百度文库-苏丹黑B染色液说明书

+采集发育中后期及成熟种子并用FAA 固定保存。

用滑走切片机冰冻切片法制片，爱尔新蓝一番红染色，甘油胶封藏。

具体组织化学方法：（1）用氯化汞一溴酚蓝鉴定蛋白质。

（2）高碘酸一锡夫试剂鉴定多糖。

（3）碘一碘化钾鉴定淀粉。

（4）苏丹黑B鉴定脂类物质。

（5）PAS法进行可溶性糖鉴定。

（6）含浓硫酸或高氯酸的显色剂能使人参皂甙产生从淡红到紫红的系列颜色反应=颜色的深浅与人参皂甙的含量成正相关![绞股蓝龙须茶的人参皂甙组织定位及皂甙含量的季节变化8-10]（7）组织化学方法冰冻切片法P将干燥的龙须茶在40温水中浸泡0.5小时，取顶芽下第2`3节的茎和叶投入醋酸铅饱和水溶液中处理24小时，Leicac-CM1850冷冻切片机冰冻切片,厚度30um。

组织化学定位：以等量的5％香草醛－冰醋酸和高氯酸混合试剂对冰冻切片显色，临时装片。

Leica－DMLB显微镜观察照相。

(8)组织化学分析结果表明，其分泌细胞团经5％NaOH水溶液处理，由黑色或红色变成绿色，而分泌囊则未变色；分泌囊经苏丹黑染色，变成灰黑色，而分泌细胞团不变色，说明分泌细胞团含金丝桃素类物质，而分泌囊则含挥发油。

Some methods of foreign papers as follows.（1）The various plant materials were treated with Toluidin Blue as a general purpose stain (O'Brien and McCully,1981), and with the following histochemical stains : 各种植物用Toluidin Blue 作为一个总体的染色,具体的组化反应见以下:（2）lipids, Alkanna tincture (Faure, 1914); 安娜酊剂鉴定脂类.（3）pectic substances果胶物质, Ruthenium Red (Jensen, 1962)钌红鉴定果胶类物质; essential oils, Sudan III with glacial acetic acid as control (Johansen, 1940); 冰醋酸的Sudan三溶液作为一个控制鉴定挥发油.（4）alkaloids, Wagner reagent (Furr and Mahlberg, 1981), Dragendorff reagent (Yoder and Mahlberg, 1976), 1% picricacid(Faure, 1914), Phosphomolybdic acid (Faure, 1914) and Iodine-potassium iodide solution (Lugol: Johansen, 1940).All histochemical stains were matched by controls.（5）Toluidine Blue (O'Brien and McCully,1981) as a generic dye for DNA, cytoplasm and some components of the cell wall; 甲苯氨蓝作为一般的染料鉴定DNA,细胞质和一些细胞壁的成分.（6）PAS (O'Brien and McCully,1981) for non-cellulosic polysaccharides.PAS反应鉴定非纤维素多糖.（7）Alkanna tincture(Faure, 1914) and Nile blue (Cain, 1947) for total lipids;安娜酊剂和尼罗兰鉴定总的脂类或油脂.（8）Sudan III with glacial acetic acid as a control (Johansen,1940) and Nadi reagent (David and Carde, 1964) for essential oils;冰醋酸的苏丹三作为控制,Nadi reagent鉴定挥发油.（9）Nadi reagent (David and Carde, 1964) for resins;（10）Wagner and Dittmar reagents (Furr and Mahlberg,1981) and iodine iodide solution (Lugol) (Johansen, 1940) for alkaloids;（11）potassium bichromate (Faure, 1914) for tannins; 重铬酸钾鉴定丹宁.（12）Dela®eld hematoxylin (Faure, 1914) and Ruthe-nium Red (Jensen, 1962) for pectic-like substances类似果胶的物质;（13）anti-mony trichloride (Hardman and Sofowora, 1972) for steroids; 三氯化锑鉴定类固醇,(14)brilliant blue Coomassie R250 (Fisher, 1968) for proteins; 库码西R250亮兰鉴定蛋白质.（15）concentrated sulfuric acid (Geissmann and Gri n, 1971) for sesquiterpene lactones.浓硫酸鉴定蓓半萜内酯.（16）分根、根茎、茎、叶四部分进行冰冻切片；于横切面上滴加新配制的99 乙醇一硫酸混合液(1：1)在显色反应l0～30rain之间，以显微镜观察颜色变化。

细胞化学染色检验摘要】细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学。

它以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质(酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。

【关键词】血液细胞染色检验过氧化物酶(peroxidase，POX)染色方法有Washburn法、四甲基联苯胺法和改良的Pereira染色法等。

前者曾是最为常用的方法，但由于其底物联苯胺具有致癌性，故现常用后两者，下面分别介绍这两种方法的原理。

四甲基联苯胺法粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶，POX能分解 H2O2而释放出新生氧，使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于酶活性的细胞质内。

改良的Pereira染色法粒细胞和部分单核细胞中POX能分解H2O2而释放出新生氧，使碘化钾氧化生成碘，碘再与煌焦油蓝作用形成蓝绿色沉淀，定位于酶活性的细胞质内。

1 苏丹黑染色原理苏丹黑B(Sudan black B，SBB)是一种脂溶性重氮染料，能溶解于细胞内的含脂结构(如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇)中，而使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。

脂类物质在粒细胞中丰富，单核细胞中也有少量。

2 中性粒细胞碱性磷酸酶染色原理中性粒细胞碱性磷酸酶(neutrophilic alkaline phosphatase，NAP)染色的方法有G0mori钙-钴法和Kaplow偶氮偶联法，因为钙-钴法操作较为繁琐且所需时间长，而偶氮偶联法的试剂盒操作方便，染色时间短，故目前国内常用偶氮偶联法。

Kaplow偶氮偶联法成熟中性粒细胞碱性磷酸酶在pH 9.6左右的碱性环境中，能水解基质液中的磷酸萘酚钠底物，释放出萘酚，后者与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质酶活性所在之处。

不同的底物与重氮盐的组合不同，化学反应过程以α-醋酸萘酚钠为例。

3 酸性磷酸酶染色原理酸性磷酶(acid phosphatase，ACP)存在于细胞的溶酶体颗粒中，有的细胞中酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的诊断及鉴别诊断。

苏丹黑B染色液(细胞专用)使用说明书货号：G1691规格：3×20ml/3×50ml保存：RT避光，6个月产品内容：名称3×20ml3×50ml Storage 试剂(A):SBB Fixative20ml50ml RT避光试剂(B): SBB Stain B1:SBB Stain A10ml25ml RT避光B2:SBB Stain B10ml25ml RT临用前，取B1、B2等量混合，即为SBB Stain，即配即用。

试剂(C):Wright Stain20ml50ml RT避光产品说明：脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。

人体的脂肪主要有两种：1、储存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、肾、胰腺等部位。

2、结构脂肪，如类脂(磷脂、糖脂、胆固醇等)，主要分布于细胞内。

中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。

中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。

苏丹黑B染色液(细胞专用)简称SBB染色溶液，其原理是苏丹黑B属于脂溶性染料，可溶解于细胞质内的含脂结构中，使脂肪、磷脂、胆固醇等脂类现棕黑或深黑色，并定位于细胞质。

神经磷脂、脑磷脂等行苏丹黑B染色后，呈阳性反应；肾透明细胞癌、卵巢纤维瘤等行苏丹黑B染色后，呈阴性反应。

操作说明(仅供参考)：1.制备新鲜骨髓、血液涂片，入SBB Fixative固定10～15min。

2.取出涂片，放于流通的空气中10～15min。

3.入新配制好的SBB Stain，室温(20～25℃)浸染60min。

4.70%乙醇洗去多余染液，蒸馏水浸洗1min。

5.Wright Stain染色20～30min。

染色结果:中性脂肪棕黑色或深黑色颗粒细胞核红色粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。

肌肉冰冻切片常用组织学及酶组织化学染色技术（—）苏木精和伊红染色（Hematoxylin and Eosin, HE）1．苏木精溶液染色10分钟2．流水冲洗10分钟2．伊红溶液染色3分钟4．流水冲洗1分钟5．梯度酒精脱水，透明树胶封固骨骼肌HE染色（肌膜核蓝色，肌纤维粉红色，结缔组织淡红色）（二）改良Gomori三色染色方法（Modified Gomori Trichrome, MGT）1．Harris苏木精10分钟2．水冲洗 10分钟3．Gomori氏溶液30分钟～60分钟4．0．2%醋酸浸洗1分钟5．酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。

骨骼肌MGT染色（核紫红,肌纤维暗绿色,胶原亮绿色 ,线粒体红色）（三）PAS反应法(Periodic Acid Schiffs reaction, PAS)1．固定于Carnoiy氏固定液10分钟2．流水冲洗2分钟3．0．5%过碘酸5分钟4．蒸溜水洗1～2分钟5．Schiff氏溶液15～30分钟6．流水洗5～10分钟7．Harris苏木精溶液2分钟8．流水洗5分钟9．脱水、透明、封固（合成树胶）骨骼肌PAS染色结果：糖原红色，肌内肌原纤维用清晰可见ⅡA纤维染色反应强，ⅡB、ⅡC、Ⅰ型纤维呈中间型。

（四）苏丹黑B染色1.苏丹黑溶液20分钟（加盖防气化）2．流水洗1．过滤的苏木精染1分钟4．流水洗2分钟5．甘油明胶封固结果：脂类物质染成黑色，。

（五）四氮唑还原酶(NADH—tetrarolium redutase, NADH—TR )1.孵育于下列基质内30分钟，37℃0.05M（或0.2M）Tric缓冲液（PH7.4） 30ml硝基四氮唑（BNT）30mgNADH 24mg2.蒸馏水洗。

3. 甘油明胶封固。

骨骼肌NADH－TR染色(Ⅰ型肌纤维紫兰色，Ⅱ型肌纤维淡灰色)。

（六）琥铂酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase，SDH）染色步骤1．孵育于下列基质30分钟,37℃（琥泊酸钠100 mg 硝基四氮唑兰 10 mg 吩嗪二甲脂硫酸盐0.3 mg 0.1M Tris缓冲液30ml 调PH7.2 ）2．顺序在60%、90%、60%丙酮顺序脱水及蒸馏水清洗3．甘油明胶封固。