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DNA的定量测定(二苯胺法)实验报告实验目的：本实验旨在掌握用二苯胺法定量测定DNA含量的基本原理和方法。
实验原理：在酸性环境中加热，DNA被水解为嘌呤、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸。
其中脱氧核糖在酸性条件下，脱水生成ω-羟基-y-酮基戊糖，后者与二苯胺作用呈现蓝色，在595nm处有最大光吸收。
当样品DNA的含量在40-400µg范围时，光密度与DNA的浓度成正比。
样品中含有少量RNA不影响测定结果，但是蛋白质、脱氧核糖、阿拉伯糖和芳香醛等能与二苯胺形成各种各样有色物质，干扰结果。
在反应中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。
试剂与仪器：DNA标准液、二苯胺试剂、样品溶液、试管与试管架、吸管与洗耳球、可见分光光度计。
DNA标准液曲线的制作与样品DNA含量的测定：取8支洁净干燥的试管，按表格操作。
混合后，于60度水浴中保温1小时，冷却至室温中，用分光光度计测定吸光值A595nm。
以DNA浓度为横坐标吸光值A595nm为纵坐标，绘制标准曲线，对照组标准曲线计算样品中DNA的含量。
实验结果与讨论：通过实验得出DNA标准曲线，y=0.0098x，求出X1=40.71µg/ml，X2=39.39µg/ml，平均DNA 浓度为40.05µg/ml，含量n%=40.05/100%=40.05%。
注意：文章中的一些数字和符号可能需要根据实际情况进行调整。
分析：本实验使用标准曲线求得的DNA浓度为40.05µg/ml。
在40-400µg范围内，光密度与DNA浓度成正比，因此使用标准曲线求得的浓度是准确的。
此外，DNA的标准曲线线性关系的R2为0.9966，证明DNA光密度的关系密切，因此求出的浓度也比较精确。
然而，本实验测得的DNA含量比整体水平偏低。
造成这种偏低的原因可能是以下几个方面：1.在吸取DNA溶液样品时，未充分摇匀，便吸取2.0mlDNA样液，造成DNA含量不均，从而导致实验存在误差。
实验八DNA的定量测定一、实验目的学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。
二、原理核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和分别针对DNA和RNA 的颜色反应方法。
本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。
在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸收，在40～400μg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。
DNA +三、试剂和器材1. 试剂200μg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂2. 器材可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平四、操作步骤1. 标准曲线的制作取12只试管分成6组，按下表操作。
取2管的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。
试管0 1 2 3 4 5标准DNA/mL 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0蒸馏水/mL 2 1.6 1.2 0.8 0.4 04 4 4 4 4 4二苯胺试剂/mL60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色2. 样品的测定取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，60℃保温1h，然后在595nm波长出测定光密度值。
根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的DNA 的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。
DNA%＝待测样品中测得的DNA的mg数 X 100待测样品液中样品的mg数五、注意事项其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应尽可能除去。
六、思考题1、DNA含量测定的方法有哪些？各有何优缺点？2、简述二苯胺法测DNA的基本原理。
实验六DNA 的定量测定（二苯胺法）一实验目的学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。
二实验原理强酸、加热条件下，可以使DNA中的嘌呤碱基与脱氧核糖间的糖苷键断裂，而产生嘌呤碱基，脱氧核糖与嘧啶核苷酸。
其中2ˊ脱氧核糖在酸性环境中成为ω―羟基―γ―酮基戊醛，此物与二苯胺反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。
DNA(脱氧戊糖基）H+HO CH2C CH2CH2蓝色化合物DNA在40-400μg范围内光密度与DNA浓度成正比。
在反应液中加入少量乙醛可提高灵敏度，而且其他化合物的干扰也显著降低。
当样品含少量RNA时不影响测定，而蛋白质、多种糖及其衍生物芳香，羟基醛都能与二苯胺形成各种有色物质，干扰测定。
三试剂和器材（一）器材1．粗制DNA。
2．坐标纸。
3．试管1.5 cm *15 cm （*7）4．吸管0.20 ml (﹡2) 、0.50ml(*3) 、1.0ml(*2)。
5．722 型（或7220 型）分光光度计。
6．恒温水浴锅。
（一）试剂1．DNA 标准液（200μg/ml）: 取DNA钠盐用5 mmol/L的NaOH配成200μg/ml 的溶液。
2．二苯胺试剂：称取纯二苯胺（如不纯, 需在70% 乙醇中重结晶2次）1克溶于100 ml 分析纯的冰醋酸中，再加入10ml 过氯酸（A.R., 60% 以上），混匀待用。
当所用药品纯净时，配成试剂应为无色，临用前加入1ml1.6% 乙醛溶液（乙醛溶液应保存于冰箱中，一周内可使用），贮于棕色瓶。
3．DNA样液：将实验所得的DNA粗品用蒸馏水溶解，定溶至50 ml，控制其DNA含量在100μg/ml左右。
四操作方法1．标准曲线的绘制按表1 加入各种试剂，混匀，于60 ℃恒温水浴保温45 min，冷却后，在595 nm波长下，于722型分光光度计比色测定，以吸光度对DNA浓度作图，制定标准曲线。
2．样品的测定吸取DNA样液1.0 ml，加入蒸馏水1.0 ml，混匀。
核酸的化学一、是非题1．嘌呤碱分子中含有嘧啶碱结构。
2．核苷由碱基和核糖以β型的C—N糖苷键相连。
3．核苷酸是由核苷与磷酸脱水缩合而成，所以说核苷酸是核苷的磷酸酯。
4．核苷酸的碱基和糖相连的糖苷键是C—O型。
5．核糖与脱氧核糖的差别是糖环的2’位有无羟基。
6．核苷酸的等电点的大小取决于核糖上的羟基与磷酸基的解离。
7．在DNA双链之间，碱基配对A-T形成两对氢键，C-G形成三对氢键，若胸腺嘧啶C－2位的羰基上的氧原于质子化形成OH，A－T之间也可形成三对氢键。
8．任何一条DNA片段中，碱基的含量都是A=T，C=G。
9．DNA碱基摩尔比规律仅适令于双链而不适合于单链。
10．用二苯胺法测定DNA含量必须用同源的DNA作标准样品。
11．DNA变性后就由双螺旋结构变成线团结构。
12．Tin值低的DNA分子中（A－T）％高。
13．Tin值高的DNA分子中（C-G）％高。
14．由于RNA不是双链，因此所有的RNA分子中都没有双螺旋结构。
15．起始浓度高、含重复序列多的DNA片段复性速度快。
16．DNA的复制和转录部必须根据碱基配对的原则。
17．某氨基酸tRNA反密码子为GUC，在mRNA上相对应的密码子应该是CAG。
18．细胞内DNA的核苷酸顺序都不是随机的而是由遗传性决定的。
19．RNA链的5 ′核苷酸的3′羟基与相邻核昔酸的5′羟基以磷酸二酯键相连。
20．假如某DNA样品当温度升高到一定程度时，OD260提高30％，说明它是一条双链DNA。
21．核酸外切酶能够降解所有的病毒DNA。
二、填空题1．核苷酸是由＿＿＿、＿＿＿＿和磷酸基连接而成。
2．在各种RNA中＿＿含稀有碱基最多。
3．T m值高的DNA分子中＿＿＿的％含量高。
T m值低的DNA 分子中＿＿＿％含量高。
4．真核生物的DNA存在于＿＿＿＿，其生物学作用是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
5．细胞内所有的RNA的核苷酸顺序都是由它们的＿＿＿＿＿＿决定的。
6．将双链DNA放置在pH2以下或pH12以上，其OD260＿＿＿，在同样条件下单链DNA的OD260＿＿＿＿＿＿。
实验一二苯胺法测定DNA含量【实验目的】1．掌握721型分光光度计的工作原理及操作方法。
2．掌握二苯胺法测DNA含量的原理和方法。
【实验原理】DNA酸解后生成嘧啶核苷酸、嘌呤、磷酸和脱氧核糖。
脱氧核糖在酸性环境中脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，它与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。
样品中DNA浓度50～500μg/mL范围内，光密度与DNA的浓度成正比，可用比色法测定。
【实验仪器与试剂】1．仪器(1)试管、吸量管、容量瓶、试管架(2)721分光光度计(3)恒温水浴锅(4)分析天平2．试剂(1)DNA标准溶液：取DNA钠盐(经定磷确定其纯度)用5mmol/LNaOH配成200µg／mL的溶液。
(2)二苯胺试剂：称取纯二苯胺（如不纯，需在70％乙醇中重结晶2次）1g溶于100mL冰醋酸(A．R)中，再加入10mL过氯酸(A．R，60％以上)，混匀待用。
临用前加入1mL1.6％乙醛溶液，所配得试剂应为无色，贮于棕色瓶中。
(3)1.6％乙醛：取47％乙醛3．4mL，加重蒸水定容至100mL(保存于冰箱中，一周内使用)。
(4)DNA样液：将DNA干燥粗制品以5mmol/LNaOH溶液配制成100µg／mL的溶液。
【实验操作】1．标准曲线的制作：取14支试管，分为2组（管号为：0～6，0´～6´）按下表操作。
以DNA含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2．样品的测定：取2支试管（7号和7´号）各加入2mL样品液(内含DNA应在标准曲线的可测范围之内)，按下表操作。
表1DNA含量的测定【计算】根据测得的光密度值，从标准曲线上查DNA的含量，按下式计算制品中DNA的百分含量：实验二酵母RNA的提取与鉴定【实验目的】掌握RNA的提取及鉴定核酸组分的方法【实验原理】酵母中RNA含量较高。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
⼆苯胺的使⽤DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的⽅法为⼆苯胺法(配⽅见下述的“药品配制”)。
⼆苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸⽣成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和⼆苯胺作⽤⽽显现蓝⾊(溶液呈浅蓝⾊)。
鉴定时溶液蓝⾊的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关。
⼆苯胺试剂的配制A液： 15 g⼆苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,⽤棕⾊瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使⽤。
B液： ⼄醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制： 将0.1 mL B液加⼊到10 mL A液中,现配现⽤。
DNA粗提取与鉴定的另⼀种⽅法1.材料⽤具新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏⽃,酒精灯,⽯棉⽹,三⾓架,⽕柴,⼑⽚,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,⼆苯胺试剂,蒸馏⽔。
2.⽅法步骤(1)DNA的粗提取 ①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放⼊冰箱冷冻室,⾄少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放⼊研钵中,倒⼊10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏⽃中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤⼊烧杯中(有条件的学校可将滤液倒⼊塑料离⼼管中进⾏离⼼,⽤1000r/min的旋转频率,离⼼25 min,取上清液放⼊烧杯中)。
在4 ℃冰箱中放置⼏分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将⼀倍体积的上清液倒⼊两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并⽤玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。
沉淀35 min后,可见⽩⾊的DNA絮状物出现。
⽤玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定 ①配制⼆苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴⼊到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放⼊试管中,加⼊4 mL ⼆苯胺试剂,混匀后观察溶液颜⾊(不变蓝)。
⽤沸⽔浴(100 ℃)加热10 min 。
二苯胺试剂鉴定DNA二苯胺试剂鉴定D N A Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】二苯胺试剂:鉴定DNA。
二苯胺试剂的配制A液:1.5 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。
如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液:乙醛的体积分数为%的溶液。
配制:将 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA的粗提取与鉴定实验原理1. DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。
当NaCl的物质的量浓度为mol／L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。
注意事项1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具鸡血细胞液（5～10 mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2 mol／L 和0．015 mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100 mL，1个，50 mL， 500 mL，各2个），漏斗，试管（20 mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100 mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
实验原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。
5 min2．溶解DNA：3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4．过滤：取黏稠物5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。
