脂肪酸甲酯分析色谱柱的选择
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食品中脂肪酸甲酯衍生物的制备和分析Preparation and determination of Fatty Acid Methyl Esters(FAME) 一、目的(Objective)1.了解脂肪酸甲酯化方法的原理2.掌握脂肪酸甲酯化的方法与操作二、仪器与试剂(Equipment and Reagents)1.仪器(equipment):岛津GC-2010气相色谱仪2.样品(sample):植物油(plant-oil)3. .试剂(reagents):三氟化硼(BF3)、氢氧化钠(NaOH) 、甲醇(methanol)正已烷(hexane) 、氯化钠(NaCl) 、硫酸钠(sodium sulfate)、三、实验方法(Procedure)1.样品处理((Sample Preparation):取约0.1g植物油样品于20ml试管中,加入0.5mol/L的NaOH甲醇溶液2ml,60℃水浴中加热至油珠完全溶解(约30min),冷却后加入25%BF3甲醇溶液2ml,60℃水浴酯化20min,冷却后加入2ml正已烷,振摇,加入2ml饱和NaCl溶液振摇,离心取上层有机相于一只干燥试管中并加入少量无水硫酸钠以除去微量的水,供分析使用。
2.分析条件(Conditions):色谱柱(colum):PEG 20M,30m(柱长)×0.32mm,i.d.(内径)液膜厚度0.5μm。
载气(Carrier gas):氮气(N2):流量3.0ml/min,尾气30ml/min;燃烧气:H2 47ml/min;助燃气:空气400ml/min;程序升温(Colum temperature):起始温度120℃,保留3min,10℃/min,至190℃(0.1min) ,2℃/min,至220℃(20min) 。
分析时间45min;检测器:250℃;汽化室:250℃;进样量:0.5ul;分流比:10:1;四、定量计算(Data and Calculations)用峰面积归一化法计算脂肪酸甲酯百分率某酸的百分含量=(某酸的面积/所有组分的总面积)×100%所有组分的总面积:=871.000+137570.000+997.599+30513.354+285672.375+694112.500+99425.289+3 073.200+1850.499=1254085.8C14:0豆蔻酸的含量%=871.000/1254085.8=0.0695%以此类推可得C16:0棕榈酸,C16:1棕榈油酸,C18:0硬脂酸,C18:1油酸,C18:2亚油酸C18:3亚麻酸,C20:0花生酸,C20:1花生一烯酸的含量(%)高效液相色谱法测定果汁中单糖及低聚糖含量1.实验目的熟悉食品中单糖及低聚糖检测的样品处理方法及色谱分析的原理,学会用HPLC分析果汁中主要糖组分的基本实验操作。
色谱柱命名规则
色谱柱的命名规则通常包括以下几个方面:
1. 目标分离物:柱子的命名可以包含目标分离物的相关信息,比如目标化合物、目标谱图等。
例如,某柱子用于分离脂肪酸甲酯,可以命名为FAME柱。
2. 化学成分或材料:柱子的命名中可以包含柱子的化学成分或材料的名称,比如柱子的填料材料、涂层材料等。
例如,某柱子使用的是C18矽胶填料,可以命名为C18柱。
3. 品牌或制造商:柱子的命名中可以包含柱子的品牌或制造商的名称,通常是为了标识柱子的来源和制造商。
例如,某柱子由美国瑞士药品公司制造,可以命名为Agilent柱。
4. 柱子的特性:柱子的命名中可以包含柱子的特性或性能指标的信息,比如柱子的分离效果、分析速度等。
例如,某柱子具有高效分离能力,可以命名为High Efficiency柱。
5. 尺寸和形状:柱子的命名中可以包含柱子的尺寸和形状的信息,比如柱子的长度、内径等。
例如,某柱子长度为250毫米,内径为4.6毫米,可以命名为250 mm × 4.6 mm柱。
综合考虑以上几个方面,柱子的命名通常是一个综合使用的结果,为了方便使用和识别,柱子的命名应该简洁明了、准确清晰。
CNW CD-2560色谱柱可完美适用于食品中脂肪酸的检测(GB 5009.168-2016 食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定,GB 5009.257-2016 食品安全国家标准食品中反式脂肪酸的测定),可实现37种脂肪酸甲酯的有效分离。
经常有检测人员反馈之前用CD-2560可很好的分离37种脂肪酸甲酯,但使用一段时间后分离度突然变差了,尤其是23、24号峰或者31、32号峰;也有检测人员反映之前用其他品牌的色谱柱可分好,换用CD-2560就分不好了。
其实这可能并不是色谱柱的质量问题,那到底是什么原因呢?让小编带你一探究竟。
我们实验室对不同流速条件下,CD-2560对37种脂肪酸甲酯混标的分离情况做了对比,实验的色谱条件为:色谱柱:CD-2560,100m*0.25mm*0.20μm进样口:250℃分流比:30:1进样量:1μL升温程序:初始温度140℃,保持5min,以4℃/min的速率升至240℃,保持30min。
FID检测器温度:260℃实验得到的谱图如下:从以上几张色谱图中,我们可以看出,不同的流速对一些脂肪酸甲酯的出峰情况会有很大的影响,尤其是31号峰(顺-5,8,11,14-二十碳四烯酸甲酯)和32号峰(二十三碳酸甲酯)。
对于本次实验所用的色谱柱,在0.80mL/min的流速条件下,31号和32号峰可以看到明显分离,而在0.70mL/min的流速条件下分离度则变的很差,在0.65mL/min的流速条件下两个峰则直接变成了一个峰,继续降低流速,在0.4mL/min的流速时,又发现两个峰又分开了,但此时两个峰的出峰时间则进行了颠倒,31号峰为二十三碳酸甲酯,而32号峰为顺-5,8,11,14-二十碳四烯酸甲酯。
这个现象很有意思,是为什么呢?我们从色谱分离的基础理论来找找原因。
塔板理论和速率理论分别从热力学和动力学的角度阐述了色谱分离效能及其影响因素,塔板理论引入了塔板数和塔板高度作为柱效的衡量指标,不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同,分配系数的差异是所有色谱分离的实质性原因,用有效塔板数和有效塔板高度作为衡量柱效能的指标时,应指明测定物质。
毛细管柱气相色谱法测定花生油中脂肪酸甲酯
谢民生;朱凌;黎金标
【期刊名称】《理化检验-化学分册》
【年(卷),期】2009(045)001
【摘要】采用毛细管柱气相色谱法测定油脂中7种脂肪酸甲酯的含量,选用HP-INNOWAX毛细管色谱柱(1 μm,30 m×0.53 mm),氢火焰离子化(FID)检测器,进样口温度250℃,柱温220℃,检测器温度280℃,载气流量128 mL·min-1的色谱条件,以保留时间定性,面积归一法定量.按所提的方法测定了花生油标样中7种脂肪酸甲酯的含量,测得结果与标准值相符合,测定值的相对标准偏差在0.1%~5.6%之间.【总页数】3页(P61-62,65)
【作者】谢民生;朱凌;黎金标
【作者单位】韶关市质量计量监督检测所,韶关512026;韶关市质量计量监督检测所,韶关512026;韶关市核工业290研究所,韶关512026
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7
【相关文献】
1.花生油脂油酸与亚油酸比值测定时脂肪酸甲酯溶液制备方法研究 [J], 姜曙光;雷红霞
2.十七酸甲酯定量测定生物柴油中脂肪酸甲酯含量的气相色谱法 [J], 吴晶芳;苏明华
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张永琴
4.气相色谱法测定生物柴油样品中脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油酯的含量 [J], 李长秀;唐忠;杨海鹰
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1. 菜籽油中的脂肪酸甲酯的分离填料: 5% DEGS-PS on 100/120 SUPELCOPORT 色谱柱: 6‘ x 1/8“ 不锈钢柱柱温: 200°C载气: 氮气, 20mL/min检测器: FID进样: 0.5µL混标,10µg FAMEs/µL于氯仿中2.多不饱和脂肪酸甲酯的分离填料: 10% SP-2330 on 100/120 Chromosorb W AW 色谱柱: 6‘ x 1/8“ 不锈钢柱温: 210°C进样: 15µg 混合物于 1.5µL 异辛烷中3. 花生油(RM-3)中的脂肪酸甲酯填料: 10% SP-2340 on 100/120 Chromosorb W AW 部件号: 11852色谱柱: 2 m x 2mm ID 玻璃柱柱温: 195°C载气: 氮气, 20mL/min进样: 0.5µL, 10mg/ml 于异辛烷4.10分钟内快速分离短链脂肪酸色谱柱: Nukol, 30m x 0.25mm ID, 0.25µm部件号: 24107柱温: 185°C载气: 氦气, 20cm/sec检测器: FID进样: 1µL, 挥发酸混标(46975-U)分流比:100:15.C2-C22饱和/不饱和游离脂肪酸色谱柱: Nukol, 15m x 0.53mm ID, 0.50µm部件号: 25326柱温: 110°C to 220°C at 8°C/min载气: helium,20ml/min氦气: FID进样: 0.20µL混标,各组分约 100µg/µL6.鲱鱼油中EPA,DHA的检测色谱柱: 320 30m x 0.32mm ID, 0.25µm部件号: 24152 , 24136柱温: 200°C 载气: 氦气, 25cm/sec 30cc/min 氮气尾吹 检测器: FID, 260°C进样: 1µL(各组分25mg /mL 正己烷), 分流比 100:1, 250°C7.Omegawax 250分析鲶鱼体内不同组织的FAMEs色谱柱: Omegawax 250, 30m x 0.25mm ID, 0.25µm 部件号: 24136柱温: 205°C载气: 氦气, 30cm/sec检测器: FID, 260°C进样: 1µL o (25mg FAMEs/mL),分流比 100:1, 250°C8. SP-2560 分离37种脂肪酸甲酯混标色谱柱:SP-2560 100m*0.25mmID*0.20um部件号:24056柱温:140℃℃(5min) to 240℃ at 4℃/min .保持15min 载气:氦气,20cm/sec,175℃37种脂肪酸甲酯种混标。
作者Frank DavidResearch Institute for Chromatography President Kennedy Park 20B-8500 Kortrijk, Belgium Pat SandraUniversity of Gent Krijgslaan 281 S4,B-9000 Gent BelgiumAllen K. VickersAgilent Technologies, Inc.91 Blue Ravine Road Folsom, CA 95630-4714USA摘要食品中的脂肪酸甲酯(FAME )的分析对食品的表征过程是十分重要的,正常情况下脂肪酸甲酯的分析使用涂渍极性固定相色谱柱,例如聚乙二醇或氰丙基聚硅氧烷固定相,这种固定相可以按脂肪酸的碳数、不饱和度、顺反构象以及双键的位置对它们进行分离。
脂肪酸甲酯分析色谱柱的选择应用报告本应用报告比较三种不同固定相对脂肪酸甲酯的分离的情况。
聚乙二醇柱对不太复杂的样品可以得到很好的分离;但不能分离顺-反异构体的样品。
而中等极性的氰丙基聚硅氧烷柱(DB23)对复杂的FAME 混合物可以得到很好的分离,对一些顺反异构体也可以得到分离; 要使顺反异构体分离的更好,就要使用更高极性的HP-88 氰丙基色谱柱。
前言FAME 的分析用于食品中脂类部分含量的表征,也是食品分析中极为重要的一项内容,脂类主要包括甘油酸酯,它们是一个甘油分子和三个脂肪酸分子的酯,绝大多数食用脂肪和油主要含有的脂肪酸是从月桂酸(十二碳酸)到花生酸(二十碳酸),除直链饱和脂肪酸外,也有支链脂肪酸、单不饱和脂肪酸、双不饱和脂肪酸以及多不饱和脂肪酸。
表1 是最重要的脂肪酸及其的缩写。
食品分析2为了表征脂类组分的含量,把甘油三酸酯水解(皂化)成为甘油和三个游离脂肪酸,虽然游离脂肪酸可以直接在极性固定相上(例如HP-FFAP 柱)进行分析,但是如果把脂肪酸衍生化为脂肪酸甲酯就可以得到更为可靠和重复性的色谱数据。
生物柴油中脂肪酸甲酯及亚麻酸甲酯含量的测定气相色谱法(NB/SHIT 0831-2010)1范围1.1本标准规定了测定用作纯生物燃料或作为柴油燃料调合组分的生物柴油中脂肪酸甲酯(FAME)含量以及其中所含亚麻酸甲酯含量的方法。
1.2本标准用于测定质量分数大于90%的脂肪酸甲酯的总含量,亚麻酸甲酯质量分数的测定范围为1%一15%。
1.3本标准适用于测定C14至C24的脂肪酸甲酯的含量。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 4756石油液体手工取样法(GB/T 4756-1998,eqv ISO 3170: 1988)GB/T 17377动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析(GB/T 17377-1998,eqv ISO 5508;1990)ISO 4259石油产品试验方法精密度确定法3方法概要将预先加人了一定量十七烷酸甲酯内标物的待测试样导人气相色谱系统,试样中的脂肪酸甲酯经聚乙二醇为固定相的强极性毛细管色谱柱分离后,用火焰离子化检测器检测,采用内标法定量,求得脂肪酸甲酷的含量和亚麻酸甲酯的含量。
4试剂和材料4.1正庚烷:分析纯。
4.2十七烷酸甲酷:纯度大于99%。
4.3十七烷酸甲酯溶液:质量浓度10mg/mL。
称量约500mg十七烷酸甲酯(见4.2)于50mL容量瓶(见5.4)中,精确至0.1mg,并用正庚烷(见4.1)稀释至刻度。
5仪器5.1气相色谱仪系统,由下述组件构成:5.1.1气相色谱仪:仪器配置应满足表1所规定的条件。
5.1.2色谱柱:壁涂聚乙二醇色谱固定相的色谱柱(Carbowax 20M.、Dbwax ,Cpwax 等),柱长30m,内径0.32mm或0.25mm,液膜厚度0.25μm的色谱柱可获得良好的分离效果。
油和脂肪中的〔天然〕脂肪酸化学分析方法气相色谱法是一种分离和定性脂肪酸的常用方法。
它基于脂肪酸的物理化学性质,在气相色谱柱上进行分离,并使用检测器检测分离的化合物。
下面是使用气相色谱法进行油和脂肪中的脂肪酸分析的步骤:1.样品制备:将油或脂肪样品转化为甲酯化的脂肪酸甲酯。
这一步骤是为了使脂肪酸与气相色谱柱相容,并提高分离和检测的灵敏度。
一般使用甲酸或甲酸甲酯进行甲酯化反应。
2.脂肪酸的分离:将甲酯化的样品通过气相色谱柱进行分离。
气相色谱柱通常是高分子量的二元硅氧烷柱,具有较好的热稳定性和化学惰性。
分离的条件包括柱温、载气流速和分离程度。
3.检测和定量:采用适当的检测器进行脂肪酸的检测和定量。
常见的检测器包括火焰离子化检测器(FID)和质谱检测器(MS)。
火焰离子化检测器是一种通用的检测器,可以用于大部分脂肪酸的定量。
质谱检测器则可以提供更高的灵敏度和选择性,可以鉴定并量化一种特定的脂肪酸。
在使用气相色谱法进行油和脂肪中脂肪酸的分析时,有一些注意事项需要遵守:1.样品制备时需要避免氧气、光线和高温等因素的影响,以免导致脂肪酸的氧化和降解。
2.分离柱的选择应根据样品的性质和需要分离的脂肪酸的种类来确定。
柱的温度和载气流速需要进行优化以获得最佳的分离效果。
3.检测器的选择取决于需要检测的脂肪酸的种类和浓度范围。
火焰离子化检测器是一种常用的检测器,但质谱检测器可以提供更高的选择性和灵敏度。
总结起来,气相色谱法是一种常用的油和脂肪中脂肪酸化学分析方法。
它通过将样品转化为甲酯化的脂肪酸甲酯,然后通过气相色谱柱进行分离,并使用适当的检测器进行检测和定量。
在进行分析时需要注意样品制备、分离条件和检测器的选择。
这种方法具有分离度高、灵敏度高和操作简便等优点,被广泛应用于科学研究和食品行业中。
MM_FS_CNG_0264动植物油脂脂肪酸甲酯气相色谱分析气相色谱法MM_FS_CNG_0264动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析1适用范围本方法不适用于聚合的脂肪酸。
2.主要试剂和仪器2.1.主要试剂载气:惰性气体(氮、氦、氩、氢等),干燥且氧气含量低于10mg/kg。
注:只有在采用毛细管柱进行分析时,作为载气的氢气能使分析速度加快一倍,但有危险。
应配用安全装置。
助燃气:氢气(纯度99.9%),不含有机杂质;空气或氧气,不含有机杂质;参比标准:纯脂肪酸甲酯的混合物或已知油脂组成的甲酯,其组成最好与欲分析之脂肪物质相似。
应注意防止多不饱和脂肪酸氧化。
2.2.仪器气相色谱仪:气相色谱仪由以下单元组成:进样装置可任选一种进样装置:a)配用填充柱,尽可能有最小的死体积(在这种情况下进样口应可被加热至比柱温高20~50℃的温度);b)配用毛细管柱,在此种情况下,进样装置应特殊设计以便适用于此种柱管。
可使用分流式进样装置也可使用非分流式进样装置。
注:在不含碳原子数少于16的脂肪酸时,可以使用移动针式进样器。
柱箱柱箱应能将色谱柱的温度加热至260℃以上,并能维持所需温度(填充柱为±1℃,毛细管柱为±0.1℃)。
当使用熔融石英管时,后一条件是特别重要的。
建议在所有情况下,特别是在分析碳原子数少于16的脂肪酸时,采用程序升温。
填充柱管柱:应由对被分析的物质惰性的材料制成(例如玻璃或不锈钢),具有如下尺寸:a)长度:1~3m。
当长链脂肪酸(碳原子数多于20)存在时,应使用较短的柱子;当测定四或六碳的脂肪酸时,建议使用长度为2m的管柱。
b)内径:2~4mm。
注1 如果带有三个以上双键的多不饱和组分存在时,它们会在不锈钢管柱内分解。
2 可以使用双柱系统。
填充物由以下要素构成:a)载体:酸洗并硅烷化的硅藻土或其他适用的惰性载体,且粒度分布范围狭窄(粒度为125~200μm时为25μm),平均粒度与管柱内径和长度有关。
气相色谱仪检测油中脂肪酸和六号溶剂脂肪酸分析一.分析原理将脂肪酸甘油酯转化为脂肪酸甲酯后,进行气相色谱测定。
用归一法确定各脂肪酸的组成比例。
二.脂肪酸甲酯的制备1.液态油样:取油样200mg置入10ml容量瓶中,加入乙醚-正己烷(2:1)2ml,甲醇2ml及0.8mol/LkOH(NaOH).CH3OH溶液2ml振匀静置5min,加水至刻度,取上层溶液进样(0.2uL)分析。
2.固态牛羊脂肪酸酯化法:乙醚甲酯化取约0.1克样品于10ml容量瓶中,加2-3ml无水甲醇在水浴上加热溶解后,滴加硫酸(分析级)5-8滴,充分摇匀后,放置10min,加3-4ml蒸馏水,0.5-1.0ml乙醚,猛烈摇动,萃取1min,静置分层后,取上层清液0.5ul进样。
三.仪器及材料1.气相色谱GCa)氢焰检测器(FID)b)气源:氮气,氢气,空气。
2.数据处理:N2000工作站及电脑3.色谱柱:¢4*2米不锈钢柱。
4.分析级:乙醚,正己烷,甲醇,kOH(NaOH),蒸馏水 5.10ml容量瓶四.仪器的掌握分析条件:柱温:190℃气化:260℃检测:250℃灵敏度:3载气:0.1MP进样量:0.2uL 五.分析谱图(略) 大豆油分析谱图:花生油分析谱图:菜子油分析谱图:芝麻油分析谱图:牛羊油分析谱图:牛羊油(硬脂酸)分析谱图:油中溶剂残留检测正己烷(六号溶剂)一.分析原理食用油分机榨油和萃取油,萃取油中六号溶剂需要检测,国家标准:100ppm,10ppm视为没检出。
检测原理将植物油样品放入密封的平衡瓶中,在肯定温度下,使残留溶剂气化达到平衡时,取液上气体注入气相色谱中测定,与标准曲线比较定量。
二.仪器及材料1.GC-5890气相色谱a).氢焰检测器(FID)```b).气源:氮气,氢气,空气。
2.数据处理:N2000工作站及电脑3.色谱柱:¢4*2米不锈钢柱。
4.分析级:正己烷5.电子天平,60ml小药瓶,10ml容量瓶,恒温水浴锅,5ml注射器三.分析方法1.无溶剂机榨油2.正己烷(分析级)3.标准油样精确称取0.5g正己烷和49.5g机榨油混匀得1﹪(质量)标准油样,称取1﹪标准油样0.5g用机榨油稀释到50g,每克含0.1mg正己烷(100mg/kg)即100ppm4测定方法:标准曲线取60ml小药瓶,分別加入机榨油10g,8g,6g,4g,2g,0g再补加100mg/kg标准油样到10g(分别含正己烷0mg/kg,20,40,60,80,100),塞紧,混匀于25℃恒温水浴中放置30min并当心地水平振匀3min,用注射器抽1ml并注射1ml空气进小药瓶25℃保温后重复进样。
分离脂类的气相色谱柱
气相色谱(GC)是一种将气体或蒸汽样品分离和分析的技术。
在分离脂类分析中,选择合适的气相色谱柱非常重要。
常见的用于分离脂类的气相色谱柱有以下几种:
1. 活性硅胶柱(Silica gel column):活性硅胶柱常用于分离不饱和脂肪酸,如脂肪酸甲酯。
这种柱材具有较高的极性,对极性物质具有很好的保留能力。
2. 聚酯柱(Polyester column):聚酯柱可用于分离中极性脂类,如甘油三酯。
聚酯柱具有相对较高的极性,对中极性化合物具有较好的保留性能。
3. 聚硅酮柱(Polydimethylsiloxane column):聚硅酮柱是最常用的气相色谱柱之一,用于分离脂类中的饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸。
这种柱材是非极性的,对不饱和脂肪酸的分离效果较好。
4. 脱水硅胶柱(Anhydrous silica gel column):脱水硅胶柱主
要用于分离和测定脂类中的脂肪醇、脂肪醛等化合物。
这种柱材对极性化合物具有较强的保留能力。
此外,还可以根据分析需要选择具有特殊功能的气相色谱柱,如具有碳氢化合物选择性的特殊柱。
需要注意的是,在选择气相色谱柱时,应根据分析物的性质和分离要求来选择柱材、柱长、内径等参数,以获得理想的分离效果。
同时,还要注意使用适当的样品预处理方法,如酯化、甲基化等,以增强对脂肪酸、甘油三酯等脂类化合物的分离和检测能力。
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参见63页.39网上订购,请登录/chem/store/cn40有机氯农药I EPA方法8081A15.α-六六六16.五氯硝基苯(IS)色谱柱:DB-35ms122-383230 m x 0.25 mm,0.25 µm载气:氦气,35 cm/sec,温度为50 ºC柱温箱:50 ºC保持1 min以25 ºC/min从50 ºC升到100 ºC以5 ºC/min从100 ºC升到300 ºC300 ºC保持5 min进样:不分流,进样口温度250 ºC30秒吹扫活化时间检测器:MSD,传输线300 ºC以m/z 50-500进行全扫描样品: 1 µL 35 µg/mL的8081A标样,Accustandard Inc。
1.1,2-二溴-3-氯丙烷2.4-氯-3-硝基三氟甲苯(SS)3.六氯戊二烯4.1-溴-2-二甲基黄嘌呤(IS)5.氯唑灵6.地茂散7.氟乐灵8.2-溴联苯(SS)9.四氯间二甲苯(SS)10.α,α-二溴间二甲苯11.毒草胺12.燕麦敌A13.燕麦敌B14.六氯苯17.γ-六六六18.β-六六六19.七氯20.甲草胺21.δ-六六六22.百菌清23.艾氏剂24.敌草索25.异艾氏剂26.开乐散27.环氧七氯28.γ-氯丹29.反式七氯30.α-氯丹31.硫丹I32.克菌丹33.p,p'-DDE34.狄氏剂35.乙酯杀螨醇36.乙滴涕37.丙酯杀螨醇38.异狄氏剂39.p,p'-DDD40.硫丹II41.p,p'-DDT42.乙醛异狄氏剂43.硫丹硫酸盐44.Dibutylchlorendate (SS)45.敌菌丹46.甲氧滴滴涕47.异狄氏剂酮48.灭蚁灵49.顺氯菊酯50.反氯菊酯有机氯农药II EPA方法8081A色谱柱:DB-5ms122-553230 m x 0.25 mm,0.25 µm载气:氦气,35 cm/sec,温度为50 ºC 柱温箱:50 ºC保持1 min以25 ºC/min从50 ºC升到100 ºC以5 ºC/min从100 ºC升到300 ºC300 ºC保持5 min 进样:不分流,进样口温度250 ºC30 sec吹扫活化时间检测器:MSD,传输线300 ºC以m/z 50-500进行全扫描样品: 1 µL 35 µg/mL的8081A标样,Accustandard Inc。
脂肪酸测定方法
脂肪酸测定方法有多种,其中气相色谱法是目前应用最为广泛的方法之一。
以下是气相色谱法的测定步骤:
样品处理:将样品中的脂肪酸进行甲酯化反应,将甲酯化后的产物注入到气相色谱仪中。
分离:在气相色谱柱中,脂肪酸会根据其分子量和极性不同,分别在柱子中停留不同的时间。
通过调整色谱柱的类型和温度,可以实现对脂肪酸的分离。
检测:经过分离后的脂肪酸组分通过检测器进行检测。
检测器可以根据组分的特征进行选择,常用的检测器有火焰离子化检测器(FID)和质谱检测器(MSD)等。
定性和定量分析:通过对比标准品和样品的色谱峰,可以确定脂肪酸的种类。
同时,通过测量各组分的峰面积或峰高,可以计算出各组分的含量。
除了气相色谱法,脂肪酸测定方法还包括高效液相色谱法、核磁共振法等。
其中,高效液相色谱法可以用于分离和分析高分子量脂肪酸,而核磁共振法则可以提供脂肪酸分子结构和组成的信息。
在实际应用中,选择合适的脂肪酸测定方法需要考虑样品的性质、分析目的和实验条件等因素。
同时,为了保证结果的准确性和可靠性,需要对实验条件和方法进行标准化和规范化,以及对实验数据进行科学合理的处理和分析。
气相色谱法测定脂肪酸实验报告
实验原理:
气相色谱法是一种常用的脂肪酸含量分析方法。
其基本原理是将脂肪酸样品经过酯化处理,然后使用气相色谱仪进行分离和定量。
实验步骤:
1. 酯化反应:将待测样品中的脂肪酸与甲醇和硫酸缩酯化反应,生成甲酯化脂肪酸。
反应条件为70℃下反应2小时。
2. 萃取:将反应混合物与乙醚进行萃取,使脂肪酸甲酯从水相中转移到有机相中。
3. 浓缩:用氮气对乙醚溶液进行浓缩,获得脂肪酸甲酯的溶液。
4. 气相色谱分析:将浓缩溶液注入气相色谱仪进行分析。
色谱柱为聚硅氧烷,流动相为氮气。
通过控制温度和流速,实现对脂肪酸甲酯的分离和定量。
实验结果与讨论:
通过气相色谱仪测得的脂肪酸甲酯峰面积与标准品的峰面积进行对比,可以计算出待测样品中脂肪酸的含量。
根据实验结果,我们可以推断该样品中的不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸的含量。
实验总结:
通过本实验,我们初步了解了气相色谱法测定脂肪酸含量的基本原理和操作步骤。
通过实验可以快速、准确地测定脂肪酸的含量,对于食品、化妆品或其他相关领域的研究具有重要意义。
实验注意事项:
1. 在操作过程中,要注意实验室安全,佩戴适当的防护装备。
2. 实验过程中要严格控制温度和流速,以保证实验结果的准确性。
3. 实验中使用的试剂和溶剂要注意储存和保存,避免出现安全隐患。
4. 实验后要及时清洗和归还实验设备,保持实验室的整洁和卫生。
脂肪酸含量测定一、实验原理由于脂肪酸中的官能团只有羰基(210nm),对紫外的吸收很小,且在这样的短波长上易受杂质的影响。
尤其是饱和脂肪酸,因此难以进行高灵敏度分析。
将脂肪酸酯化后,通常采用GC-MS进行测定。
本实验甲酯化方法采用国标GB/T 17376-2008,甘油酯皂化后,释出的脂肪酸进行酯化,萃取得到脂肪酸甲酯用于气相色谱分析。
样品中的脂肪酸经过适当的前处理(甲酯化)后,进样,样品在汽化室被汽化,在一定的温度下,汽化的样品随载气通过色谱柱,由于样品中组分与固定相间相互用的强弱不同而被逐一分离,分离后的组分,到达检测器时经检测口的相应处理,产生可检测的信号。
根据色谱峰的保留时间定性,归一法确定不同脂肪酸的百分含量。
仪器及试剂配置检测项目植物油中脂肪酸的测定色谱仪器型号:C5890型色谱仪配有FID检测器毛细管色谱柱:EG-20M30*0.32*0.5专用柱色谱工作站N2000 (电脑1台自备)氮氢空发生器:GT300E 1台或高纯氮、氢气、空气钢瓶各一瓶其它仪器:1恒温水浴锅2移液管3胶头滴管4小圆底烧瓶5冷凝管6样品瓶试剂:石油醚、乙醚、氢氧化钾、甲醇均为AR级。
四、实验步骤(一)样品预处理酯化测定:取0.2g油样于10ml容量瓶中,加5.0ml 4:3石油醚—乙醚,使其溶解,再加4.0ml 0.5mol/L 氢氧化钾—甲醇溶液,振摇1分钟,放置8min后加水1.0ml,静止20min使之分层,取上层液注入色谱仪,保留时间定性,面积归一化法定量。
测定:(1)气相色谱条件①色谱柱:石英弹性毛细管柱,0.32mm(内径)×30m,内膜厚度0.5um。
②程序升温:150℃保持3min,5℃/min升温至220℃,保持10min;进样口温度250℃;检测器温度300℃。
③气体流速:氮气:40mL/min,氢气:40mL/min,空气:450mL/min,分流比30﹕1。
(2)色谱分析吸取0.4-1μL试样液注入气相色谱仪,记录色谱峰的保留时间和峰面积。
作者Frank DavidResearch Institute for Chromatography President Kennedy Park 20B-8500 Kortrijk, Belgium Pat SandraUniversity of Gent Krijgslaan 281 S4,B-9000 Gent BelgiumAllen K. VickersAgilent Technologies, Inc.91 Blue Ravine Road Folsom, CA 95630-4714USA摘要食品中的脂肪酸甲酯(FAME )的分析对食品的表征过程是十分重要的,正常情况下脂肪酸甲酯的分析使用涂渍极性固定相色谱柱,例如聚乙二醇或氰丙基聚硅氧烷固定相,这种固定相可以按脂肪酸的碳数、不饱和度、顺反构象以及双键的位置对它们进行分离。
脂肪酸甲酯分析色谱柱的选择应用报告本应用报告比较三种不同固定相对脂肪酸甲酯的分离的情况。
聚乙二醇柱对不太复杂的样品可以得到很好的分离;但不能分离顺-反异构体的样品。
而中等极性的氰丙基聚硅氧烷柱(DB23)对复杂的FAME 混合物可以得到很好的分离,对一些顺反异构体也可以得到分离; 要使顺反异构体分离的更好,就要使用更高极性的HP-88 氰丙基色谱柱。
前言FAME 的分析用于食品中脂类部分含量的表征,也是食品分析中极为重要的一项内容,脂类主要包括甘油酸酯,它们是一个甘油分子和三个脂肪酸分子的酯,绝大多数食用脂肪和油主要含有的脂肪酸是从月桂酸(十二碳酸)到花生酸(二十碳酸),除直链饱和脂肪酸外,也有支链脂肪酸、单不饱和脂肪酸、双不饱和脂肪酸以及多不饱和脂肪酸。
表1 是最重要的脂肪酸及其的缩写。
食品分析2为了表征脂类组分的含量,把甘油三酸酯水解(皂化)成为甘油和三个游离脂肪酸,虽然游离脂肪酸可以直接在极性固定相上(例如HP-FFAP 柱)进行分析,但是如果把脂肪酸衍生化为脂肪酸甲酯就可以得到更为可靠和重复性的色谱数据。
包括水解和甲酯化的衍生化有各种不同的方法[1],这些方法很容易使用,也不需要昂贵的试剂。
典型的样品制备方法会在样品制备一节里叙述。
在脂肪酸甲酯制备好以后,脂肪酸甲酯就会按碳数(在脂肪酸链上的碳数,包括甲酯的碳数)和不饱和度进行分离,而且,双键的位置和几何构象(顺/反)也是重要的参数,对其测定就增加了对食品中脂类组分表征的信息。
在这一应用报告中,比较了三种固定相对FAME 分离的性能。
第一个方法使用DB-Wax ,聚乙二醇色谱柱,在这一固定相上FAME 从C4(丁酸)到C24(二十四酸)可以按碳数和不饱和度得到分离。
在这一类色谱柱上顺,反式异构体不能分离开,并且对复杂的混合物如鱼油,某些FAME 难以分离,但是,在聚乙二醇色谱柱上分离FAME 得到广泛应用,并用于表征“标准”的样品,如谷物玉米、橄榄和大豆中的植物油。
而且也可以分析动物脂肪。
分析牛奶脂肪中的丁酸是一项重要应用。
牛奶中的丁酸浓度是它的一个重要质量指标,所以,分析牛奶、奶制品、巧克力产品中的丁酸非常重要。
为了分析复杂的样品,例如鱼油,还需要对FAME 有额外的分离度,使用涂渍氰丙基固定相的毛细管柱,例如DB-23,有这样的能力,在DB-23 柱上高不饱和度的脂肪酸,例如全顺-5,8,11,14,17-二十碳戊烯酸甲酯(EPA,C20:5 ω3),和全顺-4,7,10,13,16,19-二十二碳己烯酸(DHA,C22:6 ω3)可以和其他脂肪酸甲酯分离开。
这一分析在当今令人关注的omega-3 脂肪酸分析计划中十分重要。
在氰丙基柱上也可以分离顺-反异构体,由于分离顺式-异构体和氰基偶极的作用力较强,反式异构体比顺式-异构体较前洗脱出来,这样就可以测定反式脂肪酸了,但是氰丙基固定相的极性还不够,不能把复杂的顺-反异构体混合物完全分离。
为了分离含有大量的反式脂肪酸复杂的FAME 混合物,推荐使用极性更强的HP-88 色谱柱,在这一高极性色谱柱上,可以很好地分离不同的顺-反异构体,但是一些更高分子量的脂肪酸分离要更困难一些。
在图1 中总结了各种色谱柱及其应用领域的概况。
实验样品FAME 的参考标准样品溶液来源于不同的渠道,或使用纯化合物,用于分析的标准溶液,通常溶于己烷,浓度为0.01%–0.1%(w/v)。
为了校验色谱柱,使用一个含有37个组分的混合物(Supelco #18919),这是一个含有100 mg 纯净物质的混合物,包含C4–C24 的FAME(相对浓度为2%–4%)。
使用前所有样品在10 mL己烷中稀释(每种FAME 最后的浓度=0.2–0.4 mg/mL)。
油和脂肪样品可使用不同的方法制备[1–5]。
样品制备方法[5]称取100 mg 样品到20 mL试管(带螺口盖)或反应瓶中,使样品溶于10 mL己烷,加100 µL2 N 氢氧化钾甲醇溶液(100 mL甲醇中11.2 g KOH)。
把试管或反应瓶盖上,旋转摇动30 秒,离心,把上清液转移到2 mL自动进样器的样品瓶中。
分析条件在带有火焰离子化检测器(FID)的Agilent 6890 GC 上进行分析,使用Agilent 7683 自动进样器进行自动分流进样。
仪器的设置和分析条件总结在表2(DB-Wax 柱),表3(DB-23 柱)和表4(HP-88柱)中。
图1.FAME 分析色谱柱选择概况3结果在DB-Wax 柱上分析37种组分FAME 参考标准样的典型色谱如图2 所示。
图2.37 种FAME 参考标准样混合物在30 m x0.25 mm ID,0.25 µm DB-Wax 色谱柱上的GC-FID 分析,使用方法1(见表2)除下列化合物外,其它化合物都能得到很好的分离:顺-和反-C18:1 在14.38 min 处一起洗脱出来。
顺-和反-C18:2 在15.13 min 处一起洗脱出来。
C20:3 n6 和C21:0 19.44 min 处一起洗脱出来。
以及C22:6 和C24:1 在30.73 min 处一起洗脱出来。
但是,这样的分离对一些经典的油和脂肪的表征方法已经足够了,丁酸在4.28 min 洗脱出来,这一方法可以用于牛奶中脂肪的测定。
这一点可以在图3 中得到证明,它是对有证牛奶脂肪标准物质(CRM 164,[6])的分析。
5在60 m×0.25 mm ID,0.15 µm DB-23 柱上分析37种FAME 混合物的色谱,如图4 所示。
6使用这些条件对标准混合物中的所有成分都可以很好地分离,顺/反异构体以及EPA(19.15 min) 和DHA(22.38 min) 混合物的分离也得到改善。
这一方法对复杂混合物的脂肪酸分离很有用,特别是对omega-3 脂肪酸(如EPA和DHA)的检测有用。
图5所示为对海产品中的多不饱和脂肪酸混合物得到很好的分离例证。
对EPA和DHA能够很好的检测和定量。
图5.海产品中的不饱和脂肪酸混合物在60 m x 0.25 mm ID,0.15 µm DB-23 柱上的GC-FID 分析(使用表3 中的方法2)在高极性HP-88 柱上分析37 种FAME 混合物的色谱图如图6 所示。
7图6.37 种FAME 混合物在100 m x 0.25 mm ID,0.2 µm HP-88 柱上的GC-FID 分析(使用表4A 中的方法3A)除C22:0 和C20:3(n-6)是在24.7 min 处共洗脱出来以外,其它都得到很好的分离。
但是,使用这一色谱柱对顺-反异构体的分离非常好。
含有五个C18:1 异构体的标准混合物分离如图7 所示。
8四个C18:2 异构体(反-反,顺-反,反-顺和顺-顺)同样得到很好的分离,如图8 所示。
图8.四个C18:2 异构体在100 m x 0.25 mm ID,0.2 µm HP-88 柱上的GC-FID 分析(使用表4 中的方法3A)分离高氢化油可以比较DB-23 和HP-88 色谱柱之间的分离能力,由于氢化的作用会形成所有可能的位置和几何(顺-反)异构体,样品分别在DB-23 和HP-88 柱上于180 °C下进行分析,图9 是色谱分离的比较(C18:1 的洗脱窗口有详细的分离图)。
虽然图4表明在37种组分标样中的反-C18:1(n9)和顺-C18:1(n9)达到基线分离,但是图9 证明真正的样品中含有几个C18:1 异构体。
HP-88 是分离顺-反异构体的最佳选择。
9图9.氢化油中C18:1 异构体在60 m x 0.25 mm ID,0.15 µm DB-23 柱(上图)和100 m x 0.25 mm ID,0.2 µm HP-88 柱上分离情况的比较,二者都在180 °C 下恒温分离。
部分氢化菜籽油的分离证明HP-88 柱的的适用性。
图10 证明反式脂肪酸可以得到显著的分离,顺-反异构体之间的峰谷很容易确定,其他反式异构体(C18:2和C18:3)也可以检测出来。
10图10.部分氢化菜籽油在100 m x 0.25 mm ID,0.2 µm HP-88 柱上的GC-FID 分析(使用表4 中的方法3A)根据欧盟法规2568/91 [5] 的规定,相同的色谱柱也可以用于对橄榄油进行质量控制,使用表4 中所述的方法(柱A– 方法A)对100 m 的色谱柱,使用氢气做载气的分析时间为35 min。
对橄榄油的质量控制,也可以使用60 m 色谱柱(表4– 柱B)。
使用氦气做载气和不同的温度程序(即柱温B,表4)在20 min内可得到很好的分离,如图11 所示。
所得到的分离与EC 法规[5]完全一致。
11安捷伦公司对本材料里可能有的错误或有关装备、性能或使用这一材料而带来的意外伤害和问题不负任何责任。
本材料中的信息、说明和指标,如有变更,恕不另行通知。
© 安捷伦科技有限公司,2005中国印刷2005年8月30日5989-3760CHCN/chem/cn图11.橄榄油FAME 在60 m x 0.25 mm ID ,0.2 µm HP-88 柱上GC-FID 分析(使用表4 中的方法3B )结论有三种固定相能用于FAME 的分析。
1.DB-Wax 色谱柱可用于典型的食用油和脂肪的分析,包括牛奶脂肪中的丁酸,但是使用这一色谱柱不能分离顺-反异构体。
2.中等极性的DB-23 氰基柱对复杂FAME 混合物,包括鱼油可以得到很好的分离,可以适用于omega 3 脂肪酸的测定,例如EPA 和DHA 。
对顺-反异构体可以得到部分的分离。
3.对更为难分离的顺-反异构体分离,推荐使用HP-88 色谱柱,可以选择这一色谱柱进行橄榄油的QC 分析。