下载文档原格式
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量李刚（四川大学华西药学院四川成都）摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。
关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法2.1 测定波长的选择：分别称取维生素B1标准品，维生素B1片粉，维生素B1空白辅料各10mg，平行配制：加盐酸溶液适量溶解后，用盐酸溶液定容至50ml，摇匀后精密量取1ml，盐酸溶液定容至25ml，摇匀后在紫外/可见光区进行全波长扫描，测得不同波长下的吸光度值。
2.2 线性与范围：取五个100ml的容量瓶，精密量取维生素B1对照品（200ug/ml）4.00、5.00、6.00、7.00、8.00ml，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀，每瓶中对照液浓度分别为8.00、10.00、12.00、14.00、16.00ug/ml，在246nm波长处进行吸光度测定，以吸光度与维生素B1对照液浓度进行最小乘法回归分析，得到回归方程，此为标准曲线。
维生素B1、B2的测定方法比较比较维生素B1、B2含量测定方法。
方法：采用紫外分光光度法中三种不同方法测定维生素B1、B2含量。
结果：1、按 E 值测标示量维生素B1：98.3 ± 2.51，维生素B2：94.8 ±0.308，复合维生素B片中维生素B1:102.1± 1.70，维生素B1平均回收率为100.4%，RSD为2.13%(n=6)，维生素B2平均回收率为94.9%，RSD为6.5%(n=6)。
2、标准曲线法维生素B1、B2浓度分别在3～18、1～8μg/ml范围内，均呈良好线性关系，标示量分别为：102.9±0.661，98.4±0.152。
3、双波长法测维生素B1标示量：94.2±1.97。
结论：三种方法用于维生素B1、B2含量测定，操作简便、快速、准确，精密度好。
近年来对维生素B1、B2测定方法报道较多，如高效液相色谱法[1,2]、流动注射化学发光法[3]、多元线性分光光度法[4]、荧光分光光度法[5]、毛细管电泳电化学法[6]、氧瓶燃烧电位滴定法[7]等。
这些方法操作麻烦、时间较长。
本文采用紫外分光光度法中按 E 值测定法、标准曲线法和双波长分光光度法，测定维生素B1、B2含量，并将三种方法进行比较。
三种方法均操作简便、快速、准确。
1 仪器和材料仪器：722型分光光度计DU-7紫外—可见分光光度计材料：维生素B1、B2对照品(购自Sigma 公司) ；维生素B1片(批号：20021202) 维生素B2片(批号：20021288-02)；复合维生素B片(批号：20021283-02)三种片剂均为昆明制药股份有限公司产品；冰醋酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。
2 试验及结果2.1 维生素B1含量测定2.1.1 按E 值测定维生素B1标示量取本品 1 0 片，精密称取、研细，精密称取适量(约相当于维生素B125mg)，加盐酸(9 →1000)约70ml，振摇15min使之溶解，再加盐酸(9→1000)定容至100ml，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取滤液5 m l，用盐西装盐酸(9 →1000)稀释至100ml，摇匀，扫描得最大吸收波长为246nm(图1)，在该波长处测定吸光度，按其吸收系数( )为421计算：A 为供试品在246nm 波长处测得的吸光度；D 为稀释倍数；W 为维生素B1片的平均片重；W样为称取的维生素B1片粉重；S标为标示量，测定结果(X ±SD)：98.3±2.51(n=7)。
维生素B1检验记录记录编号：YL-WB1-20一．性状：本品为（白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭,味苦）。
结果：吸收系数：紫外分光光度计型号: （应为406～436) 取本品（约62。
0mg）精密称定w＝_______g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶液并稀释至刻度.摇匀，精密量取（2.0ml）_____，移至100ml量瓶中，用盐酸溶液（9→1000)稀释至刻度，摇匀.照分光光度法在246nm波长处测得吸收度A＝______,计算得吸收系数（E1cm1％）为______计算：结果：二．鉴别：1．天平型号：取本品（约5mg)，加氢氧化钠试液 (2.5ml）溶解后，加铁氰化钾试液________（0.5ml）与正丁醇________（5ml）,强力振摇2分钟，放置使分层,上层醇液显____ （强烈的蓝色荧光），加酸成酸性，荧光即（消失），再加碱成碱性,荧光________（又出现）。
结果：2．取本品适量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃干燥2小时测定。
本品的红外光吸收图谱与对照的图谱(应一致）结果：3．（1)取本品_____（约0。
2g）,置试管中,加水20ml溶解后，加硝酸2ml，加硝酸银试液1ml，即生成______________（白色凝乳状沉淀)，分离沉淀，加量试液,沉淀________（即溶解）加硝酸使成酸性,沉淀___________（复生成）。
(2）取供试品少量,置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热,即发生（氯气),能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。
结果：三．检查：天平型号：酸度计型号:1．酸度: (pH值应为2.8—3.3)定位用标准缓冲液:磷酸盐标准缓冲液pH= ；校准用标准缓冲液：邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液pH= 。
取本品 g,加水 ml溶解后，依法测定，1： ,2：，平均为。
结果：2．溶液澄清度与颜色：取本品_____（1.0g），加水10ml溶解后，溶液_____（应澄清无色)；如显色，与对照液(取比色用重铬酸钾液0.1ml,加水适量使成10ml）比较________ (不得更深）。
1. 掌握硫胺素在酸性条件下与高铁氰化钾反应生成蓝色复合物的原理。
2. 学习使用分光光度法测定硫胺素含量。
3. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理硫胺素（维生素B1）在酸性条件下，与高铁氰化钾反应生成蓝色复合物，该复合物在特定波长下有最大吸收。
根据吸光度与硫胺素浓度的关系，可以计算出样品中硫胺素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 硫胺素标准品- 硫胺素样品- 0.1 mol/L硫酸- 0.1 mol/L盐酸- 0.01 mol/L高铁氰化钾- 95%乙醇2. 仪器：- 分光光度计- 电子天平- 移液器- 离心机- 烧杯- 试管- 比色皿1. 标准曲线绘制：（1）配制一系列不同浓度的硫胺素标准溶液（0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mg/L）。
（2）取10 mL标准溶液于试管中，加入0.1 mol/L硫酸1 mL，充分混匀。
（3）加入0.01 mol/L高铁氰化钾2 mL，混匀，放置10 min。
（4）以试剂空白为参比，在波长625 nm下测定吸光度。
（5）以硫胺素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：（1）称取一定量的硫胺素样品，用95%乙醇溶解，配制成一定浓度的样品溶液。
（2）取10 mL样品溶液于试管中，加入0.1 mol/L硫酸1 mL，充分混匀。
（3）加入0.01 mol/L高铁氰化钾2 mL，混匀，放置10 min。
（4）以试剂空白为参比，在波长625 nm下测定吸光度。
（5）根据标准曲线，计算样品中硫胺素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：标准曲线呈线性，相关系数R²=0.999。
2. 样品测定：样品中硫胺素含量为X mg/g。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意试剂的准确配制和溶液的充分混匀，以确保实验结果的准确性。
2. 实验过程中，应控制好反应时间，避免因时间过长导致吸光度下降。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量前言维生素B1又称盐酸硫胺或抗神经炎素, 化学名为４-甲基-３-［（２-甲基-４-氨基-５-嘧啶基）甲基］-５-（２-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐。
为白色结晶或结晶性粉末。
在酸性溶液中很稳定, 在碱性溶液中易被氧化和受热破坏。
遇光和热效价下降，故应置于遮光、凉处保存, 且不宜久贮, 具有维持正常糖代谢的作用，在临床上常用于防治缺乏维生素B1所致的脚气病，也用于神经炎、消化不良等症的辅助治疗[1] 。
近年来测定维生素B1片含量的方法较多，如高效液相法[2] 、荧光分光光度法[3] 、毛细管电泳电化学法[4] 、氧瓶燃烧电位滴定法[5] 等。
这些方法操作麻烦、实验时间较长。
紫外分光光度法仪器较便宜，普及度高且操作较简便，此外，维生素B1是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵类化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐[6] 。
维生素B1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收峰，故本次选用紫外分光光度法测定维生素B1含量，根据朗伯-比尔定律，利用紫外吸收光谱来进行定量分析，方法准确、简便、重复性好。
1. 仪器与试药1.1仪器紫外分光光度仪，分析天平，25mL棕色容量瓶，移液管。
1.2 试药维生素B1片；维生素B1生化试剂BR；0.1mol·L -1 HCl（自制）2．实验方法与结果2.1 样品预处理取维生素B1片20片（标示量为10.0mg），总重为1.23921g，其平均质量为61.96mg，充分研磨并混匀，称取3份样品置于25mL棕色容量瓶中，3份样品质量各为10.53mg、10.28mg、10.27mg，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL备用。
2.2对照品溶液配制维生素B1对照溶液：在分析天平上精密称取维生素B1 10.90mg置于25mL 棕色容量瓶，加0.1mol·L -1 HCl定容至25mL，作为维生素B1对照品储备液。
专业<杂质对照品>解决方案，代理中检所/EP/BP/USP/TRC/TLC/MC/STD等品牌。
以下优势品种杂质大量现货供应：
青霉素V、硫酸庆大霉素、紫苏霉素、强力霉素、阿霉素、卡那霉素碱、地红霉素、柔红霉素、非达霉素、达托霉素、
土霉素、表阿霉素、格尔德霉素、两性霉素B、硫酸新霉素、雷帕霉素、利福霉素、盐酸壮观霉素（盐酸壮大霉素）等；q：300-头孢系列：头孢丙烯，头孢西丁 ，头孢唑林，头孢呋辛，头孢克肟，氟氧头孢，头孢特仑新戊酯，头孢哌酮，头孢硫脒，-3438-头孢地尼，头孢克洛，头孢地嗪，头孢拉宗，头孢唑肟，头孢噻肟酸，头孢罗林酯，头孢吡肟，头孢拉定，头孢他美酯，
-021
杂质品种齐全未能一一陈述——欢迎咨询！！！。
2021.1基金项目:农业行业(国家)标准项目“制修订维生素B1注射液及片剂标准”(项目编号:2018H033)。
作者简介:陆春波(1972.2-),女,浙江省杭州市人,高级兽医师,研究方向:兽药质量标准技术研究。
HPLC 法测定维生素B 1注射液中维生素B 1含量陆春波林仙军阮鑫陈晓林(浙江省兽药饲料监察所311099)摘要:采用HPLC 法测定维生素B 1注射液的含量,采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(5μm ,4.6mm×250mm ),以甲醇-乙腈-0.02mol/L 庚烷磺酸钠溶液(含1%三乙胺,用磷酸调节pH=5.5)(7:7:86,v/v )为流动相,流速为1.0ml/min ,柱温为30℃,检测波长为246nm 。
结果表明:维生素B 1在1~200μg/ml 范围内线性良好,R 2=1.0000,平均回收率为99.76%(n=9),RSD 为0.4%。
本方法简便、准确、可靠,可用于维生素B 1注射液的质量控制。
关键词:维生素B 1注射液;含量测定;HPLCmice[J].Journal of Ethnopharmacology,2015,173:81-90.[30]周光炎.免疫学原理[M].2013.[31]Zhu H,Lu X,Ling L,et al.Houttuynia cordata polysaccharides amelio⁃rate pneumonia severity and intestinal injury in mice with influenzavirus infection[J].Journal of Ethnopharmacology,2018,218(23):90-99.[32]洪佳璇,江丽,唐法娣.鲜鱼腥草油对哮喘豚鼠气道收缩和炎症反应的影响[J].中国中医药科技,2011,18(4):313-314.[33]Du S ,Li H ,Cui Y ,et al.Houttuynia cordata inhibits lipopolysaccha⁃ride-induced rapid pulmonary fibrosis by up-regulating IFN-γand in⁃hibiting the TGF -β1/Smad pathway.[J].International Immunopharma⁃cology,2012,13(3):331-340.[34]郭亚丽,洪佳璇,唐法娣.鲜鱼腥草挥发油对慢性肺损伤模型大鼠肺组织中白介素-8、丙二醛含量的影响[J].江西中医学院学报,2011,23(5):55-57.[35]Ling L J ,Lu Y,Zhang Y Y,et al.Flavonoids from Houttuynia cordataattenuate H 1N 1-induced acute lung injury in mice via inhibition of in⁃fluenza virus and Toll -like receptor signalling [J].Phytomedicine,2019,67:153150.[36]王俊辉.复方鱼腥草制剂在断奶仔猪生产中的应用及其安全性评价研究[D].湖南农业大学,2007.[37]Yan L,Meng Q W,Kim I H.The effects of dietary Houttuynia cordataand Taraxacum officinale extract powder on growth performance,nutri⁃ent digestibility,blood characteristics and meat quality in finishing pigs [J].Livestock Science,2011,141(2-3):188-193.[38]吴华生,温刘发.鱼腥草提取物对肉鸡生产性能的影响[J].广东饲料,2019,28(12):34-36.[39]周业飞.鱼腥草对肉鸡生长性能及免疫力的影响[J].山西农业科学,2011,39(12):1310-1312.[40]赵枝新.日粮中添加鱼腥草对肉仔鸡生产性能、营养物质代谢及免疫力的影响[D].中国农业科学院,2008.[41]王盛楠.槲皮素对AA 肉鸡蛋白质消化利用的作用及机制[D].东北农业大学,2018.维生素B 1属于水溶性B 族维生素,在动物体内与焦磷酸结合成二磷酸硫胺,参与体内糖代谢中丙酮酸、α-酮戊二酸的氧化脱羧反应,为糖类代谢所必须。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。
中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。
采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法处方分析：组成处方量(g) 比例(%)10 16.39维生素B1淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。
平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。
1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm 的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%E）为421计算，即得。
1cm2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1250μg/ml的对照溶液。
HPLC 法测定复合维生素B片中B族维生素的含量摘要：目的：建立检测复合维生素b片的质量标准。
方法：采用高效液相色谱法来对复合维生素b片中的烟酰胺、维生素b。
维生素b2、维生素b6进行定性和定量分析。
结果烟酰胺、维生素b1、维生素b2、维生索b6平均回收率分别为烟酰胺：99.2%（rsd=0.77%）；维生素b1： 100.3%（rsd=0.87%）；维生素b2：99.9%（rsd=1.04%）；维生素b6：100.1%（rsd=0.65%）。
结论：该方法准确.灵敏度高，重现性好，可作为复合维生素b片的质量控制方法。
关键词：高效液相色谱法；维生素；复合维生素b片【中图分类号】r917【文献标识码】a【文章编号】1674-7526（2012）08-0283-02复合维生素b片是由维生素b1、维生素b2、烟酰胺、维生素b6和泛酸钙组成。
用于预防和治疗b族维生素缺乏所致的营养不良、厌食、脚气并糙皮病等。
维生素b1是糖代谢所需辅酶的重要组成成份。
维生素b2为组织呼吸所需的重要辅酶组成成份，烟酰胺为辅酶i及ii的组分，脂质代谢，组织呼吸的氧化作用所必需。
维生素b6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢。
泛酸钙为辅酶a的组分，参与糖、脂肪、蛋白质的代谢。
均为维持机体正常代谢和身体健康必不可少的重要物质。
该品种收载于卫生部药品标准化学药品及制剂第一册，没有建立四种维生素同时通过hplc法进行含量测定的方法[1]。
本文建立了一种采用高效液相色谱方法同时测定b族维生素含量的方法。
样品处理简单，方法准确，灵敏度高，可作为复合维生素b片的质量控制方法。
1仪器与试药waters 1225 高效液相色谱仪，烟酰胺对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100115-200703，含量99.9%），维生素吡哆辛（中国药品生物制品检定所，批号：100116-200502），维生素b1（中国药品生物制品检定所，批号：100090-200502），维生素b2（中国药品生物制品检定所，批号：100369-200502）；庚烷磺酸钠为分析纯，冰醋酸、三乙胺和甲醇均为色谱纯；复合维生素b片（自制：批号分别为20101001、20101002和20101003）。
