2020版药典微生物限度检查所用的固体培养基

《中国药典》9203章节对培养基要求变化解读药品检测实验室日常工作都会围绕药典规定的方法展开，药典改版也是备受大家关注。

本文通过比对解析的方式，对2020版《中国药典》9203章节《药品微生物实验室质量管理指导原则》培养基相关内容和15版药典进行比较，和大家分享。

培养基制备篇2015版1.培养基的制备微生物实验室使用的培养基可按处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基。

2020版微生物实验室使用的培养基可按培养基处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基配制。

或直接采用商品化的预制培养基。

商品化的脱水培养基或成品预制培养基应设立接收标准并进行符合性验收，包括品名、批号、数量、生产单位、外观性状（瓶盖密封度、内容物有无结块霉变等），附有处方和使用说明外，还应注明、有效期、贮藏条件、适用性检查试验的质控菌和用途生产商提供的质控报告和/或其他相关材料（如配方变更）。

（位置调整-3-）解析：“商品化的预制培养基”在新版药典出现的次数较多，成品培养基的使用也将是微生物实验室的选择趋势。

2015版在制备培养基时,应选择质量符合要求的脱水培养基或按单独配方组分进行配制。

脱水培养基应附有处方和使用说明，（位置调整-3-）配制时应按使用说明上的要求操作以确保培养基的质量符合要求，（位置调整-4-）结块或颜色发生改变的脱水培养基不得使用。

脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮藏，如低温、干燥和避光，所有的容器应密封，尤其是盛放脱水培养基的容器。

商品化的成品培养基除了应附有处方和使用说明外,还应注明有效期、贮藏条件、适用性检查试验的质控菌和用途。

（位置调整-3-）为保证培养基质量的稳定可靠，各脱水培养基或各配方组分应准确称量，并要求有一定的精确度。

配制培养基最常用的溶剂是纯化水。

应记录各称量物的重量和水的使用量。

2020版培养基的配制（位置调整-2-）在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培养基或按单独配方组分进行配制。

【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。

除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。

研究：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。

微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

研究：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。

计数方法……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。

所选方法的适用性须经确认。

……提醒：后文增加了关于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因留意结合此处的请求。

计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……研究：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。

培养基适用性检查微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

研究：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述更准确，下文还有，不再赘述。

……计数方法适用性试验1.供试液制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。

供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°C。

供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。

……研究：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。

我国药典2020微生物限度检查法1.引言我国药典2020版本中，微生物限度检查法是保证药品质量和安全的重要工具。

微生物限度指的是药品中的微生物数量的限定，包括细菌、酵母和霉菌等。

微生物限度检查法的执行对于药品的生产和使用至关重要，它能够保证药品在生产、存储和使用过程中不受到微生物污染，从而确保药品的质量和安全。

2.微生物限度检查法的内容和流程微生物限度检查法主要包括取样、制备试液、接种培养和菌落计数等步骤。

首先要进行取样，从样品中取得代表性的样品；然后是制备试液，将取得的样品溶解或稀释；接下来是接种培养，将制备好的试液接种到适当的培养基上培养；最后是菌落计数，根据培养后的菌落数量来确定微生物的限度。

3.微生物限度检查法的意义微生物限度检查法的实施，可以有效地控制药品中微生物数量的合理范围内，防止药品在生产、储存和使用过程中因微生物污染而导致药品变质、降解或产生毒性。

采用微生物限度检查法，可以杜绝因微生物污染而引起的医源性感染，保障患者用药安全。

4.对我国药典2020微生物限度检查法的个人观点和理解微生物限度检查法是药品质量控制中不可或缺的一部分，它直接关系到患者的用药安全和药品的治疗效果。

我国药典2020版本对微生物限度检查法做了全面更新和完善，包括对检查方法、标准和限度值的详细规定和说明，这对于药品的生产企业和监管部门都具有重要的指导意义。

在日常生产和监管中，执行我国药典2020版的微生物限度检查法，将有助于提高药品的质量和安全水平，保护患者的用药权益，为人民健康事业做出贡献。

5.总结我国药典2020版本中的微生物限度检查法，是药品质量控制中的重要环节。

通过严格执行微生物限度检查法，可以有效地控制药品中微生物数量，防止药品因微生物污染而造成质量问题和安全隐患。

我国药典2020版的微生物限度检查法的更新和完善，将为药品生产和监管提供科学的依据和指导。

在实践中要严格执行微生物限度检查法，确保药品质量和安全，保障患者的用药权益。

2020年药典中药饮片微生物限度检查法在当今社会，中药饮片作为一种传统的中华医药制剂形式，其应用与研究已经历了漫长的历史。

为了确保中药饮片的质量安全，不仅需要对其有效成分进行分析检测，还需要对微生物限度进行检查。

而在2020年的药典中，围绕中药饮片微生物限度的检查法进行了更新和完善。

1. 背景及重要性：中药饮片是中华传统医学中的重要组成部分，其作为一种应用广泛的中药剂型，一直受到人们的青睐。

然而，由于中药饮片的原料和制剂过程相对复杂，很容易受到环境和操作等因素的影响，从而导致微生物的污染和滋生。

如果这些微生物超出了一定的限度，将对中药饮片的质量和安全造成不可忽视的影响，严重时可能对人体造成危害。

制定并完善中药饮片微生物限度检查法，对于保证中药饮片的质量安全具有重要意义。

2. 检查项目及标准：2020年药典中关于中药饮片微生物限度检查法的更新，将主要针对以下几个方面进行严格的检查：大肠菌群、霉菌和酵母菌。

这些微生物对中药饮片的污染可能性较高，因此对其限度的检查也显得尤为重要。

大肠菌群是指以大肠埃希菌为代表的一类微生物，其数量的增加可能会导致中毒等严重后果；而霉菌和酵母菌则会对中药饮片的有效成分造成破坏，同时也可能对使用者的健康带来风险。

根据2020年药典，对这些微生物的限度进行了更为严格的规定，以保证中药饮片的质量安全。

3. 检查方法及要求：随着科技的不断进步，中药饮片微生物限度的检查方法也在不断更新和完善。

目前，常用的检查方法主要包括菌落总数法和培养方法。

菌落总数法是指通过将中药饮片放入培养基中，培养一定时间后观察菌落的数量来判断其中微生物的含量；而培养方法则是指通过将中药饮片制成悬浊液，然后通过不同的培养基培养显微生物，进而得到微生物的数量和种类。

这些方法在有效检查微生物限度的也要求操作人员需严格掌握检查方法和操作规程，确保检查结果的准确性和可靠性。

4. 作者个人观点：作为一名从事中药研究的从业者，笔者深切地理解并赞同2020年药典中对中药饮片微生物限度检查法的更新和完善。

中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020（中兽药）中规定的微生物限度检查包括对药
物中的细菌总数、霉菌和酵母菌的检查。

细菌总数检查是通过将样品进行稀释，接种在固体培养基上进行培养，并统计菌落数量来确定药物中的微生物总数。

霉菌检查是将样品进行稀释，接种在含有抑制细菌生长的培养基上培养，以促进霉菌的生长，并进行观察和计数。

酵母菌检查也是将样品进行稀释，接种在适宜的培养基上培养，以促进酵母菌的生长，并进行观察和计数。

这些微生物限度检查主要是为了确定药物中是否存在超过规定限度的微生物污染，以保证药品的质量和安全性。

培养基配置操作规程目的：本规程规范了微生物实验室培养基的申购、配制、培养基质量控制、储存、使用、废弃处理等。

范围：本规程适用于微生物实验室检验用的所有培养基职责：QC检验员对本标准的实施负责。

执行标准：《中国药典》2020年版四部内容:1、培养基（Media）是指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。

通常指干粉培养基（Dehydrated Medium）和配制好的琼脂（Agar）、肉汤（Broths）、稀释液（Diluents）等等。

3.程序3.1. 购买3.1.1. 质量控制部提出采购计划，并填写《采购计划》，注明培养基名称、数量、质量要求、生产厂家等，由相关人员审核，交采购部采购。

3.1.2. 培养基买回后，由使用部门填写领料单，由物流部发出。

3.1.3. 领回后的干粉培养基，开瓶后应贴上《开启标签》，注明开口日期、有效期至、开口人、贮存条件，并且不得把原标签覆盖。

使用时填写《干粉培养基使用记录》。

3.1.4. 检验人员必须依据培养基生产厂家的操作说明进行配制，并填写《培养基配制使用记录》，配制记录上注明所用培养基的批号；盛装配制好的培养基的容器外应贴《培养基标签》，标签应注明：名称、批号、配制人、配制日期、有效期至等信息。

批号编号方式为年XX，月XX，日XX，流水号XX。

3.1.5. 配制好的培养基应在一定时间内，按说明书规定时间进行灭菌，避免微生物滋生。

3.1.6. 必要时，灭菌后的培养基在配制后必须进行pH值的测定以确保符合药典及生产厂家的规定。

3.2. 培养基质量控制3.2.1. 为了保证微生物检验的质量，在使用前，每批配制好的培养基在灭菌后用于供试品检验之前都应进行培养基质量控制检查。

3.2.2.进行培养基质量控制检查应填写相应的记录，如《计数用培养基适用性检查记录》、《控制菌检查用培养基适用性检查记录》。

3.2.3菌种复活、传代用的培养基不需进行适用性检查。

【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。

除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。

学习：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。

微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

学习：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。

计数方法
……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。

所选方法的适用性须经确认。

……
提示：后文增加了对于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因注意结合此处的要求。

计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验
……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……
学习：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。

培养基适用性检查
微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品。

2020年版《中国药典》通则“非无菌药品微生物限度标准”（蓝色字体表示新增内容，红色字体表示删减内容）非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。

药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料、辅料及、中药提取物及中药饮片的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。

1.制剂通则、品种项下要求无菌的及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法规定。

2.用于手术、严重烧伤、严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。

3.非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准见表 1。

表 1 非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准给药途径需氧菌总数（cf u/g、cf u/m l或cf u/10c m2）霉菌和酵母菌总数（cf u/g、c fu/m l或cfu/10cm2）控制菌口服给药①固体制剂液体及半固体制剂103102102101不得检出大肠埃希菌（1g 或1ml）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙门菌（10g 或10ml）口腔黏膜给药制剂齿龈给药制剂鼻用制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml 或 10cm2）耳用制剂皮肤给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml 或10cm2）呼吸道吸入给药制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、或 10ml ） 阴道、尿道给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌（1g 、1ml 或 10cm 2）；中药制剂还不得检出梭菌（1g 、 1ml 或 10cm 2）直肠给药 固体制剂103102 不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g 或 1ml ）其他局部给药制剂102102不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g 、1ml 或 10cm 2）注 ①化学药品制剂和生物制品制剂若含有未经提取的动植物来源的成份及矿物质还不得检出沙门菌（10g 或 10ml ）。

微生物限度‎测定所用培‎养基微生物检测‎所涉及的原‎料药品：蛋白胨、牛肉浸出粉‎、氯化钠、琼脂、葡萄糖、磷酸二氢钾‎、硫酸镁、玫瑰红钠、酵母浸出粉‎、蒸馏水。

或者成品营‎养琼脂、玫瑰红钠琼‎脂、酵母浸出粉‎胨葡萄糖琼‎脂。

所涉及的物‎品：量筒、烧杯、培养皿、三角瓶、牛皮纸、橡胶塞、试管夹、隔热手套、滤纸、酒精灯、火柴、高温高压灭‎菌指示胶带‎、试管刷等。

1、营养琼脂培‎养基1.1、用途：供药品和生‎物制品中细‎菌的计数和‎培养用。

（《中华人民共‎和国药典》2010年‎版1.2、干粉配方（每升）：【成分】蛋白胨10‎g、牛肉浸出粉‎3.0g、氯化钠5.0g、琼脂14.0g、蒸馏水10‎00mL（《中华人民共‎和国药典》2010年‎版）【制备】将上述成分‎(除琼脂外)溶于水中校‎正p H后加‎入如琼脂,煮沸溶解,根据用途不‎同进行分装‎，经121℃灭菌15m‎in，最终pＨ7.0～7.4。

置冰箱保存‎,两周内保持‎用完。

1.3、成品配方：称取本品M‎g（不同厂家生‎产取的量不‎一样具体看‎使用说明），加入蒸馏水‎或去离子水‎1000m‎L，搅拌加热煮‎沸至完全溶‎解，分装三角瓶‎，121℃高压灭菌1‎5min。

2、玫瑰红钠琼‎脂培养基2.1、用途：供药品和生‎物制品中霉‎菌和酵母菌‎的计数、分离和培养‎用。

（《中华人民共‎和国药典》2010年‎版）2.2、原理：胨提供碳源‎和氮源；葡萄糖提供‎能源；磷酸二氢钾‎为缓冲剂；硫酸镁提供‎必须的微量‎元素；玫瑰红钠作‎为选择性抑‎菌剂可抑制‎细菌的生长‎，并可减缓某‎些霉菌因生‎长过快而导‎致菌落漫延‎生长；琼脂是培养‎基的凝固剂‎。

2.3、干粉配方（每升）：【成分】胨5.0g 葡萄糖10‎.0g、磷酸二氢钾‎1.0g、硫酸镁0.5g、玫瑰红钠0‎.0133g‎、琼脂14.0g、蒸馏水10‎00mＬ（《中华人民共‎和国药典》2010年‎版）【制备】将上述成分‎除葡萄糖、玫瑰红钠外‎，微温溶解，滤过，加入葡萄糖‎、玫瑰红钠根‎据用途不同‎进行分装,经115℃灭菌15m‎in，最终pH 6.0±0.2（药典没有标‎示）。

1.目的建立培养基的管理规程，确保产品的无菌及微生物限度检查结果真实可靠。

2.范围适用于实验室使用的培养基的管理。

3.职责3.1.实验员及实验室管理员负责对本制度实施。

3.2.QA负责监测本规程的执行。

4.规程4.1.种类和要求：本实验室无菌检查和微生物限度检查所使用的培养基均为脱水、干燥的商品培养基，商品培养基应有处方、使用说明和质量报告书。

培养基包括硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基等培养基，要求来源于正规的生产厂家。

4.2.培养基的购买:岗位实验员要根据培养基使用情况及剩余量及时向部门领导提出申购，经部门领导审批后方可购买。

应当从可靠的供应商处采购，生产厂家应尽量稳定，必要时应当对供应商进行评估；一次购入量不宜过多。

4.3.培养基的接收：培养基购进后，由岗位实验员负责接收，并及时填写《培养基接收登记表》（附件1），如培养基标签未标注效期，则应当在培养基的容器上标注接收日期。

4.4.培养基的保管4.4.1.培养基性状均为粉末，有特殊气味，容易受潮。

岗位实验员负责核对品名、数量后，按标签的要求于阴凉干燥处贮存，防止光照，潮湿。

4.4.2.储存期限:新购进未开瓶的干粉培养基按厂家说明书上的储存期限储存。

开口后的干粉培养基的储存条件和效期均按说明书上的规定执行。

4.4.3.开封后的干粉培养基使用后用3M封口膜缠绕密封。

4.5.培养基的使用4.5.1.在制备培养基时，应按使用说明上的要求操作配制，每次配制前应检查脱水培养基是否变质，如结块、变色、变味等，不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基。

每次使用需在需登记《培养基领用记录》（附件2）。

4.5.2.培养基配制时应准确称量脱水培养基，并做好记录，配制培养基所用容器和配套器具应洁净，配制培养基的溶剂为去离子水或纯化水。

脱水培养基应完全溶解于水中，再进行分装与灭菌。

配制时若需要加热助溶，应注意不要过度加热，以避免培养基炭化颜色变深。

2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。

(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。

每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。

同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。

2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。

所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。

1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。

2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。

3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。

3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。

每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。

胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。

同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。

2020版药典微生物限度计数—需氧菌2020版本药典(1)菌液制备取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液。

然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。

(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、金黄色葡萄球菌的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板和胰酪大豆胨液体培养基管，35℃条件下培养3天。

每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。

同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。

2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。

所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。

1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。

2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。

3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。

3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。

每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。

胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。

同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。

计算各试验组的平均菌落数。

(4) 供试品检查供试品的检验量为10g，检査计数方法按适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数的测定。

1．检查方法：《中国药典2020版》四部非无菌药品微生物限度检查法：微生物计数法（通则1105）。

2．验证用仪器型号及编号：立式高压蒸汽灭菌柜：型号编号：恒温培养箱：型号编号：生化培养箱：型号编号：3．菌液制备：3.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上，于30～35℃培养18～24h；上述培养物用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。

3.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基上，于20～25℃培养2～3天上述培养物用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。

3.3将黑曲霉菌菌悬液用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。

4.培养基配制按相应培养基产品说明分别配制胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、营A琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂对照培养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养养琼脂培养基、R2A琼脂对照培养基，并按照相应的灭菌方式灭菌备用。

基、营养琼脂对照培养基、R25、培养基计数适用性检查5.1胰酪大豆胨琼脂培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液置直径90mm的无菌平皿中各2皿，另一个皿不接种菌作为空白对照。

倾注20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂对照培养基，混匀，凝固。

将接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的平皿倒置于30-35℃的生化培养箱培养不超过3天，计数；将接种白色念珠菌、黑曲霉菌的平皿倒置于20-25℃的生化培养箱培养不超过5天，计数。

被检培养基同法操作。

结果见表1。

表1 培养基适用性检查结果之间，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。

判该培养基的适用性检查符合规定。

5.1.2结果判定：____________________________________5.1.3结论：________________________________________5.2沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液置直径90mm的无菌平皿中各2皿，另一个皿不接种菌作为空白对照。