if免疫荧光和免疫组化

检测抗原抗体方法
抗原抗体方法，即通过检测抗原与抗体之间的相互作用来诊断疾病或进行实验研究。

常见的抗原抗体方法包括：
1. 免疫组化（immunohistochemistry，IHC）：用特异性抗体结合组织切片中的抗原，通过染色方法来研究抗原在细胞或组织中的分布和表达水平。

2. 免疫荧光（immunofluorescence，IF）：用荧光标记的抗体与样品中的抗原结合，通过荧光显微镜观察抗原的位置和表达情况。

3. 酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）：将抗原固定在试验板上，然后使用特异性抗体结合抗原，通过加入底物使酶反应产生信号，最后用光学检测方法定量测定抗原或抗体的浓度。

4. 免疫印迹（Western blotting）：将蛋白质样品经电泳分离后转移到膜上，然后使用特异性抗体结合目标抗原，通过化学发光或染色方法来检测抗原的存在和表达水平。

5. 免疫沉淀（immunoprecipitation）：将抗体与抗原结合，在复合物中加入磷酸盐珠或蛋白A/G琼脂糖使其沉淀，然后通过洗涤和离心来分离复合物，最后用其他方法进行进一步分析或检测。

这些方法可以用于诊断感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等，并且在生物医学研究中有广泛应用。

免疫组化染色和免疫荧光染色英文回答：Immunohistochemistry (IHC) vs. Immunofluorescence (IF)。

Immunohistochemistry (IHC) and immunofluorescence (IF) are both immunostaining techniques used to localizespecific proteins or other molecules within cells or tissues. While they share some similarities, there are also key differences between the two techniques.IHC.Uses antibodies conjugated to an enzyme (e.g., horseradish peroxidase) or a hapten (e.g., biotin)。

Detects proteins using enzymatic or chemical amplification.Produces a permanent, brown or red precipitate at thesite of antibody binding.Can be used on formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue sections or frozen tissue sections.Typically provides good spatial resolution but limited sensitivity.Can provide semi-quantitative or quantitative data (e.g., number of positive cells, intensity of staining)。

1甲醛（formaldehyde）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。

易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。

用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。

10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。

对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。

经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。

2 乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。

固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。

3 中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4•H2O）4g，磷酸氢二纳（Na 2HPO4）13g。

此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。

4 AF液（混合固定液）95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。

也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5 ml。

此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。

以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。

IF免疫细胞化学和免疫荧光实验载玻片/盖玻片处理聚醚酰亚胺或多聚赖氨酸在室温下包被盖玻片1小时。

无菌水冲洗盖玻片（3次，每次5分钟）。

可将盖玻片干完全干燥，并在紫外光下消毒至少4小时。

在玻片上种植细胞，或准备细胞离心涂片器，或做好涂抹准备。

磷酸盐缓冲液（ PBS ）进行简短的冲洗。

第一步：细胞固定用预冷的甲醇、丙酮（ 1-10分钟），或3-4 ％甲醛（PBS的pH值7.4）室温（或者-20 ℃)固定细胞片15分钟。

用预冷的PBS冲洗细胞片两次。

透化：如果目的蛋白是胞内表达，透化细胞非常重要。

注：丙酮固定标本不需要透化。

用含0.25% Triton X-100或100 μM 洋地黄皂苷 or 0.5% 皂苷的PBS室温孵育标本10分钟。

排雷攻略：⼀⽂教会你免疫组化、免疫荧光如何制⽚看⽚最近带着新进门的研⼀师妹做实验，师妹问了三个问题：1、免疫组化和免疫荧光的区别？2、这两种实验该在什么情况下选择？3、组织是不是只能做免疫组化，细胞是不是只能做免疫荧光？4、免疫荧光为什么要做DAPI染⾊？我听完之后笑了，这种思考的态度是好的，但其实，师妹问的这⼏个问题就是⼀个问题。

归根结底，涉及到“免疫”⼆字总是离不开抗原抗体反应的，⼆者都属于免疫检测技术⼿段，⽽免疫组化和免疫荧光两项技术都可以应⽤在组织和细胞⽅⾯，前者采⽤的是化学发光的⽅法，后者是荧光。

因为我们在⽂献中看到的，很多⼈都会选择做组织的免疫组化、细胞的免疫荧光，所以这就给初⼊实验室的新⼿们带来了误区。

其实⽹上已经有很多详细的操作步骤，所以⼩六⼉今天想为各位新⼿朋友们总结⼀下我认为的免疫组化和免疫荧光制⽚看⽚的⼩技巧，帮助⼤家排雷区，同时也提出⾃⼰的⼀些疑问，希望能得到解答（因为本⼈只做过组织的免疫组化和细胞的免疫荧光，以下内容以这两⽅⾯为主，内容若有⽋缺，欢迎⼤家补充）。

免疫组化1、取材时要尽量去除⾎液的⼲扰：⼩⿏⿇醉后，从左⼼⽿插⼊针头，⼼尖处剪开⼀个⼩⼝，然后将PBS缓慢打⼊⼼脏中，缓慢跳动的⼼脏会将PBS运送⾄全⾝。

50ml的PBS⽤量对于Balb/c或昆明⼩⿏的体积⽽⾔就已⾜够，这⼀步骤对于像肺、肝和脾脏这样⾎管丰富的脏器取材极为重要。

2、取材时要尽量做到表⾯积⼤、厚度⼩：理想的取材厚度是2mm，这样的尺⼨可以让后续的固定、脱⽔等操作达到理想的效果。

器材选择上，⼿术⼑和超市购买的⼑⽚都可以，只要⼑⽚锋利即可，切勿反复切割揉搓组织。

因为脏器的表⾯都是弧形，并且质地很软，如果你直接取材，第⼀是不好切，第⼆是弧形的⼀⾯肯定是厚度超标，所以这⾥建议各位将组织置于碎冰上后，沿着长轴在横切⾯处再切⼀⼑取材（针对实质性器官，且不要求取材部位）。

3、取材后的组织需⽴即固定：固定不仅是要保留组织原有的形态，也是在保留组织中的抗原。

请问你曾经被ＩＨＣ、ＩCＣ和IF所困扰过吗?作者：北京义翘神州在实验中,有没有一种感觉,就是对免疫组化(ＩHＣ),免疫细胞(ICC)，以及免疫荧光(IF)傻傻分不清,那么今天我们就来讨论一下这三者的区别,先贴图上来以便有个大致的区分。

从图中我们可以看出，免疫检测技术可以根据报告标签的不同，分为免疫化学和免疫荧光两类，而根据样品类型不同,可以分为组织和细胞检测技术。

因此，才会延伸出三个相近的概念。

为了更好的区分这三个概念,我们还可以根据他们的英文词根来分析一下,他们的英文名分别是免疫组织化学Ｉｍｍuｎｏhistoｃｈｅmistry (ＩHＣ)，免疫细胞化学Imｍunocyｔocheｍisｔry (ＩＣC），免疫荧光 Imｍｕnofluｏresｃｅnｃｅ (ＩＦ)。

词根分析:Immuno－指的是免疫技术(例如，抗体和抗原的结合）Histｏ-指的是组织(细胞以及它周围的细胞外基质)Cyｔo-指的是细胞(不包含细胞外的基质)Chｅmistry-在这里指的是化学检测方法（例如,颜色的变化)Fluｏrｅscence-对被激发的荧光团的检测通过对词根的解释，相信你在心中不再迷茫了吧。

这三个应用技术都属于免疫技术,都是将抗原与抗体的结合可视化,即通过一定的方法可以直接看到实验结果。

而常用的方法就是化学显色和荧光显色。

如果报告标签是酶促的,就是免疫化学,如果是荧光的，就是免疫荧光。

其实我们纠结免疫荧光的一个原因还在于免疫荧光的英文名字Iｍmunｏｆluoresｃｅｎce （IF),但若是写成免疫组织荧光(IHＦ)或是免疫细胞荧光(IＣF），那我们是不是就豁然开朗了。

虽然这两个词汇在英文文献中应用的还不是很广泛,但绝对不是我自己杜撰的哦，已经有些学者在使用了，规范化应该也只是时间的问题。

可能文字描述还是有些晦涩难懂,那我们就直接上图吧。

先不看下面答案,仅从几张图片,你能明白哪张图代表哪种应用吗?A免疫组织化学：兔EGFR单克隆抗体（1００01-R043-50)—人胎盘B 免疫细胞化学:兔α微管蛋白单克隆抗体抗—MEF1细胞Ｃ免疫荧光组织：兔Cdk５单克隆抗体—鸡脑组织D免疫荧光细胞:兔ＪNK2/ＭAPK9（10745-R0０4-5０）单克隆抗体—人Hela细胞A图和B图是免疫化学（Ｉmmuｎｏcｈｅmｉstry），这种应用是抗体检测目标蛋白,发生了化学反应,然后显色，根据样本类型的不同,又可以分为免疫组织化学（A）和免疫细胞化学(B）。

免疫组化,免疫荧光
免疫组化（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光（Immunofluorescence，简称IF）是常用于研究细胞和组织中蛋白质分布和定位的实验技术。

免疫组化：免疫组化是通过使用特异性抗体来检测和定位组织切片中特定蛋白质的技术。

它包括将组织切片与特异性抗体结合，然后使用染色试剂使抗原-抗体复合物形成染色反应，从而可视化目标蛋白质的位置。

该技术常用于研究细胞分化、组织病理学和肿瘤学等领域。

免疫荧光：免疫荧光是利用荧光染料（荧光标记的二抗或直接标记的一抗）结合目标抗原的方法来检测和定位组织或细胞中的蛋白质。

通过特异性的抗体与目标蛋白质结合，然后使用荧光标记的二抗或直接标记的一抗与抗原-抗体复合物结合，使目标蛋白质在显微镜下产生荧光信号，以观察其位置。

免疫荧光技术广泛应用于细胞生物学研究、免疫学和医学诊断领域。

这两种技术在原理上非常类似，但在应用上有一些区别。

免疫组化主要用于固定的组织切片，可用于定量和定位分析。

而免疫荧光通常用于固定的细胞，可以提供更高分辨率的蛋白质定位信息，并可以进行多色荧光共标记以研究多个蛋白质的相互作用和定位。

无论是免疫组化还是免疫荧光，都依赖于合适的抗体选择和样本处理步骤来确保结果的准确性。

技术的选择应根据研究
的目的和样本的性质进行评估和决策。

免疫组化法和免疫荧光染色法是生物医学领域常用的实验技术，它们在细胞和组织的研究中扮演着重要的角色。

虽然它们都是用于检测特定蛋白在生物样本中的表达情况，但在操作方法、原理和应用范围上却有着明显的区别。

在本文中，我将深入探讨这两种技术的区别，并就其在生物医学研究中的应用进行全面评估，以期帮助读者更深入地理解并灵活运用这两种技术。

1. 免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织或细胞中特定蛋白表达的技术。

它的操作流程大致包括取材、固定、脱水、包埋、切片、脱蜡、抗原修复、蛋白质检测、染色和显微镜观察等步骤。

在实验过程中，首先需要将样本切片，并通过特定的固定、脱水和包埋步骤将其固定在载玻片上。

随后，利用抗原修复方法还原蛋白的空间结构，以便后续的免疫染色。

接下来，通过加入特定的抗体和标记物，可以对目标蛋白进行特异性染色，并最终通过显微镜观察蛋白在组织或细胞中的表达情况。

2. 免疫荧光染色法免疫荧光染色法是利用特定抗体与荧光染料结合，通过检测荧光信号的方式来标记和检测生物样本中的特定蛋白表达。

它的操作流程也包括取材、固定、脱水、包埋、切片等步骤，与免疫组化法的操作步骤较为类似。

不同的是，在免疫荧光染色法中，需要利用特定的荧光标记的二抗或荧光素-抗素进行染色，通过激光共聚焦显微镜等设备观察样本中荧光的分布情况，从而检测目标蛋白的表达位置和水平。

在应用范围方面，免疫组化法主要用于研究组织切片或细胞样本中特定蛋白的表达情况，可以定量地评估蛋白的表达水平和分布情况，适用于体内和体外实验样本。

而免疫荧光染色法由于其高灵敏度和高分辨率的特点，适用于细胞共聚焦显微镜观察，可以用于检测细胞中蛋白的定位、表达和相互作用等，是细胞生物学和免疫学研究中常用的技术手段。

在本文中，我主要介绍了免疫组化法和免疫荧光染色法的操作原理、步骤和应用范围，并就其在生物医学研究中的应用进行了全面评估。

通过对这两种技术的深入了解，我们可以更好地选择合适的技术手段，并在实验设计和结果分析中更加灵活地运用这些技术来开展生物医学研究。

免疫组织化学（Immunohistochemistry，简称IHC）和免疫荧光染色（Immunofluorescence，简称IF）是两种常用的免疫细胞化学技术，用于在组织切片或细胞涂片上检测特定蛋白质或抗原的存在和分布。

这两种技术都依赖于抗体与抗原之间的特异性结合反应。

免疫组织化学是一种使用酶标记抗体来检测抗原的方法。

在这个过程中，首先将组织切片与特定的初级抗体（针对目标抗原的抗体）孵育，然后洗涤以去除未结合的抗体。

接下来，将切片与带有酶标记的次级抗体（针对初级抗体的抗体）孵育。

再次洗涤后，加入酶的底物，它会在酶的作用下产生颜色沉淀，使得抗原的位置在显微镜下可见。

常用的酶包括过氧化物酶和碱性磷酸酶。

这种方法的优点是可以产生永久性的记录，因为颜色沉淀是稳定的。

免疫荧光染色则涉及使用荧光染料标记的抗体来检测抗原。

在这个过程中，初级抗体和次级抗体都带有荧光标记。

当这些抗体与抗原结合时，它们发出的荧光可以在荧光显微镜下观察到。

这种方法的优点是可以同时使用多种颜色的荧光染料来检测多个不同的抗原，而且荧光信号通常比免疫组织化学的颜色反应更强。

两种技术都有其应用范围。

免疫组织化学常用于病理学诊断，因为它可以用于存档的组织样本，并且结果可以用常规显微镜观察。

而免疫荧光染色则更适合于研究目的，特别是在活细胞成像和多标记实验中，因为它可以提供更丰富的信息和更高的灵敏度。

总之，免疫组织化学和免疫荧光染色都是强大的工具，它们使得科学家能够在细胞和组织水平上可视化蛋白质的表达和定位。

选择哪种技术取决于实验的具体需求和可用的设备。