多，如高效液相色谱法[1,2]、流动注射化学发光法[3]、多元线性分光光度法[4]、荧光分光光度法[5]、毛细管电泳电化学法[6]、氧瓶燃烧电位滴定法[7]等。

这些方法操作麻烦、时间较长。

本文采用紫外分光光度法中按 E 值测定法、标准曲线法和双波长分光光度法，测定维生素B1、B2含量，并将三种方法进行比较。

三种方法均操作简便、快速、准确。

1 仪器和材料仪器：722型分光光度计DU-7紫外—可见分光光度计材料：维生素B1、B2对照品(购自Sigma 公司) ；维生素B1片(批号：20021202) 维生素B2片(批号：20021288-02)；复合维生素B片(批号：20021283-02)三种片剂均为昆明制药股份有限公司产品；冰醋酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。

2 试验及结果2.1 维生素B1含量测定2.1.1 按E 值测定维生素B1标示量取本品 1 0 片，精密称取、研细，精密称取适量(约相当于维生素B125mg)，加盐酸(9 →1000)约70ml，振摇15min使之溶解，再加盐酸(9→1000)定容至100ml，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取滤液5 m l，用盐西装盐酸(9 →1000)稀释至100ml，摇匀，扫描得最大吸收波长为246nm(图1)，在该波长处测定吸光度，按其吸收系数( )为421计算：A 为供试品在246nm 波长处测得的吸光度；D 为稀释倍数；W 为维生素B1片的平均片重；W样为称取的维生素B1片粉重；S标为标示量，测定结果(X ±SD)：98.3±2.51(n=7)。

维生素B1检验记录记录编号：YL-WB1-20一．性状：本品为（白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭,味苦）。

结果：吸收系数：紫外分光光度计型号: （应为406～436) 取本品（约62。

0mg）精密称定w＝_______g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶液并稀释至刻度.摇匀，精密量取（2.0ml）_____，移至100ml量瓶中，用盐酸溶液（9→1000)稀释至刻度，摇匀.照分光光度法在246nm波长处测得吸收度A＝______,计算得吸收系数（E1cm1％）为______计算：结果：二．鉴别：1．天平型号：取本品（约5mg)，加氢氧化钠试液 (2.5ml）溶解后，加铁氰化钾试液________（0.5ml）与正丁醇________（5ml）,强力振摇2分钟，放置使分层,上层醇液显____ （强烈的蓝色荧光），加酸成酸性，荧光即（消失），再加碱成碱性,荧光________（又出现）。

结果：2．取本品适量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃干燥2小时测定。

本品的红外光吸收图谱与对照的图谱(应一致）结果：3．（1)取本品_____（约0。

2g）,置试管中,加水20ml溶解后，加硝酸2ml，加硝酸银试液1ml，即生成______________（白色凝乳状沉淀)，分离沉淀，加量试液,沉淀________（即溶解）加硝酸使成酸性,沉淀___________（复生成）。

(2）取供试品少量,置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热,即发生（氯气),能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。

结果：三．检查：天平型号：酸度计型号:1．酸度: (pH值应为2.8—3.3)定位用标准缓冲液:磷酸盐标准缓冲液pH= ；校准用标准缓冲液：邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液pH= 。

取本品 g,加水 ml溶解后，依法测定，1： ,2：，平均为。

结果：2．溶液澄清度与颜色：取本品_____（1.0g），加水10ml溶解后，溶液_____（应澄清无色)；如显色，与对照液(取比色用重铬酸钾液0.1ml,加水适量使成10ml）比较________ (不得更深）。

1. 掌握硫胺素在酸性条件下与高铁氰化钾反应生成蓝色复合物的原理。

2. 学习使用分光光度法测定硫胺素含量。

3. 培养实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理硫胺素（维生素B1）在酸性条件下，与高铁氰化钾反应生成蓝色复合物，该复合物在特定波长下有最大吸收。

根据吸光度与硫胺素浓度的关系，可以计算出样品中硫胺素的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 硫胺素标准品- 硫胺素样品- 0.1 mol/L硫酸- 0.1 mol/L盐酸- 0.01 mol/L高铁氰化钾- 95%乙醇2. 仪器：- 分光光度计- 电子天平- 移液器- 离心机- 烧杯- 试管- 比色皿1. 标准曲线绘制：（1）配制一系列不同浓度的硫胺素标准溶液（0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mg/L）。

（2）取10 mL标准溶液于试管中，加入0.1 mol/L硫酸1 mL，充分混匀。

（3）加入0.01 mol/L高铁氰化钾2 mL，混匀，放置10 min。

（4）以试剂空白为参比，在波长625 nm下测定吸光度。

（5）以硫胺素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：（1）称取一定量的硫胺素样品，用95%乙醇溶解，配制成一定浓度的样品溶液。

（2）取10 mL样品溶液于试管中，加入0.1 mol/L硫酸1 mL，充分混匀。

（3）加入0.01 mol/L高铁氰化钾2 mL，混匀，放置10 min。

（4）以试剂空白为参比，在波长625 nm下测定吸光度。

（5）根据标准曲线，计算样品中硫胺素的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：标准曲线呈线性，相关系数R²=0.999。

2. 样品测定：样品中硫胺素含量为X mg/g。

六、实验讨论1. 实验过程中，应注意试剂的准确配制和溶液的充分混匀，以确保实验结果的准确性。

2. 实验过程中，应控制好反应时间，避免因时间过长导致吸光度下降。

紫外分光光度法测定维生素B1片的含量前言维生素B1又称盐酸硫胺或抗神经炎素, 化学名为４-甲基-３-［（２-甲基-４-氨基-５-嘧啶基）甲基］-５-（２-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐。

为白色结晶或结晶性粉末。

在酸性溶液中很稳定, 在碱性溶液中易被氧化和受热破坏。

遇光和热效价下降，故应置于遮光、凉处保存, 且不宜久贮, 具有维持正常糖代谢的作用，在临床上常用于防治缺乏维生素B1所致的脚气病，也用于神经炎、消化不良等症的辅助治疗[1] 。

近年来测定维生素B1片含量的方法较多，如高效液相法[2] 、荧光分光光度法[3] 、毛细管电泳电化学法[4] 、氧瓶燃烧电位滴定法[5] 等。

这些方法操作麻烦、实验时间较长。

紫外分光光度法仪器较便宜，普及度高且操作较简便，此外，维生素B1是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵类化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐[6] 。

维生素B1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收峰，故本次选用紫外分光光度法测定维生素B1含量，根据朗伯-比尔定律，利用紫外吸收光谱来进行定量分析，方法准确、简便、重复性好。

1. 仪器与试药1.1仪器紫外分光光度仪，分析天平，25mL棕色容量瓶，移液管。

1.2 试药维生素B1片；维生素B1生化试剂BR；0.1mol·L -1 HCl（自制）2．实验方法与结果2.1 样品预处理取维生素B1片20片（标示量为10.0mg），总重为1.23921g，其平均质量为61.96mg，充分研磨并混匀，称取3份样品置于25mL棕色容量瓶中，3份样品质量各为10.53mg、10.28mg、10.27mg，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL备用。

2.2对照品溶液配制维生素B1对照溶液：在分析天平上精密称取维生素B1 10.90mg置于25mL 棕色容量瓶，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL，作为维生素B1对照品储备液。

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