NK细胞毒活性

nk细胞检验标准NK细胞检验标准NK细胞是一种重要的免疫细胞，它能够识别并杀死病毒感染的细胞和癌细胞。

因此，检测NK细胞的数量和功能状态对于诊断和治疗某些疾病具有重要意义。

下面将介绍NK细胞检验的标准。

1. NK细胞数量检测NK细胞数量检测是通过流式细胞术或细胞计数器进行的。

正常人的NK细胞占外周血淋巴细胞的10%至15%。

如果NK细胞数量低于正常范围，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

2. NK细胞功能检测NK细胞功能检测是通过测量NK细胞的杀伤活性来进行的。

常用的方法是使用靶细胞，如K562细胞，来评估NK细胞的杀伤能力。

正常人的NK细胞杀伤活性应该在10%至50%之间。

如果NK细胞杀伤活性低于正常范围，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

3. NK细胞表面标志物检测NK细胞表面标志物检测是通过检测NK细胞表面的分子来评估NK 细胞的功能状态。

常用的标志物包括CD56、CD16、NKG2D等。

正常人的NK细胞应该表达这些标志物。

如果NK细胞表面标志物异常，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

4. NK细胞基因检测NK细胞基因检测是通过检测与NK细胞功能相关的基因来评估NK 细胞的功能状态。

常用的基因包括KIR、NKG2A等。

正常人的NK 细胞应该表达这些基因。

如果NK细胞基因异常，可能表明免疫功能受损，需要进一步检查。

NK细胞检验是评估免疫功能的重要方法之一。

通过检测NK细胞数量、功能、表面标志物和基因等指标，可以帮助医生诊断和治疗某些疾病，如感染、肿瘤等。

因此，对于需要进行免疫功能检查的患者，建议进行NK细胞检验。

NK细胞(Natural Killer Cell)又称自然杀伤细胞。

属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，占外周血淋巴细胞总数的5％-10％，是机体重要的免疫细胞，具有广谱抗肿瘤细胞作用，其不依赖于抗原刺激作用，就可以非特异直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，对肺癌、肝癌、卵巢癌、食道癌、结肠癌、胃癌、宫颈癌、骨癌等均有效果，以NK细胞为中心的巨噬细胞，24小时加以监视，一旦发现癌细胞，就陆续加以清除。

特别是对造血细胞来源的肿瘤细胞更为敏感。

特别是对淋巴瘤和白血病细胞作用更为明显，因此，在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中起重要作用，是抗瘤免疫的第一线细胞，能迅速溶解某些肿瘤细胞。

人体的健康是由免疫系统来保证的，因此绝大多数的保健品都是为了提高机体免疫力的。

NK细胞作为免疫系统中最重要的效应杀伤细胞，就像免疫系统中的巡警，时刻游弋在人体的血液中，一旦遇到入侵体内的细菌、病毒和体内产生的癌变、病变、衰老细胞，便启动免疫攻击和免疫稳定功能，当自己无法独立完成攻击和清除任务，就会发出信号，调集其他类型的免疫细胞来共同完成清除任务。

·人体的健康是由免疫系统来保证的。

免疫系统被医学专家誉为世界上最好的医生，就像一支不知疲倦的部队，24小时保护着我们的健康。

·NK细胞作为先天免疫系统中最重要的效应细胞，是免疫系统在进化过程中所分化出的广谱性防御机制，对外清除病毒、细菌及其他有害物质，对内清除衰老、病变及癌变细胞,维护着我们机体的相对健康状态，被医学界誉为“人体第一道防线”。

·NK细胞平时像巡警一样游弋在人体的血液中，行使着免疫监视功能，当遇到癌变，疾病及衰老的细胞时，便启动免疫攻击和免疫稳定功能。

·NK细胞与我们的生活息息相关，它可以抑制病毒和细菌的入侵，清除体内癌变、病变及衰老细胞，具有延缓机体衰老的功能。

NK细胞功能在人生不同阶段呈现不同趋势和特征。

科学研究发现，在人的一生中，NK 细胞功能变化大致可分为五个阶段：（1）0-8周左右：出生到2月龄为NK细胞功能成熟期，在此阶段，NK细胞功能提升至与成年接近水平，表现为NK细胞在骨髓中分化成熟并释放入血，成为新生儿自身抵抗力的主要效应细胞。

NK 细胞代谢途径及其功能于雅婷 张建 （山东大学药学院免疫药物学研究所，济南 250012）中图分类号 R392.9 文献标志码 A 文章编号 1000-484X （2024）01-0021-10［摘要］ NK 细胞是固有免疫系统的重要成员，在免疫应答中发挥关键作用。

NK 细胞激活主要依赖于其表面表达的活化性受体和抑制性受体间的动态平衡。

然而，在许多慢性疾病模型中，NK 细胞受体表达失衡，导致杀伤活性及细胞因子产生能力降低，处于免疫失活状态。

近年许多研究表明，胞内代谢对包括NK 细胞在内的免疫细胞至关重要，代谢改变能够通过影响细胞发育、增殖和活性等调节免疫细胞效应功能发挥。

鉴于NK 细胞强大的抗肿瘤和抗病毒功能及其重要的临床应用价值，深入研究其代谢特征及机制具有重要意义。

本文主要从NK 细胞的代谢方式及其相关调控通路、代谢对NK 细胞发育、记忆和功能的调控作用以及基于代谢的NK 细胞疗法进行综述，阐述代谢对NK 细胞生物合成、体内稳定及效应功能的重要作用，以及不同慢性疾病模型中NK 细胞失活的代谢相关因素，为NK 细胞治疗的临床应用提供坚实的研究依据。

［关键词］ NK 细胞；免疫失活；代谢；细胞治疗Metabolism and function of NK cellsYU Yating ， ZHANG Jian. Institute of Immunopharmaceutical Sciences ， School of Pharmaceutical Sciences ， Shan⁃dong University ， Jinan 250012， China［Abstract ］ NK cells are important components of innate immune system and play a key role in immune responses. Activation of NK cells mainly depends on dynamic balance between activatory and inhibitory receptors expressed on surface. However ， in many chronic diseases ， balance between these receptors of NK cells is disorder ， resulting in reduced cytolysis activity and cytokine produc‐tion ， which is in a state of immune inactivation. In recent years ， many studies have shown that intracellular metabolism is crucial for immune cells such as NK cells ， and changes of metabolism will regulate functions of immune cells by affecting cell development ， pro‐liferation and activity. In view of powerful anti -tumor and anti -viral effects of NK cells and their important clinical application value ， it is important to study their metabolic characteristics and mechanisms. This review mainly introduces metabolic patterns of NK cell ，related regulatory pathways ， regulatory effects of metabolism on NK cell development ， memory and functions ， and metabolism -based NK cell therapy ， also expounds important role of metabolism on NK cell biosynthesis ， stability and effector function in vivo ， as well as metabolism -related factors involved in NK cell inactivation in different chronic diseases ， providing a solid research basis for clinical application of NK cell therapy.［Key words ］ NK cells ；Immune inactivation ；Metabolism ；Cell therapydoi ：10.3969/j.issn.1000-484X.2024.01.003基金项目：国家重点研发计划（2021YFC2300603）。

属于细胞生物学，自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，细胞来源：NK细胞确切的来源还不十分清楚，一般认为直接从骨髓中衍生，其发育成熟依赖于骨髓的微环境。

小鼠和人的体外实验表明，胸腺细胞在体外IL-2等细胞因子存在条件下培养也可诱导出NK细胞。

小鼠脾脏在体内IL-3诱导下可促进NK细胞的分化。

NK细胞主要分布于外周血中，占PBMC 5~10%，淋巴结和骨髓中也有NK活性，但水平较外周血低。

由于NK细胞具有部分T细胞分化抗原，如80~90%NK细胞CD2+，20~30%NK细胞CD3+(表达CD3ζ链)，30%NK细胞CD8+(α/α)和75~90%NK细胞CD38+，而且NK细胞具有IL-2中亲和性受体，在IL-2刺激下可发生增殖反应，活化NK细胞可产生IFN-γ，因此一般认为NK细胞与T细胞在发育上关系更为密切。

细胞功能自然杀伤活性：由于NK细胞的杀伤活性无MHC限制，不依赖抗体，因此称为自然杀伤活性。

NK细胞胞浆丰富，含有较大的嗜天青颗粒，颗粒的含量与NK细胞的杀伤活性呈正相关。

NK细胞作用于靶细胞后杀伤作用出现早，在体外1小时、体内4小时即可见到杀伤效应。

NK细胞的靶细胞主要有某些肿瘤细胞(包括部分细胞系)、病毒感染细胞、某些自身组织细胞(如血细胞)、寄生虫等，因此NK细胞是机体抗肿瘤、抗感染的重要免疫因素，也参与第Ⅱ型超敏反应和移植物抗宿主反应。

⒈识别靶细胞NK细胞识别靶细胞是非特异性的，这与CTL识别靶细胞机理不同，但确切的机理尚未明了。

现已知淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1) 与靶细胞表面的细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的作用参与NK细胞的识别过程，抗LFA-1或抗ICAM-1 McAb可抑制NK细胞的杀伤活性。

此外CD2与LFA-3(CD58)结合以及CD56也可能介导NK细胞与靶细胞的结合。

NK细胞作用及效应机制1 抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）NK细胞低亲和力的CD16分子与靶细胞IgG抗体复合物结合后，活化蛋白酪氨酸激酶（PTK），使PLC γ的酪氨酸磷酸化，裂解膜磷酯酰肌醇为三磷酸肌醇（IP3）和二酰甘油，IP3增加细胞内游离钙浓度，进而释放细胞毒性物质（如穿孔素和颗粒酶）。

研究发现，IgG1抗体与凝集抗原作用能增强IgG1与NK细胞的结合，且去除岩藻糖的IgG1抗体更易募集和活化NK细胞，从而减少诱导ADCC所需的抗原量并且明显提高ADCC作用；当低岩藻糖抗体与靶细胞同时存在时，NK细胞尤其是CD56dim细胞群的活化标记CD69表达增高。

Forthal等报道在HIV急性感染期，病毒感染的靶细胞表达HIV糖蛋白与特异抗体结合，介导NK细胞发挥ADCC作用杀伤靶细胞。

另有研究者用HIVgp120特异的IgG1/IgA嵌合蛋白交联CD16，活化新鲜分离的NK细胞，只需pmol浓度即可溶解HIV感染的靶细胞。

2 天然细胞毒性（Natural cytotoxicity）天然细胞毒性是指不需要抗体介导,也不经预先致敏而直接杀伤靶细胞的作用,其具体机制尚未完全阐明。

与ADCC不同，该作用需要多个表面受体结合靶细胞传递溶细胞信号。

例如，CD11a/CD18、CD2、CD44、CD54、CD58、CD69均有利于NK细胞与靶细胞建立稳定连接,形成免疫突触。

在动物模型中，Lck、Fyn、ZAP70分子的缺失会引起T细胞缺陷，但却不影响天然细胞毒性，表明NK细胞发挥细胞毒性不一定需要这些激酶。

另有研究报道IFN γ和IL 12等细胞因子活化的STAT1分子提供了另一重要信号，STA T1敲除的小鼠天然细胞毒性被抑制，但不影响ADCC 作用。

Sconocchia等还发现一条不同于ADCC或传统天然细胞毒性的信号传导途径，即专一表达于NK细胞上的CD44依赖的溶细胞效应通路。

3 NK细胞介导的凋亡（NK cell mediated apoptosis）靶细胞对NK细胞诱导的凋亡很敏感，尤其大多数对自然杀伤不甚敏感的肿瘤细胞对NK细胞诱导的凋亡却很敏感。

NK细胞是天然免疫系统中一类十分重要的淋巴细胞，由于其杀伤作用是自发的，无需有抗体存在或预先加以致敏，因此将其命名为自然杀伤细胞。

它通过其细胞毒活性和产生淋巴因子，在机体抗感染、抗肿瘤、免疫调节和造血调控等方面发挥重要的免疫功能。

NK细胞和杀伤T细胞在清除病原生物感染靶细胞方面有着相似的功能，但NK细胞的杀伤功能属于天然免疫，病原生物侵人机体后数小时到数天就会遭到NK细胞的攻击，阻止其感染的扩散，同时NK细胞分泌的细胞因子，为杀伤T细胞的分化提供有利条件；而杀伤T 细胞从杀伤T细胞前体细胞诱导成熟为效应的杀伤T细胞需要一个应答过程，一般需1周以上，识别和杀伤具有特异性，免疫力维持时间也较长。

另外，在病毒感染过程中，病毒感染细胞产生的IFN－a和IFN－5可诱导NK细胞的活化，提高其杀伤功能。

在病毒感染初期，NK细胞主要通过自然杀伤来控制病毒的感染，在机体产生了针对病毒抗原的特异性抗体后，NK细胞还可通过ADCC 来杀伤感染的靶细胞，从而达到清除病毒的目的。

穿孔素是NK细胞杀伤病毒感染靶细胞的重要因素。

在病毒感染过程中，NK细胞可提供辅助B细胞免疫应答的细胞因子，尤其是针对胸腺非依赖抗原的应答。

NK细胞可产生多种趋化因子，参与白细胞趋化和炎前反应。

NK 细胞无论在血循环中或组织中均可参与控制肿瘤转移和阻抑转移肿瘤的生长。

NK细胞控制肿瘤生长及其转移主要是通过穿孔素依赖的机制，但也存在着穿孔素非依赖的机制。

NK细胞除具有抗感染和抗肿瘤免疫功能外，还参与机体的免疫调节和移植排斥反应。

NK细胞和K细胞的不同点1、数量不同K细胞占血液中淋巴细胞总数的5％～7％，NK细胞占血中淋巴细胞总数的2％～5％。

2。

免疫杀伤方式不同K细胞必须在抗体协助下才能具有免疫杀伤作用,NK细胞不需抗原激活,更不需抗体的协助,它可直接杀伤靶细胞。

3、细胞体积不同K细胞体积略大,是中型淋巴细胞,其直径约为9～12μm。

NK细胞是大淋巴细胞,平均直径为12～15μm,胞质较多,在胞质内有许多大小不等的嗜天青颗粒。

NKLAK细胞活性原理及操作步骤自然杀伤细胞（nature killer cell，NK cell）是一类既不表达TCR，也不表达BCR的淋巴细胞。

来源于骨髓，属于固有免疫细胞。

NK细胞杀伤靶细胞体现MHC非限制性，是抗病毒感染和抗肿瘤免疫的第一道天然防线。

淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cell，LAK）是PBMC经体外IL-2培养后诱导产生的一类新型杀伤细胞，其杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏，也无MHC限制性，其来源可能为NK细胞，临床上用于肿瘤和慢性病毒感染的非特异性免疫治疗。

51Cr释放试验1.原理效应细胞（NK或LAK细胞）和不同的51 Cr标记靶细胞按适当的效∶靶（E：T）比值进行混合，引起效应细胞对靶细胞的溶细胞作用。

通过检测上清中靶细胞内释放出的放射活性来判断NK或LAK细胞活性。

试验时必须同时设立仅有51 Cr标记靶细胞（无效应细胞）的自发释放管以及和含51 Cr标记靶细胞和Triton X-100最大释放管，从而确保检测活性的准确性。

2.材料（1）效应细胞：NK细胞、LAK细胞或通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心从肝素抗凝血中分离获得的PBMC。

（2）靶细胞：推荐测定NK细胞活性的靶细胞株是K562。

K562是一种NK细胞敏感的慢性髓细胞性白血病细胞株；对于LAK细胞活性的测定，常用到对NK细胞抵抗，而对LAK细胞敏感的一种肿瘤靶细胞系，即Daudi细胞。

培养细胞使其处于对数生长期，进行细胞毒性检测的前一天，调整细胞浓度至2×105/ml。

（3）RPMI-10培养基。

（4）用PBS配制5%（v/v）Triton X-100。

（5）10ml圆底聚丙烯管。

（6）96微孔圆底微孔反应板。

（7）8通道微量移液器。

（8）含有H-1000B型转子的Sorvall RT-6000离心机。

（9）γ闪烁计数器和计数管。

3.操作步骤所有操作步骤必须在一个特定的有防护条件的指定为放射性核素使用的区域内进行，51 Cr的使用和处理必须遵循有关生物安全规则。

NK细胞活性检测的原理及应用引言自然杀伤细胞（NK细胞）作为一种重要的免疫细胞，在机体的免疫防御中扮演着重要的角色。

NK细胞不仅可以杀死肿瘤细胞和感染病原体的细胞，还可以调节和激活其他免疫细胞的功能。

因此，研究NK细胞的活性对于预防和治疗肿瘤、感染疾病等免疫相关疾病具有重要的意义。

本文将详细介绍NK细胞活性检测的原理及其在临床和科研中的应用。

原理NK细胞的活性可以通过多种方法进行检测，其中最常用的方法是使用细胞毒性检测。

细胞毒性检测主要分为两种方法：靶细胞直接杀伤法和溶血/变性法。

靶细胞直接杀伤法靶细胞直接杀伤法是通过将靶细胞与NK细胞一起培养，观察并计算靶细胞的存活率来评估NK细胞的活性。

具体步骤如下： 1. 将靶细胞和NK细胞分别培养在细胞培养基中。

2. 将培养好的NK细胞与靶细胞按照不同的比例混合。

3. 经过一定时间的培养后，观察并计算靶细胞的存活率，即可评估NK细胞的杀伤活性。

溶血/变性法溶血/变性法是通过观察和测量NK细胞对溶血红细胞的溶血能力来评估NK细胞的活性。

具体步骤如下： 1. 准备一定浓度的溶血红细胞悬液。

2. 将溶血红细胞悬液与NK细胞按照不同的比例混合。

3. 经过一定时间的孵育，离心沉淀红细胞。

4. 通过测量上清液的吸光度来计算溶血率，即可评估NK细胞的杀伤活性。

应用NK细胞活性检测在临床和科研中都具有广泛的应用。

临床应用在临床中，检测患者的NK细胞活性可以帮助医生评估患者的免疫状态和疾病进展情况，从而制定更合理的治疗方案。

常见的临床应用包括： - 评估抗肿瘤免疫治疗的疗效：通过监测患者的NK细胞活性，可以评估抗肿瘤免疫治疗的疗效，指导治疗方案的调整。

- 检测传染病的免疫性：通过检测患者的NK细胞活性，可以评估患者对于传染病的免疫性，指导预防和治疗。

- 评估移植排斥反应：通过监测移植患者的NK细胞活性，可以评估移植排斥反应的发生和程度，指导治疗和预防。

科研应用在科研领域，NK细胞活性检测可以帮助研究人员深入了解NK细胞的免疫功能和机制，从而为免疫治疗的研发提供理论依据和实验数据。