目得:
建立培养基配制及适用性检查得标准操作规程,规范实验人员得操作流程。
范围:
适用于微生物检验人员对培养基得规范管理。
依据:
《药品生产质量管理规范(20１0年修订）》、《中华人民共与国药典》2015年版ﻩ第四部
职责:
１、微生物检验员:负责实验室所需求得培养基管理工作,使日常检验可以顺利进行。
２、微生物检验主管:负责对日常配制培养基得规范操作进行监督。
内容
１培养基得申购
根据检验项目、工作量与工作进度得需求,提前一个月进行所需得培养基申购。申购时需指定培养基供应商,必要时进行供应商审计。
2 培养基得验收
２、1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装就就是否完整、产品就就是否在有效期内。
2、2 验收合格后,登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SＭP-10－QC-０
09-02(00))。
３培养基得贮藏
3、１未开封得脱水培养基贮存于阴凉室,使培养基处于低温、干燥、与避光条件下。已开封得脱水培养基应盖紧,贮存于阴凉库。
3、2灭菌好得培养基应进行预培养７2h检查无菌后，置4~８℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为７天。
４培养基得配制
4、1培养基得配制与使用应填写《培养基配制及使用记录》(附记录文件编号：ＳMP-10-QＣ-0０9-０2(00））。
4、2培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如２011年１月1日配制得培养基,培养基干粉批号0０0０00,配制批号为:０00０00－１10101。配制好得培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-１0－ＱC－009-０3)。(注:同一天同一培养基配置多次得,在原批号后加“-”加“数字”表示,如00０0００－1１０101-０１) ４、3培养基配制方法
4、3、1 使用商品化脱水合成培养基时,应严格按照厂商提供得使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件与操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时,应按照配方准确配制,并记录相关信息如:培养基名称与类型及试剂级别,每个成分物质含量、制造商、批号,pH值,培养基体积／分装体积,灭菌条件(灭菌方式、温度及时间)，配制日期、人员等,以便溯源。
4、３、2 水、容器具要求:培养基配制均采用纯化水,特殊说明时采用去离子水与蒸馏水。培养基配制所用容器与配套器具应洁净。对热敏感得培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌,以保证培养基得无菌性。
4、３、3 称量与分装: 快速称量所需量得脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作,以防吸入含有有毒物质得培养基粉末)。以免吸潮。先加入适量得水,充分混合。注意避免培养基结块,然后加水至所需得量。根据说明书要求选择就就是否加热。分装体积不超过容器体积得2/３。配制斜面等含琼脂得培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。
4、4 pH 值得测定与调整
pＨ值采用pH计进行检测,温度25±２℃。取配后培养基10ml进行灭前ｐH测定。另取２0ml于５０ml三角瓶与同批配制培养基同时灭菌冷却至25±2℃检测灭后PＨ。灭菌前后pH应按下表进行控制。灭菌前可使用浓度约为40g/L(约1mｏl/L）得氢氧化
钠溶液或浓度约为36、5ｇ/Ｌ(约1mol／L)得盐酸溶液进行缓慢调整,避免反复调整而增加离子浓度。灭菌后培养基不符合标准时视为不合格，不进行使用。
4、5 培养基灭菌
培养基与试剂应采用湿热灭菌法或过滤除菌法。湿热灭菌在高压灭菌锅或蒸汽灭菌柜中进行,容器具若需湿热灭菌时，灭菌条件为１21℃灭菌30 ｍiｎ。培养基严格按说明书条件进行灭菌。培养基灭菌后应立即取出,不得存放于高压灭菌器中。
５培养基得质量控制
5、1计数培养基适用性检查
５、1、１菌种及菌液制备
菌种:试验用菌株得传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。计数培养基适用性检查与计数方法适用性试验用菌株见表1。
菌液制备:按表１规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌得新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，3５℃培养18~24小时,取上述培养物1ml加入9ml 0、９％无菌氯化钠溶液中，制成１0-1得菌液，依法10倍稀释至10-7, 分取各菌悬液1ml注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基２0mｌ，各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数，取小于100CFＵ/ml得菌液备用;取白色念珠菌得新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中,２5℃培养２～3天。取上述培养物１ml加入9ｍl ０、９%无菌氯化钠溶液中,制成1０-1得菌液，依法10倍稀释至1０-7，取菌悬液１ml注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml，各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数，取小于１0０CFU/ｍl得菌液备用;取黑曲霉得新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基,经2５℃培养5～７天,加入３~5ｍｌ含０、05％(ml／ｍl)聚山梨酯80得0、9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管内，取上述培养物１ml加入9ml０、9%无菌氯化钠溶液中，制成10-1得菌液,依法10倍稀释至1０-7, 分取各菌悬液１ml注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基２０ｍl,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取小于1０0CＦＵ/ml得菌液备用。
菌液制备后若在室温下放置,应在２小时内使用;若保存在2〜8℃,可在2４小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2〜８℃ ,在验证过得贮存期内使用。
5、1、2 阴性对照
为确认试验条件就就是否符合要求,应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查。
