医学检验·检查项目:神经元特异性烯醇化酶(NSE)_课件模板
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大鼠神经特异性烯醇化酶NSE ELISA本试剂盒用于定量检测大鼠血清和血浆中的NSE的浓度。
本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。
抗大鼠NSE单抗包被于酶标板上,大鼠标本中的NSE会与单抗结合。
加入生物素化的抗大鼠NSE(二抗),它将与结合在单抗上的大鼠NSE结合而形成免疫复合物,未结合的将被洗去。
辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 将与二抗的生物素结合,多余的物质会被洗掉。
加入TMB显色。
大鼠NSE的浓度与OD(450nm)成正比。
酶标板(Coated Wells) 48wells Anti-Rat NSE Biotin 1 vial浓缩洗涤液(40X)(Washing Concentrate)12.5ml 标准品(Standards) 1 vial显色液(TMB Substrate) 6ml 标准品稀释液(Standard Diluent) 7ml终止液(Stop Solution) 6ml 浓缩酶联物(HRP) 1 vial酶联物稀释液(HRP Diluent) 7ml 生物素稀释液(Biotin Diluent)7ml1.可在450nm处进行读数的酶标仪;2.能精确吸取10-200µL的移液器;3.可调多道(8)移液器(50-200µL);4.供可调多道移液器使用的试剂存放槽;5.洗瓶或洗板机;6.蒸馏水或去离子水;7.1升的圆柱形量筒;8.移液器:1和(10或25 mL);9.移液器枪头;10.纸巾;11.计时器,用以监控温育步骤;12.处理池和消毒剂(例如:0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水);1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。
所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。
使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。
在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。
温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
神经元特异性烯醇化酶( N S E)是烯醇化酶的一种亚型, 特异性地存在于成熟的神经元和神经内分泌细胞中, 神经细胞损害后, N S E释放出细胞外。
血清或脑脊液内N S E浓度被认为是直接反映脑损害程度的一种灵敏的、有价值的特异性指标[ 5]。
神经元特异性烯醇化酶( N S E ) 是烯醇化酶的型同工酶, 正常情况下, 主要特异性地存在于神经元和神经内分泌细胞的胞浆中[ 1 , 2 ], 而在起源于神经内分泌细胞的肿瘤组织也有异常表达, 常见于神经母细胞瘤、小细胞肺癌( SCLC )。
目前N S E 已作为神经系统损伤和SCLC 的标志物, 被用于SCLC和非小细胞肺癌( NSCLC ) 的鉴别诊断、放化疗效果、预监测等[ 3 , 4]。
而对于神经内分泌细胞以外的肿瘤细胞中N S E 的表达情况则鲜见报道。
本研究从转录蛋白和细胞水平检测N SE 在不同肿瘤细胞中的表达情况, 发现N SE有更广泛的表达谱, 现将研究结果报告如下。
开头新生儿缺氧缺血性脑病( HIE) , 是新生儿病死和其后神经系统发育障碍的重要原因之一[ 1] 早期判断HIE脑损伤程度对估计HIE病情和预后有重要意义。
神经元特异性烯醇化酶( neuron- specificenolase,NSE) 是一种神经系统特异性蛋白质, 主要存在于神经元细胞浆中, 脑组织损伤后, NSE从损伤的神经元漏出, 通过血脑屏障进入脑脊液和外周血液, 检测血液中NSE水平可反映神经元损伤的程度2]。
本研究对40例HIE患儿血清NSE进行了观察, 并分析血清NSE与HIE的临床分度及窒息程度之间的关系, 结果报告如下。
烯醇化酶Enolase是参与糖酵解的关键酶主要在肝脏代谢由和三种亚单位以二聚体形式组成5种同工酶其中-型特异性地存在于神经元和神经内分泌细胞中称为神经元特异性烯醇化酶NSE以中枢神经含量最丰富来源于神经和神经内分泌的肿瘤细胞解体时神经元特异性烯醇化酶释放入血可作为肺小细胞癌神经内分泌瘤神经母细胞瘤的标志物用于诊断和治疗监测1影响因子:NES 也存在于正常红细胞中, 溶血标本将会干扰结果的正常判断; 由于红细胞可释放大量的N S E , 因此溶血可导致结果偏高; 同样N S E 也可从血小板中释放, 因此, 离心不充分的样本N S E 的结果也会偏高等[ 1 ~3]检验界对溶血标本对血清钾测定的影响尽管提法有异, 但历史上早已达成共识。
文章编号: 1000-1336(2008)04-0439-04神经元特异性烯醇化酶邱全曜 缪明永(第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,上海 200433)摘要:神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)是烯醇化酶的一种同工酶,该酶不仅参加糖酵解反应,而且还具有神经营养因子作用,对神经系统疾病和肿瘤的诊断、治疗和预后等也有重要作用。
本文将从NSE的理化特性、生物学功能和临床应用等方面对其进行阐述。
关键词:神经元特异性烯醇化酶;同工酶;神经保护作用;神经营养作用;标志物中图分类号:Q55收稿日期:2008-02-09作者简介:邱全曜(1987-),男,白族,本科生,E-mail:qiuquanyao@126.com;缪明永(1961-),男,副教授,硕士生导师,联系作者,E-mail:miaomy@163.com1965年科学家首次发现了一种大量存在于脑组织中而不存在于非神经组织中的酸性可溶性蛋白质,称之为14-3-2蛋白[1]。
后来人们发现该蛋白质特异性地位于神经元中,并具有烯醇化酶活性,故将其命名为神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)。
1. NSE的理化特性NSE是烯醇化酶基因超家族成员之一,是糖酵解的关键酶,主要参与糖酵解,催化2-磷酸甘油酸变成磷酸烯醇式丙酮酸。
烯醇化酶是由α、β、γ三个亚基组成的二聚体,其同工酶可分为αα、ββ、γγ、αβ和αγ五种。
α亚基主要存在于肝、肾等组织,故αα称其为非神经系统的烯醇化酶(NNE); β亚基主要存在于骨骼肌和心肌称其为肌肉特异性的烯醇化酶(MSE);γ亚基主要存在于神经组织。
γγ、αγ组成的同工酶为神经元和神经内分泌细胞特有,故命名为神经元特异性烯醇化酶[2,3]。
NSE基因核苷酸序列全长2423 bp,可读框从第226到1531个碱基,长度为1305 bp,编码434个氨基酸残基。
神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶(Neuron—specific enolase,NSE)是神经母细胞瘤的肿瘤标志物,由于小细胞肺癌(SCLC)是最常表现由神经内分泌性质的肿瘤,目前NSE也是SCLC最敏感最特异的肿瘤标志物。
近年来,NSE作为神经元损伤的敏感性和特异性标志其与中枢神经系统疾病的关系已引起了国内外学者的极大关注。
一、生化特性NSE是催化糖原酵解途径中甘油分解的最后的酶。
由3个独立的基因片段编码3种免疫学性质不同的亚基α、β、γ,组成5种形式的同工酶αα、ββ、γγ、αγ、βγ。
二聚体是该酶分子的活性形式,γ亚基同工酶存在于神经原和神经内分泌细胞的胞浆中,称为NSE。
α亚基同工酶定位于胶质细胞,其结构和免疫学特性与肝脏中的烯醇化酶相同,称为非神经原特异性烯醇化酶(NNE);NSE和NNE的分子量分别为78kD和87kD。
二、测定方法与正常参考值烯醇化酶的测定方法主要有两类,一是酶活性测定法,一是酶含量测定法。
酶活性测定法主要有直接分光光度法、酶偶联速率法、生物发光法和琼脂糖凝胶电泳法等,酶含量测定主要采用免疫化学法。
目前NSE测定最常用的方法有RIA和ELISA两种,RIA有放射污染,而ELISA无RIA的不足,并且灵敏度较高。
国内陈惠鹏等建立的ABC-ELISA灵敏度为2ng/ml;军事医学科学院建立的ELISA测定试剂盒,灵敏度达1ng/ml,且操作简便,重复性好。
最近国外学者报道用时间分辨荧光免疫分析法测定血清NSE,其重复性好,灵敏度、特异性与RIA法一致,相关系数为0.99,正常参考值女性为2.9〜9.6μg/L,男性为3.4〜11.7μg/L,性别间有显著差异(P<0.001)。
不同方法的NSE测定值有一定差异,一般说来,健康成人血清NSE水平在10ng/ml 以下均属正常。
二、临床意义NSE是神经母细胞瘤和小细胞肺癌的标志物。
神经母细胞瘤是常见的儿童肿瘤,占1一14岁儿童肿瘤的8%〜10%。