培养基配制及适用性检查标准操作规程
- 格式：doc
- 大小：187.50 KB
- 文档页数：14
目得:建立培养基配制及适用性检查得标准操作规程,规范实验人员得操作流程。
范围:适用于微生物检验人员对培养基得规范管理。
依据:《药品生产质量管理规范(20１0年修订）》、《中华人民共与国药典》2015年版ﻩ第四部职责:１、微生物检验员:负责实验室所需求得培养基管理工作,使日常检验可以顺利进行。
２、微生物检验主管:负责对日常配制培养基得规范操作进行监督。
内容１培养基得申购根据检验项目、工作量与工作进度得需求,提前一个月进行所需得培养基申购。
申购时需指定培养基供应商,必要时进行供应商审计。
2 培养基得验收２、1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。
验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装就就是否完整、产品就就是否在有效期内。
2、2 验收合格后,登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SＭP-10－QC-０09-02(00))。
３培养基得贮藏3、１未开封得脱水培养基贮存于阴凉室,使培养基处于低温、干燥、与避光条件下。
已开封得脱水培养基应盖紧,贮存于阴凉库。
3、2灭菌好得培养基应进行预培养７2h检查无菌后，置4~８℃冷藏保存待用。
灭菌后培养基储存期为７天。
４培养基得配制4、1培养基得配制与使用应填写《培养基配制及使用记录》(附记录文件编号：ＳMP-10-QＣ-0０9-０2(00））。
4、2培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如２011年１月1日配制得培养基,培养基干粉批号0０0０00,配制批号为:０00０00－１10101。
配制好得培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-１0－ＱC－009-０3)。
(注:同一天同一培养基配置多次得,在原批号后加“-”加“数字”表示,如00０0００－1１０101-０１) ４、3培养基配制方法4、3、1 使用商品化脱水合成培养基时,应严格按照厂商提供得使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件与操作步骤等。
实验室使用各种基础成分制备培养基时,应按照配方准确配制,并记录相关信息如:培养基名称与类型及试剂级别,每个成分物质含量、制造商、批号,pH值,培养基体积／分装体积,灭菌条件(灭菌方式、温度及时间)，配制日期、人员等,以便溯源。
4、３、2 水、容器具要求:培养基配制均采用纯化水,特殊说明时采用去离子水与蒸馏水。
培养基配制所用容器与配套器具应洁净。
对热敏感得培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌,以保证培养基得无菌性。
4、３、3 称量与分装: 快速称量所需量得脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作,以防吸入含有有毒物质得培养基粉末)。
以免吸潮。
先加入适量得水,充分混合。
注意避免培养基结块,然后加水至所需得量。
根据说明书要求选择就就是否加热。
分装体积不超过容器体积得2/３。
配制斜面等含琼脂得培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。
4、4 pH 值得测定与调整pＨ值采用pH计进行检测,温度25±２℃。
取配后培养基10ml进行灭前ｐH测定。
另取２0ml于５０ml三角瓶与同批配制培养基同时灭菌冷却至25±2℃检测灭后PＨ。
灭菌前后pH应按下表进行控制。
灭菌前可使用浓度约为40g/L(约1mｏl/L）得氢氧化钠溶液或浓度约为36、5ｇ/Ｌ(约1mol／L)得盐酸溶液进行缓慢调整,避免反复调整而增加离子浓度。
灭菌后培养基不符合标准时视为不合格，不进行使用。
4、5 培养基灭菌培养基与试剂应采用湿热灭菌法或过滤除菌法。
湿热灭菌在高压灭菌锅或蒸汽灭菌柜中进行,容器具若需湿热灭菌时，灭菌条件为１21℃灭菌30 ｍiｎ。
培养基严格按说明书条件进行灭菌。
培养基灭菌后应立即取出,不得存放于高压灭菌器中。
５培养基得质量控制5、1计数培养基适用性检查５、1、１菌种及菌液制备菌种:试验用菌株得传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。
计数培养基适用性检查与计数方法适用性试验用菌株见表1。
菌液制备:按表１规定程序培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌得新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，3５℃培养18~24小时,取上述培养物1ml加入9ml 0、９％无菌氯化钠溶液中，制成１0-1得菌液，依法10倍稀释至10-7, 分取各菌悬液1ml注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基２0mｌ，各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数，取小于100CFＵ/ml得菌液备用;取白色念珠菌得新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中,２5℃培养２～3天。
取上述培养物１ml加入9ｍl ０、９%无菌氯化钠溶液中,制成1０-1得菌液，依法10倍稀释至1０-7，取菌悬液１ml注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml，各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数，取小于１0０CFU/ｍl得菌液备用;取黑曲霉得新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基,经2５℃培养5～７天,加入３~5ｍｌ含０、05％(ml／ｍl)聚山梨酯80得0、9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。
然后吸出孢子悬液至无菌试管内，取上述培养物１ml加入9ml０、9%无菌氯化钠溶液中，制成10-1得菌液,依法10倍稀释至1０-7, 分取各菌悬液１ml注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基２０ｍl,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取小于1０0CＦＵ/ml得菌液备用。
菌液制备后若在室温下放置,应在２小时内使用;若保存在2〜8℃,可在2４小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2〜８℃ ,在验证过得贮存期内使用。
5、1、2 阴性对照为确认试验条件就就是否符合要求,应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查。
5、1、3培养基适用性检査微生物计数用得成品培养基、由脱水培养基或按处方配制得培养基均应进行培养基适用性检查。
按表1 规定,接种不大于l0０cｆu得菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板,置表1 规定条件下培养。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时,用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
被检固体培养基上得菌落平均数与对照培养基上得菌落平均数得比值应在0、5〜２范围内,且菌落形态大小应与对照培养基上得菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
表1 试验菌液得制备与使用5、2控制菌检查用培养基适用性检查5、２、1 菌种及菌液制备菌种:试验用菌株得传代次数不得超过５代(从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0 代）,并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。
菌液制备：按表１规定程序培养各试验菌株。
取大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌得新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中,３５℃培养18～24小时,取上述培养物1ml加入9mｌ０、9％无菌氯化钠溶液中,制成１0－１得菌液，依法10倍稀释至10-7,分取各菌悬液1mｌ注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基２0ml,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取小于1０0ＣFU／ｍl得菌液备用;取白色念珠菌得新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中,２５℃培养2～3天。
取上述培养物1mｌ加入９ｍl 0、９％无菌氯化钠溶液中,制成10－1得菌液,依法10倍稀释至1０-7,取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基20mｌ,各菌悬液平行制备两个平皿,平皿法培养计数,取小于１00CＦU/mｌ得菌液备用;菌液制备后若在室温下放置,应在２小时内使用;若保存在２〜8℃，可在２4小时内使用。
2、１、3 阴性对照为确认试验条件就就是否符合要求,应进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
２、2 培养基适用性检查控制菌检查用得成品培养基、由脱水培养基或按处方配制得培养基均应进行培养基得适用性检查。
控制菌检査用培养基得适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示特性得检查。
各培养基得检查项目及所用得菌株见表1。
表1 控制菌检査用培养基得促生长能力、抑制能力与指示特性2、２、1 液体培养基促生长能力检査 分别接种不大于100cfu 得试验菌(表１)于被检培养基与对照培养基中,在相应控制菌检查规定得培养温度及不大于规定得最短培养时间下培养，与对照培养基管比较,被检培养基管试验菌应生长良好。
2、2、2固体培养基促生能力检査 用涂布法分别接种不大于１00c ｆu 得试验菌(表1 )于被检培养基与对照培养基平板上,在相应控制菌检査规定得培养温度及不大于规定得最短培养时间下培养,被检培养基与对照培养基上生长得菌落大小、形态特征应一致。
2、2、3 培养基抑制能力检査 接种不少于l0０c ｆu 得试验菌(表1）于被检培养基与对照培养基中,在相应控制菌检査规定得培养温度及不小于规定得最长培养时间下培养,试验菌应不得生长。
2、2、4 培养基指示特性检査 用涂布法分别接种不大于100cfu 得试验菌（表1 ）于被检培养基与对照培养基平板上,在相应控制菌检查规定得培养温度及不大于规定得最短培养时间下培养，被检培养基上试验菌生长得菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
６培养基销毁失效、检测用过培养基(无论就就是否有菌生长)均按废物进行高压蒸汽灭菌处理。
参照《实验室废弃物管理规程》（文件编号：S ＭP-10-QC-014(0０))。
相关文件：文件变更历史：培养基领用台账R-SＭP－10-QC-0０９-0１(00）培养基配制及使用记录R-SMP-10-QC－00９-02(0０)培养基配制标签计数培养基适用性检查报告R-ＳMP-10-QC-009－04(00)计数培养基适用性数据记录R-SMＰ-10-QC-009－05(00)控制菌培养基适用性测试记录R-SMP-1０-QC-00９-06(０0)控制菌培养基适用性检查报告R-ＳMP－1０-QC-009-07(00）。
