荧光显微镜使用说明书

显微镜结构示意图

显微镜使用说明

您现在使用的是1600倍生物显微镜，配有三个目镜（5X、10X、16X）和三个物镜（10X、40X、100X）

1．低倍目镜和低倍物镜的使用（低倍镜容易找到目标）：

（1）准备：将显微镜取出，平放于桌面上，转动粗调焦旋钮，将镜筒略升高使物镜转换器与载物台距离拉开，以便安装物镜，按任意顺序装上三个物镜（物镜转换器有一个孔上有防尘盖，装物镜时需取下），物镜需顺着螺纹方向旋到底；取下目镜筒上的防尘盖并插上一个低倍的目镜，安装完毕将显微镜置于前方略偏左侧，必要时使镜臂倾斜以便观察。再旋转物镜转换器，将低倍物镜对准载物台中央的通光孔（可听到“咔哒”声）。

（2）对光：打开光圈，转动聚光镜使其上升(其作用是把光线集中到所要观察的标本上)，双眼同时睁开，以左眼向目镜内观察，同时调节反光镜的方向，直到视野内光线明亮均匀为止。反光镜的平面镜易把其他景物映入视野，一般用凹面镜对光,光线不足时,可使用电光源（电光源的安装见下文）。

（3）放标本片：标本片朝上放到载物台上用移动尺的两个夹子夹住标本片（640倍的显微镜是用压片压住标本），调节移动尺的两个旋钮把要观察的部分移到通光孔的正中央。

（4）调节焦距：从显微镜侧面注视物镜镜头，同时旋转粗调焦旋钮，使镜筒缓慢下降，大约低倍镜头与玻片间的距离约5mm时，再用左眼从目镜里观察视野，左手慢慢转动粗调焦旋钮，使镜筒缓缓上升，直至视野中出现物像为止。如物像不太清晰，可转动细调焦旋钮，使物像更加清晰。 如果按上述操作步骤仍看不到物像时，可能由以下原因造成：

①转动调焦旋钮太快，超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距．

②物镜没有对正，应对正后再观察。

③标本没有放到视野内，应移动标本片寻找观察对象。

④光线太强，尤其观察比较透明的标本片或没有染色的标本时，易出现这种现象，应将光线调暗一些后，再观察。

2．低倍物镜转高倍物镜（40倍物镜）的使用

（1）依照上述操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。

荧光显微镜使用指导书

一、 荧光显微镜的整体布局说明

图中项目说明:

A--荧光显微镜光路部分

B--光路电源及数据采集卡

C--数据采集电脑

A1----汞光

A2----卤素灯

A3----卤素灯(底光)

A4----滤光模组

A5----目镜组

A6----观察模式切换(目镜/数据采集)

A7----反光镜

A8----差分光度计

1----卤素灯A2电源

2----汞光A1电源

3----数据采集卡

二、 观察外延表面状态

1，打开卤素灯A2电源开关1并通过卤素灯A2电源开关1上的旋钮调整其亮度(如图1，具体亮度可根据个人要求决定)。

2，同时确定卤素灯A2与汞灯A1之间的反光镜扳手A7处于如图2所示位置以使卤素灯A2 的光线进入主光路。

图1 卤素灯电源1 图2 反光镜扳手位置

图3 滤光片插条位置 图4 滤光模组A4

3，确定左边的D/UV插条进入光路，调整其余两个ND4和ND32插条以使进入光路的亮度合适(如图3)，如需要微调可以通过改变右侧光栅插条(标注:A.STOP)的状态以达到合适的亮度，如需要调整视野的大小可以通过调整右侧的光圈插条(标注:F.STOP)来达到(一般情况下不需要调整)。

4，转动滤光模组A4的转盘选择4#滤光模组(如图4)。

5，在载物台上放上需要观察的样品，先选择目镜A5中低倍目镜去选取要观察的区域并且调整焦距使视野内的观察物体清晰，然后切换

到合适放大倍数的目镜进行观察。

注意：调焦时先用低倍后用高倍。

调焦时先顺时针旋转粗准焦螺旋(如图5)把载物台升到最高位置并观察不要让物镜碰到物体；然后眼睛靠近目镜观察视场同时逆时针旋转粗准焦螺旋让载物台下降，当观察到视场最亮时切换细准焦螺旋进行调整(如图6)。

图5 粗准焦螺旋的调整 图6 细准焦螺旋的调整

6，如需要调整观测样品表面显示的颜色，则需要差分光度计A8中 3个透镜插条同时插入，然后通过其中带旋钮的插条调整表面颜色以方便观察(如图7)。

service@ 实验目的 1. 熟悉荧光显微镜的原理、用途和使用方法。 2. 掌握荧光显微镜的调校方法。 实验器材 荧光显微镜一台，荧光染色标本，擦镜纸，吸水纸，载玻片，盖玻片等。 实验原理 荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光，激发检测标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，通过物镜和目镜系统的放大以观察标本的荧光图像的光学显微镜，是医学检验中的重要仪器之一。 仪器描述 荧光显微镜是由荧光光源、荧光镜组件、滤板系统和光学系统等主要部件组成。其基本结构见图6-1。

（一）荧光光源 现在多采用200W的超高压汞灯作荧光光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，超高压汞灯

service@ 的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外光和蓝紫光，足以激发各类荧光物质。 （二）滤色系统 滤色系统是荧光显微镜的重要部位，主要由激发滤光片和阻断滤光片组成。激发滤光片，位于光源和标本之间，仅允许能激发标本产生荧光的光通过，激发滤光片有四组：紫外光(U)、紫光(V)、蓝光(B)、绿光(G)；阻断滤光片，位于标本与目镜之间，可吸收和阻挡激发光进入目镜并把剩余的紫外线吸收掉，以免干扰荧光和损伤眼睛，还可选择并让特异的荧光透过，只让激发出的荧光通过，这样有利于增强反差。激发滤光片和阻断滤光片必须选择配合使用。 （三）反射荧光装置 通过反射荧光装置将激发光经过物镜向下落射到标本表面。其反光镜的反光层一般是镀铝的，因为铝对紫外光和可见光的蓝紫区吸收少，反射达90%以上，而银的反射只有70%，一般使用平面反光镜。 （四）聚光镜 专为荧光显微镜设计制作的聚光镜是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成。 根据成像光路的特点，荧光显微镜可分为透射荧光显微镜和落射荧光显微镜。 透射荧光显微镜激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野聚光镜，也可用普通聚光镜，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上。这是比较旧式的荧光显微镜。但在低倍镜时荧光强，所以对观察较大的标本材料较好。 落射荧光显微镜是激发光从物镜向下落射到标本表面，物镜起着照明聚光镜和收集荧光的作用。光路中双色束分离器与光轴呈45°角，把激发光反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，再返回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光被阻断滤片吸收。选择不同的激发滤光片／双色束分离器／阻断滤光片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。落射荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。 实验步骤（以XSJ-2荧光显微镜为例） 1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的电灯，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。 2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。 3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。

Leica荧光倒置显微镜使用指南

1、 按下接线板电源，打开计算机屏幕电源和主机箱电源，双击桌面上Leica Application Suite图标进入程序。

2、 打开显微镜光源，如需使用荧光灯，打开荧光灯光源，在记录本上记录下荧光灯使用时间。

3、 显微镜物镜放大倍数有5倍、10倍、20倍、40倍，旋转物镜下转盘改变放大倍数。

4、 明场使用方法：将透射光装置的聚光镜转盘旋转至BF档。选择合适的物镜，调节焦距，用明视光源强度旋转及透射光装置上的光圈调节光源强度。将滤色块放在第4或5档。

5、 相差使用方法：将透射光装置的聚光镜转盘转至PH1档（物镜为10×、20×）或PH2档（物镜为40×时）。用明视光源强度旋转及透射光装置上的光圈调节光源强度。将滤色块放在第4或5档。（5×物镜无相差功能）

6、 荧光使用方法：放下明场遮拦，拉开荧光遮拦棒，旋转滤色块转盘，选择合适的激发波长。用荧光光源视野调节旋钮和荧光光源光圈调节旋钮调节荧光的范围和强度。

7、 图像处理：在“摄取”菜单栏Micl卡片下根据所选的物镜倍数选择放大倍数。拉开摄像头操纵杆，单击鼠标左键选择一块白色区域，单击鼠标右键，进行白平衡。可以通过改变摄取菜单栏摄像头卡片下曝光，饱和，伽马和增益改变现实图像的效果。明场或者相差模式，建议将增益放在零。单击拍摄，新建自己的文件夹，保存图片。

8、 荧光拍摄完毕，推进荧光遮拦棒，看一下显微镜使用登记表。

（1） 如果下一个使用登记时间小于或等于1个小时，不需要关闭荧光灯光源，记录下荧光灯光源使用时间。将明场电源旋至最低。将物镜旋至空挡，关闭应用程序。填写完整仪器使用记录。

（2） 如果下一个使用登记时间大于1个小时，使用完毕荧光及时关闭荧光灯光源，注意需长于半个小时，记录下荧光灯光源使用时间。将明场电源旋至最低，关闭明场电源。将物镜旋至空挡，关闭应用程序，关闭电脑。填写完整仪器使用记录。

倒置荧光显微镜使用注意事项