实验四 葡萄果实中花色苷提取与测定
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葡萄皮中花色苷和油的提取一. 实训目的:1.会通过查阅文献资料,搜集有关数据,并正式选用公式的能力。
当缺乏必要数据尚需自己通过实验测定或在生产现场进行实际查定。
2.在兼顾技术上先进性,可行性,经济合理性的前提下,学生能够综合分析设计任务要求,确定仪器分析测定。
进行设备选型,并提出保证过程正常,安全运行所需要的监测和计量参数,同时,还要考虑改善劳动条件和环境保护的有效措施。
3.进一步巩固、提高已有的实验操作技能,掌握常规工艺试验技术,常规检验技术,学会设计工作思路、方法、步骤,受到技术员的基本训练,提高技术实施能力。
4.能够用精炼的语言,简洁的文字,清晰地的图标来表达自己的实际思想和实验结果。
5.树立严谨的科学作坊的良好的工作习惯,提高独立思考和与他人合作完成任务的能力。
二、实训场所:北京电子科技职业学院色谱分析实验室及生化实验室。
三、实训要求:1.论述相关企业中分析仪器的种类,尤其侧重于气象色谱仪、液相色谱仪、紫外可见以及酸度计等仪器的使用。
2.测定方法依据和方法原理。
3.样品及采样过程。
4.分析工作质量保证措施。
5.测定数据记录以及数据计算处理过程。
6.报告测定结果,对样品质量作出评价7.分析工作质量作出自我评价四、实训内容及安排:(一)课程设计的主要任务:1.葡萄皮中花色苷和油的提取本组做的是葡萄皮中油的提取。
五、实训过程:12月26日查阅相关资料确定实验方案1、超声波提取法:利用超声波破碎细胞(空化)和强化传质作用(机械作用),使溶剂分子渗透到组织细胞中,能更好地与溶质分子接触,使细胞中可溶成分更好地释放出来。
它具有操作简单、提取温度低、提取率高、提取物结构不易被破坏等优点。
近年来,研究者们已将超声波技术应用到多种油脂的提取中。
相关研究表明,对比无水乙醇、丙酮、石油醚和正己烷四种提取剂在超声波作用下对油的提取效率,石油醚为较适宜的提取剂。
以石油醚作为提取剂时,最佳提取工艺为超声时间25min,功率500W循环泵转速1200r/min ,料液比1: 5, 在此条件下提取率可达94. 1 2%。
花色苷的提取及分析研究进展王化;周丽萍;于志民;吕品;张悦【摘要】花色苷是广泛存在于自然界植物中的一类黄酮类化合物,来源广泛、种类繁多且具有多种保健功能,具有较好的开发利用价值和应用前景,近年来一直是国内外研究的热点之一.文章综述了花色苷的结构及稳定性、提取和纯化以及分析方法的研究进展,旨在为进一步展开植物花色苷的研究提供参考.【期刊名称】《国土与自然资源研究》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】4页(P85-88)【关键词】花色苷;稳定性;高速逆流色谱;离子迁移质谱【作者】王化;周丽萍;于志民;吕品;张悦【作者单位】黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040;黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040;黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040;黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040;黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】Q946花色苷(Anthocyanin)一词是Marguart在1835年首先用来命名矢车菊花朵中的蓝色提取物时提出来的,现为同类物质的总称[1]。
大量研究表明,花色苷广泛存在于自然界中植物的细胞液中,使根、茎、花、叶、果实呈现蓝、紫红、红等不同颜色。
花色苷属黄酮类物质,具有较好的营养及药理作用,在医药、食品、化妆品等领域有很大应用潜力。
近年来,花色苷受到越来越多的关注,研究表明,花色苷能以糖苷的形式进入体内,具有抗氧化、抗肿瘤、保护视力、保护心血管、保护肝脏等多种生理功能[2,3],采取适当的方法对花色苷结构进行深入研究可与其功能研究相辅相成,相得益彰。
本文主要根据近年来对花色苷化合物的研究,对国内外关于花色苷的结构及稳定性、提取和纯化以及分析方法的研究进展予以简要综述。
一、摘要⑴、葡萄皮色素来源较为丰富。
葡萄果皮花色苷不但含量高, 而且种类多,葡萄花色苷作为一种天然食用色素, 安全、无毒,且具有降低肝脏及血清中脂肪含量、抗氧化、抗肿瘤、延迟血小板凝集等多种生理和药用活性功能对葡萄皮花色苷的提取技术及稳定性的研究具有重要意义⑵、目前为止花色苷的定量分析方法主要有直接比色法、pH示差法、亚硫酸脱色法、色谱法,本次实训我们采用液相色谱法对花色苷进行提取。
⑶、用于液相色谱法提取葡萄酒中的花色苷前要进行样品的预处理,再测定其中的花色苷来判断葡萄酒或者葡萄皮中的花色苷,标定是否合格以及是否符合国家标准。
二、关键词⑴花色苷⑵液相色谱⑶分光光度计三、正文引言花色苷的提取方法有溶剂浸提法、微波辅助萃取法、酶解法超高压辅助提取法、本次我们是利用微波萃取,微波是一种频率300~300 000 MHz的电磁波。
在微波场中吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热,从而使得被萃取物质从基体或体系中分离,进入到介电常数较小、微波吸收能力相对较弱的萃取剂中。
由于传统提取过程中能量累积和渗透过程以无规则的方式发生,萃取的选择性较差,只能通过改变溶剂性质或延长溶剂萃取时间来获得,同时又受限于溶解能力和扩散系数,效果不够理想;微波因其能对萃取体系中不同组分进行选择加热,因而能使目标组分直接从基体分离萃取。
微波萃取受溶剂亲和力的限制较小,可供选择的溶剂较多。
另外,微波加热则利用分子极化或离子导电效应直接对物质进行加热,避免了传统加热过程因热传导、热辐射造成的热量损失,加热效率高、升温快速均匀,缩短了萃取时间。
具有设备简单、适用范围广、重现性好、萃取效率高、萃取时间短、能耗低、污染轻等特点。
用液相色谱法来检测葡萄酒及葡萄皮中的花色苷,用等度及梯度检测花色苷的存在来判断其营养成分。
⑴、材料及方法①仪器及试剂材料:葡萄皮仪器:超声波提取器、紫外-可见分光光度计、安捷伦-高效液相色谱仪试剂:甲醇、甲酸、水②实验方法葡萄皮花色苷提取液的制备干葡萄皮→粉碎→加入提取液→超声波辅助提取→花色苷提取液称取 1g 粉碎过的干葡萄皮,按 1:40(g/mL)的料液比加入酸性乙醇提取液,用超声波清洗器辅助提取。
目录摘要 ....................................................................................................................................................................... 关键词................................................................................................................................................................... Abstract .............................................................................................................................................................. Key words............................................................................................................................................................1 绪论 (1)1.1 葡萄的概述.................................................................................................................. 错误!未定义书签。
广东石油化工学院Guangdong University of Petrochemical Technology文献综述题目:葡萄果皮花色素提取的研究进程姓名:余荣春班别:食品11-3学号:11114050333摘要花色素是一种广泛存在于植物中的天然产物,具有清除自由基、抗氧化、抑制酶活性、保护血管、抗炎症和抑制肿瘤等多种功能,在食品、保健品、化妆品和药品中具有广泛应用价值。
本文就葡萄果皮花色素的提取、纯化方法及应用存在的问题进行介绍。
关键词花色素价值葡萄提取应用AbstractProanthocyanidins ( PCs) , which is widely distributed in plants, is a kind o f valuable natural products. It has been revealed that the PCs has multiple biological activities, such as anti-oxidation, scavenging of free radicals, inhibiting of enzymes, protecting of blood vessel, anti-inflammation and repressing of tumors, and can be extensively utilized in food, cosmetic, health product and medicine industries. This paper mainly talks about several kinds of extracting methods of the natural pigments of grapes and problems in applications. Keywords PCs value grape extraction application1 前言花色素是天然色素的一种, 存在于植物的花、果实、叶、茎、种子等器官和组织中, 具有一定的营养、保健和药理作用, 现已进行了开发、利用及商品化生产; 但是花色素化学性质不稳定, 受pH值、温度、光照、金属离子等影响容易变色, 极大限制了其开发利用[1-2]。
葡萄皮花色苷的提取及稳定性研究(二)3结果与讨论3.1单因素实验3.1.1提取温度对葡萄皮花色苷提取的影响实验结果分析在提取液乙醇浓度为60%,提取液ph1.0的条件下,于30℃、40℃、50℃、60℃、70℃下提取葡萄皮中的花色苷,结果见图3-1。
图3-1提取温度对葡萄皮花色苷提取的影响从图3-1可以明显看出,提取温度在30℃-50℃时,葡萄皮花色苷的提取率受提取温度的影响不大。
当提取温度上升到50℃以后,随着提取温度的升高,葡萄皮花色苷的提取率有着较大的提高,当提取温度达到60℃时,花色苷的提取率达到最大,温度过高会对花色苷的稳定性产生影响,因此,提取温度为60℃时的提取效果最佳。
3.1.2乙醇浓度对葡萄皮花色苷提取的影响实验结果分析在温度60℃,提取液ph1.0的条件下,分别用乙醇浓度为0%、20%、40%、60%、80%、95%的酸性乙醇溶液来提取葡萄皮中的花色苷,结果见图3-2。
图3-2乙醇浓度对葡萄皮花色苷提取的影响结果从图3-2可以明显看出,提取液的乙醇浓度在0-80%之间时,花色苷的提取率随着提取液乙醇浓度的增大而提高,当乙醇浓度达到80%时,花色苷的提取率达到最大。
提取液乙醇浓度超过80%以后,花色苷的提取率随着乙醇浓度的升高而有所降低。
因此,提取液的乙醇浓度为80%时,花色苷的提取率最高。
3.1.3ph对葡萄皮花色苷提取的影响实验结果分析在温度60℃,提取液的乙醇浓度在80%条件下,分别用ph为3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5的酸性乙醇溶液提取葡萄皮的花色苷,结果见图3-3。
图3-3ph对葡萄皮花色苷提取的影响结果从图3-3可以明显看出,花色苷的提取率随着提取液ph增大而减小,ph值越低提取率越高,说明提取液中较强的酸性有利于葡萄皮中花色苷物质的浸出。
当提取液的ph为0.5时,花色苷的提取率达到最高。
因此,提取液ph为0.5时的提取效果最好。
3.2正交实验3.2.1正交实验的结果及分析根据提取温度、提取液乙醇浓度、提取液ph等单因素试验的结果,以提取温度、乙醇浓度、ph值三个因素作为研究对象,分别设三个水平,按l9(33)正交表进行正交试验,以花色苷提取液吸光值为考察指标,选出葡萄皮花色苷的最佳提取条件。
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”,其抗氧化能力是VC的20倍,VE的50倍。
也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂,因此在促进皮肤新陈代谢,分解黑色素,以及提高机体免疫力,延缓衰老方面的应用极为广泛。
葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的,由于原花青素的成分极其复杂,目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品,因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。
一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究:(一)Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品,因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值,其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。
【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。
【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15~40mg)用甲醇溶解,最后定溶于100ml。
从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中,然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V),在97℃±1下反应40min后,取出迅速冷却,在550nm处测定其吸光度,以甲醇代替提取物溶液作为空白。
原花青素指数=A×7.0/WW:样品质量(g);A:吸光度【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80~100之间,有时也可能大于100。
因此,目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量,是不正确的。
(二)Porter法测定葡萄籽原花青素含量【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。
食品中花色苷物质的提取与评价分析方法研究食品是人类生活中不可或缺的重要组成部分,而食品的质量与营养价值与我们的健康息息相关。
其中,花色苷作为一类重要的生物活性物质,在食品中的含量和质量评价上具有重要意义。
本文将探讨食品中花色苷物质的提取与评价分析方法的研究进展。
首先,花色苷是一类在植物中广泛存在的化合物,其具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性。
因此,研究食品中花色苷的含量和活性对于评估食品的营养价值和功能性具有重要意义。
目前,常用的花色苷提取方法主要包括传统浸提法、超声波浸提法、微波辅助浸提法等。
这些方法均能有效提取食品中的花色苷物质,但其提取效率和稳定性仍然是需要改进的方面。
其次,针对花色苷物质的评价分析方法也日益多样化。
最常见的评价方法是高效液相色谱法(HPLC),该方法通过对待测样品进行分离和检测,能够准确测定花色苷的含量,并且具有灵敏度高、分辨率好等优点。
此外,近年来还涌现出一些新的评价方法,如基于荧光、红外光谱等技术的分析方法。
这些新方法能够提高测定效率,减少样品前处理步骤,并且能够对多个成分进行同时测定,从而更好地满足食品分析的需求。
另外,花色苷的评价分析方法也面临一些挑战和问题。
首先,不同食品样品中花色苷的组成和含量可能存在较大差异,因此,开发适用于不同食品的标准分析方法是亟待解决的问题。
其次,一些食品中的花色苷物质含量较低,对于灵敏度要求较高的分析方法仍然有待改进。
此外,花色苷物质的结构多样化,导致不同花色苷物质之间的相互转化和互相影响,使得分析方法的选择和分析结果的解释变得更加复杂。
综上所述,食品中花色苷物质的提取与评价分析方法的研究是一个具有挑战性和重要意义的课题。
当前,虽然已经有许多方法被提出和应用于花色苷的提取和评价,但仍然需要进一步完善和改进。
相信随着科学技术的不断发展和进步,我们能够找到更加高效、灵敏和准确的方法,为评估食品的营养价值和功能性提供更有力的支持。
食品科学领域的专家和研究者们将继续努力,推动食品分析方法的创新和改进,为人类提供更加健康和有益的食品。
3.3.1 花色苷含量的测定
(1)缓冲液的制备:
pH1.0缓冲液:使用电子分析天平准确称量1.86g氯化钾,加蒸馏水约980ml,用盐酸和酸度计调至pH1.0,再用蒸馏水定容至1000ml。
pH4.5缓冲液:使用电子分析天平准确称量32.81g无水醋酸钠,加蒸馏水约980ml,用盐酸和酸度计调至pH4.5,再用蒸馏水定容至1000ml。
(2)花色苷含量的测定:
采用pH示差法[33]:用pH1.0、pH4.5的缓冲液,将样液稀释到适当的倍数,放在暗处,平衡15min。
用光路直径为1cm的比色皿在可见分光光度计的510nm 和700nm处,分别测定吸光度,以蒸馏水做空白对照。
按下式计算花色苷的含量。
A=[ ( A510 - A700 ) pH1.0 - ( A510 - A700) pH4.5]
花色苷浓度C ( mg/L) = A×MW×DF×1000 /(ε×l)
两式中:
( A510 - A700 ) pH1.0—加pH1.0缓冲液的样液在510 nm和700 nm波长下的吸光值之差;
( A510 - A700) pH4.5—加pH4.5缓冲液的样液在510 nm和700 nm波长下的吸光值之差;
MW=449.2(矢车菊—3—葡萄糖苷的分子量,mg/mol);
DF=样液稀释的倍数;
ε=26900(矢车菊—3—葡萄糖苷的摩尔消光系数,mol-1);
l=比色皿的光路直径,为1cm。
夏黑葡萄花色苷的提取及抗氧化活性研究李丹;沈才洪;马懿;邹时英;侯长军;法焕宝;霍丹群【摘要】The optimized experimental condition of anthocyanin from summer black grape by ultrasonic-as-sisted extraction as well as its antioxidant properties were studied.Box-Behnken response surface design method was employed to explore the effect of liquid-solid ration,ultrasonic time and temperature on antho-cyanin-extraction.The optimal conditions obtained were the liquid-solid ration of 3∶1,ultrasonic time of 21 min and temperature of 59 ℃.Under the optimized e xperimental conditions,relative error of total an-thocyanin content as-extracted was 3.17% compared with theoretical prediction value.Furthermore, scavenging activitytowards ·OH,·O2 -and DPPH· caused by anthocyanin were also systematically investigated,respectively.These results demonstrated thatthe anthocyanin as-extracted displayed strong antioxidant activity,and its scavenging activity was evaluated by the concentration of anthocyanin.%探究了超声波辅助提取夏黑葡萄花色苷的最佳工艺及其抗氧化能力。
花色苷的检测方法我前几天又试了个新方法检测花色苷,这次总算成功了,可把我之前折腾的劲儿都补回来了。
我一开始也是瞎摸索。
先尝试了一种比较基础的方法,就是比色法。
这就好比看颜色猜东西一样。
你得先把样品处理好,这步可不能马虎。
就像做菜得把菜洗干净切好才能下锅似的。
要从植物组织里提取出花色苷来,我当时就是直接研磨植物样本,可这么做有点粗糙,有时候提取得不完全,这就是我的一个教训。
提取出来以后要先调pH值,这个很关键,就像调收音机的频道一样,得调到合适的位置,才能有清晰的反应。
但比色法有个问题就是不太精确,容易受其他物质干扰。
后来我又试过高效液相色谱法(HPLC)。
这个可复杂多了。
这个方法就像警察破案一样,一个一个把里面的成分都分离开,然后识别出来。
首先样品的准备就得特别精细,我那时候为了把样品处理成适合进柱子检测的状态,弄了好久。
要过滤除掉杂质,就像过滤咖啡渣一样,滤不干净柱子就会堵住。
一开始我不知道这个重要性,进去了一些杂质,结果仪器就出问题了,检测结果乱七八糟的。
流动相的选择也很麻烦,就相当于不同的交通工具,得选合适的流动相才能把花色苷这种“乘客”稳稳当当送到目的地给检测出来。
紫外- 可见分光光度法我也捣鼓过。
这方法听起来挺简单的,但是实际操作起来也是有不少坑的。
这个方法是基于花色苷在紫外和可见光谱区有特征吸收峰。
我当时以为只要把样品放进去测就行了,但是发现吸收峰老是对不上标准的值。
后来才意识到样本的浓度还有纯度也是相当会影响检测结果的。
就好比同样一杯果汁,浓的和稀的看起来颜色就不一样,检测出来的值也会不一样。
要说现在觉得哪个最好用,我还不太确定,反正不同的情况可能要用不同的方法。
如果只是初步检测,比色法简单快捷。
但是想要精确检测到花色苷的具体含量和结构,HPLC就比较靠谱了。
要是有大量样本需要粗略判断一下,紫外- 可见分光光度法还是可以试试的,只是得更仔细控制样本的条件罢了。
哦对了,还有纸层析法,这就像小朋友画画用的颜料晕染法差不多。
葡萄与葡萄酒中花色苷类物质UPLC-ESI-MS-MS分析方法建立及应用葡萄与葡萄酒中花色苷类物质UPLC-ESI-MS/MS分析方法建立及应用引言:葡萄是一种常见的水果,在全球广泛栽培,并且是一种富含花色苷类物质的水果。
葡萄酒则是将葡萄的果汁发酵而成的酒类产品,葡萄酒中的花色苷类物质对其品质和风味有着重要的影响。
因此,建立分析葡萄与葡萄酒中花色苷类物质的准确和快速的方法对于加强葡萄和葡萄酒的质量控制具有重要意义。
一、实验方法的建立为了建立一种准确、快速的分析葡萄与葡萄酒中花色苷类物质的方法,我们采用了超高效液相色谱(UPLC)结合电喷雾质谱法(ESI-MS/MS)来进行分析。
首先,收集了来自不同地区的葡萄样品和葡萄酒样品。
然后,对样品进行提取和净化处理,以去除杂质和干扰物。
接下来,使用UPLC进行分离,利用柱温控制和梯度流动相来优化分离条件,以实现对花色苷类化合物的高效、高分辨的分离。
最后,通过ESI-MS/MS对样品进行检测和鉴定,使用多反应监测(MRM)模式进行定量。
二、方法的验证与优化为了验证我们建立的分析方法的准确性和可靠性,我们通过对标准品的测定来进行方法的验证。
实验结果显示,该方法能够对葡萄和葡萄酒样品中的花色苷类物质进行准确的定性与定量分析。
同时,我们对分析方法进行了优化,包括优化的梯度洗脱程序、柱温和流动相组成等,以提高分离效果和信号强度。
三、方法的应用我们将建立的方法应用于实际的样品测定中。
首先,我们对来自不同产地的葡萄样品进行了分析,结果显示不同产地的葡萄中花色苷类物质的含量存在差异。
这表明建立的方法可以用于不同产地葡萄的质量评价。
其次,我们对葡萄酒产品进行了分析,结果显示花色苷类物质的含量与产品的品质和风味有着密切的关系。
因此,该方法可用于葡萄酒的质量控制和风味改进。
结论:本文基于UPLC-ESI-MS/MS技术建立了一种准确、快速的分析葡萄和葡萄酒中花色苷类物质的方法。
葡萄花色苷提取技术的研究
王朝臣;姚婧婧;沈琦
【期刊名称】《农业技术与装备》
【年(卷),期】2009(000)002
【摘要】为了更好地开发利用葡萄资源,研究采用烟-73酿酒用调色葡萄为原料,同时研究了溶剂浸提对葡萄花色苷提取效果的影响,确定了葡萄皮花色苷提取的最适工艺条件.
【总页数】3页(P8-10)
【作者】王朝臣;姚婧婧;沈琦
【作者单位】天津渤海职业技术学院 300402;北京林业大学人文社会科学学院100083;上海东华大学管理学院
【正文语种】中文
【中图分类】S663.1
【相关文献】
1.内部沸腾法提取葡萄皮花色苷研究 [J], 黄茜;李建凤;廖立敏
2.葡萄花色苷提取技术的研究 [J], 王朝臣
3.干红葡萄酒中多酚提取响应面优化及非花色苷类物质的测定研究 [J], 王凯丽;张波;韩舜愈;解迎双;龚祥;张欢;田秀;鲁榕榕;王媛
4.葡萄花色苷提取技术的研究 [J], 王朝臣
5.蓝莓花色苷提取物干预人肝癌细胞对葡萄糖消耗的作用研究 [J], 张森;吴莹;张久亮
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专利名称:一种基于高光谱的酿酒葡萄果皮中花色苷含量测定的方法
专利类型:发明专利
发明人:刘旭,吴迪,宁纪锋,梁曼
申请号:CN201310393516.2
申请日:20130903
公开号:CN103411973A
公开日:
20131127
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明公开了一种基于高光谱的酿酒葡萄果皮中花色苷含量测定的方法,该方法包括以下步骤:从四个不同产量水平不同植株随机取下1500粒葡萄,将每25粒葡萄作为一个样本,共计60个样本,将样本随机分为校正集和检验集,其中校正集40个样本,检验集20个样本;采用近红外高光谱图像获得酿酒葡萄果皮的光谱数据;利用pH示差法测量花色苷含量;结合光谱预处理方法和化学计量学建模方法,建立葡萄果皮中花色苷含量的预测模型。
本发明通过使用光谱成像技术,将成像技术与光谱探测技术相结合,对目标空间特征成像的同时,具有检测速度快、效率高、成本低的优点,适于应用于农产品品质与安全的无损检测,有效地检测了酿酒葡萄果皮中花色苷的含量。
申请人:西北农林科技大学
地址:712100 陕西省杨凌示范区邰城路3号
国籍:CN
代理机构:北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人:汤东凤
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实验四葡萄果实中花色苷提取与测定
一、实验目的
1、了解并掌握葡萄果皮中花色苷提取的原理和操作;
2、掌握葡萄果皮重花色苷含量的测定方法和步骤。
二、实验原理
花色苷是红色葡萄果实中一类非常重要的呈色物质,并且多数情况下主要存在于果皮当中,只有极少数染色品种的果肉中存在花色苷。
花色苷主要有花色素(包括花翠素、花青素、甲基花青素、甲基花翠素及二甲花翠素)经过羟基化后以单体糖苷的形式存在。
三、实验材料
红色葡萄果实、吸水纸、研钵、研杵、液氮、分光光度计等
四、主要项目和方法
1、果皮花色苷提取
把每个样本(20粒)的葡萄果皮取下,然后用蒸馏水冲洗果皮,除去果皮粘连的部分果肉与糖分等并用吸水纸吸干,进行称重(M),然后再液氮中将果皮研
磨成粉末,准确称取3.0000g粉末放入50ml离心管中,加入30ml酸化甲醇溶液(1mol/L HCl/MOH/水,1/80/19,v/v/v),在100%功率条件下超声辅助提取30min,温度控制在25摄氏度,然后将其只置于低温离心机中离心(8000r/min)15min,收集上清液。
向残渣中继续加入30ml酸化甲醇溶液,在此按照上述步骤进行提取,重复4次,合并所有上清液(120ml)于细口瓶中,-20摄氏度避光保存。
2、花色苷含量测定和计算
采用pH示差法,提取液分别用pH值为1.0盐酸-氯化钠缓冲液稀释20倍。
然后分别在510nm与700nm下测定两种稀释液的吸光度。
吸光度A为:
A=(A510nm-A700nm)pH1.0 - (A510nm-A700nm)pH4.5
花色苷含量用矢车菊素-3葡萄糖苷(R CGE , mg/g)表示,即
R CGE=(A × MW × DF × Ve × 1000)/(ε× 1 × M)
式中 MW-矢车菊素-3葡萄糖苷相对分子量,取449
DF-稀释倍数
Ve-提取液总体积
M-葡萄皮质量
ε–摩尔吸光系数,取29600
五、实验结果
A=0.9007-0.0087-(0.0813-0.0065)=0.8172nm
R CGE=
因此该葡萄果实中,花色苷含量为 mg/g。
六、实验总结
花色苷是花色素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物,是类黄酮——以黄酮核为基础的一类物质中能呈现红色的一族化合物。
它是葡萄果实中重要的呈色物质,主要存在与果皮中。
通过了解花色苷的相关特性以及掌握花色苷的提取原理和技术,可以更好地完成葡萄果实中花色苷的提取,为后续研究奠定基础。