不同剂量链脲佐菌素建立1型糖尿病大鼠模型

1型糖尿病大鼠模型的制备及建模失败后补救措施与效果魏泽宁;张凤成;李传洁;王俊成;刘娜;李亚男【摘要】目的:研究通过链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导建立1型糖尿病大鼠模型的方法及首次建模失败后的补救措施及效果.方法:健康6-8周龄雄性Wistar 大鼠30只,随机分为2组,建模组25只,非建模组5只.给予建模组大鼠一次性大剂量腹腔注射STZ(65mg/kg),同时对非建模组大鼠腹腔注射相同体积的柠檬酸缓冲液.72h后检测大鼠的血糖值判断建模是否成功.对首次建模失败的大鼠常规饲养一周,再次腹腔注射STZ(65mg/kg),观察其成模状况.分别在建模后第0、2、4、6、8周测量大鼠的体重与血糖并观察其一般情况.于第8周处死全部大鼠,取胰腺标本进行HE染色和胰岛素的免疫组化染色,观察胰腺组织的病理学改变.结果:建模组有21只大鼠首次注射STZ 72h后,血糖值达到成模标准,4只血糖值未达到成模标准,再次注射STZ72h后血糖值检测均达到成模标准.持续观察8周,首次建模成功及补救建模组大鼠均成模稳定,糖尿病症状明显,未见血糖转复正常.非建模组大鼠各项指标均未见异常.与非建模组相比,首次建模成功组及补救组大鼠胰岛形态不规则,体积萎缩变小,胰岛内分泌细胞数量明显减少.胰岛素胰腺免疫组化检测发现,与非建模组相比,首次建模成功组和补救组胰岛素分布面积显著减少.结论:一次性大剂量腹腔注射STZ可制备有效、稳定的1型糖尿病大鼠模型.首次建模失败后,适时再次注射STZ 仍可制备高质量的1型糖尿病大鼠模型.【期刊名称】《口腔颌面修复学杂志》【年(卷),期】2016(017)003【总页数】5页(P135-139)【关键词】链脲佐菌素;1型糖尿病模型;大鼠【作者】魏泽宁;张凤成;李传洁;王俊成;刘娜;李亚男【作者单位】解放军总医院口腔科北京100853;解放军总医院口腔科北京100853;解放军总医院口腔科北京100853;解放军总医院口腔科北京100853;解放军总医院口腔科北京100853;解放军总医院口腔科北京100853【正文语种】中文【中图分类】R780.21型糖尿病又被称作胰岛素依赖型糖尿病，表现为胰岛β细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏，部分同时表现出胰岛素抵抗[1]。

链脲佐菌素诱导的高血糖对大鼠肾、肝及眼睛的影响张琪;刘亚千;陈华【摘要】目的通过不同剂量链脲作菌素(STZ)诱导1型糖尿病大鼠模型,探讨不同高血糖对脏器影响.方法实验分为STZ 40 mg/kg组,50 mg/kg组,60 mg/kg组,25mg/kg连续3次、每次间隔1 d(25 mg/kg*3)组,空白对照组.给药后0、1、3、7、11、24、48、72h检测血糖,之后每3 d测量1次,期间观察大鼠一般情况,并于第9周进行血生化以及胰腺、肾、肝及眼睛病理检查.结果 72 h内血糖检测:STZ造模时血糖先轻微升高后降低之后再大幅度升高.50 mg/kg和60 mg/kg组出现给药后第3天死亡现象,存活鼠成模率分别为70％、80％、100％、100％.期间血糖和体质量呈负相关,血糖顺序为:40 mg/kg＜50 mg/kg＜25 mg/kg*3＜60 mg/kg.40 mg/kg组于第10周出现白内障,其他实验组均于第8周出现白内障.第9周血生化检测发现40 mg/kg组insulin、C-Peptide、urea、UA、Cr、ALT、AST、TP、ALB正常,其它实验组均有波动.胰腺、肾、肝病理支持上述改变.结论25 mg/kg*3诱导高血糖最佳,其成模率高且高血糖稳定;高血糖的并发症的评估要将空腹和随机血糖相结合;不同的高血糖对肾、肝及眼睛影响不同,其中眼睛对高糖反应比较敏感,肾次之,肝影响最小.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2014(034)008【总页数】6页(P1098-1103)【关键词】1型糖尿病;链脲佐菌素;高糖血症;并发症【作者】张琪;刘亚千;陈华【作者单位】解放军总医院医学实验动物中心,北京100853;解放军总医院医学实验动物中心,北京100853;解放军总医院医学实验动物中心,北京100853【正文语种】中文1型糖尿病是儿童糖尿病的主要类型，其病理机制是自身免疫诱导胰岛beta细胞死亡，致使胰岛素绝对不足，进而血糖升高［1-4］。

小剂量多次链脲佐菌素腹腔注射诱导1型糖尿病小鼠模型及模型鉴定摘要：目的考察对C57BL/6J小剂量多次链脲佐菌素腹腔注射诱导1型糖尿病模型的成模率、模型鉴定及稳定性。

方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、链脲佐菌素50mg/kg多次给药组，考察多次给药后链脲佐菌素对小鼠血糖、血清胰岛素、IL-10、IFN-γ、胰腺组织的影响。

结果50mg/kg多次给药诱导C57BL/6J小鼠成模率为83.64%，空腹血糖值显著升高(P<0.01)，血清胰岛素和IL-10值明显下降(P<0.01)，血清IFN-γ含量明显增加(P<0.01)，胰腺组织中胰岛数目显著减少，胰岛周围及胰岛内出现胰岛炎。

结论小剂量(50mg/kg)多次链脲佐菌素腹腔注射C57BL/6J可诱导稳定可靠的1型糖尿病小鼠模型。

关键词：链脲佐菌素；1型糖尿病模型；腹腔注射；小剂量多次Multiple low dose intraperitoneal injection of streptozotocin-induced type 1 diabetes miceand model identificationAbstract：Objective To investigate the molded rate of type 1 diabetes and model stability of C57BL/6Jinduced by intraperitoneal injection of multiple low dose strptozotocin. Method Male C57BL/6J wererandomly divided into normal control group and streptozotozin 50mg/kg dose group, blood glucose,serum insulin, IL-10 and IFN-γ were measured after repeated administration of streptozotocin. ResultsThe molded rate of multiple 50mg/kg dose group was 83.64%, the fasting blood glucose serum IFN-γlevel were significantly higher than the normal group while the serum insulin and IL-10 valuesdecreased significantly (P<0.01). The number of islets of pancreatic tissue was significant reductionand insulitis occurs surrounding the islets. Conclusion Multiple low dose (50mg/kg) intraperitonealinjection of streptozotocin in C57BL/6J can induce stable mouse model of type 1 diabetes.Key words: streptozotocin; type 1 diabetes model; intraperitoneal injection; multiple low dose胰岛素依赖型糖尿病又名1型糖尿病，是由于机体自身反应性免疫应答攻击胰岛β细胞，使其遭破坏、功能缺失，从而导致胰岛素绝对缺乏所引起的糖尿病。

糖尿病大鼠模型的建立101实验动物SD大鼠，体重200-250克，8周龄。

02实验试剂1）STZ(链脲佐菌素)无色固体2-8℃干燥避光保存，115℃可分解为气体水溶液不稳定，溶于双蒸水或盐溶液。

但在低温下pH4-4.5是较为稳定。

2）柠檬酸钠，柠檬酸用于调制缓冲溶液。

03实验器材1ml注射器，大鼠固定器。

04试剂配制1）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH=4.5.0.1mol/L）配制0.1mol/L柠檬酸钠溶液，在用柠檬酸和氢氧化钠调节pH至4.5。

2）称量140mgSTZ溶解于10ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，配制成14mg/mlSTZ溶液。

05动物分组及造模1）大鼠自由摄食，饮水，动物房保持室温20-25℃，并维持一定的光照。

三天后，将大鼠随机分为实验组和对照组。

2）所有大鼠实验开始前12小时开始禁食但不禁水，禁食时间可根据情况顺延至18小时，但不要超过24小时。

3）将配置好的STZ溶液用锡箔纸包裹做避光处理并保存在冰水中，并在配制成功后30分钟内完整注射造模。

4）称量大鼠体重，采用腹腔注射给药进行造模，剂量为70mg/kg。

对照组注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。

06模型指标检测血糖测定：实验过程中腹腔注射STZ 48小时和72小时分段测定大鼠血糖并记录，采用剪尾采血法，使用血糖试纸进行检测。

※两次检测血糖浓度均高于16.8mmol/ml，即可认为造模成功。

07后期饲养糖尿病大鼠会有很明显的“三多一少”症状，所以尽量分笼饲养，勤换垫料，并保证足够的饲料和饮水供给。

糖尿病大鼠慢性溃疡伤口模型201实验动物SD糖尿病大鼠（八周以上大鼠，并糖尿病造模时间超过1周并少于2周）普通SD大鼠（八周以上，时间相近）。

02实验试剂1）水合氯醛（或戊巴比妥钠）用于麻醉实验大鼠。

2）医用酒精，表层消毒。

3）龙胆紫（或苦味酸，碘酊）创口标记染液。

4）试纸，标记创口，提前裁成直径为2cm的小圆片，并浸入标记染液中。

Ⅰ型糖尿病胃轻瘫大鼠动物模型建立与优化陈霞;赵宏贤;徐富翠;梅欣明;郭勇【摘要】目的探讨I型糖尿病胃轻瘫大鼠模型的建立方法,为糖尿病胃肠动力障碍研究提供合理的平台.方法链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射方法建立I型糖尿病动物模型,观察大鼠一般状况、血糖、胃排空、小肠传输速率.结果①模型组大鼠于造模后均出现糖尿病症状;平均体重明显低于对照组(P＜0.01);平均血糖浓度显著高于对照组(P＜0.01).②模型组大鼠胃内色素残留率明显高于对照组(P＜0.01);小肠传输速率显著慢于对照组(P＜0.01).结论链脲佐菌素一次性腹腔内注射10周后能成功诱导出糖尿病胃轻瘫大鼠模型.【期刊名称】《四川动物》【年(卷),期】2010(029)005【总页数】3页(P630-632)【关键词】糖尿病;胃轻瘫【作者】陈霞;赵宏贤;徐富翠;梅欣明;郭勇【作者单位】泸州医学院附属医院消化内科,四川泸州,646000;泸州医学院组胚教研室,四川泸州,646000;泸州医学院组胚教研室,四川泸州,646000;泸州医学院组胚教研室,四川泸州,646000;泸州医学院组胚教研室,四川泸州,646000【正文语种】中文【中图分类】Q95-33;R587.1Abstract:Objective To establish ratmodelsof typeⅠdiabetic gastroparesis and to provide reasonable approaches for research of gastrointestinal dysfunction of diabetes.M ethods SD ratswere randomly divided into a control group and model group.Rats in the model group were intraperitoneally injected with a single dose of streptozotocin(STZ)to induce typeⅠdiabetic models.General condition,blood sugar levels,gastric emptying,and the intestinal conduction velocity of ratsweredetected.Results Compared with rats in the control group:(1)Typical symptoms of diabetes mellitus appeared in the model group,in which the average weightwas significantly lower(P<0.01)and the average fasting concentration of blood glucose was significantly higher(P<0.01).(2)The rate of gastric residual pigment in the model group was significantlyhigher(P<0.01)and the intestinal conduction velocity of diabetic ratswas significantly lower(P<0.01).Conclusion Diabetic rats induced by STZ showed gastroparesismanifestation at 10 weeks.Key words:diabetes;gastroparesis糖尿病性胃轻瘫 (diabetic gastroparesis,DGP)是继发于糖尿病的以胃动力低下、胃排空延迟、胃节律紊乱为特点的临床综合征。

实验研究链脲佐菌素是从链霉菌中提取出来的一种抗生素，是诱导糖尿病动物模型的常用药物之一。

链脲佐菌素诱导1型糖尿病的发生与鼠的用药剂量有关[1]。

一般认为大剂量（250mg/kg，即约为LD50）链脲佐菌素对胰岛β细胞具有很大的毒性，可以引起暴发性的糖尿病，但也可对模型鼠肝肾功能造成影响，导致模型鼠死亡，选择合适的剂量是成模的关键。

本实验主要通过腹腔注射不同剂量（175mg/kg、200mg/kg、225mg/kg）链脲佐菌素诱导产生1型糖尿病动物模型，以探讨其可能的发病机制，并为该模型的应用提供实验依据。

1材料与方法1.1动物：Balb/c裸鼠，体质量25~50g，均雌性，自湘雅医学院动物部购买。

1.2实验方法：小鼠40只，术前1天晚上开始禁食，随机分为175mg/kg剂量实验组、200mg/kg剂量实验组、225mg/kg剂量实验组及对照组，每组各10只，链脲佐菌素用pH4.5，0.1mol/L柠檬酸缓冲液配制，实验组腹腔内注射相应剂量链脲佐菌素（购自Sig-ma公司），空白对照组腹腔内注射柠檬酸缓冲液。

1.3观察指标：血糖：由美国强生公司的One touch two血糖仪和血糖试纸条测定。

每天分别测空腹血糖（末梢全血快速血糖测定法:剪尾取血，血糖仪检测）1次，动态监测1型糖尿病模型形成，以血糖≥11mmol/L持续2次为模型制作成功，未成模小鼠3d后腹腔注射半剂量链尿佐菌素，继续动态观察血糖，若仍低于此值弃去。

实验环境室温24~25℃，相对湿度50%~60%，自由进食全价颗粒饲料、饮水，每日观察记录其症状、体征、一般情况和死亡情况，称重第四周结束实验，处死小鼠取胰腺行病理学检查（HE染色及胰岛素免疫组化染色），体质量记录从禁食日开始。

1.4数据处理：结果以均数±标准误差（x±s）表示，用t检验及方差分析做均数比较，检验的显著性水准P<0.05。

2结果2.1日常观察：腹腔造模后至观察期末，D组小鼠死亡2只，其他组未发生小鼠死亡。

・２１８・・实验研究・ＳＤ大鼠１型糖尿病动物模型的建立唐山钢铁集团有限责任公司医院（０６３０２０）常利民上海交通大学医学院附属第九人民医院蓑蓑言妻姜主妻萎【摘要】目的探讨制作理想糖尿病动物模型的方法。

方法采用空腹腹腔一次性注射６５ｍｇ／ｋｇ链脲佐菌素的方法，建立ｓＤ大鼠１型糖尿病模型。

结果造模１周后测血糖均高于１６．７ｍｎ帕Ｉ／Ｌ。

持续观察８周，血糖值始终在建模初期高血糖水平上波动，未见到复转，并出现典型的“三多一少”症状，胰腺符合糖尿病成模动物胰腺病理变化。

结论采用空腹腹腔一次性注射６５ｍｇ／ｋｇ链脲佐菌素的方法复制出１型糖尿病模型，具有造模方法简便、用药量小、药物毒性较低、胰岛Ｂ细胞损害特异性高等优点，可应用于糖尿病及其并发症研究的各个领域。

【关键词】糖尿病，１型；模型，动物；链脲佐菌素Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｅｓｒａｔｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙｓｔｒｅｐ蝴ａ翻ＮＧＬｉ－ｍｉｎ’，ＤＯＮｒＧ胁一ｓｈｅｎｇ，Ｘ【，Ｈｕａ，ＷＡＮＧＬ“一∥携ｇ，ＤＡＩＣＡｕａｎ－ｃｈａｎｇ，ＺＨＵＬｉａｎ，ＷＡＮＧＹｉ－ｍｉｎ．％，培妣纰ＩｒｏｎａｎｄＳ纰ｆＣｏ．，Ｌｔｄ．Ｈｏｓｔ，／一ｔｏ．／，Ｈｅｂｅ／０６３０２０，Ｃｈｉｎａ【Ａｌ麓ｔｒａｅｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈ嬲ｉｄｅａｌｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅＵｉｔｕｓＳＤｒａｔｓｎ如ｄｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ∞ｒａｔｓｗ虢ｉｎ—ｊｏｅｔｅｄｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｗｉｔｈ６５ｍｇ／ｋｇｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｅｉｎｏｎｃｅｔｏｉｎｄｕｃｅｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ．ＲｅｓｕｌｔｓＯｎｅｗｅｅｋａｆｔｅｒｉｎｄｕｃｅｄｂｙｓｔｒｅｐｔｏ∞ｔｏｃｉｎ（ＳＴＺ），ｔｈｅｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ１６．７ｒｒａｎｏｌ／Ｌ．Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅ８ｗｅｅｋｓｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｔｈｅｂｌｏｏｄｇｌｔｌｇｘ】ｓｅｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｔａｂｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ１６．７ｍｎ的Ｉ／Ｌ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ０１１ｐａｒｌｃｌＰ．ｓｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆｉｓｌｅｔｓ，ｌｏｓｓｏｆｐｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐ．Ｃ０ｎｄｌｌｓｉ帅ｍ既一ｐｅｒｉｍｅｎｔｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｉｄｅａｌｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅＵｉｔｕｓＳＤｒａｔｓｎｘｘＪｄ，【ＫｅｙＷＯＩ＇凼】Ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ，ｔｙｐｅｌ；Ｍｏｄｄ，ａｎｉｍａｌ；蛳ｔ０跹舡）ｃｉｎ随着人们生活水平的提高，糖尿病的发病率呈上升趋势，糖尿病的相关研究越来越受到人们的重视，而建立相应的动物模型是研究糖尿病的重要手段之一。

链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型STZ 诱发糖尿病动物模型的原理STZ对一定种属动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用，能诱发许多动物产生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造动物模型。

国外有学者报道选用雄性大鼠制造模型的成模率明显高于雌性大鼠。

1型糖尿病与2型糖尿病动物模型的制备与STZ注射的剂量有关系：大剂量注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成1型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类2型糖尿病的动物模型。

造模前的喂养Ⅰ型糖尿病模型成模比较快，通常大鼠在普通饲料适应性喂养2周后即可开始造模Ⅱ型糖尿病模型：高脂饮食诱导加小剂量STZ。

造模前喂以高脂（高糖）饲料，诱发出胰岛素抵抗。

高脂（高糖）饲料高脂（高糖）饲料成分：其中含10%蔗糖，10%猪油，5%胆固醇由基础鼠饲料加蔗糖、炼猪油和蛋黄按比搭配制作高脂高糖饲料：其比例为猪油18 % ,蔗糖20 % ,蛋黄3 % ,基础饲料59 %。

预实验的重要性很重要。

实验时STZ的给药量应参照预实验的结果，尽量不要盲目按照文献上或他人的给药量来直接使用，鼠均重和空腹（低糖状态）抗药力、禁食时长、注射选时、以及之前饲养过程、测糖选时等都不相同，通过预实验来确定符合自己实验鼠的给药计量，才是最科学的。

常用给药剂量Ⅰ型糖尿病模型：大鼠剂量为70～65mg/KgⅡ型糖尿病模型：高糖高脂喂养1～2 个月的大鼠,STZ 剂量在25～40mg/Kg或参考文献（鼠均重不同，本剂量以200克均重为例）。

配置STZ溶液柠檬酸缓冲液的配制：柠檬酸（FW:210.14）2.1g加入双蒸水100mL中配成A液柠檬酸钠（FW:294.10）2.94g加入双蒸水100mL中配成B液链脲佐菌素配制液：用时将A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH计测定ph值,调节ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。