金针菇液体培养基优化研究

K2 0
1 .715 1 .744 1 .639
K3 1 .009 1 .314 1 .209 1 .285
R 3 .259 0 .476 0 .535 0 .354
0 .381
由表2 可见, 对菌丝体干 重影响主次顺序为 A > C > B > D, 即氮源对金针菇菌丝生长影响最大。对 K 值分析得 出水 平最 优组 合为 A1B2C2D2 , 即最 佳 碳源 为 可 溶性 淀 粉, 最 佳氮 源为 黄豆 粉, 最佳 无机 盐为 KCl , 最佳 维生 素为 VB2 。金 针菇 在无 机氮 源上 不能 生长 。
金 针菇( Fla mmuli ng vel utipes Cart .Si ng) , 属 伞菌 目 口蘑 科 金钱菌 属[ 1] 。金针 菇干 品 蛋 白质 含 量 高 达30 % , 含 有18 种 氨基酸, 其中人体必需氨基酸8 种, 精氨酸和赖氨酸含量丰 富。人工栽培金针菇生长周期长, 受环境影响大, 产量低、品质 差, 生产成本较高。液体培养可克服以上不足[2] 。笔者对金针 菇液体培养基进行了优化, 为工业化大生产提供理论依据。 1 材料与方法 1 .1 材 料 ①菌 种。由 湖北 民 族 学院 微 生 物实 验 室 提 供。 ②斜 面培 养 基。PDA 培 养 基 : 马 铃 薯 20 % , 蔗 糖 2 % , 琼 脂 2 % ,pH 值自 然 。 ③ 活 化 培 养 基。 同 斜 面 培 养 基 。 ④ 液 体 菌种 培养 基。 马铃薯 20 % , 葡萄 糖1 % , 麦 芽 糖1 % 。MgSO4 0 .15 % , K2HPO4 0 .1 % ,pH 值 6 .86 。 1 .2 方 法 1 .2 .1 供试 菌种 的活 化。 在无 菌 条 件 下, 用 接 种 铲 从 斜 面 菌种 上切 取1 c m2 的 菌 块 接 种 至 PDA 斜 面 培 养 基 上,25 ℃ 恒温 培 养 6 d , 挑 选 菌 丝洁 白 、粗 壮、浓密 、无 污 染 的 斜 面 作 为供 试菌 种。 1 .2 .2 接种 与培 养。 在无 菌条 件 下, 用 接 种 铲 从 供 试 菌 种 的斜 面上 切取 1 c m2 的 菌 块 接 种 至 液 体 菌 种 培 养 基 上,25 ℃恒温振荡培养6 d。将液体菌种接种至发酵培养基上, 发 酵培 养基 由4 因子 3 水平 正交 试 验 确定 最 佳 碳 源、氮 源、无 机盐 和维 生素 以及 最佳 配比 。 1 .2 .3 菌丝 体干 重测 定。 将培 养 好 的 菌 丝体 用 滤 纸 过 滤, 然后用蒸馏水冲洗3 遍, 放在已烘干与称重的培养皿上, 放 入干 燥箱 中105 ℃烘 干0 .5 h , 再称 重, 直至2 次 称重 的重 量 不超 过2 mg 即 为恒重 。 2 结果与分析 2 .1 不 同碳 源、氮 源 、无 机 盐 与 维 生 素 对 金 针 菇 菌 丝 生 长 的影响 选取影响金针菇菌丝生长的4 个主要营 养因子,
K3 4 .744 5 .680 5 .668 4 .735
R 0 .754 1 .673 2 .570 0 .563
1 .258
由表4 可见, 对菌丝体 干重影响主次顺序为 C > B> A > D, 即改变可溶性淀粉的浓度 对菌丝生长影响最大。对
K 值 分析 得出 水 平 最 优 组 合 为 A2B3C1D2 , 即 最 佳 培 养 基 为 3 % 可溶性 淀粉 、4 % 黄 豆粉 、0 .15 % KCl ,7 .5 mg/ 100 ml VB2 。 3 结论与讨论 3 .1 不 同碳 源、氮 源 、无 机 盐 与 维 生 素 对 金 针 菇 菌 丝 生 长 影响 氮源对金针菇菌丝生长影响最大, 金针菇对黄豆粉 的利用好于其他氮源。使用黄豆粉作为氮源时, 菌丝生长 旺盛, 生物量高。而使用无机氮源作为氮源时, 金针菇根本 不生长。说明, 金针菇不能利用无 机氮作为氮源。这可能 是因为: 当使用无机氮源作为氮源时, 菌丝必须利用无机氮 合成自身生长所需要的氨基酸, 而有些氨基酸是不能通过 菌丝 自身 合成 的[ 3] 。 严 格 地 说, 黄 豆 粉 的 营 养 成 分 比 较 复 杂, 不 仅含有 蛋白 质, 而 且还含 有其 他 一些 成 分, 如 脂 肪、碳 水 化 合 物、无 机 盐 和 维 生 素 等。 至于 黄 豆 粉 中 的 其 他 营养
作者 简介 姜 宁( 1968 - ) , 女, 江 苏 南通 人 , 讲师 , 从事 生 物化 学 的教 学和研究工作。
收稿 日期 2007-04-02
即碳 源、氮源 、无 机盐 和维 生 素, 采 用 L9( 34) 正 交 表 , 试 验数 为9 。碳 源为 葡萄 糖、麦芽 糖和 可溶 性淀粉 ; 氮源 为黄豆 粉、 硫 酸 铵、蛋 白 胨; 无 机 盐 为 KCl 、K2HPO4 、KH2PO4 、维 生 素 VB1 、VB2 、VB6 ; 其 中3 % 黄豆 粉为 将3 % 黄豆 粉煮 沸30 mi n ,4 层纱 布过 滤, 取 滤 液。 测 定 菌 丝 体 干 重 , 确 定 最 佳 碳 源、氮 源、无 机盐与 维生 素。 试验 设计 见表1 。
表1
液体 培养 基试验 因素 与水平
水 平 A 氮源
B 无机盐
C 碳源
D 维生素
1 黄豆粉3 % K2 HPO4 0 .05 % 葡萄糖3 %
VB6( 10 mg/ 100 ml)
2 硫酸铵3 % KCl 0 .05 %
可溶性淀粉3 % VB2( 5 mg/ 100 ml)
3 蛋白胨3 % KH2PO4 0 .05 % 麦芽糖3 % VB1( 5 mg/ 100 ml)
1
1
1
1
菌丝 干重
g/ 100 ml 1 .545
2
1
2
2
2
1 .244
3
1
3
3
3
1 .949
4
2
1
2
3
0 .881
5
2
2
3
1
2 .138
6
2
3
1
2
2 .473
7
3
1
3
2
1 .581
8
3
2
1
3
1 .905
9
3
3
2
1
K1 4 .738 4 .007 5 .923 4 .941
K2 5 .492 5 .287 3 .353 5 .298
Study on the Optimization of Liquid Culture Mediumin Fla mmuli ng velutipes Cart .Sing JI ANG Ning et al ( College of Biological Science and Technology ,Hubei Institute for Nationalities ,Enshi ,Hubei 445000 ) Abstract The ai mof the study was to opti mize the liquid culture mediumin Fl a mmuli ng velutipes Cart .Sing .In orthogonal experi ment 4 major nutrient factor selected was carbon source ,nitrogen source ,inorganic salt and vitami n to study the effects of different carbon sources and nitrogen sources ,salts and vitami ns and their different proportion on the mycelial growth and deter mine the opti mumculture mediumfor the mycelial growth in F . Velutipes The optimumcarbon source for liquid culture of F . vel utipes was soluble starch ,the opti mum nitrogen source was soybean powder ,the opti muminorganic salt was KCl ,and the opti mum vitamin was VB2 .The opti mumformula of culture medium was as follows : 3 % soluble starch ,4 % soybean flour ,0 .15 % KCl ,7 .5 mg/ 100 ml VB2 .The study provided a theoretical basis for the industrialization production of F . vel utipes . Key words Fla mmuling velutipes Cart .Sing ;Liquid culture ;Medium
表3 培养基4 个主要营养因子不同配比试验因素与水平
水平 1
黄豆粉( A) % 3
KCl( B) %
0 .05
可溶性淀粉( C) % 3
VB2( D)
mg/ 100 ml 5 .0
2
4
0 .10
4
7 .5
3
5
0 .15
பைடு நூலகம்
5
10 .0
表44 个主要营养因子不同配比对金针菇菌丝生长的影响
因素
序号
A
B
C
D
1
6 430
安徽 农业科 学
2007 年
2 .2 不 同碳 源、氮 源 、无 机 盐 和 维 生 素 的 配 比 对 金 针 菇 菌 丝生 长的 影响 将 试验 所得最 佳碳 源 、氮源 、无 机盐 和 维 生 素按 不同 配比 , 采 用 L9( 34) 正 交 表 , 试 验 数 为 9 。试 验 设 计 见 表3 。其 中黄 豆粉 为将 黄豆 粉煮 沸30 min ,4 层纱 布过 滤, 取滤液。测定菌丝体干重, 确定4 个主要因子的最佳配比。