纸层析法鉴定转氨基作用

转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论转氨基作用是指氨基酸中的氨基团与另一种物质中的羰基团发生反应，从而产生新的氨基酸或新的化合物。

这个作用在生物体内起着重要的生理和代谢功能，参与蛋白质合成、氨基酸代谢、能量代谢等过程。

为了研究转氨基作用及氨基酸的特性，科学家们开展了许多实验研究，其中纸层析实验是一种常用的方法。

纸层析实验是一种基于物质在纸上移动的原理进行分离和鉴定的技术。

在氨基酸研究中，纸层析实验可以用来分离和检测不同氨基酸的存在和含量。

这种实验方法简便易行，不需要昂贵的设备和大量试剂，因此深受科研工作者的喜爱。

在进行纸层析实验前，首先需要准备一张具有吸附性能的纸层析纸。

将待检测样品溶液滴在纸的一端，然后将纸的另一端浸入移液池中。

待液体在纸上上升至一定高度后，取出纸并晾干。

接下来，可以用各种显色试剂处理纸上的样品，使不同的氨基酸显示出不同的色带。

在进行纸层析实验时，可以通过探讨不同氨基酸的特性来讨论转氨基作用。

每种氨基酸在纸上的运动速度和颜色表现会受到其分子结构、极性和分子量的影响。

例如，极性较大的氨基酸在纸上运动较慢，而极性较小的氨基酸则会相对快速地移动。

这种差异可以通过纸层析实验中的色带位置来观察和比较。

转氨基作用还可以通过纸层析实验中的反应产物来进行研究。

例如，将某种氨基酸与特定的酶反应，可以观察到新的氨基酸或产物的形成。

这种方法可以用来研究酶的催化作用和氨基酸代谢途径。

总结一下，转氨基作用及氨基酸的纸层析实验是研究氨基酸特性和生物代谢的重要手段。

通过纸层析实验，可以分离和鉴定不同氨基酸的存在和含量，并观察氨基酸在纸上的运动速度和颜色表现。

此外，纸层析实验还可以研究转氨基作用产生的新的氨基酸或产物。

这些实验方法为我们深入了解氨基酸的生理功能和代谢机制提供了重要的工具和线索。

一、实验目的1. 了解转氨基作用的基本原理及过程。

2. 掌握实验操作步骤，学会使用纸层析法观察转氨基作用。

3. 分析实验结果，加深对转氨基作用的认识。

二、实验原理转氨基作用是指氨基酸分子中的氨基和α-酮酸分子中的酮基相互转移，生成新的氨基酸和α-酮酸的过程。

本实验通过纸层析法观察转氨基作用，利用纸层析技术分离反应产物，分析反应过程中氨基酸和α-酮酸的变化。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：L-苯丙氨酸、α-酮戊二酸、FeCl3、NaOH、层析纸、滤纸、铅笔、剪刀、烧杯、滴管、移液器、紫外灯等。

2. 实验仪器：实验台、天平、烘箱、显微镜、冰箱等。

四、实验步骤1. 配制反应液：取L-苯丙氨酸、α-酮戊二酸、FeCl3和NaOH按一定比例配制反应液。

2. 进行反应：将配制好的反应液放入烧杯中，在室温下反应一段时间。

3. 层析分离：取一张层析纸，用铅笔在距一端1cm处划一条起始线，用滴管将反应液滴在起始线上，待液滴干燥后，将层析纸放入装有展开剂的层析箱中。

4. 展开剂：取适量展开剂（如正丁醇-冰醋酸-水，体积比为4:1:5）倒入层析箱中，使展开剂液面略高于层析纸上的反应液滴。

5. 展开过程：待展开剂上升至层析纸的另一端时，取出层析纸，晾干。

6. 观察结果：用紫外灯照射层析纸，观察反应产物在层析纸上的分布情况。

五、实验结果与分析1. 实验现象：在紫外灯照射下，层析纸上出现两个明显的色带，分别对应L-苯丙氨酸和α-酮戊二酸。

2. 实验分析：通过观察层析纸上反应产物的分布情况，可以判断转氨基作用是否发生。

在本实验中，层析纸上出现了两个明显的色带，说明L-苯丙氨酸和α-酮戊二酸发生了转氨基作用，生成了新的氨基酸和α-酮酸。

六、实验总结1. 通过本实验，我们了解了转氨基作用的基本原理及过程，掌握了实验操作步骤，学会了使用纸层析法观察转氨基作用。

2. 实验结果表明，在FeCl3和NaOH的催化作用下，L-苯丙氨酸和α-酮戊二酸发生了转氨基作用，生成了新的氨基酸和α-酮酸。

纸层析法测定肝组织的转氨基作用【目的】1 ．掌握纸层析法的原理和方法。

2 ．熟悉相关转氨酶的临床意义。

【原理】转氨基作用是氨基酸代谢的一个重要反应。

在转氨酶作用下，将氨基酸的氨基转移到α - 酮酸上。

每种转氨基反应均由专一的转氨酶催化。

转氨酶广泛分布于机体各器官、组织，例如肝细胞中存在的丙氨酸氨基转移酶，能催化α - 酮戊二酸与丙氨酸之间的转氨基作用。

反应式如下：纸层析是以滤纸作为支持物，与滤纸纤维素结合的水（约占纸重 20 ～ 30 ％）称为层析中的“固定相”。

另一种和固定相不能混合或部分混合的溶剂则为“流动相”。

把欲分离的物质加在纸的一端，并使流动相借滤纸的毛细现象移动，此时，待分离溶质因分配系数不同而逐渐分布于滤纸的不同部位。

层析过程中或层析结束时，用显色剂使被分离的物质显出颜色，成为一个个色斑。

分配在固定相中趋势较大的成分在纸上随流动相移行的速度就小，色斑距原点的位置就较近。

反之，分配在固定相内趋势较小的成分移行就远，色斑位置离原点也远。

溶质在纸上的移动速率可用比移（R f ）表示：同一氨基酸在相同的层析条件下 R f 值相同，不同氨基酸在相同层析条件下 R f 值不同，因此可以根据 R f 值来鉴定被分离的氨基酸。

层析时，用显色剂茚三酮使氨基酸显色，将样品氨基酸的 R f 值与标准氨基酸的 R f 值比较，即可确定所分离氨基酸的种类。

【器材】1 ．研钵2 ．剪刀3 ．恒温水浴4 ．点样毛细管5 ．漏斗6 ．表面皿或小平皿7 ．新鲜动物肝脏8 ．直径 10cm 圆型新华滤纸9 ．中试管和小试管10 ．电炉或吹风机或烘箱11 ．直径 10cm 的培养皿【试剂】1 ． 0.2mol/L ， pH7.4 磷酸缓种液Na 2 HPO4 溶液 81ml 与 0.2mol/L NaH 2 PO4 溶液 19ml 混匀，再用蒸馏水稀释 20 倍。

2 ． 0.1mol/L 丙氨酸溶液称取丙氨酸 0.891g 先溶于少量 pH7.4 磷酸盐缓冲液中，以 0.1mol/LNaOH 仔细调节至 pH7.4 后，用磷酸缓冲液加至 100ml 。

一、实验目的1. 理解转氨基作用的基本原理。

2. 掌握利用纸层析法观察转氨基作用的方法。

3. 通过实验验证转氨基作用在生物体内的重要性。

二、实验原理转氨基作用是一种生物体内重要的生化反应，主要是指在酶的催化下，氨基酸分子中的氨基与α-酮酸分子中的羰基进行交换，从而形成新的氨基酸和新的α-酮酸。

这一过程对于生物体内氨基酸的代谢和蛋白质的合成具有重要意义。

纸层析法是一种常用的分离和鉴定技术，通过在固定相（如滤纸）上展开待测物质，根据物质在固定相和流动相之间的分配系数不同，实现物质的分离和鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 丙氨酸（Ala）- 丙酮酸（Pyruvate）- 苹果酸（Malic acid）- 乙酸（Acetic acid）- 硫酸铵- 磷酸二氢钠- 水合三氯乙醛- 硝酸银- 氨水- 乙醇- 氨基苯甲酸- 硫酸铜- 铁氰化钾- 酚酞- 氢氧化钠- 氨基酸标准品2. 实验仪器：- 纸层析装置- 热水浴- 烘箱- 移液器- 移液管- 电子天平- 恒温水浴锅- 离心机- 紫外分光光度计四、实验步骤1. 配制氨基酸和α-酮酸混合溶液：将丙氨酸和丙酮酸按照一定比例混合，加入适量水合三氯乙醛，搅拌均匀，作为待测溶液。

2. 纸层析：将混合溶液点在滤纸上，将滤纸放入展开剂中，进行纸层析。

3. 显色：取出滤纸，晾干，用硝酸银和氨水进行显色，观察氨基酸和α-酮酸分离情况。

4. 定性鉴定：将滤纸放入展开剂中，加入氨水，观察氨基酸和α-酮酸分离情况，并进行定性鉴定。

5. 定量分析：将滤纸放入紫外分光光度计中，测定氨基酸和α-酮酸的吸收峰，计算其浓度。

6. 重复实验：重复以上步骤，验证实验结果的准确性。

五、实验结果与分析1. 转氨基作用实验结果：在纸层析过程中，氨基酸和α-酮酸在滤纸上分离，说明转氨基作用发生了。

2. 定性鉴定结果：通过观察滤纸上的颜色变化，可以判断出分离出的物质为氨基酸和α-酮酸。

3. 定量分析结果：通过紫外分光光度计测定，可以计算出氨基酸和α-酮酸的浓度。

转氨基作用原理氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。

转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。

经转氨后，原来的α-—氨基酸变成了相应的α-—酮酸，原来的α-—酮酸则成为新的、相应的α-—氨基酸。

本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称GPT）的催化进行转氨基的过程。

然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。

为便于观察转氨基作用，在反应中须加一碘醋酸（或—溴醋酸），以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。

试剂0.9% NaCl溶液；0.01mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）；1%谷氨酸钾溶液；1%丙酮酸钠溶液；0.25%一碘酸钠溶液；2%HAc。

操作1、肌匀浆的制备（该步由实验室准备室制备）取小白兔一只，猛击头部处死后，立即剪颈放血，取肌肉若干经0.9%NaCl溶液洗去血污后，称取肌肉约100g置电动匀浆器中，再加0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液500ml磨成匀浆。

2混匀后同置37-40℃水浴中保温1小时（时加振摇）。

取出两管各加入2%醋酸2滴，再同置沸水浴中5分钟，使反应停止，稍冷却，将上清液用于纸层析。

纸层析（氨基酸）原理层析法又称色层分离法，原指有色物质在吸附剂上因吸附能力不同而得到分离的方法。

后来此方法也应用于无色物质的分离。

层析法除了吸附层析以外，还有离子交换层析、分配层析和亲和层析等。

纸层析是分配层析中的一种。

分配层析是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离的。

通常用a表示分配系数。

溶质在固定相中的浓度（Cs）a = —————————————溶质在流动相中的浓度（CL）一种物质在某溶剂系统中的分配系数，在一定的温度下是一个常数。

纸层析是以纸作为惰性支持物的分配层析，纸纤维上的羟基具有亲水性，因此以滤纸吸附的水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。

有机溶剂沿着滤纸自下而上流动的，称为“上行法”；自上而下流动的，称为“下行法”。

第1篇一、实验概述本次实验通过纸层析法观察转氨基作用，旨在学习氨基酸纸层析的基本原理，掌握氨基转移反应的过程和条件，以及通过纸层析法分析转氨基反应的结果。

实验过程中，我们使用了多种氨基酸作为底物，转氨酶作为催化剂，通过观察层析板上氨基酸的迁移情况，分析了转氨基作用的效率及其影响因素。

二、实验结果与分析1. 氨基酸纸层析原理纸层析法是一种常用的分离和鉴定化合物的方法。

在本次实验中，纸层析法用于分离混合氨基酸，并观察转氨基反应的结果。

层析原理基于不同物质在固定相（滤纸）和流动相（层析溶剂）中的分配系数不同，导致物质在层析过程中的迁移速率不同，从而实现分离。

2. 转氨基反应的观察实验中，我们选取了多种氨基酸作为底物，包括丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸等。

在转氨酶的催化下，这些氨基酸发生转氨基反应，生成相应的α-酮酸和新的氨基酸。

通过观察层析板上氨基酸的迁移情况，我们可以分析转氨基反应的效率。

（1）丙氨酸转氨基反应：实验结果显示，丙氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成丙酮酸和新的氨基酸。

层析板上丙氨酸的斑点明显减少，丙酮酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。

（2）甘氨酸转氨基反应：实验结果显示，甘氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成甘酮酸和新的氨基酸。

层析板上甘氨酸的斑点明显减少，甘酮酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。

（3）谷氨酸转氨基反应：实验结果显示，谷氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成α-酮戊二酸和新的氨基酸。

层析板上谷氨酸的斑点明显减少，α-酮戊二酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。

3. 影响转氨基反应的因素（1）pH值：实验结果显示，不同pH值条件下，转氨基反应的效率有所不同。

在适宜的pH值范围内，转氨基反应的效率较高。

因此，pH值是影响转氨基反应的一个重要因素。

（2）温度：实验结果显示，不同温度条件下，转氨基反应的效率有所不同。

在一定温度范围内，随着温度的升高，转氨基反应的效率逐渐提高。

竭诚为您提供优质文档/双击可除转氨作用实验报告篇一：实验六纸层析法观察转氨基作用实验报告实验六纸层析法观察转氨基作用【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用09救援一班第三大组李岚宇20XX222336室温：28°（一）实验目的：1、学习氨基酸纸层析的基本原理。

2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。

（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。

转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。

氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。

各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：α—酮戊二酸+丙氨酸谷氨酸+丙酮酸本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。

纸层析属于分配层析。

以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。

有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。

由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：ALT物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。

（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液。

2、0.2mol/Lna2hpo4溶液81ml与0.2mol/Lnah2po4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。

3(:转氨作用实验报告)、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0nnaoh仔细调至ph7.4后,加磷酸盐缓冲液至100ml。

转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论误差转氨基作用是指一些酶（转氨酶）催化下，氨基酸中的氨基基团与其他有机物中的羰基（如酮体、醛体、羧酸等）发生相互转移的化学反应。

这种转移可以使氨基酸的氨基基团被转移到其他分子上，并将原分子上的基团转移到氨基酸上。

纸层析实验是通过纸层析技术对混合物中的物质进行分离和鉴定的方法。

在氨基酸的纸层析实验中，通常是将待测的混合物和标准氨基酸点于纸上，然后通过溶剂的上升运动，使待测物质和标准物质在纸上产生色斑，并根据它们的迁移速度和颜色对其进行分离和鉴定。

在讨论误差时，需要考虑以下因素：1. 纸张的质量和用量：纸张的质量和用量可以影响实验的结果。

使用较差质量的纸张或者使用过多或过少的纸张都可能导致分离效果不佳。

2. 溶剂的选择和准备：溶剂的选择和准备也会影响纸层析实验的结果。

溶剂的纯度、浓度和pH值等因素都应该被控制在合适的范围内，以避免对实验结果产生干扰。

3. 样品的准备和处理：样品的准备和处理方法可能会引入一些误差。

例如，样品的浓度、含量和纯度等可以影响实验的结果。

4. 运动时间和温度：运动时间和温度的控制也是关键因素。

运动时间过短或太长，以及温度过高或过低，都可能导致实验结果的误差。

为了减小误差，可以采取以下措施：1. 选择优质的纸张，并在合适的量上施加样品和标准氨基酸。

2. 使用高纯度、适当浓度和pH值合适的溶剂。

3. 在样品准备和处理过程中严格控制条件，确保样品的浓度和纯度符合要求。

4. 控制运动时间和温度，使其处于适宜的范围内。

此外，还应注意实验操作的规范性，仔细记录实验过程和观察结果，以便后续分析和讨论误差。